专利名称：一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法
技术领域：
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法。
背景技术：
蛋白芯片作为一种高通量检测系统，需将蛋白质固定在固相基质的表面形成微阵列，最后通过特定的检测方式来分析蛋白之间的相互作用或测定目标分子的含量。蛋白芯片的检测方式有放射分析、荧光分析和化学发光分析等，与前两者相比，化学发光法随着其底物的不断改进，具有如下优势信号强，灵敏度高，可以检测飞克级的目标分析物；稳定性好，发光持续时间达几个小时，有利于检测的准确性和重复性。无论采用何种检测方式， 点形的均一性对蛋白芯片检测的准确性来说是至关重要的。点形的不均一主要是指点的中空和拖尾，前者与基质表面的化学性质和点样缓冲液成分相关，后者除了这两个因素，还与特定的检测方式有关。化学发光分析中，如果发光方式不当会导致芯片点出现拖尾，不仅削弱本身的信号强度，也会对周围点的信号产生干扰。不同检测方式下，固相蛋白芯片中出现点拖尾的现象虽有报道；基质表面的化学性质或者点样缓冲液中的成分对点形的影响报道也有不少，但是迄今为止未找到通过改变化学发光方式来抑制点拖尾的方法固相蛋白芯片的拖尾现象。如用化学发光分析钙调蛋白时，出现信号漂白的同时，也出现了点拖尾的现象(参考文献:Schweitzer Barry ；Predki Paul ；SnyderMichael. Preteomics 2003，3，2190—2199)基质表面的化学性质对蛋白芯片点形的影响。如用聚-L-赖氨酸修饰的玻片获得的点形比用凝胶修饰的玻片获得的点形更加均一(参考文献jeurynck-krvoss Shannon L. ；White Amanda Μ. ；Baird Cheryl L, et al. AnalBiochem. 2007，371 (1) :105-115.)点样缓冲液成分对蛋白芯片点形的影响。如与含有甘油的点样缓冲液相比，含有聚乙烯醇的点样缓冲液产生的点形更规则，更均一。(参考文献mi Peng ；Grainger David W. J Proteome Res. 2006,5(11) :2956-2965.)这些文献报道中虽然提到了蛋白芯片点的拖尾现象以及部分影响因素，但没有提及化学发光分析中抑制点拖尾的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法。作为本发明的一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法，是以蛋白芯片酶免化学发光产生的点形为研究对象，在加入一层含表面活性剂的缓冲液的基础上再加入化学发光底物进行酶促反应，然后捕获图像。
该方法具体包括如下步骤(1)配置含表面活性剂的Tris缓冲液，所述表面活性剂为Tween-20或 TritonX-IOO ；浓度为 0. 1% -0. 5% (M/V)；(2)将一定体积的步骤(1)所配置含表面活性剂的Tris缓冲液加到芯片基质表面形成溶液层；(3)在步骤⑵所形成的溶液层的基础上，再添加化学发光底物混合溶液；其中含表面活性剂的缓冲液与底物混合溶液的体积比为1 :3-1:9;(4)静止进行酶促反应Imin后，用蛋白芯片检测仪来捕获图像。所述1Tris缓冲液由0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl组成，以去离子水配制，用盐酸调节PH = 7. 4 士 0.2。本发明具有如下有益效果和实质性特点所制蛋白芯片点的均一性强，检测的准确性高，方法成本低廉，操作简便。
图1为本发明加入化学发光底物混合溶液之前先加入含表面活性剂的缓冲液时的蛋白芯片照片。图2为加入化学发光底物混合溶液之前未加入含表面活性剂的缓冲液时的蛋白芯片照片。
具体实施例方式以下对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例应用本发明所述技术手段与原有技术的对比实验首先配置含Tween-20 的 Tris 缓冲液0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl，0· 2% Tween-20 (M/V)，以去离子水配制，用盐酸调节pH = 7.4 ；待芯片经免疫反应、洗涤、晾干后， 分别滴加5微升上述缓冲液于以玻片为基质的单个芯片表面(< Icm2)，轻轻晃动使之铺开形成溶液层；然后再分别滴加20微升按1 1(H202:鲁米诺及增强子)混合的底物溶液，送至检测仪内，辣根过氧化氢酶酶促反应Imin后获取芯片图片(如图1所示)；或者在没有缓冲液层的情况下，直接加底物混合溶液，送至检测仪内，酶促反应Imin后获取芯片图片(如图2所示)。经过对比观察可以很明显看出，在完成免疫反应，并经过洗涤、晾干后的蛋白芯片固相表面直接加入化学发光底物混合溶液后，液体在固相表面扩散的过程中由于界面张力需要一段时间，因此一部分光子会随着液体的扩散而扩散，形成“彗星”似的拖尾现象(如图2所示)；在加入化学发光底物混合溶液之前先加入含表面活性剂的缓冲液，形成一个溶液层，然后再加入化学发光底物混合物，由于液体在溶液中的扩散速率与酶促反应产生光子的速率相当，因此产生的点形较为规整，即是点本身的形状(如图1所示)，证明此方法能有效抑制点的拖尾。以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法，其特征在于，具体包括如下步骤(1)配置含表面活性剂的Tris缓冲液，所述表面活性剂为Tween-20或TritonX-IOO； 浓度为 0. -0. 5% (M/V)；(2)将一定体积的步骤(1)所配置含表面活性剂的Tris缓冲液加到芯片基质表面形成溶液层；(3)在步骤( 所形成的溶液层的基础上，再添加化学发光底物混合溶液；其中含表面活性剂的缓冲液与底物混合溶液的体积比为1 :3-1:9;(4)静止进行酶促反应Imin后，用蛋白芯片检测仪来捕获图像。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Tris缓冲液由0.lmol/L Tris, 0. 85% (M/V)NaCl组成，以去离子水配制，用盐酸调节pH = 7. 4士0. 2。
全文摘要
本发明公开的一种通过改变化学发光方式抑制固相蛋白芯片点拖尾的方法，它以固相蛋白芯片中酶免化学发光产生的点形为研究对象，在加入一层含表面活性剂的缓冲液的基础上再加入化学发光底物进行酶促反应，然后捕获图像。所制蛋白芯片点的均一性强，检测的准确性高，方法成本低廉，操作简便。
文档编号G01N21/76GK102175668SQ20111003034
公开日2011年9月7日 申请日期2011年1月28日 优先权日2011年1月28日
发明者姚涌, 徐宏科, 杨小丽, 柳飞舟, 石怡, 范文燕 申请人:上海铭源数康生物芯片有限公司