专利名称：一种烟草中果胶含量的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种烟草中果胶含量的检测方法，属烟草分析检测技术领域。
背景技术：
果胶是烟草中细胞壁物质的重要组成部分，约占烟叶质量的6% 13%，对烟叶结构的稳定性及其热解产物都有重要影响，其化学组成主要以α (1 — 4)键合的D—半乳糖醛酸为基本结构.果胶含量过高时会使烟草在燃吸时不完全并产生甲醇，还会产生强烈的刺激性，青杂气重的不良影响。因此准确的测定烟草中果胶含量有很重要的意义。目前，果胶的测定方法主要有重量法、咔唑比色法、3，5- 二硝基水杨酸法(DNS)、 高效液相色谱法(HPLC)、流动分析法及气相色谱法(GC)。其中重量法操作复杂且重复性差，咔唑比色法和高效液相色谱法皆是把果胶酸解成半乳糖醛酸，但半乳糖醛酸遇酸容易形成内酯物质，造成测定值偏低.气相色谱法需衍生化，操作复杂。3，5 二硝基水杨酸法、流动分析法皆是把果胶酶解成半乳糖醛酸。3，5 二硝基水杨酸法的准确精度不够，流动分析法仪器稳定性不好，浪费试剂。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术之不足，而提供一种方法简单、成本低、效率高和分析数据精确的烟草果胶含量的测定方法。本发明根据果胶酶具有很强的专一性的特点，运用果胶酶对样品进行前处理生成了半乳糖醛酸，简化了样品前处理的过程，同时，根据半乳糖醛酸具有还原性的特性，首次在烟草行业内采用电位滴定方法对烟草中果胶含量进行了测定，减少了人为误差。本发明的烟草果胶含量的测定方法，包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤；具体如下(1)标准曲线及线性范围确定a.称取精确到0. OOlg的半乳糖醛酸标准品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于温度为4-5°的冰箱中；b.分别移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液:0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5mL，分别注入IOOmL 容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、 0. 025g/mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线，在浓度为0. 005g/mL 0. 025g/mL范围内相关系数为0. 9994 ；(2)样品处理a.称取精确到0. OOOlg的1. OOOOg烟末置于150mL平底烧瓶中，加入50mL 85% 乙醇，士80°C回流30min，沸腾开始计时；然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净；b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mL pH = 4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58°C水浴中水解池，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解；其中菲林试剂A液取硫酸铜结晶34. 69g，加适量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀释至 500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；菲林试剂B液取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；(3)果胶含量的确定用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，按常规方法用标准曲线求取果胶的百分含量。本发明的特点在于用酶解-电位滴定分析方法测定烟叶中果胶含量，消除了浓硫酸对显色反应的影响，操作简单，重复性好，回收率高，设备投资小，能满足烟草中果胶含量的批量测定。
附图为标准曲线图。
具体实施例方式本方法采用的设备均为市场购买。方法的具体操作步骤如下1.酶解-电位滴定分析方法标准曲线及线性范围a.准确称取半乳糖醛酸标准品1. OOOg (精确到0. OOlg)置于IOOmL容量瓶中，定容，保存于温度为4-5°的冰箱中。b.分别移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0. 5、1.0、1.5、2.0、2. 5mL，分别注入 IOOmL容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/ mL、0. 025g/mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线(附图所示)，在浓度为0. 005g/mL 0. 025g/mL范围内相关系数为 0.9994。2.样品处理a.准确称取1. OOOOg烟末(精确到0. OOOlg)置于150mL平底烧瓶中，加入 50mL85%乙醇，士80°C回流30min，沸腾开始计时。然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净。b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mL pH = 4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58°C水浴中水解池，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解。其中菲林试剂A液取硫酸铜结晶34. 69g，加适量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀释至 500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。菲林试剂B液取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。3、果胶含量的确定用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，按常规方法用标准曲线求取果胶的百分含量。
4、对比实验酶解-电位滴定分析方法和用比色法测定果胶含量(以半乳糖醛酸计)，能够得到酶解-电位滴定分析方法，重复性较好。烟样果胶的分析结果
权利要求
1. 一种烟草中果胶含量的检测方法，其特征在于该检测方法包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤；具体如下(1)标准曲线及线性范围确定a.称取精确到0.OOlg的半乳糖醛酸标准品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于温度为4-5°的冰箱中保存；b.分别移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0.5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ML，分别注入IOOmL容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为 0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、0. 025g/ mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线，在浓度为0. 005g/mL 0. 025g/mL范围内相关系数为0. 9994 ；(2)样品处理a.称取精确到0.OOOlg的l.OOOOg烟末置于150mL平底烧瓶中，加入50mL 85%乙醇， 士80°C回流30min，沸腾开始计时；然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净；b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mLpH = 4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58°C水浴中水解池，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成 Cu2O,用 H2SO4 和 NH4Fe (SO4) 212H20 溶液溶解；其中菲林试剂A液取硫酸铜结晶34. 69g，加适量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀释至 500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；菲林试剂B液取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；(3)果胶含量的确定用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，用标准曲线求取果胶的百分含量。
全文摘要
本发明涉及一种烟草中果胶含量的检测方法，属烟草分析检测技术领域。本发明的烟草果胶含量的测定方法，根据果胶酶具有很强的专一性的特点，运用果胶酶对样品进行前处理生成了半乳糖醛酸，简化了样品前处理的过程，同时，根据半乳糖醛酸具有还原性的特性，采用电位滴定方法对烟草中果胶含量进行了测定，减少了人为误差。本发明的烟草果胶含量的测定方法，包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤。本发明的特点在于用酶解-电位滴定分析方法测定烟叶中果胶含量，消除了浓硫酸对显色反应的影响，操作简单，重复性好，回收率高，设备投资小，能满足烟草中果胶含量的批量测定。
文档编号G01N27/42GK102323319SQ201110129600
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月18日 优先权日2011年5月18日
发明者冯文, 孙桂芬, 廖臻, 徐世涛, 曹红云, 杨帅, 王岚, 纳丹, 芮晓东, 蒋次清, 马燕 申请人:云南烟草科学研究院