人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，属于蛋白质、肽或氨基酸的检测领域。本实用新型包括设有加样孔、加稀释液孔和检测窗的塑料壳，塑料壳内插装人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸芯，该试纸芯包括一端粘贴有上样垫的底板、包被有第一检测条带、第二检测条带和质控条带的硝酸纤维膜、分别搭接在硝酸纤维素膜两端的标记物垫和吸水纸。本实用新型可同时检测体血液中的铁蛋白和骨碱性磷酸酶，保证检测灵敏度和特异性能够满足临床诊断要求的同时，简化了操作过程。
【专利说明】 人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及蛋白质、肽或氨基酸的检测，特别是一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡。
【背景技术】
[0002]铁蛋白作为机体内一种贮存铁的蛋白，其血清(血浆)浓度代表机体铁储备状况。在感染或某些肿瘤发生时，血清(血浆)铁蛋白浓度也会作为急性时相反应蛋白异常增高。一般情况下，血清铁蛋白浓度在20至200 ug/L，即20-200ng/ml。
[0003]目前，血清(血浆)铁蛋白含量的主要检测方法包括放射免疫法、酶联免疫法和化学发光法等。上述这些检测方法均需要依赖相应的复杂的仪器设备，还需要使用液体试剂，因此，具有检测程序复杂、检测速度慢以及检测结果不可靠等缺陷。此外，这些方法所需样本量较大，都要抽取静脉血进行检测，也不易于被」L童接受。
[0004]钙缺乏是我国人群尤其是儿童常见的营养缺乏疾病。血清(血浆)骨碱性磷酸酶浓度对辅助诊断钙缺乏具有重要意义。目前，检测骨碱性磷酸酶浓度一般采用酶联免疫法、电泳法、免疫浓缩化学法。前两种方法需从静脉取血分离血清(血浆)进行检测，不易被儿童接受，而且检测过程操作复杂、时间长；后一种方法检测结果的误差较大，不能得出定量测定的结果，并且也存在操作繁琐的弱点。
实用新型内容
[0005]本实用新型的目的是为了解决上述技术问题，设计了一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡。
[0006]本实用新型是按照以下技术方案实现的:
[0007]—种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，由试纸芯和塑料壳构成，试纸芯包括依次相互搭接并粘贴于底板上的上样垫、标记物垫、硝酸纤维膜和吸样垫，塑料壳包括底座和面板，其中底座中部形成有放置试纸芯的承托结构和周边的多个圆柱型卡槽，面板上形成设有与试纸芯中硝酸纤维膜位置大小相对应的检测窗、与上样垫位置相对应的加样孔和多个圆柱型卡块，所述承托结构包括位于底座正中央且与试纸芯长度相等的支撑梁、多个与支撑梁垂直相交的加强筋和位于支撑梁两端的凹槽型限位结构和挡板型限位结构；所述面板上还设有与试纸芯中上样垫位置相对应的加稀释液孔，所述硝酸纤维膜上按顺序依次平行设置有铁蛋白单克隆抗体包被构成的第一检测条带，骨碱性磷酸酶多克隆抗体包被构成的第二检测条带和羊抗鼠IgG包被构成的质控条带。
[0008]利用本实用新型的技术方案制作的人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，同时检测两种指标，简化了操作程序，省时，并且灵敏度和特异性完全能够满足临床诊断要求，适用于铁蛋白和骨碱性磷酸酶的快速检测。而且本实用新型采用胶体金标记免疫层析定量检测技术，用20微升血即可同时检测血清(血浆)铁蛋白和骨碱性磷酸酶浓度，有利于采取手指血进行测定，易被儿童患者接受，也简化了测试操作过程，缩短了测试时间。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是本实用新型中底座的立体结构示意图；
[0010]图2是本实用新型中卡面板的立体结构示意图；
[0011]图3是本实用新型中试纸芯的立体结构示意图。
[0012]其中:la、底座lb、面板
[0013]2、承托结构2a、支撑梁
[0014]2b、加强筋2c、挡板型限位结构
[0015]2d、凹槽型限位结构3、圆柱型卡槽
[0016]4、检测窗5、加样孔
[0017]6、加稀释液孔7、圆柱型卡块
[0018]8、底板9、上样垫
[0019]10、标记物垫11、硝酸纤维膜
[0020]12、吸样垫13、第一检测条带
[0021]14、第二检 测条带15、质控条带。
【具体实施方式】
[0022]下面结合附图及实施例对本实用新型进行具体描述。
[0023]一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，由试纸芯和塑料壳构成，试纸芯包括依次相互搭接并粘贴于底板8上的上样垫9、标记物垫10、硝酸纤维膜11和吸样垫12，塑料壳包括底座Ia和面板lb，其中底座Ia中部形成有放置试纸芯的承托结构2和周边的多个圆柱型卡槽3，面板Ib上形成设有与试纸芯中硝酸纤维膜11位置大小相对应的检测窗4、与上样垫9位置相对应的加样孔5和多个圆柱型卡块7，所述承托结构2包括位于底座Ia正中央且与试纸芯长度相等的支撑梁2a、多个与支撑梁2a垂直相交的加强筋2b和位于支撑梁2a两端的凹槽型限位结构2d和挡板型限位结构2c ;所述面板Ib上还设有与试纸芯中上样垫9位置相对应的加稀释液孔6，所述硝酸纤维膜11上按顺序依次平行设置有铁蛋白单克隆抗体包被构成的第一检测条带13，骨碱性磷酸酶多克隆抗体包被构成的第二检测条带14和羊抗鼠IgG包被构成构成的质控条带15。
[0024]所述标记物垫10的一端与硝酸纤维膜11靠近第一检测条带13的一侧搭接，另一端与上样垫9搭接。
[0025]所述吸样垫12与硝酸纤维膜11靠近质控条带15的一侧搭接。
[0026]所述底座Ia上的承托结构2与试纸芯大小相契合。承托结构2中的支撑梁2a和加强筋2b使加入到试纸芯上的标本的分子扩散减缓，使标本与试纸芯上的胶体金的化学反应更充分彻底，所述支撑梁2a两端分别设置的挡板型限位结构2c和凹槽型限位结构2d，通过所述限位结构使试纸条固定在试纸卡底座Ia内。
[0027]所述底座Ia上的圆柱型卡槽3与面板Ib上的圆柱型卡块7大小相配合,位置相对称，底座Ia与面板Ib通过圆柱型卡槽3与圆柱型卡块7的卡合固定。
[0028]标记物垫10的制备:用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30_50nm的胶体金溶液，制备完成后取IOOml胶体金溶液，用0.2MK2C03将溶液pH调到pH9.0,然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液加入0.5mg?l.5mg铁蛋白单克隆抗体和骨碱性磷酸酶抗体，缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌I小时，再加入终浓度为0.2% BSA,
0.1 %聚乙二醇20000进行封闭30分钟，12000转离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至76.5ml，按Iml溶液铺16cm2的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20?25°C、湿度小于30%的干燥间干燥2?4小时，制成标记物垫10。
[0029]铁蛋白单克隆抗体和骨碱性磷酸酶多克隆抗体的包被:将适当稀释后的铁蛋白单克隆抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维膜上按l.0ul/cm划线包被，构成第一检测条带13 ;将适当稀释后的骨碱性磷酸酶多克隆抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维膜上按l.0ul/cm划线包被，构成第二检测条带14 ;最后包被羊抗鼠IgG抗体在硝酸纤维膜上作为质控条带15，包被完成后将硝酸纤维膜11置于干燥间干燥3?4小时。
[0030]人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸芯的装配:在温度20?25°C、湿度小于30%的干燥室内，取底板8，将已包被的硝酸纤维膜11放置在底板8的中部粘贴，在硝酸纤维膜11靠近第一检测条带13—侧搭接标记物垫10，在标记物垫10另一侧搭接粘贴上样垫9，在硝酸纤维膜11质控条带15 —侧距边缘搭接吸样垫12 ;然后用裁剪机将贴好的底板切成适当宽度的试纸芯。
[0031]本实用新型在实际检测时，首先撕开包装铝箔袋取出试剂卡平放，取20微升滴样本滴加至加样孔5中，立即在加稀释液孔6中滴加两滴稀释液，静止15分钟，用免疫层析试验判读仪器分析第一检测条带13和第二检测条带14轮廓和颜色深浅，依据相应的标准曲线，计算这两条线所代表的铁蛋白和骨碱性磷酸酶的量。若无红色质控线出现，说明本次实验无效。
[0032]利用本实用新型的技术方案制作的人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，同时检测两种指标，简化了操作程序，省时，并且灵敏度和特异性完全能够满足临床诊断要求，适用于铁蛋白和骨碱性磷酸酶的快速检测。而且本实用新型采用胶体金标记免疫层析定量检测技术，用20微升血即可同时检测血清(血浆)铁蛋白和骨碱性磷酸酶浓度，有利于采取手指血进行测定，易被儿童患者接受，也简化了测试操作过程，缩短了测试时间。
【权利要求】
1.一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，由试纸芯和塑料壳构成，试纸芯包括依次相互搭接并粘贴于底板(8)上的上样垫(9)、标记物垫(10)、硝酸纤维膜(11)和吸样垫(12)，塑料壳包括底座(Ia)和面板(lb)，其中底座(Ia)中部形成有放置试纸芯的承托结构(2)和周边的多个圆柱型卡槽(3)，面板(Ib)上形成设有与试纸芯中硝酸纤维膜(11)位置大小相对应的检测窗(4)、与上样垫(9)位置相对应的加样孔(5)和多个圆柱型卡块(7)，其特征在于:所述承托结构(2)包括位于底座(Ia)正中央且与试纸芯长度相等的支撑梁(2a)、多个与支撑梁(2a)垂直相交的加强筋(2b)和位于支撑梁(2a)两端的凹槽型限位结构(2d)和挡板型限位结构(2c);所述面板(Ib)上还设有与试纸芯中上样垫(9)位置相对应的加稀释液孔(6 )，所述硝酸纤维膜(11)上按顺序依次平行设置有铁蛋白单克隆抗体包被构成的第一检测条带(13)，骨碱性磷酸酶多克隆抗体包被构成的第二检测条带(14)和羊抗鼠IgG包被构成构成的质控条带(15)。
2.根据权利要求1所述的一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，其特征在于:所述标记物垫(10)的一端与硝酸纤维膜(11)靠近第一检测条带(13)的一侧搭接，另一端与上样垫(9)搭接。
3.根据权利要求1所述的人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，其特征在于:所述吸样垫(12)与硝酸纤维膜(11)靠近质控条带(15)的一侧搭接。
4.根据权利要求1所述的一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，其特征在于:所述底座(Ia)上的承托结构(2)与试纸芯大小相契合。
5.根据权利要求1所述的一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试剂卡，其特征在于:所述底座(Ia)上的圆柱型卡槽(3)与面板(Ib)上的圆柱型卡块(7)大小相配合，位置相对称，底座(Ia)与面板(Ib)通过圆柱型卡槽(3)与圆柱型卡块(7)的卡合固定。
【文档编号】G01N33/577GK203490223SQ201320544153
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年9月3日 优先权日:2013年9月3日
【发明者】叶涛 申请人:天津朗赛生物科技有限公司