专利名称：人类免疫缺陷病毒抗体和抗原联合快速检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种HIV抗体和抗 原联合快速检测的免疫层析试剂盒。
背景技术：
获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency synd画e。 AIDS) 简称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV) 感染引起的一种严重传染病。自美国1981年诊断出首例艾滋病患者以来， 据最新的WHO数据评估，至2007年底，全球估计共有3300万艾滋病病毒 感染者，中国国内有艾滋病病毒感染者约70万。
艾滋病病毒的传播途径主要包括血液传播、性接触、毒品注射和母婴传 播。在人体内的潜伏期平均为7 10年。HIV感染潜伏期病人没有明显的临 床症状，但具有高虔的传染性。对HIV进行检测以发现传染源和切断传播 途经是防制AIDS最有效的手段。HIV免疫学检测是最有效和最广泛使用的 方法，HIV抗体筛查是我国法定的的四个血源性筛查项目之一。
HIV抗体检测最常用的试剂为HIV抗体酶联免疫试剂(ELISA)和胶体金 类试剂，采用双抗原夹心法的第三代HIV抗体诊断试剂盒，灵敏度达到99% 以上，特异性大于97%。最短在HIV感染后十余天即可检测出阳性。但由于 部分HIV感染在5-8个月才出现抗体，世界卫生组织(WHO)将HIV感染的窗 口期定为6个月。HIV在窗口期内已具有传染性，为了进一步减少窗口期传 染情况的发生，目前国际上已出现了第四代HIV诊断试剂盒，试剂盒采用 了 HIV抗体和HIV p24抗原同时检测的方法，能较HIV感染后抗体转阳前4 一7天检测HIV的感染。HIV感染后，最早出现的是p24抗原，然后才出现 相应的特异性抗HIV抗体，随抗体滴度的升高p24逐渐下降至检测不出。在 病情发展后期p24抗原在血中又可检测出，另外P24抗原的检测适合对婴 儿HIV感染的诊断。
到目前为止HIV抗原抗体联合检测主要应用于ELISA试剂盒，尚无抗 原抗体联合检测的免疫层析胶体金类试剂盒出现。徐克沂等虽然发表了 "同 时检测HIV抗体及p24抗原快速诊断试剂的研制"[徐克沂，张永新，王瑛 等，同时检测HIV抗体及p24抗原快速诊断试剂的研制，中华实验和临床 病毒学杂志，2002,16(4)377-279]，但采用并非免疫层析方法，实际方法 和ELISA的检测方法类似，整个检测过程分为多步，检测时间超过l小时， 不符合快速诊断试剂的标准。胶体金类试剂的检测原理如下利用胶体金
4标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测 时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体
相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成 肉眼可见的检测(T)线，通过检测线的有无实现对结果的判定。HIV胶体金 类免疫层析快速诊断试剂具有ELISA不具备的优势检测快速5-30分钟 即出结果，操作简便，适于现场检测，试剂的稳定性好。 发明内容
本实用新型目的是提供一种操作简便、快速、适合现场检测、灵敏度 和特异性高、适合于临床诊断或筛査用的HIV抗体和抗原联合快速检测免 疫层析试剂盒。技术方案如下 一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体和抗原 联合快速检测试剂盒，包括盒盖、盒底，其特征在于在盒盖19的前面左侧 设置两个同样大小的B反应区孔23 、 A反应区孔24，在B反应区孔23 、 A反应区孔24的右侧各设置一个箭头形状的凸起为加样标示22，加样标示 25，在加样标示22,加样标示25的右侧各设置一个A加样孔20， B加样孔 21;在盒底31左侧设置两个同样大小的组合支撑肋D，在盒底31右侧设置 两个同样大小的组合支撑肋C，试纸A9的上样垫1对应A加样孔20的位置 装入盒底31的组合支撑肋C、组合支撑肋D上，将试纸BIO的上样垫(14) 对应B加样孔(23)的位置装入盒底(31)的组合支撑肋C、组合支撑肋D 上，盒盖19上的所有凸柱27插入盒底31上的凸起孔35中，即为HIV抗 体和抗原联合快速试剂盒18;
还在于所述的试纸A9包括上样垫1与紧密连接于所述上样垫1 一端的 含有标记HIV抗原gp41、 gp36的胶体金垫2、与所述胶体金垫2的另一端 紧密连接的硝酸纤维素NC膜3和紧密连接于所述NC膜3另一端的吸样垫4， 所述NC膜包被有相互分离的检测线5、 6和质控线7，所述检测线为包被在 NC膜上的HIVgp41、 gp36抗原，所述质控线为包被在NC膜上的抗HIV抗原 的抗体，所述上样垫1、胶体金垫2、 NC膜2和吸样垫4粘贴到塑料支撑板 8上形成试纸A9;
试纸B(10)和试纸A结构基本相同，但胶体金垫15为抗HIV p24抗体， 检测线13为抗HIV p24抗体，质控线12为抗鼠IgG抗体。
试剂盒的上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。 试剂盒试纸A抗原的包被方法为以0. 01M pH 9. 0碳酸盐缓冲液(CBS) 分别将gp41、 gp36抗原配制成lmg/ml、 0. 5mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC 膜下部以lul/cm的参数分别划线，包被T1， T2线，同时在NC膜上部包被 抗HIV抗体作为C线。试纸B包被方法为以0. 01M pH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗p24抗体配制成1.5mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以 lul/cm的参数划线，包被T3线，同时在NC膜上部包被鼠IgG抗体作为C 线。划线后将NC膜在干燥间，温度20-25。C，湿度小于30%，干燥8-10小 时，备用。
制备标记胶体金颗粒的方法为以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径 为30 — 50nm的胶体金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用 0. 2M K2C03调至pH9. 0，按100ml胶体金溶液分别加入lmg抗原或抗体，室 温搅拌1小时，加入P/oBSA， 0. 1%PEG 20000，封闭20min， 12000r/m离心 30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按lml溶液铺22cm2的比 例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间(温度20-25t:，湿度小 于30%)干燥2-4小时，制成胶体金垫，备用。
试纸条的装配方法为在干燥室内(温度20-25。C，湿度小于30%)， 取塑料支撑板板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板板的中部粘贴，在NC 膜T线一侧搭接胶棘金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金垫另一侧搭 接粘贴上样垫(搭胶体金垫的1/5);在NC膜C线一侧搭接吸样垫(搭吸 样垫的1/10);试纸A和试纸B的区别为试纸A所用的胶体金垫标记的 为HIV gp41、 gp36抗原，NC膜包被的为HIV gp41、 gp36抗原，试纸B用 的胶体金垫标记的为抗HIV p24抗体，NC膜包被的为抗HIV p24抗体。最 后用裁剪机将贴好塑料板切成3皿宽的试纸条。切好的试纸A和试纸B平 行装入塑料盒，形成HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒。
试剂盒的检测方法为将被检血清或血浆平衡至温室，将试剂盒平放， 由加样孔在试纸A和试纸B上样垫上分别加入50 — 100ul被检样品，样品 溶解胶体金并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察在30分钟内.C、 T线的 出现情况，并判定检测结果。若试纸A出现T线，说明样品中含有抗HIV 抗体，若试纸B出现T线，说明样品中含有HIV p24抗原。若T线不出现，
说明样品为阴性或含量低于试剂盒的最低检测限。
人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体和抗原联合快速试剂盒18是由盒盖19、 盒底31构成，盒盖19、盒底31均是采用塑料注塑一体形成的，盒盖19、 盒底31均是两个长方形盒状体。
盒盖19的长、宽、高以试纸A9、试纸B10的长、宽、高配合设置，在 盒盖19的前面左侧设置两个同样大小的长方形孔为B反应区孔23 、 A反 应区孔24，在B反应区孔23 、 A反应区孔24的右侧各设置一个箭头形状 的凸起为加样标示22，加样标示25，在加样标示22，加样标示25的右侧 各设置一个圆形孔为A加样孔20， B加样孔21;在盒盖19的后面左侧设置两个同样大小的B反应区孔23 、 A反应区 孔24左侧边缘各设置两个同样大小的凸柱28、凸柱29，在B反应区孔23 、 A反应区孔24的右侧纵向各设置两条同样长、宽、高的凸起为肋26、肋30， 在盒盖19的后面边缘有间隔地设置多个凸柱27，凸柱27高比凸柱28、凸 柱29的高度要高。
在盒底31左侧设置两个同样大小的组合支撑肋D，组合支撑肋D是由 类似"["形状的凸起肋36，在凸起肋36两侧外边缘横向，向右各设置一 个凸起肋37，在凸起肋37里边缘向右设置一向右各设置一"]"形状的凸 起肋39，在凸起肋39右侧纵向各设置两个同样大小的凸起肋40;在盒底 31右侧设置两个同样大小的组合支撑肋C，组合支撑肋C是由类似"["形 状的凸起肋32，凸起肋32的高度是由左向右逐渐降低形成的，在凸起肋 32里侧内纵向设置两个同样大小的两个凸起肋33，个凸起肋32右侧外边 缘设置一个"]"形状的凸起肋34，在盒底31的边缘有间隔地设置多个凸 柱27，凸柱27高比凸柱28、凸柱29的高度要高的后面边缘有间隔地设置 多个凸起孔35，以便与在盒盖19的上的凸柱27配合连接。
本实用新型的有益效果如下采用HIV抗体和抗原联合检测，使目前 的HIV胶体金类诊断试剂由第三代进入第四代，能提高HIV的检出率，縮 短HIV检测的窗口期，达到和第四代HIV ELISA诊断试剂盒类似的效果， 同时保持胶体金试剂适于现场检测，5-30分钟即出结果，操作简单，试剂 的稳定性好等特点。
本试剂盒采用了试纸A和试纸B装入同一个塑料盒中，分别检测HIV 的抗体和抗原。虽然采用了两条试纸，但检测时只需要直接加入被检样品， 并不增加检测的步骤和复杂性。而釆用两条试纸，极大地减少了产品研制 的复杂性试纸A用于HIV抗体的检测在现有技术的基础上不用作任何的 改变[李洲，人类免疫缺陷病毒(HIV)l+2型抗体三条线快速检测板，中国专 利(公开)号CN2501049]。单独研制出HIV P24抗原检测试纸就可以实现 同时对HIV抗体和抗原的联合检测。而在ELISA试剂盒中，由于要将HIV 抗原和抗体包被在同一个酶标板孔中，常常引起产品的灵敏度的明显下降， 需要改变各自的工艺，增加了产品制造的难度，到目前为止，同时检测HIV 抗体和抗原的ELISA试剂的灵敏度都低于相应的单独检测试剂。
图1试纸A结构示意图。 图2试纸B结构示意图。
图3 HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒盖主视图。图4 HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒盖后视图。 图5 HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒底俯视图。
附图符号说明
1:上样垫2:胶体金垫
3: NC膜4:吸样垫
5: gp41检测线6: gp36检测线
7:质控线(C)8:塑料支撑板
9:试纸A10:试纸B
11:吸样垫12:质控线(C)
13: P24检测线(T3)14:上样垫
15胶体金垫16: NC膜
17-塑料支撑板18:试剂盒
19: "^盖20: A加样孔
21: B加样孔22:加样标示
23: B反应区孔24: A反应区孔
25:加样标示26:肋
27:凸柱28:凸柱
29:凸柱30:肋
31:盒底32:凸起肋
33:凸起肋34:凸起肋
35:凸柱36:凸起肋
37:凸起肋38:凸起肋
39:凸起肋40:凸起肋
C:组合支撑肋D:组合支撑肋
具体实施方式
实施例l HIV抗体和抗原联合快速检测检测试纸A9 、试纸B10的制备 1主要材料
l.l重组抗原:HIV gp41、 gp36:美国Biotech Atlantic Inc(BAI.)产品， 用于试纸A的包被和标记；抗HIVP24抗体配对BAI公司产品，用于试纸 B的包被和标记；氯金酸Sigma公司产品，NC膜Millipore公司产品； BSA， PEG 20000，水解酪蛋白Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。 1.2 HIV抗体国家参考品(胶体金类)中国药品生物制品检定所检研制。 包括20份阳性血清，20份阴性血清，3份灵敏度血清，l份精密度血清。 HIV1 P24抗原国家参考品，包括括10份阳性血清，20份阴性血清，10份灵敏度血清，2份精密度血清。 2方法
2.1 HIV抗原、抗体的胶体金标记氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径 为40nm的胶体金溶液，制备完成后取3份胶体金溶液，用分别用0. 2M K2C03 将溶液调到pH7.0、 pH8.0和pH9.0。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅 拌，按每100ml溶液加入0. 5mg、 lmg、 1. 5mg将重组抗原或抗体缓慢滴加 到胶体金溶液中，继续搅拌l小时，再滴加入到终浓度为0. 1%的PEG2000 和1。/o的BSA封闭20min，标记结束后以12000 r/m离心，弃上清，沉淀按 原体积复溶至不同配比的胶体金工作液(Tris缓冲液，含BSA、水解酪蛋白， 蔗糖和表面活性剂)中。然后将标记胶体金溶液按lml溶液铺22cm2的比例 加样于无纺布上，在干燥间(温度20-25°C ，湿度小于30%)干燥2-4小时， 制成胶体金垫，干燥备用。
2.2 HIV抗原与抗体的包被在试纸A中，以0.01MpH9.0的CBS分别将 gp41、 gp36抗原配制成0.5mg/ml、 lmg/ml、 1. 5 mg/ml的溶液，用喷膜仪 在NC膜下部以lul/cm的参数分别划线，包被T1， T2线，同时在NC膜上 部包被抗HIV抗体作为C线。试纸B包被方法为以0. 01M pH 7. 2 PBS将 抗P24抗体配制成0.5mg/ml、 lmg/ml、 1. 5 mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC 膜下部以lul/cm的参数划线，包被T3线，同时在NC膜上部包被抗鼠IgG 抗体作为C线。划线后将NC膜在干燥间(温度20-25°C ，湿度小于30%)干 燥8-10小时，备用。
2.3 HIV快速诊断试纸条的组装在干燥室内(温度20-25'C，湿度小于 30%)，取塑料支撑板板，将已包被韵NC膜放置在塑料支撑板板的中部粘 贴，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金 垫另一侧搭接粘贴上样垫(搭胶体金垫的1/5);在NC膜C线一侧搭接吸 样垫(搭吸样垫的1/10);试纸A和试纸B的区别为试纸A所用的胶体 金垫标记的为HIV gp41、 gp36抗原，NC膜包被的为HIV gp41、 gp36抗原， 试纸B用的胶体金垫标记的为抗HIV p24抗体，NC膜包被的为抗HIV p24 抗体。然后用裁剪机将贴好塑料板切成3mm宽的试纸条。切好的试纸A和 试纸B平行装入塑料盒，形成HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒。
2.4检测方法将缺检血清或血浆平衡至温室，将制备好的试纸条或试剂 盒平放，检测时，在试纸A和B上样垫上分别加入50 — 100ul被检样品， 若样品中含抗HIV抗体、P24抗原，则和样品垫上的标记的胶体金结合，形 成复合物，并扩散到NC膜上进一步层析，当遇到包被在NC膜上T线处的 配对抗原、P24抗体时，复合物则又和包被抗原、P24抗体结合，被捕获在包被处，当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时，则形成肉眼可见的T
线。若试纸A出现T线，说明样品中含有抗HIV抗体，若试纸B出现T线， 说明样品中含有HIV p24抗原。若T线不出现，说明样品为阴性或含量低 于试剂盒的最低检测限。C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性样品检测时 均会出现。用肉眼直接观察在15、 20、 30和45分钟内C、 T线的出现情况， 并判定检测结果。
2.5反应体系工艺评价方法不同参数制备的试剂研制小样后，以HIV抗 体国家参考品(胶体金类)、HIV1 P24抗原国家参考品为质控，进行检测， 确定最佳的产品反应体系和工艺路线。 3结果
根据小样的检测结果，确定了试纸的最佳标记HIV抗原、抗体pH值为 为9.0;最佳标记量均为lmg每100ml胶体金溶液；最佳的胶体工作液为 50mMTris缓冲液，pH9. O，含O. 5%BSA、 1%的水解酪蛋白、2%蔗糖和0. 2% Tween 20;最佳的gp41抗原包被浓度为lmg/ml， gp36抗原包被浓度为0. 5mg/ml， P24抗体包被浓度为1. 5mg/ml。检测结果的最佳判定时间为在5-30分钟内 判定。
实施例2: HIV抗体抗原联合快速诊断试剂盒的性能分析 1主要材料
1.1 HIV抗体抗原联合快速诊断试剂盒制备方法见实施例一；
1.2 HIV抗体、抗原国家参考品中国药品生物制品检定所检研制，说明 见实施例一；
1.3含干扰物血清包括常见干扰物高血脂、溶血、黄疸血清各10份， 含相关传染病HAV、 HBV、 HIV、 TP和HP抗体阳性血清各10份，含不同抗 凝剂肝素、EDTA和枸椽酸钠血浆各10份，由本公司在天津地区相关医院收 集验证并保存，以上血清或血浆经两种以上ELISA检测均为HIV抗体和抗 原阴性血清。
1.4临床血清HIV阳性血清600份，由公司在天津地区相关医院收集， 为门诊采集检验用血清，经两种以上ELISA检测均为HIV抗体和抗原阴性 血清。HIV阳性血清20份，由公司在相关AIDS专科医院获得，确证为HIV 抗体阳性血清，已灭活。 2方法
2.1样品检测方法见实施例一，在30分钟内判定检测结果。
2.2 HIV抗体国家参考品(胶体金类)检测取出HIV抗体国家参考品(胶
体金类)血清盘，平衡到室温后用本试纸进行检测。
102.3 HIV1P24抗原国家参考品的检测取出国家参考品血清盘，平衡到室 温后用本试纸进行检测。
2.4分析特异性评估用试纸对公司保存的含干扰物样品进行检测。 2.5稳定性试验将本试纸在室温条件下保存，在l、 3、 6、 12、 18个月 取出部分试纸，以国家参考品进行测试；将本试纸置于37'C、 5(TC条件下， 每隔7天取出部试纸，以国家参考品进行测试。
2.6临床样品评估由企业从相关医院收集临床血清，用本试剂盒进行检 领U，若遇到检测阳性样品，再以两种以上商用ELISA试剂进行检测，以确 证结果。 3结果
3.1 HIV抗体国家参考品(胶体金类)检测对国家参考品(胶体金类) 血清盘进行测试，结果和预期完全一致(表l)，通过国家标准规定。 表l本试剂盒对HIV抗体国家参考品(胶体金类)的测试结果
检验项目
标准规定
HIV ( + )
20
20/20
20/20
HIV ( — )
20
》18/20
20/20
精密性样品
1
+
+
灵敏度样品
51
52
53
+ +
+ +
3.2 HIV1P24抗原国家参考品检测检测结果表明能通过国家参考品阴性 和阳性参考品的检测，P24抗原检测灵敏度至10U/ml (表2)。 表2本试剂盒对HIV1 P24国家参考品的测试结果
检验项目
标准规定
检测结果
P24 ( + )
10
10/10
10/10
HIV ( — )
20
20/20
20/20
精密性样品L
P24单独检测参考品
+
未做
精密性样品V 联合检测参考品
1
+
+
灵敏度样品
L1-L10 ELISA检测至10U/ml及以
20-0.078U/ml 10U/ml 上为阳性
3. 3分析特异性评估检测结果表明本试纸对常见干扰物高血脂、溶血-黄疸血清检测均为阴性，对含相关传染病HAV、 HBV、 HIV、 TP和HP抗体阳 性血清检测均为阴性，对含不同抗凝剂肝素、EDTA和枸椽酸钠血浆检测均 为阴性。说明对以上物质没有非特异性反应。
3.4稳定性分析本试纸在室温条件下保存，用国家参考品进行测试；1、 3、 6、 12个月捡测均能通过测试，结果无显著性差异。37"C条件下加速破 坏性试验，共检测到6周，5(TC条件下加速破坏性试验，共检测到3周， 均能通过测试，试纸性能无显著下降。根据加速破坏试验结果，试纸的稳 定性在室温条件下应该在18个月以上。
3.5临床样品试验共检测了企业收集的临床样品600份，本试剂共检测 出阳性8份，经ELISA试剂复检为阴性。特异性=592/600=98.7%。 20份阳性血清检测均为阳性，灵敏度为二20/20二100 实施例3:制备HIV抗体和抗原联合快速试剂盒18:
图3 HIV抗体和抗原联合快速检测试剂盒盖主视图。图4 HIV抗体和 抗原联合快速检测试剂盒盖后视图。图5 HIV抗体和抗原联合快速检测试 剂盒底俯视图。如图3、图4、图5所示，人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体 和抗原联合快速试剂盒18是由盒盖19、盒底31构成，盒盖19、盒底31 均是采用塑料注塑一体形成的，盒盖19、盒底31均是两个长方形盒状体。
盒盖19的长、宽、高以试纸A9、试纸B10的长、宽、高配合设置，在 盒盖19的前面左侧设置两个同样大小的长方形孔为B反应区孔23 、 A反 应区孔24，在B反应区孔23 、 A反应区孔24的右侧各设置一个箭头形状 的凸起为加样标示22，加样标示25，在加样标示22，加样标示25的右侧 各设置一个圆形孔为A加样孔20, B加样孔21;
在盒盖19的后面左侧设置两个同样大小的B反应区孔23 、 A反应区 孔24左侧边缘各设置两个同样大小的凸柱28、凸柱29，在B反应区孔23 、 A反应区孔24的右侧纵向各设置两条同样长、宽、高的凸起为肋26、肋30， 在盒盖19的后面边缘有间隔地设置多个凸柱27，凸柱27高比凸柱28、凸 柱29的高度要高。
在盒底31左侧设置两个同样大小的组合支撑肋D，组合支撑肋D是由类 似"["形状的凸起肋36，在凸起肋36两侧外边缘横向，向右各设置一个 凸起肋37，在凸起肋37里边缘向右设置一向右各设置一"]"形状的凸起 肋39，在凸起肋39右侧纵向各设置两个同样大小的凸起肋40;在盒底31 右侧设置两个同样大小的组合支撑肋C，组合支撑肋C是由类似"["形状 的凸起肋32，凸起肋32的高度是由左向右逐渐降低形成的，在凸起肋32 里侧内纵向设置两个同样大小的两个凸起肋33，个凸起肋32右侧外边缘设置一个"]"形状的凸起肋34，在盒底31的边缘有间隔地设置多个凸柱 27，凸柱27高比凸柱28、凸柱29的高度要高的后面边缘有间隔地设置多 个凸起孔35，以便与在盒盖19的上的凸柱27配合连接。
本实用新型试剂盒的组装方法将试纸A9的上样垫1对应A加样孔20 的位置装入盒底31的组合支撑肋C、组合支撑肋D上，将试纸B10的上样 垫14对应B加样孔23的位置装入盒底31的组合支撑肋C、组合支撑肋D 上，然后将盒盖19上的所有凸柱27插入盒底31上的凸起孔35中，即为 完成HIV抗体和抗原联合快速试剂盒18的组装。
权利要求1、一种人类免疫缺陷病毒抗体和抗原联合快速检测试剂盒，包括盒盖、盒底，其特征在于在盒盖(19)的前面左侧设置两个同样大小的B反应区孔(23)、A反应区孔(24)，在B反应区孔(23)、A反应区孔(24)的右侧各设置一个箭头形状的凸起为加样标示(22)，加样标示(25)，在加样标示(22)，加样标示(25)的右侧各设置一个A加样孔(20)，B加样孔(21)；在盒底(31)左侧设置两个同样大小的组合支撑肋(D)，在盒底(31)右侧设置两个同样大小的组合支撑肋(C)，试纸A(9)的上样垫(1)对应A加样孔(20)的位置装入盒底(31)的组合支撑肋(C)、组合支撑肋(D)上，将试纸B(10)的上样垫(14)对应B加样孔(23)的位置装入盒底(31)的组合支撑肋(C)、组合支撑肋(D)上，盒盖(19)上的所有凸柱(27)插入盒底(31)上的凸起孔(35)中，即为HIV抗体和抗原联合快速试剂盒(18)；还在于所述的试纸A(9)包括上样垫(1)与紧密连接于所述上样垫(1)一端的含有标记HIV抗原gp41、gp36的胶体金垫(2)、与所述胶体金垫(2)的另一端紧密连接的硝酸纤维素NC膜(3)和紧密连接于所述NC膜(3)另一端的吸样垫(4)，所述NC膜包被有相互分离的检测线(5)、(6)和质控线(7)，所述检测线为包被在NC膜上的HIVgp41、gp36抗原，所述质控线为包被在NC膜上的抗HIV抗原的抗体，所述上样垫(1)、胶体金垫(2)、NC膜(2)和吸样垫(4)粘贴到塑料支撑板(8)上形成试纸A(9)；试纸B(10)和试纸A结构基本相同，但胶体金垫(15)为抗HIV p24抗体，检测线(13)为配对的抗HIV p24抗体，质控线(12)为抗鼠IgG抗体。
2、 根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒抗体和抗原联合快速检测 试剂盒，其特征在于，试纸A(10)标记和包被用抗原为重组表达HIV抗原 gp41、 gp36，亦可再增加或替换为HIV其它特异性抗原gp160、 gpl20、 P24 及0亚型gp41等，试纸B标记和包被用抗体为抗HIV p24抗体。
3、 根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒抗体和抗原联合快速检测 试剂盒，其特征在于所述的上样垫(l) (14)为玻璃纤维膜或无纺布，吸样 垫(4) (ll)由吸水滤纸构成。
4、 根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒抗体和抗原联合快速检测 试剂盒，其特征在于所述的试剂盒(18)的盒盖(11)、盒底(20)均是 采用塑料注塑一体形成的，盒盖(11)、盒底(20)均是两个上角为圆弧 形状的长条形状且其下边中部设置向上的方形凹陷；人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体和抗原联合快速试剂盒(18)是由盒盖(19)、盒底(31)构 成，盒盖(19)、盒底(31)均是采用塑料注塑一体形成的，盒盖(19)、盒底(31均是两个长方形盒状体。盒盖(19)的长、宽、高以试纸A (9)、试纸B (10)的长、宽、高 配合设置，在盒盖(19)的前面左侧设置两个同样大小的长方形孔为B反 应区孔(23) 、 A反应区孔(24)，在B反应区孔(23) 、 A反应区孔(24) 的右侧各设置一个箭头形状的凸起为加样标示(22)，加样标示(25)， 在加样标示(22)，加样标示(25)的右侧各设置一个圆形孔为A加样孔 (20) ， B加样孔(21);在盒盖(19)的后面左侧设置两个同样大小的B反应区孔(23) 、 A 反应区孔(24)左侧边缘各设置两个同样大小的凸柱(28)、凸柱(29)， 在B反应区孔(23) 、 A反应区孔(24)的右侧纵向各设置两条同样长、 宽、高的凸起为肋(26)、肋(30)，在盒盖(19)的后面边缘有间隔地 设置多个凸柱(27)，凸柱(27)高比凸柱(28)、凸柱(29)的高度要 高。在盒底(31)左侧设置两个同样大小的组合支撑肋(D)，组合支撑肋 (D)是由类似"["形状的凸起肋(36),在凸起肋(36)两侧外边缘横 向，向右各设置一个凸起肋(37)，在凸起肋(37)里边缘向右设置一向右 各设置一 "]"形状的凸起肋(39),在凸起肋(39)右侧纵向各设置两个 同样大小的凸起肋(40);在盒底(31)右侧设置两个同样大小的组合支撑 肋(C)，组合支撑肋(C)是由类似"["形状的凸起肋(32)，凸起肋(32) 的高度是由左向右逐渐降低形成的，在凸起肋(32)里侧内纵向设置两个 同样大小的两个凸起肋(33)，个凸起肋(32)右侧外边缘设置一个"]"形 状的凸起肋(34)，在盒底(31)的边缘有间隔地设置多个凸柱(27)，凸 柱(27)高比凸柱(28)、凸柱(29)的高度要高的后面边缘有间隔地设置 多个凸起孔(35)，以便与在盒盖(19)的上的凸柱(27)配合连接。
专利摘要本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体和抗原联合快速检测的免疫层析试剂盒。试剂盒由两条独立的试纸A、B和存放试纸的塑料盒C组成，试纸A用于检测HIV抗体。试纸B用于检测HIV p24抗原。将试纸A和试纸B平行装入塑料盒中组成试剂盒。检测时将被检样品加在试纸条的上样垫上，然后直接观察免疫反应结果，实现检测。本试剂盒用于HIV感染的筛查或临床诊断，同时检测HIV抗体和抗原，较单纯的抗体检测能有效缩短HIV检测的窗口期，具有反应快速、操作简便、适合现场检测和经济实用等优点。
文档编号G01N33/558GK201331527SQ200820074600
公开日2009年10月21日 申请日期2008年4月30日 优先权日2008年4月30日
发明者洲 李, 杨发青 申请人:天津中新科炬生物制药有限公司