专利名称：一种养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法
技术领域：
本发明涉及具体地是指牛、羊、猪、鸡、鱼或虾的养殖或屠宰环境中，对可能受到多种抗生素污染的水体或土壤样品中多种兽药残留量同时进行定性和定量测定，多种兽药包括氯霉素、β内酰胺类(青霉素类)、喹诺酮类、磺胺类、磺胺增效剂类、大环内酯类、四环素类、硝基咪唑类、青霉素类在内的共计9大类61种药物。
背景技术：
近些年来，由于动物养殖过程中，特别是牛、羊、猪、鸡、鱼和虾的养殖或屠宰过程中各类兽药的大量滥用和过度使用，导致对养殖或屠宰所在土壤和环境水出现间接性污染。目前土壤和环境水中多残留测定项目主要集中在农药残留、重金属污染和有机物污染 (如多环芳烃等)，还没有针对兽药残留污染的检测方法报导。而多种兽药残留检测主要都是针对动物源性食品，如禽肉类、水产品等，没有针对环境水和土壤方面的检测方法研究。目前国内外热点检测的抗生素大多为氨基糖苷类、内酰胺类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、林可胺类、磺胺类、硝基呋喃类和喹诺酮类等，在检测技术方面，国际上已较多采用多残留检测技术和快速筛选检测技术。但是其中有些药物，如氨基糖苷类属于极性较大的一类化合物，很难和其他类的抗生素使用同一类前处理方法和仪器检测方法；硝基呋喃类需要测定其代谢物，须进行酸水解并衍生化，因此也只能单独分类检测。其他如内酰胺类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类、林可胺类、磺胺类和喹诺酮类抗生素的检测多局限在某一类或几类同时测定，目前还没有关于多类抗生素同时测定的方法报道，这是由于不同类的兽药因极性不同，化学性质也不同，难以实现多类兽药残留的同时提取、净化、检测；此外，多残留测定在仪器检测设定上也存在一定的困难。国内外兽药残留检测主要采用 HPLC法，配有UV、FLD、MS以及MS/MS等检测器，而当多残留的项目达到一定数量之后只能使用HPLC-MS/MS的方法进行，由于各家主流质谱生产厂家对于多残留测定方法参数设置和仪器性能的侧重点略有不同，导致多残留检测项目达到某一数量后，参数设置对于整个测定方法的稳定性和精密度好坏起到了很重要的影响。如何简化复杂样品基质的前处理步骤，提高灵敏度，缩短分析时间，建立简便快速、可同时检测多类兽药残留的分析方法是目前研究的热点和难点。
发明内容
本发明一种能同时对养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法，具体是对牛、羊、猪、鸡、鱼、虾的养殖或屠宰环境的水体或土壤中氯霉素、β内酰胺类(青霉素类)、 喹诺酮类、磺胺类、磺胺增效剂类、大环内酯类、四环素类、硝基咪唑类在内的共9大类61种药物残留进行快速筛选和定量检测方法，提高分析效率，降低检测成本。本发明方法包括以下步骤(1) 土壤和环境水样品中加入磷酸盐缓冲溶液(ρΗ控制在6 7. 5之间)(2)将步骤(1)的溶液离心过滤，收集滤液；
(3)滤液加入固相萃取柱中萃取，洗脱，弃去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脱液用甲醇水溶液定容；(4)将定容样品溶液用液相色谱-串联质谱进行分析测试，测得样品的色谱峰；(5)将测得的色谱峰与各已知药物的标准色谱峰对照，准定所检出药物的具体品种。上述步骤⑶所说固相萃取柱为反相固相萃取柱(优化选择Oasis HLB 500mg/6mL)。本方法利用液质联用检测土壤或环境水中多种兽药残留。样品溶液经液相色谱串联质谱多反应监测选择离子分析，经内标校正后，回收率在70% -120%，相对标准偏差 RSD< 18%。与现有的分类检测方法相比，分析效率提高至少5倍，检测成本约为原来的 30%。
具体实施例方式实例1环境水样品中多兽药残留检测准确取水样品IOOmL过滤纸于干净玻璃锥形瓶中，加入混合内标溶液50 μ L，加入磷酸盐缓冲溶液50mL，调节溶液pH至6. 5，涡旋混勻。用6ml甲醇和6mL水活化的OasisHLB 柱，将调节好PH的样品溶液过柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用5mL水洗离心管和贮液管并过柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干lOmin，最后用6mL甲醇洗脱，收集洗脱液于IOmL试管中，于45°C用氮气吹干仪吹干，用甲醇+水(l+9v/v)定容至l.OmL，过 0. 45 μ m的有机相尼龙滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。实例2、土壤样品中多兽药残留检测准确称取土壤样品IOg (士0. 05g)于500mL离心管中，加入混合内标溶液50 μ L，加入200mL磷酸盐缓冲液调节溶液pH值为约6. 5，在振荡器上振荡30min，将提取溶液过滤纸于干净500mL锥形瓶中。用6mL甲醇和6mL水活化的Oasis HLB柱，将过滤好的样品溶液过柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用6mL水洗离心管和贮液管并过柱。在65kPa的负压下， 减压抽干lOmin，最后用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于IOmL试管中，于45°C用氮气吹干仪吹干，用甲醇+水(30+70v/v)定容至l.OmL，过0.45 μ m的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。液相色谱-串联质谱仪测定典型条件见表1和表2。表1正离子模式条件参数
液相条件色谱柱Varian Polaris C-18 100*2. Imm 5 μ m流动相0. 甲酸水溶液(A)，甲醇(B)流速0.25mL/min进样量50 μ L
权利要求
1.一种养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法，其特征是包括氯霉素、β内酰胺类(青霉素类)、喹诺酮类、磺胺类、磺胺增效剂类、大环内酯类、四环素类、硝基咪唑类在内的共9大类61种药物残留，测定方法包括以下步骤(1)取土壤或环境水样品，加入磷酸盐缓冲溶液，PH控制在6 7.5 ；(2)将步骤(1)的溶液离心过滤，收集滤液；(3)滤液加入固相萃取柱中萃取，洗脱，弃去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脱液用甲醇水溶液定容；(4)将定容样品溶液用液相色谱-串联质谱进行分析测试，测得样品的色谱峰；(5)将测得的色谱峰与各已知药物的标准色谱峰对照，准定所检出药物的具体品种。
2.根据权利要求1所述的养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法，其特征是步骤C3)所述的固相萃取柱为反相固相萃取柱。
3.据权利要求2所述的养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法，其特征是所述的固相萃取柱为Oasis HLB柱。
全文摘要
本发明提供一种养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法，可同时对氯霉素、β内酰胺类(青霉素类)、喹诺酮类、磺胺类、磺胺增效剂类、大环内酯类、四环素类、硝基咪唑类在内的共9大类61种药物残留进行快速筛选和定量检测。土壤或环境水样品加磷酸盐缓冲溶液，离心所得滤液入固相萃取柱中萃取，洗脱，萃取柱吹干，用甲醇溶液洗柱，洗脱液用甲醇溶液定容，用液相色谱-串联质谱测得样品的色谱峰，经与标准色谱峰对照，准定所检出药物的具体品种。本方法样品溶液经液相色谱串联质谱多反应监测选择离子分析，经内标校正后，回收率在70％-120％，相对标准偏差RSD≤18％。与现有检测方法相比，分析效率提高至少5倍，检测成本约为原来的30％。
文档编号G01N30/88GK102426209SQ20111036375
公开日2012年4月25日 申请日期2011年11月15日 优先权日2011年11月15日
发明者丁涛, 张睿, 蒋原, 薛峰 申请人:江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心