专利名称：一种检测植物激素β-3-吲哚乙酸的电化学免疫传感方法
技术领域：
本发明涉及生物检测方法，具体是一种检测植物激素β -3-吲哚乙酸的电化学免疫传感方法。
背景技术：
^^是化(1016-3-3061化acid的简称，中文化学名称为β-3-吲哚乙酸，生物学名称为生长素，是传统五大类植物激素中最早被发现的一种，也是具有相当重要的生物学意义以及应用价值的一种植物生长物质。β -3-吲哚乙酸在植物的叶芽和嫩叶等分生组织中广泛存在。植物细胞经常利用色氨酸来合成β-3-吲哚乙酸。它普遍存在于植物体内，高浓度抑制植物生长，低浓度促进植物生长，对非植物安全无害，亦无作用。正是由于IAA在生物生理学和农业生产中均有重要的作用，而其含量又较低，化学结构不稳定，易分解，所以如何对IAA含量进行准确的测定就具有十分重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种植物样品中IAA含量的检测方法。本发明能较好的满足IAA测定的需要，且方法简单，快速，灵敏度高，为检测 IAA提供了一种新的途径。为了达到上述目的，本发明提供的检测植物样品中IAA含量的方法包括以下步骤在金电极表面制备无试剂型IAA电化学免疫传感器；绘制标准工作曲线； 对实际植物样品中IAA含量进行检测。本发明解决其技术问题所采用的技术方案还可以进一步完善。所述无试剂型IAA电化学免疫传感器可以由以下步骤制备(1)将处理干净的金电极首先浸入0.02 M半胱胺溶液中4°C下反应他，使其表面形成致密的自组装单层膜。 (2)水洗晾干后，在室温条件下将其浸入10 mg/mL的酵母细胞溶液中反应4h，取出，水洗， 晾干。(3)然后滴加40ml的0.5 mg/mL IAA抗体溶液(PBS，pH 7.5)于金电极表面，37°C下温育lh。取出水洗，晾干。(4)最后，采用30ml的lOmg/mLBSA溶液封闭晶振表面的非特异性反应位点。按照此方法即获得无试剂型IAA电化学免疫传感器，修饰好的免疫传感器电极探针可浸入适宜PH值的PBS溶液中于4°C下保存备用。所述的制作标准工作曲线方法为 将修饰有抗体的工作电极(即制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器)置于不同浓度的抗原(IAA)溶液中孵育60min (37°C )，在相同条件下测定其循环伏安曲线，响应电流差值与IAA浓度成正比。为获得一个稳定的实验结果，对生物传感器表面的电流连续检测直到稳态，获得稳定值。改变IAA标准溶液的浓度，按上述步骤测定一系列不同浓度的IAA标准溶液，用免疫传感器表面的循环伏安电流变化值与IAA浓度绘制标准工作曲线。所述的样品测定方法为先测定制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器表面循环伏安电流值；然后取处理好的样品溶液取常规量滴到已制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器，37°C环境下反应60min ；对免疫传感器表面的循环伏安电流连续检测直到稳态，获得稳定数值。将响应电流差值与绘制好的标准工作曲线对照获得植物样品溶液中IAA含量的数值。IAA电化学免疫传感器的检测原理本发明是基于利用电化学免疫传感器具有高灵敏度、简便、快速、可靠等特点，结合生物识别系统(抗原抗体特异性结合)而形成的一种自动化分析检测系统，实现植物样品中IAA含量的快速检测。本发明利用自组装技术和酵母细胞活体固定化技术，将IAA抗体固定在通过由自组装单层半胱氨膜和静电吸附活体酵母细胞修饰的金电极表面，解决了抗体固定的难题，然后在电极上滴加待测样品，由于IAA能与anti-IAA发生高特异性的免疫反应，如果样品中IAA含量高，结合到金电极表面的IAA的量就多，然后用循环伏安法测定。本发明实际上响应信号与样品中2，4-D含量成正比，即样品中IAA越多，连接到金电极上的抗原就越多，免疫响应电流差值就越大，信号越明显。本发明效果是 在IAA浓度为lng/mL-125ng/mL范围内成线性关系，校正曲线是y=0. 0395x+0. 6499，相关性系数R为0. 9976，检测下限为0. 05ng/mL。经应用证实此方法能较好的满足植物样品中 IAA含量测定的需要。
权利要求
1.一种检测植物激素β-3-吲哚乙酸(IAA)的电化学免疫传感方法，其特征在于包括以下步骤(1)在金电极表面制备无试剂型IAA电化学免疫传感器；(2)制作标准工作曲线；(3)对实际植物样品中IAA含量进行检测。
2.根据权利要求1所述的无试剂型IAA电化学免疫传感器由以下步骤制备将处理干净的金电极首先浸入0.02 M半胱胺溶液中4°C下反应他，使其表面形成致密的自组装单层膜；水洗晾干后，在室温条件下将其浸入10 mg/mL的酵母细胞溶液中反应4h，取出，水洗，晾干；然后滴加40ml的0.5 mg/mL IAA抗体溶液(PBS，pH 7.5)于金电极表面，37°C 下温育Ih ；取出水洗，晾干；最后，采用30ml的lOmg/mLBSA溶液封闭晶振表面的非特异性反应位点；按照此方法即获得无试剂型IAA电化学免疫传感器，修饰好的免疫传感器电极探针可浸入适宜PH值的PBS溶液中于4°C下保存备用。
3.根据权利要求1所述的标准工作曲线的制作，其特征在于将修饰有抗体的工作电极(即制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器)置于不同浓度的抗原(IAA)溶液中孵育 60min (37°C )，在相同条件下测定其循环伏安曲线，响应电流差值与IAA浓度成正比；为获得一个稳定的实验结果，对生物传感器表面的电流连续检测直到稳态，获得稳定值；改变 IAA标准溶液的浓度，按上述步骤测定一系列不同浓度的IAA标准溶液，用免疫传感器表面的循环伏安电流变化值与IAA浓度绘制标准工作曲线。
4.根据权利要求1所述的检测植物样品中IAA含量的方法，其特征在于先测定制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器表面循环伏安电流值；然后取处理好的样品溶液取常规量滴到已制备好的无试剂型IAA电化学免疫传感器，37°C环境下反应60min ；对免疫传感器表面的循环伏安电流连续检测直到稳态，获得稳定数值；将响应电流差值与绘制好的标准工作曲线对照获得植物样品溶液中IAA含量的数值。
全文摘要
本发明涉及了一种检测植物激素β-3-吲哚乙酸的电化学免疫传感方法，主要包括以下步骤来实现1)电极修饰与免疫传感器的制备；2)标准曲线的制备；3)样品的检测。本发明有益的效果是在传感器界面构建中，利用酵母细胞对IAA抗体进行活体定向固定，提高了检测下限和灵敏度，从而实现IAA的高灵敏定量测定。该方法在IAA浓度为1ng/mL～125ng/mL范围内成线性关系，检测下限为0.05ng/mL，能较好的满足对植物样品中IAA含量测定的需要，且具有方法简便，结果可靠，成本较低等优点。
文档编号G01N33/74GK102253223SQ20111011105
公开日2011年11月23日 申请日期2011年4月30日 优先权日2011年4月30日
发明者李合松, 王若仲, 肖浪涛, 蔺万煌, 黄志刚 申请人:湖南农业大学