专利名称：EB病毒IgA抗体检测试剂盒(胶体金法)及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗体检测试剂盒，具体地说是一种应用胶体金法检测EB病毒IgA 抗体的试剂盒及制备方法。
背景技术：
EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)是疱疹病毒科Y亚科中唯一能引起人类感 染的淋巴滤泡病毒，1964年Epstein及Barr等从非洲儿童恶性淋巴瘤的细胞培养中首先发 现，故命名为EB病毒，是最早被识别的人类肿瘤病毒。采用酶联免疫吸附(ELISA)检测法检测血清/血浆中的EB抗体最为常用，已有 商品化的试剂盒，例如以ELISA法与间接免疫酶染色(IEA)法检测鼻咽癌血清中IgA2VCA 抗体、EB病毒早期复合抗原(EBV 2EA)IgG的抗体滴度，在敏感性相同(88.3%)的前提 下，ELISA法特异性(98. 3% )明显优于IEA法(53. 2% )。在特异性为97. 7%的前提下用 ELISA法检测鼻咽癌血清的敏感性也显著高于用IEA法测定EBV 2EA IGA抗体滴度(IGA 2EA IEA)的敏感性。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分 离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种应用胶体金法检测EB病毒IgA抗体的试剂 盒及其制备方法，用于定性检测血清(浆)样本中的EB病毒NA1 IgA抗体，采用本方法检 测，只用20min就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具 有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于EB病 毒的检测和控制起到非常重大的作用。本发明的技术方案为一、原料本试剂盒所使用的检测线包被原料为重组EB NA1抗原。本试剂盒所使用的胶体金标记原料为鼠抗人IgA单抗。本试剂盒所用质控线原料为羊抗鼠IgG抗体。二、原料要求1、重组EB病毒抗原(1)外观无色透明液体；(2)浓度及纯度要求浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10 yl条件下 仅存一条带；2、羊抗鼠IgG抗体(1)外观无色透明液体；(2)浓度要求浓度大于4mg/ml ；3、鼠抗人IgA单抗
(1)外观无色透明液体；(2)浓度及纯度要求浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10 yl条件下 存两条带；三、生产工艺条件的确定1、反应膜包被条件的优化1. 1检测线包被浓度和胶体金标记鼠抗人IgA稀释比例的选择按照上述确定好的标记条件进行标记，将其体积浓缩至原体积的1/10，原体积以 胶体金体积计算，再以不同的稀释比例稀释浓缩液，用稀释液浸泡金标垫，1.5ml/条，干燥 后与以不同检测线包被浓度，0. 1 u 1/mm的包被量包被好的EB反应膜进行配对，检测内控 血清。实验方案如表1，实验结果如表2、3 表1实验方案设计
权利要求
EB病毒IgA抗体检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原EB NA1、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgA单抗，其特征在于所述重组EB病毒抗原为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用SDS PAGE测定，上样量在10μl条件下存一条带；所述羊抗鼠IgG抗体为无色透明液体，浓度大于4mg/ml；所述鼠抗人IgA单抗为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用SDS PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。
2.根据权利要求1所述的EB病毒IgA抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以 下步骤(1)反应膜的制备用磷酸盐缓冲液将重组EB病毒抗原稀释到包被浓度为1.0mg/ml， 将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2. Omg/ml，用点膜机将两种包被液分别划到硝酸纤维 素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgA单抗金结合物垫的制备将标记浓度为10-23Pg/ml的鼠抗人IgA 单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgA单抗溶液，以转速为12000r/min离心 40min,弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备 成EB-IgA金结合物垫，将EB-IgA金结合物垫放入干燥保存；(3)切割装配将反应膜、EB-IgA金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配成反应板，再用 切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。
3.根据权利要求2所述的EB病毒IgA抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述步 骤⑴和⑵的干燥条件为37°C干燥3小时。
4.根据权利要求2所述的EB病毒IgA抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述步 骤(2)的鼠抗人IgA单抗的标记浓度为g/ml。
全文摘要
本发明涉及一种EB病毒IgA抗体检测试剂盒(胶体金法)及制备方法，所述试剂盒包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原EB-NA1、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgA单抗，制备方法是通过制备反应膜和鼠抗人IgA单抗金结合物垫，以及切割装配得到产品。本发明的优点在于EB病毒IgA抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于EB病毒的检测和控制效果明显。
文档编号G01N33/577GK101949932SQ20101025514
公开日2011年1月19日 申请日期2010年8月17日 优先权日2010年8月17日
发明者周晟 申请人:北京中检安泰诊断科技有限公司