一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法，11种有效成分为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、山栀苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷和断氧化马钱子苷，该方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(3.0×*100mm，1.8um)，流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸(B)，梯度洗脱，流速0.35-0.45mL·min-1，检测波长324-326nm和236-238nm，柱温：25-35℃。本发明方法准确快捷灵敏，进一步提高了热毒宁注射液质量控制水平。
【专利说明】一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种同时测定热毒宁注射液中11种成分的 方法。
【背景技术】
[0002] 热毒宁注射液处方由金银花、青蒿、桅子组成，具有清热、疏风、解毒功效，临床上 用于治疗上呼吸道感染[1]。热毒宁注射液成分研究表明，其主要含有咖啡酰奎宁酸类和环 烯醚萜类化合物[2]。前期研究建立了热毒宁注射液HPLC指纹图谱[3]和一测多评法测定热 毒宁注射液中的9种成分[4]，上述HPLC和一测多评方法运行时间较长，不利于工业化大生 产过程中对产品的快速检测，并且只检测了桅子苷这一种环烯醚萜类成分，而环烯醚萜类 物质在处方药材桅子中含量较高[M]，包括羟异桅子苷、山桅苷、京尼平龙胆双糖苷等其他 成分，这些成分对上呼吸道感染均具有一定程度的治疗作用，仅检测桅子苷含量不能更好 的反映产品的质量和疗效。因此，本发明建立了一种新的UPLC方法，增加检测桅子中山桅 苷、京尼平苷酸和京尼平龙胆双糖苷等多种药效指标成分，实现热毒宁注射液中6种有机 酸成分和5种环烯醚萜类成分的同时测定，达到缩短实际生产中的检测时间，增加与产品 疗效相关的指标，进一步提升热毒宁注射液的质控标准的目的。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是克服上述不足之处提供一种UPLC方法，可以同时测定热毒宁注 射液中11种成分（包括6种有机酚酸类物质和山桅苷、京尼平苷酸和京尼平龙胆双糖苷等 5种环烯醚萜类物质）。该方法是采用UPLC-DAD法同时测定热毒宁注射液中新绿原酸、绿 原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、山桅苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖 苷、桅子苷、断氧化马钱子苷11种有效成分的含量。该方法与现有技术相比，可以大大缩短 分析时间，提1?分析的灵敏度和分辨率，并增加了控制指标，进一步提1? 了热毒宁注射液 质控水平。
[0004] 本发明的目的是通过以下方式实现的：
[0005] -种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法，该方法包括以下步骤：
[0006] a、对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、 异绿原酸B、异绿原酸C、山桅苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖苷、桅子苷和断氧化马钱 子苷对照品适量，加浓度为50 %?100 %的甲醇制成浓度分别为0. 12-0. 25,0. 28-0. 58， 0. 12-0. 25,0. 01-0. 04,0. 02-0. 06,0. 02-0. 05,0. 01-0. 04,0. 02-0. 05,0. 23-0. 48， 0? 40-0. 81，0. 05-0. 12mg ? ml-1 的混合对照品溶液。
[0007] b、供试品溶液的制备
[0008] 精密吸取Iml热毒宁注射液置容量瓶中，用浓度为50%?100%的甲醇溶解并稀 释至IOOml，摇匀，离心，上清液通过微孔滤膜滤过，即得。
[0009] c、测定法：采用UPLC-DAD法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色 谱仪，测定，即得；
[0010] 色谱条件：色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18 (3. OX 100mm，I. 8um);以乙腈为流动相 A，以0? 1 %磷酸为流动相B，按照下表进行梯度洗脱；检测波长：324-326nm和236-238nm ; 流速：0? 35-0. 45mL. mirT1 ;柱温：25-35°C。
[0011]
【权利要求】
1. 一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法，其特征在于该方法包括 以下步骤： a、 对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原 酸B、异绿原酸C、山桅苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖苷、桅子苷和断氧化马钱子苷对照 品适量，加浓度为50% -100%的甲醇制成浓度分别为-0? 12-0. 25,0? 28-0. 58,0? 12-0. 25， 0. 01-0. 04,0. 02-0. 06,0. 02-0. 05,0. 01-0. 04,0. 02-0. 05,0. 23-0. 48,0. 40-0. 81, 0? 05-0. 12mg?ml-1的混合对照品溶液。 b、 供试品溶液的制备 精密吸取lml热毒宁注射液置容量瓶中，用浓度为50% -100%的甲醇溶解并稀释至 100ml，摇匀，离心，上清液通过微孔滤膜滤过，即得。 c、 测定法：采用UPLC-DAD法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱 仪，测定，即得； 色谱条件：色谱柱AgilentZORBAXSB-C18 ;以乙腈为流动相A，以0. 1%磷酸为流动相B，按照下表进行梯度洗脱；检测波长：324-326nm和236-238nm;流速：0. 35-0. 45mL.mirT1 ; 柱温：25-35 °C。
2. 根据权利要求1所述的同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法，其特征 在于所述的甲醇均为浓度为50?70%的甲醇。
3. 根据权利要求1所述的同时测定热毒宁注射液中11种成分的方法，其特征在于该方 法包括以下步骤： a、 对照品溶液的制备：分别精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿 原酸B、异绿原酸C、山桅苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖苷、桅子苷和断氧化马钱子苷 对照品适量，加浓度为50%的甲醇制成浓度分别为0. 12-0. 15、0. 28-0. 30、0. 12-0. 15、 0. 01-0. 02,0. 02-0. 04,0. 02-0. 03,0. 01-0. 03,0. 02-0. 03,0. 23-0. 30,0. 40-0. 50, 0? 05-0. 08mg?ml-1的混合对照品溶液。 b、 供试品溶液的制备 精密吸取lml热毒宁注射液置容量瓶中，用浓度为50%甲醇溶解并稀释至100ml，摇 匀，离心，上清液过〇? 22um微孔滤膜滤过，即得。 c、 测定法：采用UPLC-DAD法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱 仪，测定，即得； 色谱条件：色谱柱AgilentZORBAXSB-C18 ;以乙腈为流动相A，以0. 1%磷酸为流动相B，按照下表进行梯度洗脱，然后再运行10_12min;检测波长：324-326nm和236-238nm;流 速：0? 4mL.mirT1 ;柱温：30°C。
【文档编号】G01N30/02GK104407072SQ201410717303
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月29日 优先权日:2014年11月29日
【发明者】萧伟, 毕宇安, 吴建雄, 王振中, 吴莎, 吴亚男, 刘启安 申请人:江苏康缘药业股份有限公司