高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含量的方法
【专利摘要】本发明公开了高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含量的方法；利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的甲基丁香酚，用甲醇萃取滤片，萃取液直接采用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用外标法得到卷烟主流烟气中甲基丁香酚的含量；该方法前处理简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高。
【专利说明】高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚 含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及烟草和化学【技术领域】，具体为高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流 烟气中甲基丁香酚含量的方法。
【背景技术】
[0002] 甲基丁香酚又称为丁香酚甲醚，可用于配制依兰型、康乃馨型、紫丁香型等香精， 也用作丁香酚和异丁香酚的变调剂，也常常被应用于食用香精和及烟草香精配方中。在卷 烟燃烧过程中产生的主流烟气中也会产生该种成分。2001年Hoffmann与其研究者对1991 年的有害成分清单进行了修订和补充，将甲基丁香酚列为卷烟烟气的69种有害成分之一， 2002年Rodgman和Green对烟气中已报道的有害成分进行了总结，也将甲基丁香酚列为 149种卷烟烟气有害成分之一。
[0003] 关于卷烟主流烟气中酚类化合物的测定主要集中于邻-苯二酚、对-苯二酚、苯 酚、邻-甲酚、间-甲酚等几种高度关注的酚类化合物。如中国专利200910066382. 7公开 了一种测定卷烟主流烟气中邻-苯二酚、对-苯二酚、苯酚、邻-甲酚、间-甲酚等几种主要 酚类化合物的方法，该测定方法是利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的主要酚类化合物， 用乙酸水溶液萃取后过滤，采用二维液相色谱分离系统串联荧光检测器进行检测，测定卷 烟主流烟气中这几种酚类化合物的含量。
[0004] 卷烟在燃烧过程中，发生了蒸馏、干馏、热解、合成、冷凝等多种物理和化学反应， 形成大量新生化合物，甲基丁香酚在卷烟主流烟气中的含量采用何种方法进行测定，相关 文献报道较少，截至目前，尚未发现国内外有采用高效液相色谱-串联质谱仪测定卷烟主 流烟气中甲基丁香酚含量的任何专利和文献报道。而且，烟气成分非常复杂，基质干扰严 重，甲基丁香酚在烟气中的含量又较低，已经建立的烟气中酚类化合物的检测方法能否适 用于烟气中甲基丁香酚的测定尚未可知。
[0005] 因此，建立一种能够快速、准确、分离效果好、灵敏度高的卷烟主流烟气中甲基丁 香酚含量的检测方法，是烟草行业当前的一项迫切任务，对于研究和评价吸烟与健康问题 也具有十分重要和迫切的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种前处理简单、分离效果好、定性准确、样品分 析时间短、检测灵敏度高的卷烟主流烟气中甲基丁香酚的高效液相色谱-串联质谱的测定 方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案：
[0008] 高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含量的方法，所述方法 是利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的甲基丁香酚，然后用甲醇萃取滤片，萃取液用高效 液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用外标法对卷烟主流烟气中甲基丁香酚的含量进行定 量分析。进一步地，步骤1)所述的食品添加剂的性状包括浸膏、固态和液态。
[0009] 进一步地，所述方法包括以下步骤：
[0010] 1)将待测卷烟在GB/T16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境 条件下平衡48h ;
[0011] 2)采用吸烟机于YC/T29-1996标准抽吸条件下抽吸，利用剑桥滤片捕集卷烟主流 烟气中的甲基丁香酚，采用40mL的甲醇萃取滤片，得到萃取液；
[0012] 3)移取0. 5?1. OmL的萃取液采用高效液相色谱/质谱仪进行测定：
[0013] 4)配制0. 05 μ g/mL?2 μ g/mL的甲基丁香酚系列标准工作溶液，浓度梯度5个以 上且均匀分布；利用高效液相色谱-串联质谱仪对标准溶液进行检测，将得到的甲基丁香 酚峰面积作为纵坐标，甲基丁香酚浓度作为横坐标，绘制标准曲线并得到回归方程，然后在 相同条件下对样品进行检测，将得到的甲基丁香酚峰面积代入回归方程中，即可计算得出 甲基丁香酚的含量。
[0014] 进一步地，所述高效液相色谱仪条件为：C18反相柱，检测温度30°C，进样量 lyL?10yL，流速0.2?0.4mL/min，甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪 条件为：离子化模式为大气压化学电离；扫描模式为正离子；雾化气25?35psi ;气帘气 20psi ;辅助加热气20?30psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压4000?5000V ;离子源温度 350 ?450 °C。
[0015] 进一步地，所述高效液相色谱仪条件为：C18反相柱，检测温度30°C，进样量1 μ L， 流速0. 2mL/min，甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为：离子化模式为大 气压化学电离；扫描模式为正离子；雾化气25psi ;气帘气20psi ;辅助加热气30psi ;碰撞 气5psi ;离子源喷射电压4500V ;离子源温度400°C。
[0016] 进一步地，所述高效液相色谱仪流动相梯度洗脱程序为：
[0017]
【权利要求】
1. 高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含量的方法，其特征在 于，所述方法是利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气中的甲基丁香酚，然后用甲醇萃取滤片，萃 取液用高效液相色谱/串联质谱仪进行检测，采用外标法对卷烟主流烟气中甲基丁香酚的 含量进行定量分析。
2. 根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含 量的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 将待测卷烟在GB/T16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境条件 下平衡； 2) 采用吸烟机于YC/T29-1996标准抽吸条件下抽吸，利用剑桥滤片捕集卷烟主流烟气 中的甲基丁香酚，采用40mL的甲醇萃取滤片，得到萃取液； 3) 移取0. 5?1. OmL的萃取液采用高效液相色谱/质谱仪进行测定： 4) 配制0. 05 μ g/mL?2 μ g/mL的甲基丁香酚系列标准工作溶液，浓度梯度5个以上且 均匀分布；利用高效液相色谱-串联质谱仪对标准溶液进行检测，将得到的甲基丁香酚峰 面积作为纵坐标，甲基丁香酚浓度作为横坐标，绘制标准曲线并得到回归方程，然后在相同 条件下对样品进行检测，将得到的甲基丁香酚峰面积代入回归方程中，即可计算得出甲基 丁香酚的含量。
3. 根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚 含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪条件为：C18反相柱，检测温度30°C，进样 量1 μ L?10 μ L，流速0. 2?0. 4mL/min，甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪 条件为：离子化模式为大气压化学电离；扫描模式为正离子；雾化气25?35psi ;气帘气 20psi ;辅助加热气20?30psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压4000?5000V ;离子源温度 350 ?450 °C。
4. 根据权利要求2所述的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香 酚含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪条件为：C18反相柱，检测温度30°C，进 样量1 μ L，流速0. 2mL/min，甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱；所述质谱仪条件为：离子 化模式为大气压化学电离；扫描模式为正离子；雾化气25psi ;气帘气20psi ;辅助加热气 30psi ;碰撞气5psi ;离子源喷射电压4500V ;离子源温度400°C。
5. 根据权利要求4所述的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚含 量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪流动相梯度洗脱程序为：
其中，A为去离子水，B为甲醇，以体积比混合。
6.根据权利要求4所述的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚 含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱-串联质谱仪进行检测时，甲基丁香酚的定量 离子对m/z为179. 0/151. 0,定性离子对m/z为179. 0/164. 0,驻留时间为200ms，碰撞能为 3V〇
【文档编号】G01N30/88GK104122356SQ201410342934
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年7月17日 优先权日:2014年7月17日
【发明者】朱怀远, 尤晓娟, 庄亚东, 秦艳华, 曹毅, 张媛, 沈晓晨, 刘献军 申请人:江苏中烟工业有限责任公司