一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，包括基板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述基板上，所述滤纸片中依次浸入有A液和B液，其中：所述A液是包含：柠檬酸钠、柠檬酸和浓盐酸的缓冲水溶液；所述B液是包含：四氢呋喃、聚丙二醇和磺酞染料的甲醇或乙醇溶液。本案制备的检测试剂条，在酸性条件下，磺酞染料能够与尿液中的微量白蛋白迅速发生反应，当微量白蛋白浓度在0～200mg/L范围内时，试纸呈现从无色到深蓝色的明显色阶，易于目视分辨和机读，测定结果准确，且不受尿液中其他离子的干扰，性能稳定；同时，该试剂条的制备方法简便快捷，制作成本低廉，适合大规模推广应用。
【专利说明】一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及尿液检测领域，特别涉及一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条及其制备方法。
【背景技术】
[0002]微量白蛋白是指在人体尿中出现微量的白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，具体到每升尿白蛋白应< 20mg/L。如果在体检后发现尿中的微量白蛋白在20mg/L?200mg/L范围内，就属于微量白蛋白尿，微量白蛋白尿反映人体肾脏异常渗漏蛋白质。通常应用微量蛋白指标来监测肾病的发生。微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标。通过尿液微量白蛋白的数值，结合发病情况、症状以及病史陈述就可以较为准确的诊断病情。
[0003]现有技术中检测微量白蛋白通常采用免疫法，如免疫金标、免疫荧光等，但依照免疫法设计出的试剂条生产工艺繁琐，生产成本高，难以大规模推广应用。
【发明内容】
[0004]针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条及其制备方法，相较于现有技术，该制备方法简便快捷，制作成本低廉，试剂条使用方便，便于保存，检测结果快速准确。
[0005]本发明的技术方案概述如下:
[0006]一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，包括基板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述基板上，所述滤纸片中依次浸入有A液和B液，其中:
[0007]所述A液是包含:4.0wt %?4.5wt %柠檬酸钠、4.2wt %?4.8wt %柠檬酸和3.0wt %?3.5wt%浓盐酸的缓冲水溶液；
[0008]所述B液是包含:4.0wt %?IOwt %四氢呋喃、0.5wt %?1.5wt %聚丙二醇和0.03wt%?0.15wt%磺酞染料的甲醇或乙醇溶液。
[0009]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，所述A液的pH = 2.0?
3.5o
[0010]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，所述基板材质是聚氯乙烯树脂，或是聚丙烯，或是聚甲基丙烯酸甲酯。
[0011]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，所述滤纸片是普通定量滤纸或普通定性滤纸。
[0012]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，所述磺酞染料为5’，5 ” - 二硝基-3 ’，3 ” - 二碘-3，4，5，6-四溴苯酚磺酞。
[0013]一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:
[0014](I)配置A液:将40?45g柠檬酸钠、42?48g柠檬酸和30?35mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL定容；
[0015](2)配置B液:将40?IOOmL四氢呋喃、5?15mL聚丙二醇和0.3?L 5g磺酞染料放入容器内，加入甲醇或乙醇至IOOOmL定容；
[0016](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为10?20分钟；
[0017](4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为5?15分钟；
[0018](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
[0019]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，所述A液的pH = 2.0 ?3.5。
[0020]优选的是，所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，所述矩形纸条的尺寸为0.55X0.80cm。
[0021]本发明的有益效果是:本案制备的检测试剂条，在酸性条件下，磺酞染料能够与尿液中的微量白蛋白迅速发生反应，当微量白蛋白浓度在O?200mg/L范围内时，试纸呈现从无色到深蓝色的明显色阶，易于目视分辨和机读，测定结果准确，且不受尿液中其他离子的干扰，性能稳定；同时，该试剂条的制备方法简便快捷，制作成本低廉，适合大规模推广应用。
【具体实施方式】
[0022]下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0023]一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:
[0024](I)配置A液:将40?45g柠檬酸钠、42?48g柠檬酸和30?35mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL定容，得到pH = 2.0?3.5的缓冲水溶液。
[0025](2)配置B液:将40?IOOmL四氢呋喃、5?15mL聚丙二醇(优选为PPG2000)和
0.3?1.5g磺酞染料放入容器内，加入甲醇或乙醇至IOOOmL定容；甲醇或乙醇的纯度不限定，优选是无水甲醇或无水乙醇，也可以是80% (v/v% )的纯度或更低(但尽量要用无水体系)。磺酞染料优选为5 ’，5 ” - 二硝基-3 ’，3 ” - 二碘-3，4，5，6-四溴苯酚磺酞。
[0026](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为10?20分钟。
[0027](4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为5?15分钟。
[0028](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成尺寸为0.55X0.80cm的矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。该基板材质可以是聚氯乙烯树脂，或是聚丙烯，或是聚甲基丙烯酸甲酯；而滤纸片可以是普通定量滤纸或普通定性滤纸。
[0029]实施例1
[0030]本实施例提供一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:[0031](I)配置A液:将40g柠檬酸钠、42g柠檬酸和30mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL 定容；
[0032](2)配置B液:将40mL四氢呋喃、5mL聚丙二醇和0.3g磺酞染料放入容器内，加入甲醇至10OOmT,定容；
[0033](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为10分钟；
[0034](4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为5分钟；
[0035](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
[0036]实施例2
[0037]本实施例提供一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:
[0038](I)配置A液:将45g柠檬酸钠、48g柠檬酸和35mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL 定容；
[0039](2)配置B液:将IOOmL四氢呋喃、15mL聚丙二醇和1.5g磺酞染料放入容器内，力口入乙醇至IOOOmL定容；
[0040](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为20分钟；
[0041 ] (4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为15分钟；
[0042](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
[0043]实施例3
[0044]本实施例提供一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:
[0045](I)配置A液:将42.5g柠檬酸钠、45g柠檬酸和32.5mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL定容；
[0046](2)配置B液:将70mL四氢呋喃、IOmL聚丙二醇和0.9g磺酞染料放入容器内，力口入甲醇至IOOOmL定容；
[0047](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为15分钟；
[0048](4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为10分钟；
[0049](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
[0050]实施例4
[0051]本实施例提供一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其包括如下步骤:[0052](I)配置A液:将41.7g柠檬酸钠、45.1g柠檬酸和32mL浓盐酸放入容器内，加水至IOOOmL定容；
[0053](2)配置B液:将50mL四氢呋喃、IOmL聚丙二醇和0.58g的5’，5” - 二硝基-3，，3”- 二碘-3,4,5,6-四溴苯酹磺酞放入容器内，加入乙醇至IOOOmL定容；
[0054](3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为15分钟；
[0055](4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为15分钟；
[0056](5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
[0057]实施例5
[0058]标准比色卡的制备方法:
[0059](I)配置0mg/L、20mg/L、80mg/L、150mg/L的牛血清白蛋白标准溶液；
[0060](2)将上述实施例1?4制备好的检测试剂条分别浸于上述的四种牛血清白蛋白标准溶液中，2秒钟后取出，晚干，I分钟后显色完全；
[0061](3)根据各试纸的显色情况制备比色卡，比色卡的色阶为白色到深蓝色的四个色阶。
[0062]实施例6
[0063]微量白蛋白检测试剂条的使用方法:
[0064]将实施例1?4制备好的检测试剂条浸入待测液中，2秒钟后取出，晾干，I分钟后显色完全，随后与标准比色卡进行比较，与检测试剂条上颜色最接近的标准比色卡上的颜色所对应的浓度即为待测液的浓度，如果在两个色阶之间，则可估读微量白蛋白浓度。
[0065]实施例7
[0066]尿液微量白蛋白检测试剂条在仪器上的使用方法:
[0067](I)配置 0mg/L、20mg/L、80mg/L、150mg/L、200mg/L 的牛血清白蛋白标准溶液；
[0068](2)将实施例1?4制备好的检测试剂条分别浸于上述的五种牛血清白蛋白标准溶液中；
[0069](3)使用尿液分析仪测定I分钟的反射率，根据5个点绘制标准曲线；
[0070](4)使用时，将按照实施例制备好的尿微量白蛋白检测试剂条浸入待测液中取出，I分钟后使用尿液分析仪测定反射率，测得的反射率与标准曲线上对应的浓度即为待测液微量白蛋白浓度。
[0071]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
【权利要求】
1.一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，包括基板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述基板上，其特征在于，所述滤纸片中依次浸入有A液和B液，其中: 所述A液是包含:4.0wt %~4.5wt %柠檬酸钠、4.2wt %~4.8wt %柠檬酸和3.0wt %~3.5wt%浓盐酸的缓冲水溶液； 所述B液是包含:4.0wt %~IOwt %四氢呋喃、0.5wt %~1.5wt %聚丙二醇和0.03wt%~0.15wt%磺酞染料的甲醇或乙醇溶液。
2.根据权利要求1所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，其特征在于，所述A液的 pH = 2.0 ~3.5。
3.根据权利要求1所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，其特征在于，所述基板材质是聚氯乙烯树脂，或是聚丙烯，或是聚甲基丙烯酸甲酯。
4.根据权利要求1所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，其特征在于，所述滤纸片是普通定量滤纸或普通定性滤纸。
5.根据权利要求1所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条，其特征在于，所述磺酞染料为5 ’，5 ” - 二硝基-3 ’，3 ” - 二碘-3，4，5，6-四溴苯酚磺酞。
6.一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其特征包括如下步骤: (1)配置A液:将40~45g柠檬酸钠、42~48g柠檬酸和30~35mL浓盐酸放入容器内，加水至1000mL定容 ； (2)配置B液:将40~IOOmL四氢呋喃、5~15mL聚丙二醇和0.3~1.5g磺酞染料放入容器内，加入甲醇或乙醇至1000mL定容； (3)将滤纸片浸入A液中，充分浸泡后取出，置于温度为70°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为10~20分钟； (4)将烘干后的滤纸片再次浸入B液中，充分浸泡后取出，置于温度为60°C的真空干燥箱中干燥，干燥时间为5~15分钟； (5)将干燥后的滤纸片与基板固定，裁成矩形纸条，制成一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条。
7.根据权利要求6所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述A液的pH = 2.0~3.5。
8.根据权利要求6所述的检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条的制备方法，其特征在于，所述矩形纸条的尺寸为0.55X0.80cm。
【文档编号】G01N21/78GK103901034SQ201410178531
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月29日 优先权日:2014年4月29日
【发明者】白鹏利, 陈名利, 殷建, 尹焕才, 胡军 申请人:中国科学院苏州生物医学工程技术研究所