一种检测仲丁胺残留的方法及应用与流程

本发明属于农药残留检测领域，具体涉及一种检测仲丁胺残留的方法及应用。
背景技术：
：目前，进行仲丁胺检测多采用气相或者紫外检测法，该方法易产生假阳性，且前期处理步骤繁琐，回收率低，稳定性差，针对基质单一，不适于实际应用。技术实现要素：为了解决现有技术中的问题，本发明的技术方案是：一种检测仲丁胺残留的方法，利用甲醇水溶液提取样品中的仲丁胺，碳酸盐缓冲溶液和丹酰氯丙酮溶液进行衍生，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述甲醇溶液的浓度为80％。在上述方案的基础上，所述检测仲丁胺残留的方法步骤如下：1)提取纯化称取10g样品，加入15mL80％甲醇水溶液，超声15min，然后定容至20mL，4000r/min离心5min；移取5mL上清液于离心管中，加入2mLpH为9.8的碳酸盐缓冲溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振荡1h，冷却后用甲醇定容至10mL，4000r/min离心5min，吸取1mL过滤膜，待测；2)高效液相色谱质谱联用仪检测色谱参数：色谱柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱温：40度；流速：0.4mL/min；进样量：1μL；流动相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；质谱参数：离子源：ESI+；离子源温度：325℃；雾化气流速：10L/min；喷嘴压力：40psi；辅助加热器温度：375℃；辅助加热器流量：11L/min。在上述方案的基础上，所述检测仲丁胺残留的方法应用于检测蔬菜水果的仲丁胺残留。在上述方案的基础上，所述蔬菜水果为葡萄、卷心菜、白菜、苹果、彩椒和韭菜。本发明的有益效果：本发明所要检测的仲丁胺是强极性物质，易溶于极性有机溶剂和水溶液中，故采用80％的甲醇水溶液进行提取；纯化时，加入碳酸盐缓冲溶液PH始终维持在9.8左右，使仲丁胺成分子态，丹酰氯丙酮溶液是一种强荧光剂，它能专一地与仲丁胺上的氨基发生结合反应，有利于仲丁胺的纯化。本发明的方法的检出限为100μg/kg，比国标或文献资料中检出限600μg/kg低；此外，本发明的方法检测范围较广，相比于其他方法只检测葡萄的单一基质，本方法适用于多种蔬菜水果等复杂基质的检测；本发明的方法采用液质检测仲丁胺残留是改革性的进步，文献和国标中采用的气相或者紫外检测法易产生假阳性，且前期处理方法繁琐，回收率低及稳定性差；本发明采用甲醇水溶液作为提取溶剂，耗材少，节约成本。附图说明图1仲丁胺质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。图2仲丁胺定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图3仲丁胺保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图4仲丁胺定量离子S/N图，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图5仲丁胺的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为仲丁胺浓度。具体实施方式在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。实施例1.标准溶液的配制1.1储备液的配制准确称量10.00mg仲丁胺溶解到超纯水中，定容到10mL，作为1000μg/mL的储备液(实际浓度应乘以仲丁胺的纯度)，置于4℃冷藏保存；1.2工作液的配制准确移取1mL100μg/mL的仲丁胺储备液于50mL离心管内，加入1mL80％甲醇水溶液和2mLpH为9.8的碳酸盐缓冲溶液，加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，在50℃下水浴振荡1h，冷却后用甲醇定容至10mL，4000r/min离心5min，过滤膜即为10ppm工作液。1.3标准工作曲线的配制用工作液配制成5、10、20、50、100ng/mL的标液(用80％甲醇水溶液定容)，作为工作曲线用的标准溶液。2.样品的处理称取10g样品，加入15mL80％甲醇水溶液，超声15min，然后定容至20mL，4000r/min离心5min；移取5mL上清液于离心管中，加入2mLpH为9.8的碳酸盐缓冲溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振荡1h，冷却后用甲醇定容至10mL，4000r/min离心5min，吸取1mL过滤膜，待测。3.高效液相色谱质谱联用仪检测使用的高效液相色谱质谱联用仪为AgilentLC-MSMS1290/6460；色谱参数：色谱柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱温：40度；流速：0.4mL/min；进样量：1μL；流动相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；流动相的梯度如表1所示：表1流动相的梯度时间B相浓度0.00501.00503.00954.00954.01505.5040质谱参数：离子源：ESI+；离子源温度：325℃；雾化气流速：10L/min；喷嘴压力：40psi；辅助加热器温度：375℃；辅助加热器流量：11L/min。4.结果及分析4.1专属性如图1所示，1ppm仲丁胺衍生物上机，通过质谱优化各得到4个离子对，纵坐标为响应，横坐标为m/z。仲丁胺的质谱结果如表2所示：表2质谱结果仲丁胺衍生物定量定性离子明细如图2所示，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。4.2保留时间10ppb仲丁胺衍生物通过C18色谱柱分离，确定保留时间，如图3所示，保留时间约为2.994min，且色谱的峰形较佳，无干扰峰出现。4.3检出限在基质中添加相当于样品含有5.0μg/kg的标准品，经前处理上机检测，计算其信噪比(S/N)＞10，如图4所示。测得本发明方法对仲丁胺的检出限为5.0μg/kg。4.4标准曲线精密吸取仲丁胺衍生物标准品，用甲醇溶液稀释成系列浓度为5，10，20，50，100μg/L标准溶液，分别进样测定，以峰面积响应为纵坐标，仲丁胺衍生物浓度为横坐标，绘制标准曲线如图5所示，得到仲丁胺衍生物的回归方程为Y＝13952.16*X+62582.37，R2＝0.9991，由相关系数可见，在5ng/mL～100ng/mL标准曲线线性范围内，UPLC-MSMS法测定线性关系良好，此标准曲线可以用于准确定量。4.5验证基体及回收率空白样品添加回收如表3所示：表3空白样品添加回收针对客户需求量较大的葡萄进行平行及多浓度加标实验验证，RSD＜10％，回收率稳定，具体如表4所示：表4葡萄的回收率5.结论通过运用UPLC-LCMSMS法对蔬菜水果中的仲丁胺进行测定，确定用80％甲醇水溶液提取，用丹酰氯丙酮溶液进行衍生，仲丁胺色谱峰达到基线分离，峰形良好，检测限低，灵敏度高，方法回收稳定，本研究为蔬菜水果中的仲丁胺残留量的测定建立了一种可靠地分析方法。当前第1页1 2 3