尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂及制备方法
【专利摘要】本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种对人体内异常代谢物—5-羟吲哚乙酸检测试剂及制备方法。所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，包括Hg2+、Hg22+、Cu2+、WO42-、SO42-和NO3-的水溶液。所述制备方法包括如下步骤：硫酸溶液的制备；硝酸溶液的制备；A溶液的制备；B溶液的制备；C溶液的制备；D溶液的制备；E溶液的制备和混合。本发明提供的技术方案，原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定，用于癌症检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点，检测过程简单，时间短，易于判断，特别适合于大规模的人群普查及癌症临床辅助诊断和疗效动态检查。
【专利说明】尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种对人体内异常代谢物一 5-羟吲哚乙酸检 测试剂及制备方法。
【背景技术】
[0002] 癌症死亡率在所有疾病中占据首位，是人类健康的第一杀手已成为威胁人类生命 和健康的一大病因，据统计每隔25年，癌症患者的人数就要翻一番。不仅如此，癌症的死亡 人数也在全球迅猛上升，2030年这个数字可能会增至1320万。因此，癌症的防治已成为全 球的卫生战略重点之一，而治疗癌症的关键在于早期发现、早期诊断和早期治疗。影像检测 往往只能发现中晚期肿瘤类疾病，难以达到早期发现的目的，且价格昂贵，操作复杂，不适 合大规模的人群普查。
[0003] 尿液筛查试剂是通过肿瘤类疾病病人尿液中异常代谢物的检测进行筛查，实验数 据表明其比目前的肿瘤标志物灵敏1000倍，比CT、MRI等影像检测灵敏10万倍，可以用于 提前判断恶性肿瘤发生的可能性，且避免了抽血这项容易引起感染的环节。
[0004] 但由于尿液中成分复杂，某些微量成分或者因其他病因导致的代谢异常产物同样 会与检测试剂中的汞离子、亚汞离子结合生成颜色沉淀，会严重干扰检测结果的准确性，因 此目前的尿液代谢物检测试剂虽然灵敏很高，但常常会出现假阳性问题，大大降低了检测 的准确性，造成误诊，限制了其应用价值。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂及制备方法，用以 解决检测准确性低的问题。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚 乙酸检测试剂，包括Hg 2+、Hg22+、Cu2+、WO4 2' SO/-和NO3-的水溶液。
[0007] 优选地是，所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂中的浓度为Hg2+O. 17? 0· 50mol/L，Hg22+ 的浓度为 0· 25 ?0· 88mol/L，Cu2+ 的浓度为 0· 35 ?5. 41 mmol /T,, WO42 的 浓度为 〇· 37 ?5. 40mmol/L〇
[0008] 本发明还提供了尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂的制备方法，包括如 下步骤：
[0009] 1)硫酸溶液的制备：将市售浓硫酸用水稀释至原体积的2?6倍，冷却至室温备 用；
[0010] 2)硝酸溶液的制备：将市售浓硝酸用水稀释至原体积的2?6倍，冷却至室温备 用；
[0011] 3) A溶液的制备：称取一定量的硝酸汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶液中获得A 溶液；
[0012] 4) B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶液中获得 B溶液；
[0013] 5) C溶液的制备：称取一定量的硫酸铜溶于步骤1)配置的所述硫酸溶液中获得C 溶液；
[0014] 6) D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于水中获得D溶液；
[0015] 7)混合：将步骤3)、4)、5)和6)中制备的A、B、C和D溶液按I: (I. 1?1.8) : (2? 5) : (0. 3?0. 9)体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂。
[0016] 公知常识中，所述市售浓硫酸浓度约为98 %，所述市售浓硝酸浓度约为65 %。
[0017] 优选地是，步骤3)中Hg2+含量为L 5?2. 2mol/L。
[0018] 优选地是，步骤4)中Hg22+含量为L 8?2. 5mol/L。
[0019] 优选地是，步骤5)中Cu2+含量为0· 001?0· 008mol/L。
[0020] 优选地是，步骤6)中WO广含量为0· 01?0· 03mol/L。
[0021] 癌细胞导致的代谢异常，会使尿液中5-羟吲哚乙酸含量较常人大幅上升，本发明 通过试剂中的亚汞离子与5-羟吲哚乙酸反应产生红色、类红色沉淀，从而据此初步判断是 否携带癌细胞，该检测方法具有高灵敏度的特点；汞离子能与尿液中其他的阴离子（如卤 素离子、亚硝酸根离子）反应生成白色络合物沉淀，另外，铜离子可以稳定反应后产生的红 色沉淀，并且因为汞离子和亚汞离子易水解或随温度变化导致二者比例发生变化，影响试 剂中离子浓度配比，影响试剂反应灵敏度，而铜离子同样也可以保证试剂中离子的稳定，提 供试剂的稳定性；而钨酸根离子能与尿液中的有机化物如马尿酸、葡萄糖醛酸等有机酸反 应生成相应的有机酸络合物非红色沉淀，与尿液中的磷酸盐等电解质反应生成磷钨杂多酸 络合物非红色沉淀，还能结合因其他疾病导致异常代谢的血红蛋白结合并使之沉淀，从而 大大排除干扰，提高了检测试剂的特异性。
[0022] 本发明提供的技术方案，原材料易得，低廉，制备过程简单，获得的试剂性能稳定， 用于癌症检测具有普适性强、灵敏度高和特异性好等特点，检测过程简单，时间短，易于判 断，特别适合于大规模的人群普查及癌症临床辅助诊断和疗效动态检查。
【具体实施方式】
[0023] 所有原材料均为分析纯级别的普通化学制剂，制备过程也都在常温、常压下进行。
[0024] 实施例1
[0025] 所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的浓度为0· 30mol/L，Hg22+的浓度为0· 40mol/L，Cu2+的浓 度为 3. 03mmol/L，WO42 的浓度为 0. 91mmol/L。
[0026] 制备过程如下：
[0027] 1)市售浓硫酸1份用水稀释成3份，冷却至室温备用；
[0028] 2)市售浓硝酸1份用水稀释成3份，冷却至室温备用；
[0029] 3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中汞离子含 量为 2mol/L ;
[0030] 4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离 子含量为2. 2mol/L ;
[0031] 5) C溶液的制备：称取一定量硫酸铜溶于步骤1)的硫酸溶液中，，其中铜离子含量 为 0· 005mol/L ;
[0032] 6)D溶液的制备：称取一定量的鹤酸纳溶于蒸馈水中，其中鹤酸根尚子含量为 0.015mol/L ；
[0033] 7)混合：将制备的A、B、C和D溶液按1:1. 2:4:0. 4体积比均匀混合，即得尿液中 肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂。
[0034] 实施例2
[0035] 所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的浓度为0· 30mol/L，Hg22+的浓度为0· 40mol/L，Cu2+的浓 度为 3. 03mmol/L，WO42 的浓度为 0. 91mmol/L。
[0036] 制备过程如下：
[0037] 1)市售浓硫酸1份用水稀释成4份，冷却至室温备用；
[0038] 2)市售浓硝酸1份用水稀释成4份，冷却至室温备用；
[0039] 3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中汞离子含 量为 I. 6mol/L ;
[0040] 4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离 子含量为2mol/L ;
[0041] 5) C溶液的制备：称取一定量硫酸铜溶于步骤1)的硫酸溶液中，，其中铜离子含量 为 0· 003mol/L ;
[0042] 6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于蒸馏水中，其中钨酸根离子含量为 0.02mol/L ；
[0043] 7)混合：将制备的A、B、C和D溶液按1:1. 5:3:0. 7体积比均匀混合，即得尿液中 肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂。
[0044] 实施例3
[0045] 所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Cu2+、WO42' SO42-和NO3-的水溶液，其中Hg2+的浓度为0· 39mol/L，Hg22+的浓度为0· 79mol/L，Cu2+的浓 度为 0. 70mmol/L，WO42 的浓度为 4. 74mmol/L。
[0046] 制备过程如下：
[0047] 1)市售浓硫酸1份用水稀释成6份，冷却至室温备用；
[0048] 2)市售浓硝酸1份用水稀释成6份，冷却至室温备用；
[0049] 3)A溶液的制备：称取一定量的硫酸汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中汞离子含 量为 2. 2mol/L ;
[0050] 4)B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)的硝酸溶液中，其中亚汞离 子含量为2. 5mol/L ;
[0051] 5) C溶液的制备：称取一定量硫酸铜溶于步骤1)的硫酸溶液中，，其中铜离子含量 为 0· 002mol/L ;
[0052] 6)D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于蒸馏水中，其中钨酸根离子含量为 0.03mol/L ；
[0053] 7)混合：将制备的A、B、C和D溶液按1:1. 8:2:0. 9体积比均匀混合，即得尿液中 肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂。
[0054] 实施例4对比例
[0055] 所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、S0,和NCV的水 溶液。
[0056] 制备过程如下：市售浓硫酸1份用水稀释成3份，冷却至室温，称取一定量的硫酸 汞溶解其中，其中汞离子含量为2mol/L ;市售浓硝酸1份用水稀释成3份，冷却至室温，称 取一定量的硝酸亚汞溶解其中，其中亚汞离子含量为2. 2mol/L ;将上述两种溶液按1:1. 2 体积比均匀混合，即得对比例检测试剂。
[0057] 实施例5效果验证试验
[0058] 1.试验对象
[0059] 1)经临床诊断确诊为恶性肿瘤（已经临床检测手段确诊）的患者共957名，年龄 20-80,男女各占一半，其中确诊的癌症有甲状腺癌、肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻 咽癌等；
[0060] 2)非肿瘤良性疾病组654名，年龄20-80岁，男女各半；
[0061] 3)正常健康人组1854名，年龄20-80岁，男女各半为经检查健康合格者。
[0062] 2.试验方法
[0063] 所有试验对象均取新鲜洁净尿液4mL加入装有0. 5ml试剂（实施例1制备的检测 试剂）的安瓿中，稍加振荡静置约5min，将沉淀颜色与标准比色板对照判定结果，结果及颜 色如下表1所示：
[0064] 表1尿液中检测5-羟吲哚乙酸乙酸判定标准
【权利要求】
1. 一种尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，其特征在于，包括Hg2+、Hg 22+、Cu2+、 to42-、so42-和no3_的水溶液。
2. 根据权利要求1所述一种尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂，其特征在于， 所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂中的浓度为Hg2+0. 17?0. 50mol/L，Hg22+的 浓度为 〇? 25-0. 88mol/L，Cu2+ 的浓度为 0? 35-5. 41mmol/L，WO广的浓度为 0? 37-5. 40mmol/ L〇
3. 权利要求1或2所述一种尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂的制备方法，其 特征在于，包括如下步骤： 1) 硫酸溶液的制备：将市售浓硫酸用水稀释至原体积的2?6倍，冷却至室温备用； 2) 硝酸溶液的制备：将市售浓硝酸用水稀释至原体积的2?6倍，冷却至室温备用； 3. A溶液的制备：称取一定量的硝酸汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶液中获得A溶 液； 4. B溶液的制备：称取一定量的硝酸亚汞溶于步骤2)配置的所述硝酸溶液中获得B溶 液； 5. C溶液的制备：称取一定量的硫酸铜溶于步骤1)配置的所述硫酸溶液中获得C溶 液； 6. D溶液的制备：称取一定量的钨酸钠溶于水中获得D溶液； 7) 混合：将步骤3)、4)、5)和6)中制备的六、8、（：和0溶液按1:(1.1?1.8):(2? 5) : (0. 3?0. 9)体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂。
4. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤3)中Hg2+含量为1. 5?2. 2mol/ L〇
5. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤4)中Hg22+含量为1. 8?2. 5mol/ L〇
6. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤5)中Cu2+含量为0. 001? 0.008mol/L〇
7. 根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤6)中W042_含量为0.01?0.03mol/ L〇
【文档编号】G01N21/82GK104390975SQ201410605167
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】刘 东, 黎磊, 郑明彬 申请人:江苏东博生物医药有限公司