专利名称：一种酮戊二酸精氨酸盐的hplc检测方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域一种测定α -酮戊二酸-L-精氨酸盐的方法，特别涉及一种采用高效液相色谱法测定α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法。
背景技术：
α -酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2)及其制剂是法国瑞法兰药厂研制的护肝药物。 其针对肝脏功能失调，能直接且快速提供营养、给肝细胞提供能量，迅速维护肝脏正常功能及其健康。在新药研究过程中，药品的含量及其杂质的准确测定和分析是保证其质量的重要条件。α -酮戊二酸-L-精氨酸盐易解离，因此，在对其含量、纯度、有关物质等进行分析时，遇到较大困难。现有技术仅有对α-酮戊二酸或L-精氨酸单体进行含量或有关物质测定的报道，景宏武等公开了采用分光光度法测定α-酮戊二酸(α-酮戊二酸和丙酮酸的分光光度法同时测定.同济大学学报，1986，14 ) :531-536)，但分光光度法精度差，准确性不高，而且仅能测定α-酮戊二酸的含量。毛影等公开了采用高效液相色谱法测定酮戊二酸的含量，其采用AgilentODS C18柱，以0. 5% (NH4)2HPO4-H3PO4缓冲液为流动相，流速为 110ml/min,紫外检测波长为233nm(HPLC法测定酮戊二酸的含量.中国药事，2008，22 (10) 598-599)，但该方法也仅能用于测定酮戊二酸的含量，无法对α -酮戊二酸-L-精氨酸盐进行含量检测和有关物质的检查。到日前为止，现有技术中没有对α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的质量控制的报道。因次，现有技术需要一种对α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂进行质量检测和纯度检查的准确度高，重现性好的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，从而保证α -酮戊二酸-L-精氨酸盐的纯度，实现其原料和制剂的质量控制。采用本发明的方法，可以通过一次高效液相色谱检测，同时准确测定出α-酮戊二酸-L-精氨酸盐或其制剂中α-酮戊二酸和L-精氨酸的含量和有关物质，主药与杂质均能达到良好的分离，可方便地用于α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的含量及其有关物质的检测。本发明所述的方法中，α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的α-酮戊二酸与L-精氨酸的比例为1 1或1 2，优选1 2，即α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2)。本发明所述的高效液相色谱法的色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液=(0-20) (30-70) (20-50)，优选 (0-10) (50-60) 40，最优选O 60 40，以体积份数计
检测波长为200-220nm，优选 205nm。本发明的方法中，柱温为5_50°C，优选为10_40°C，最优选为室温(15-30°C )。本发明的方法中，流动相中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，其pH值为2. 5-7. 0，优选 4. 0-7. 0，最优选5. 2。其中，用于PH值调节的酸或碱包括盐酸、硫酸、硫酸氢盐、枸橼酸、酒石酸、甲磺酸、二甲苯磺酸、乙二酸、甲酸、草酸、稀磷酸，醋酸，磷酸二氢盐溶液，磷酸氢二盐溶液，优选磷酸氢二钠或钾，最优选磷酸氢二钠溶液。任选地，磷酸盐溶液中还可以加入三乙胺或四氢呋喃，其中，磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为980-1000 0-20 (0-5)； 优选 1000 0 0-3。具体地，本发明的检测方法包括以下步骤1、将α -酮戊二酸-L-精氨酸盐供试品溶解；2、溶解后的供试品溶液注入高效液相色谱仪；3、记录色谱图。其中，色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液=(0-20) (30-70) ^)-50)，优选 (0-10) (50-60) 40，最优选0 60 40，以体积份数计；流速0.8-2. Oml/min,优选 0. 8-1. 5ml/min,最优选 0. 8-1. 2ml/min。
检测波长为 200-220nm，优选 205nm。以上方法中，柱温优选为室温。以上方法中，流动相中的磷酸盐缓冲液的pH值为2. 5-7. 0，优选4. 0-7. 0，最优选 5.2。其中，用于PH值调节的酸或碱包括盐酸、硫酸、硫酸氢盐、枸橼酸、酒石酸、甲磺酸、二甲苯磺酸、乙二酸、甲酸、草酸、稀磷酸，醋酸，磷酸二氢盐溶液，磷酸氢二盐溶液，优选磷酸氢二钠或钾，最优选磷酸氢二钠溶液。磷酸盐溶液中还可以加入三乙胺或四氢呋喃，其中， 磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为980-1000 0-20 (0-5)；优选1000 O 0-3。本发明的方法中，色谱图的记录时间为100分钟以下，优选80分钟，更优选60分钟。本发明的测定方法中，α -酮戊二酸-L-精氨酸盐溶液的测定浓度为0. 1-3. Omg/ mL,优选 0. 5-1. 5mg/mL,更优选 1. 0mg/mLo采用本发明的方法，主成分的出峰时间为两主峰的保留时间为精氨酸 (3-50min,优选 5_20min，最优选 9-Hmin)，酮戊二酸(5-50min,优选 15_30min，最优选 20-25min)。本发明采用氨基色谱柱，能够有效地分离α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其有关物质，准确测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的纯度；本发明解决了 α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其有关物质的分离问题，从而确保α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的质量可控。
图1流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 2) = 60 40时的HPLC2流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2%三乙胺，用稀磷酸调PH值至5. 2) = 60 40时的HPLC3流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2%三乙胺，用乙二酸调pH值至5. 2) = 60 40时的HPLC4流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至6. 5) = 60 40时的HPLC5流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 5) = 50 50时的HPLC6流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=70 30 时的HPLC7流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 01mol/L磷酸二氢钠溶液，加入 0.2%三乙胺，用稀磷酸调pH值至7.0) = 15 45 40时的HPLC8流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 03mol/L磷酸二氢钠溶液，加入 0.2%三乙胺和2%四氢呋喃，用稀磷酸调pH值至4.0) = 15 50 ；35时的HPLC9流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液，加入 0.375%三乙胺和四氢呋喃，用稀磷酸调pH值至6.0) = 20 30 50时的HPLC10流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用稀磷酸调PH值至6. 0) = 10 50 40时的HPLC11流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，用 0. 02mol/L的磷酸氢二钾溶液调节pH值至6. 0) = 10 60 30时的HPLC12流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸氢二钠溶液，用稀磷酸调PH值至6. 0) = 10 60 30时的HPLC13甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，，用枸橼酸调pH 值至5.0) =5 55 40流动相为时的HPLC14流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，用 0. 005mol/L的盐酸调节pH值至3. 5) = 10 50 40时的HPLC15流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，用 0. 02mol/L的磷酸氢二钠调节pH值至4. 5) = 10 50 40时的HPLC图
具体实施例方式本发明的以下实施例仅用来说明实现本发明的技术方案，这些实施方式并不对本发明构成进一步限定。本领域技术人员根据现有知识对本发明进行等同替换或相应的逻辑改进，均属于本发明的范围。以下实施例中，采用的高效液相色谱仪为日本岛津: LC-I OATvp, SPD-lOAvp ；色谱柱为 Agilent NH2 5ym 4. 6 X 250mm ；进样体积为 20 μ 1。当然，也可以采用其他厂家和型号的高效液相色谱仪、其他粒径和长度的氨基色谱柱、以及其他进样体积，都能达到本发明的目的。实施例1色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 2) = 60 40 ；
流速LOmol/L；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图1。由图1可知，峰1-3均为杂质峰，峰4为L-精氨酸峰，峰5为α -酮戊二酸峰。峰1_3与主峰分离度均大于2. 5。α-酮戊二酸-L-精氨酸盐选用的测定波长处于末端吸收，易受流动相的影响。采用本实施例中流动相PH值6. 8 (水相ρΗ值5. 2)，基线更趋于稳定，且流动相系统简单易配制，测定过程不易受外界环境干扰；且两主峰出峰时间适宜，与杂质分离度良好。实施例2色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0.2%三乙胺， 用稀磷酸调PH值至5. 2) = 60 40 ；流速LOmol/L；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图2。由图2可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-2、峰4-5为杂质峰，峰3为L-精氨酸峰， 峰6为α -酮戊二酸峰。峰1-2、峰4-5与主峰分离度均大于2. 5。实施例3色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0.2%三乙胺， 用乙二酸调PH值至5. 2) =60 40;流速LOmol/L；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图3。由图3可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-3为杂质峰，峰4为L-精氨酸峰，峰5为 α-酮戊二酸峰。峰1-3与主峰分离度均大于2. 5。实施例4
色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L的磷酸氢二钠溶液调节PH值至6. 5) = 60 40 ；流速LOmol/L；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图4。由图4可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-3、峰5为杂质峰，峰4为L-精氨酸峰，峰 6为α -酮戊二酸峰。峰1-3与主峰分离度均大于2. 5，峰5与主峰分离度为2. 4。实施例5色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 5) = 50 50 ；流速LOmol/L；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图5。由图5可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-5为杂质峰，峰6为L-精氨酸峰，峰7为 α-酮戊二酸峰。峰1-5与主峰分离度均大于2. 5。实施例6色谱条件流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=70 30 ；流速LOmol/L；
检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图6。由图6可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰2-4为杂质峰，峰1为L-精氨酸峰，峰5为 α-酮戊二酸峰。峰2-4与主峰分离度均大于2. 5。实施例7色谱条件
流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 01mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2% 三乙胺，用稀磷酸调PH值至7.0) = 15 45 40 ；流速1.0mol/L;检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图7。由图7可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-3为杂质峰，峰4为α-酮戊二酸峰，峰 5为L-精氨酸峰。峰2-4与主峰分离度均大于2. 5。实施例8色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 03mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2% 三乙胺和2%四氢呋喃，用稀磷酸调pH值至4.0) =15 50 35;流速1.0mol/L;检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图8。由图8可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1、峰3-5为杂质峰，峰2为α-酮戊二酸峰，峰6为L-精氨酸峰。峰3与主峰分离度均为2. 2，其余各杂质峰与主峰分离度均大于
2 · 5 ο实施例9色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液，加入0. 375% 三乙胺和四氢呋喃，用稀磷酸调PH值至6.0) =20 30 50;流速L0mol/L;检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图9。由图9可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-5为杂质峰，峰6为α-酮戊二酸峰，峰 7为L-精氨酸峰。峰1-5与主峰分离度均大于2. 5。实施例10
色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，用稀磷酸调 pH 值至 6. 0) = 10 50 40 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温20°C实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图10。 由图10可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-2、峰4-5为杂质峰，峰3为α-酮戊二酸峰，峰6为L-精氨酸峰。峰1-2、峰4-5与主峰分离度均大于2. 5。实施例11色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液，用0. 02mol/ L的磷酸氢二钾溶液调节pH值至6. 0) = 10 60 30 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温40°C实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图11。 由图11可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1、2、4、6、7为杂质峰，峰3为α-酮戊二酸峰，峰5为L-精氨酸峰。峰1、2、4、6、7与主峰分离度均大于2. 5。实施例12色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸氢二钠溶液，用稀磷酸调 pH 值至 6. 0) = 10 60 30 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) 20mg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图12。 由图12可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-4、峰6为杂质峰，峰5为α-酮戊二酸峰，峰7为L-精氨酸峰。峰1-4、峰6与主峰分离度均大于2. 5。实施例13
色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸氢二钠溶液，，用枸橼酸调 pH 值至 5. 0) = 5 55 40 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图13。 由图13可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-4为杂质峰，峰5为L-精氨酸峰，峰 6为α-酮戊二酸峰。峰1-4与主峰分离度均大于2. 5。实施例14色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 005mol/ L的盐酸调节pH值至3. 5) = 10 50 40 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图14。 由图14可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1、峰3-4为杂质峰，峰2为L-精氨酸峰，峰5为α-酮戊二酸峰。峰1与主峰分离度为2.1，其余各杂质峰与主峰分离度均大于
2 · 5 ο实施例15色谱条件流动相甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/ L的磷酸氢二钠调节pH值至4. 5) = 10 50 40 ；流速1.Omol/L ；检测波长205nm柱温室温实验步骤供试品溶液称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2) IOmg置于IOml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。精密吸取供试品溶液20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图15。 由图15可知，样品中主峰和各杂质峰分离良好。峰1-7为杂质峰，峰8为L-精氨酸峰，峰 9为α-酮戊二酸峰。峰1-7与主峰分离度均大于2. 5。
权利要求
1.一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，其色谱条件为色谱柱氨基柱；流动相为甲醇乙腈磷酸盐缓冲液=(0-20) (30-60) 00-50)，以体积份数计；检测波长200-220nm。
2.根据权利要求1的方法，其中的α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的α-酮戊二酸与L-精氨酸的比例为1 1或1 2。
3.根据权利要求2的方法，其中的α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的α-酮戊二酸与L-精氨酸的比例为1 2。
4.根据权利要求1 3的任一方法，其中的流动相为甲醇乙腈磷酸盐缓冲液= (0-10) (50-60) 40，以体积份数计。
5.根据权利要求4的方法，其中的流动相为甲醇乙腈磷酸盐缓冲液= 10 50 40，以体积份数计。
6.根据权利要求5的方法，其中的检测波长为205nm。
7.根据权利要求6的方法，其中采用的柱温为室温。
8.根据以上任一权利要求的方法，其中磷酸盐缓冲液的pH值为2.5-7.0。
9.根据权利要求8的方法，其中磷酸盐缓冲液的pH值为4.0-7.0。
10.根据权利要求9的方法，其中磷酸盐缓冲液的pH值为6.0。
11.根据以上任一项权利要求的方法，其中磷酸盐缓冲液中还加入三乙胺和/或四氢呋喃，磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为(980-1000) (0-20) (0-5)。
12.根据权利要求11的方法，其中磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为 1000 0 0-3。
13.根据以上任一项权利要求的方法，包括以下步骤(1)将α-酮戊二酸-L-精氨酸盐供试品溶解；(2)溶解后的供试品溶液注入高效液相色谱仪；(3)记录色谱图。
14.根据权利要求13的方法，α-酮戊二酸-L-精氨酸盐溶液的测定浓度为 0. 1-3. 0mg/mLo
15.根据权利要求14的方法，α-酮戊二酸-L-精氨酸盐溶液的测定浓度为 0. 5-1. 5mg/mL。
16.根据权利要求15的方法，α-酮戊二酸-L-精氨酸盐溶液的测定浓度为1. Omg/mL。
17.一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，其色谱条件为流动相乙腈-磷酸缓冲盐溶液=60 40;其中的磷酸缓冲盐溶液为0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，并用0. 02mol/L的磷酸氢二钠溶液调节pH值至5. 2 ； 流速1. Omol/L ； 检测波长205nm ；称取α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 幻置于量瓶中，加流动相溶解并稀释至lmg/ml，摇勻，得供试品溶液精密吸取供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
18.根据权利要求17的方法，其中的氨基柱为AgilentNH2, 5 μ m，4. 6 X 250mm的氨基柱。
19.根据权利要求18的方法，其中的柱温为室温。
20.根据权利要求19的方法，进样体积为20μ 1。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液＝(0-20)∶(30-70)∶(20-50)，以体积份数计；检测波长为200-220nm。
文档编号G01N30/60GK102269737SQ20101019257
公开日2011年12月7日 申请日期2010年6月7日 优先权日2010年6月7日
发明者常龙, 温守明, 陈小平 申请人:北京嘉事联博医药科技有限公司