专利名称：一种同步测定三唑类手性农药对映体含量的方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域和农药残留检测技术领域，涉及一种同步测定三唑类手性农药对映体含量的方法。
背景技术：
手性农药对映体在自然环境和生物体中的活性、毒性、吸收、降解、代谢和消除等诸多方面可能存在巨大的差异，比如两个对映体表现出来的生物活性往往是不同的，甚至是截然相反的即一个对映体对病虫害具有很好的防治作用，而另一个对映体则活性甚微， 或无作用，甚至可能产生较强的毒副作用。受市场需求、经济效益及环境保护因素的影响， 人们也开始采用单一活性对映体或提高某种活性对映体的含量，来提高病虫害防治效果并获得更高的经济效益，同时减轻农药对环境的污染。因此，对手性农药对映体的分离分析和选择性行为的研究成为新的热点，相关研究逐步增多并不断深入。三唑类农药是一大类具有手性特征的化学农药，其对映体之间显示出性质完全不同的活性特征，如R-烯唑醇的杀菌活性远远高于S-对映体，而S-对映体的植物生长调节活性又比R-对映体高，这种现象在烯效唑上表现得更明显。己唑醇和戊唑醇的(-)_对映体杀菌活性均高于(+)_对映体，而(+)_粉唑醇活性却高于(-)_粉唑醇。三唑酮的两个对映体之间活性差异很小，但其还原产物三唑醇有四个对映体，其中1S，2R-对映体具有较高的杀菌活性。在环境和生物体中的残留和降解代谢方面，这些农药也具有较大的差异。如氟环唑和环唑醇对映体在多种土壤中具有立体选择性降解行为，在耗氧条件下顺式氟环唑在碱性土壤中存在选择性降解，环丙唑醇的四个异构体之间也存在着降解速率的差异。家兔耳静脉注射己唑醇外消旋体后，随时间增加(-)_己唑醇在血浆中的浓度明显大于其对映体浓度，在心脏、肝脏、肾脏、脾脏及脑组织中(+)_己唑醇也比(-)_己唑醇消除快，在肝脏中的立体选择性行为最明显。研究三唑类手性农药对映体的活性、残留、降解和代谢等立体选择性行为，就需要对其对映体进行拆分，建立有效、灵敏的对映体分离分析方法。目前见报道的拆分方法较多，如用手性OD (纤维素_3，5- 二甲基苯基氨基甲酸酯)固定相在正相液相色谱上可直接拆分三唑酮、己唑醇、戊唑醇等多种三唑类杀菌剂；用磺酸化的β-环糊精毛细管电泳可拆分三唑酮、己唑醇和戊唑醇等杀菌剂。用商品化的手性AD柱(直链淀粉-3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)在超临界流体色谱条件下可拆分戊唑醇、己唑醇等6种三唑类农药。在这些方法中，液相色谱手性固定相法最为普遍且操作方便，得到了广泛的应用。但现有液相色谱法多采用正相色谱和紫外检测器进行对映体的分析，一般只能对一种手性农药的对映体进行分离和检测。由于紫外检测器是一种通用型检测器，测定样品时容易受到样品基质的干扰而影响方法的选择性，同时该检测器的灵敏度也相对较低，因此无法做到多种手性农药对映体的同步分离和高灵敏度检测
发明内容
本发明的目的是提供一种同步测定三唑类手性农药对映体含量的方法。本发明提供的从样品中分离三唑类手性农药对映体的方法，包括如下步骤将待测样品进行液相色谱-串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间和定量检测的母离子/子离子的质荷比和定性检测的母离子/子离子的质荷比特征分离各个洗脱峰，即得到各个三唑类手性农药对映体；所述三唑类手性农药选自如下化合物中的至少一种己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮；所述液相色谱检测的条件如下色谱柱为填装纤维素-3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯固定相的Wienomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱；使用的洗脱缓冲液为乙腈和水的混合溶液，洗脱方式为梯度洗脱，洗脱速度为0. 3mL/min ；所述梯度洗脱方式如下第Imin起至第6min末，混合溶液中水和乙腈的体积比为50% 50% ；第7min起至第IOmin末，混合溶液中水和乙腈的体积比为30% 70% ；第Ilmin起至第18min末，混合溶液中水和乙腈的体积比为50% 50% ；所述根据洗脱峰保留时间和母离子/子离子的质荷比特征分离各个洗脱峰的方法如下保留时间为5. 72分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/159. 0的洗脱峰即为己唑醇的(+)对映体；保留时间为6. 50分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/159. 0的洗脱峰即为己唑醇的(_)对映体；保留时间为3. 27分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/123. 1的洗脱峰即为粉唑醇的(_)对映体；保留时间为3. 47分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/123. 1的洗脱峰即为粉唑醇的(+)对映体；保留时间为6. 48分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/159. 0的洗脱峰即为烯唑醇的(_)对映体；保留时间为6. 97分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/159. 0的洗脱峰即为烯唑醇的(_)对映体；保留时间为4. 35分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(+)对映体；保留时间为5. 10分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(+)对映体；保留时间为5. 67分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(_)对映体；保留时间为12. 51分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(_)对映体；保留时间为6. 99分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/159. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/70. 0的洗脱峰即为氟醚唑的(+)对映体；保留时间为8. 52分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/159. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/70. 0的洗脱峰即为氟醚唑的(_)对映体；保留时间为7. 14分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/121. 2和定性检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/123. 2的洗脱峰即为氟环唑的(_)对映体；保留时间为11. 59分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/121. 2和定性检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/123. 2的洗脱峰即为氟环唑的(+)对映体；保留时间为6. 05分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/125. 0的洗脱峰即为腈菌唑的(+)对映体；保留时间为7. 77分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/125. 0的洗脱峰即为腈菌唑的(_)对映体；保留时间为10. 66分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/125. 0的洗脱峰即为腈苯唑的(+)对映体；保留时间为11. 66分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/125. 0的洗脱峰即为腈苯唑的(_)对映体；保留时间为5. 02分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/197. 1和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/69. 1的洗脱峰即为三唑酮的(_)对映体；保留时间为5. 61分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/197. 1和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/69. 1的洗脱峰即为三唑酮的(+)对映体。上述方法所述液相色谱的检测条件中，所述色谱柱的长度为150毫米，内径为2. 0 毫米；进样量为 ο μ L ；所述纤维素-3，5- 二甲基苯基氨基甲酸酯的粒径为3 μ m。所述质谱检测条件中，电喷雾电离源雾化气压力均为15psi，干燥气均为55psi， 碰撞气压力均为3psi，电离电压均为+5500V，离子源温度均为400°C ；每种对映体对应的解簇电压、碰撞能如下己唑醇的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；己唑醇的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；粉唑醇的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；粉唑醇的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；烯唑醇的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；烯唑醇的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；环丙唑醇的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；环丙唑醇的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；环丙唑醇的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；环丙唑醇的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；氟醚唑的⑴对映体解簇电压为20，碰撞能为30 ；氟醚唑的㈠对映体解簇电压为20，碰撞能为35 ；氟环唑的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为30 ；氟环唑的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为30 ；腈菌唑的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；腈菌唑的㈠对映体解簇电压为20，碰撞能为40 ；腈苯唑的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；
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腈苯唑的㈠对映体解簇电压为20，碰撞能为35 ；三唑酮的㈠对映体解簇电压为25，碰撞能为25 ；三唑酮的⑴对映体解簇电压为25，碰撞能为30。所述从样品中分离三唑类手性农药对映体的方法，还包括将待测样品进行前处理的步骤；所述前处理的方法包括如下步骤称取20g待测样品用2g硅藻土分散后加入预先加有0.5g弗罗里硅土的34mL萃取池中，以由二氯甲烷和丙酮以体积比1 1组成的混合液作为萃取溶剂，设定萃取压力为1500psi、萃取温度为100°C、预加热平衡时间5min、静态萃取5min，冲洗体积为60%池体积及吹扫时间90s用所述快速萃取仪进行萃取，循环1次； 萃取完毕后向收集瓶中加入5g无水硫酸钠除水，转入IOOmL浓缩瓶中，用5mL所述萃取溶剂洗瓶后合并，35°C水浴旋蒸至干，用ImL由乙腈和水以体积比为1 1组成的混合液进行定容，过孔径为0. 22μπι的滤膜后，得到所述待测样品。所述待测样品优选为土壤。本发明提供的检测样品中三唑类手性农药对映体含量的方法，包括如下步骤1)将已知浓度的三唑类手性农药对映体标准品混合按照前述提供的方法进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积；以每种对映体的浓度值为自变量，以其对应的峰面积为因变量，得到一元线性回归方程；2)将待测样品按照前述提供的方法进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积；3)将每种对映体对应的峰面积代入步骤(1)中一元线性回归方程，得到所述待测样品中对映体的浓度；所述三唑类手性农药选自如下化合物中的至少一种己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮；所述三唑类手性农药对映体标准品选自如下化合物中的至少一种己唑醇的(+) 对映体、己唑醇的㈠对映体、粉唑醇的⑴对映体、粉唑醇㈠对映体、烯唑醇的⑴对映体、烯唑醇的㈠对映体、保留时间为4. 35分钟的环丙唑醇的⑴对映体、保留时间为5. 10 分钟的环丙唑醇的(+)对映体、保留时间为5. 67分钟的环丙唑醇的(-)对映体、保留时间为12.51分钟的环丙唑醇的(_)对映体、氟醚唑的(+)对映体、氟醚唑的(_)对映体、氟环唑的⑴对映体、氟环唑的㈠对映体、腈菌唑的⑴对映体、腈菌唑的㈠对映体、腈苯唑的⑴对映体、腈苯唑的㈠对映体、三唑酮的⑴对映体和三唑酮的㈠对映体。上述方法中，所述各种对映体的一元线性回归方程如下己唑醇的(+)对映体y = 541x+1700,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；己唑醇的(_)对映体y = 526x+1680,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；粉唑醇的(+)对映体y = 844x-38. 4，自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；粉唑醇(-)对映体y = 725x-1210,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；烯唑醇的⑴对映体y = 292x+1630,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；烯唑醇的(_)对映体y = 274x+253,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ；保留时间为4. 35分钟的环丙唑醇的(+)对映体y = 965x+378,自变量浓度范围为9 180 ；保留时间为5. 10分钟的环丙唑醇的(+)对映体y = 951x+571,自变量浓度范围为16 320 ；保留时间为5. 67分钟的环丙唑醇的(_)对映体y = 930x+259,自变量浓度范围为9 180 ； 保留时间为12. 51分钟的环丙唑醇的(_)对映体y = 725x+877,自变量浓度范围
为16 -320 ；
氟醚唑的⑴对映体:y=344x+2710,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；
氟醚唑的㈠对映体:y=395x+414,自变量浓度范围为25 500 ；
氟环唑的⑴对映体:y=694x+1700,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；
氟环唑的㈠对映体:y=724x+2280,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；
腈菌唑的⑴对映体:y=337x+1590,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；
腈菌唑的㈠对映体:y=353x+264,自变量浓度范围为25 500 ；
腈苯唑的⑴对映体:y=215x-857,自变量浓度范围为25 500 ；
腈苯唑的㈠对映体:y=199x+400,自变量浓度范围为25 500 ；
三唑酮的⑴对映体:y=318x+2570,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；
三唑酮的㈠对映体:y=319x+1830,自变量浓度范围为25 ‘ 500。所述检测样品中三唑类手性农药对映体含量的方法，还包括将待测样品进行前处理的步骤；所述前处理的方法包括如下步骤称取20g待测样品用2g硅藻土分散后加入预先加有0.5g弗罗里硅土的34mL萃取池中，以由二氯甲烷和丙酮以体积比1 1组成的混合液作为萃取溶剂，设定萃取压力为1500psi、萃取温度为100°C、预加热平衡时间5min、静态萃取5min，冲洗体积为60%池体积及吹扫时间90s用所述快速萃取仪进行萃取，循环1 次；萃取完毕后向收集瓶中加入5g无水硫酸钠除水，转入IOOmL浓缩瓶中，用5mL所述萃取溶剂洗瓶后合并，35°C水浴旋蒸至干，用ImL由乙腈和水以体积比为1 1组成的混合液进行定容，过孔径为0. 22μπι的滤膜后，得到所述待测样品。所述待测样品优选为土壤。本发明提供的三唑类手性农药对映体的特征分离方法，包括如下步骤用填装纤维素-3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相的Wienomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱对己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮中的任意一种进行液相色谱分离，其中，己唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液或由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，己唑醇对映体的洗脱顺序依次为右旋己唑醇和左旋己唑醇；粉唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为50 50的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，粉唑醇对映体的洗脱顺序依次为左旋粉唑醇和右旋粉唑醇；烯唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为75 25的甲醇和水组成的混合液，烯唑醇对映体的洗脱顺序依次为左旋烯唑醇和右旋烯唑醇；环丙唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液，环丙唑醇4个对映体的洗脱顺序依次为右旋环丙唑醇、右旋环丙唑醇、左旋环丙唑醇和左旋环丙唑醇；或流动相为由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，环丙唑醇对映体的洗脱顺序依次为右旋环丙唑醇、左旋环丙唑醇、右旋环丙唑醇和左旋环丙唑醇；氟醚唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为80 20的乙腈和水组成的混合液，氟醚唑对映体的洗脱顺序依次为右旋氟醚唑和左旋氟醚唑；氟环唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，氟环唑对映体的洗脱顺序依次为左旋氟环唑和右旋氟环唑；腈菌唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，腈菌唑对映体的洗脱顺序依次为右旋腈菌唑和左旋腈菌唑；腈苯唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，腈苯唑对映体的洗脱顺序依次为右旋腈苯唑和左旋腈苯唑；三唑酮的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为50 50的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为75 25的甲醇和水组成的混合液，三唑酮对映体的洗脱顺序依次为左旋三唑酮和右旋三唑酮。上述方法中，所述填装纤维素-3，5_ 二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相的 Phenomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱中，所述纤维素-3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相填料的粒径为3 μ m，所述Wienomenex Lux Cellulose-I色谱柱的长度为150毫米，内径为2. 0毫米。上述己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮
的结构式如下所示
权利要求
1. 一种从样品中分离三唑类手性农药对映体的方法，包括如下步骤 将待测样品进行液相色谱-串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间和定量检测的母离子 /子离子的质荷比和定性检测的母离子/子离子的质荷比特征分离各个洗脱峰，即得到各个三唑类手性农药对映体；所述三唑类手性农药选自如下化合物中的至少一种己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮；所述液相色谱检测的条件如下色谱柱为填装纤维素-3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯固定相的Wienomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱；使用的洗脱缓冲液为乙腈和水的混合溶液，洗脱方式为梯度洗脱，洗脱速度为0. 3mL/min ； 所述梯度洗脱方式如下第Imin起至第6min末，混合溶液中水和乙腈的体积比为50% 50% ； 第7min起至第IOmin末，混合溶液中水和乙腈的体积比为30% 70% ； 第Ilmin起至第ISmin末，混合溶液中水和乙腈的体积比为50% 50% ； 所述根据洗脱峰保留时间和母离子/子离子的质荷比特征分离各个洗脱峰的方法如下保留时间为5. 72分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/159. 0的洗脱峰即为己唑醇的(+)对映体；保留时间为6. 50分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为314. 4/159. 0的洗脱峰即为己唑醇的(_)对映体；保留时间为3. 27分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/123. 1的洗脱峰即为粉唑醇的(_)对映体；保留时间为3. 47分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为302. 1/123. 1的洗脱峰即为粉唑醇的(+)对映体；保留时间为6. 48分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/159. 0的洗脱峰即为烯唑醇的(_)对映体；保留时间为6. 97分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为326. 1/159. 0的洗脱峰即为烯唑醇的(_)对映体；保留时间为4. 35分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(+)对映体；保留时间为5. 10分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(+)对映体；保留时间为5. 67分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(_)对映体；保留时间为12. 51分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四2. 2/125. 0的洗脱峰即为环丙唑醇的(_)对映体；保留时间为6. 99分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/159. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/70. 0的洗脱峰即为氟醚唑的(+)对映体；保留时间为8. 52分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/159. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为372. 2/70. 0的洗脱峰即为氟醚唑的(_)对映体；保留时间为7. 14分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/121. 2和定性检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/123. 2的洗脱峰即为氟环唑的(_)对映体；保留时间为11. 59分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/121. 2和定性检测的母离子/子离子的质荷比为330. 3/123. 2的洗脱峰即为氟环唑的(+)对映体；保留时间为6. 05分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/125. 0的洗脱峰即为腈菌唑的(+)对映体；保留时间为7. 77分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为观9. 2/125. 0的洗脱峰即为腈菌唑的(_)对映体；保留时间为10. 66分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/125. 0的洗脱峰即为腈苯唑的(+)对映体；保留时间为11. 66分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/70. 0和定性检测的母离子/子离子的质荷比为337. 2/125. 0的洗脱峰即为腈苯唑的(_)对映体；保留时间为5. 02分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/197. 1和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/69. 1的洗脱峰即为三唑酮的(_)对映体；保留时间为5. 61分钟、定量检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/197. 1和定性检测的母离子/子离子的质荷比为四4. 1/69. 1的洗脱峰即为三唑酮的(+)对映体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述液相色谱的检测条件中，所述色谱柱的长度为150毫米，内径为2. 0毫米；进样量为10 μ L ；所述纤维素-3，5- 二甲基苯基氨基甲酸酯的粒径为3 μ m。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述质谱检测条件中，电喷雾电离源雾化气压力均为15psi，干燥气均为55psi，碰撞气压力均为3psi，电离电压均为+5500V，离子源温度均为400°C ；每种对映体对应的解簇电压、碰撞能如下 己唑醇的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 己唑醇的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 粉唑醇的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 粉唑醇的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 烯唑醇的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 烯唑醇的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 环丙唑醇的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 环丙唑醇的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 环丙唑醇的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 环丙唑醇的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 氟醚唑的(+)对映体解簇电压为20，碰撞能为30 ； 氟醚唑的(_)对映体解簇电压为20，碰撞能为35 ； 氟环唑的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为30 ； 氟环唑的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为30 ； 腈菌唑的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ； 腈菌唑的(_)对映体解簇电压为20，碰撞能为40 ； 腈苯唑的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为35 ；腈苯唑的(_)对映体解簇电压为20，碰撞能为35 ； 三唑酮的(_)对映体解簇电压为25，碰撞能为25 ； 三唑酮的(+)对映体解簇电压为25，碰撞能为30。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述从样品中分离三唑类手性农药对映体的方法，还包括将待测样品进行前处理的步骤；所述前处理的方法包括如下步骤称取20g待测样品用2g硅藻土分散后加入预先加有0.5g弗罗里硅土的34mL萃取池中，以由二氯甲烷和丙酮以体积比1 1组成的混合液作为萃取溶剂，设定萃取压力为1500psi、萃取温度为100°C、预加热平衡时间5min、静态萃取5min，冲洗体积为60%池体积及吹扫时间90s用所述快速萃取仪进行萃取，循环1次；萃取完毕后向收集瓶中加入5g无水硫酸钠除水，转入IOOmL浓缩瓶中，用5mL所述萃取溶剂洗瓶后合并，35°C水浴旋蒸至干，用ImL由乙腈和水以体积比为1 1组成的混合液进行定容，过孔径为0. 22μπι的滤膜后，得到所述待测样品。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述待测样品为土壤。
6.一种检测样品中三唑类手性农药对映体含量的方法，包括如下步骤1)将已知浓度的三唑类手性农药对映体标准品混合按照权利要求1-5中任一所述方法进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积；以每种对映体的浓度值为自变量，以其对应的峰面积为因变量，得到一元线性回归方程；2)将待测样品按照权利要求1-5中任一所述方法进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积；3)将每种对映体对应的峰面积代入步骤(1)中一元线性回归方程，得到所述待测样品中对映体的浓度；所述三唑类手性农药选自如下化合物中的至少一种己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮；所述三唑类手性农药对映体标准品选自如下化合物中的至少一种己唑醇的(+)对映体、己唑醇的(_)对映体、粉唑醇的(+)对映体、粉唑醇㈠对映体、烯唑醇的⑴对映体、烯唑醇的㈠对映体、保留时间为4. 35分钟的环丙唑醇的⑴对映体、保留时间为5. 10分钟的环丙唑醇的⑴对映体、保留时间为5. 67分钟的环丙唑醇的(_)对映体、保留时间为12. 51分钟的环丙唑醇的(-)对映体、氟醚唑的(+) 对映体、氟醚唑的(_)对映体、氟环唑的(+)对映体、氟环唑的(_)对映体、腈菌唑的(+)对映体、腈菌唑的㈠对映体、腈苯唑的⑴对映体、腈苯唑的㈠对映体、三唑酮的⑴对映体和三唑酮的(-)对映体。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述各种对映体的一元线性回归方程如下己唑醇的(+)对映体y = 541x+1700,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 己唑醇的(_)对映体y = 526x+1680,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 粉唑醇的(+)对映体y = 844x-38. 4，自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 粉唑醇(_)对映体y = 725x-1210,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 烯唑醇的(+)对映体y = 292x+1630,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 烯唑醇的(_)对映体y = 274x+253,自变量浓度范围为25 500 μ g/L ； 保留时间为4. 35分钟的环丙唑醇的(+)对映体y = 96切+378，自变量浓度范围为9 ·180 ；保留时间为5. 10分钟的环丙唑醇的(+)对映体y = 951x+571,自变量浓度范围为 16 320 ；保留时间为5. 67分钟的环丙唑醇的(-)对映体y = 930x+259，自变量浓度范围为9 180 ；保留时间为12. 51分钟的环丙唑醇的(_)对映体y = 725x+877,自变量浓度范围为-320 ；氟醚唑的⑴对映体:y=344x+2710,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；氟醚唑的㈠对映体:y=395x+414,自变量浓度范围为25 500 ；氟环唑的⑴对映体:y=694x+1700,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；氟环唑的㈠对映体:y=724x+2280,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；腈菌唑的⑴对映体:y=337x+1590,自变量浓度范围为25 ‘ 500 ；腈菌唑的㈠对映体:y=353x+264,自变量浓度范围为25 500 ；腈苯唑的⑴对映体:y=215x-857,自变量浓度范围为25 500 ；腈苯唑的㈠对映体:y=199x+400,自变量浓度范围为25 500 ；三唑酮的⑴对映体:y=318x+2570,自变量浓度范围为25 500 ；三唑酮的㈠对映体:y=319x+1830,自变量浓度范围为25 500。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述检测样品中三唑类手性农药对映体含量的方法，还包括将待测样品进行前处理的步骤；所述前处理的方法包括如下步骤称取20g待测样品用2g硅藻土分散后加入预先加有0.5g弗罗里硅土的34mL萃取池中，以由二氯甲烷和丙酮以体积比1 1组成的混合液作为萃取溶剂，设定萃取压力为1500psi、萃取温度为100°C、预加热平衡时间5min、静态萃取5min，冲洗体积为60%池体积及吹扫时间90s用所述快速萃取仪进行萃取，循环1次；萃取完毕后向收集瓶中加入5g无水硫酸钠除水，转入IOOmL浓缩瓶中，用5mL所述萃取溶剂洗瓶后合并，35°C水浴旋蒸至干，用ImL由乙腈和水以体积比为1 1组成的混合液进行定容，过孔径为0. 22 μ m的滤膜后，得到所述待测样品；所述待测样品优选为土壤。
9.一种三唑类手性农药对映体的特征分离方法，包括如下步骤用填装纤维素_3， 5-二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相的Wienomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱对己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑和三唑酮中的任意一种进行液相色谱分离，其中，己唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液或由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，己唑醇对映体的洗脱顺序依次为右旋己唑醇和左旋己唑醇；粉唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为50 50的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，粉唑醇对映体的洗脱顺序依次为左旋粉唑醇和右旋粉唑醇；烯唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为75 25的甲醇和水组成的混合液，烯唑醇对映体的洗脱顺序依次为左旋烯唑醇和右旋烯唑醇；环丙唑醇的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为60 40的乙腈和水组成的混合液，环丙唑醇4个对映体的洗脱顺序依次为右旋环丙唑醇、右旋环丙唑醇、左旋环丙唑醇和左旋环丙唑醇；或流动相为由体积比为70 30的甲醇和水组成的混合液，环丙唑醇对映体的洗脱顺序依次为右旋环丙唑醇、左旋环丙唑醇、右旋环丙唑醇和左旋环丙唑醇；氟醚唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为80 20的乙腈和水组成的混合液，氟醚唑对映体的洗脱顺序依次为右旋氟醚唑和左旋氟醚唑；氟环唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，氟环唑对映体的洗脱顺序依次为左旋氟环唑和右旋氟环唑；腈菌唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，腈菌唑对映体的洗脱顺序依次为右旋腈菌唑和左旋腈菌唑；腈苯唑的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为90 10的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为90 10的甲醇和水组成的混合液，腈苯唑对映体的洗脱顺序依次为右旋腈苯唑和左旋腈苯唑；三唑酮的液相色谱分离步骤中，流动相为由体积比为50 50的乙腈和水组成的混合液或流动相为由体积比为75 25的甲醇和水组成的混合液，三唑酮对映体的洗脱顺序依次为左旋三唑酮和右旋三唑酮。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述填装纤维素_3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相的Wienomenex Lux Cellulose-Ι色谱柱中，所述纤维素-3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯手性固定相填料的粒径为3μπι，所述Kienomenex Lux Cellulose-1色谱柱的长度为150毫米，内径为2. 0毫米。
全文摘要
本发明公开了一种同步测定三唑类手性农药对映体含量的方法。该方法采用快速溶剂萃取技术处理土壤样品，在线旋光检测器明确对映体洗脱顺序，反相液相色谱手性固定相法结合三级四极杆串联质谱同步检测了己唑醇、粉唑醇、烯唑醇、环丙唑醇、氟醚唑、氟环唑、腈菌唑、腈苯唑、三唑酮9种三唑类手性农药的对映体，方法检出限低至0.5～1.0μg/kg。
文档编号G01N30/88GK102353740SQ201110148839
公开日2012年2月15日 申请日期2011年6月3日 优先权日2011年6月3日
发明者于红侠, 杨曙明, 邱静 申请人:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所