应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法。更具体地说， 本发明设及一种应用根瘤菌可有效提高山豆根有效药用成分含量的方法。
【背景技术】
[0002] 山豆根为豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis Ga即ep.)的干燥根和根茎，主 产广西，又名广豆根。具有清火解毒、消肿止痛等功效;其有效成分W苦参碱和氧化苦参碱 为主，具有抗炎、抗屯、律失常、抗肿瘤等生物活性。野生山豆根地域分布狭窄，零星生长于石 山区石缝之中，野生资源已溯临枯竭，近年来科技人员已对山豆根的人工繁殖栽培进行研 究，并取得了一定的成果。在山豆根的栽培生产中，如果能利用豆科植物与根瘤菌的共生固 氮效应满足植物对氮素的需求，对提高药材的质量及发展可持续农业、保护生态环境都有 重要意义。但目前对豆科药材的生物固氮及其结瘤固氮对药材质量影响等相关研究甚少， 对山豆根的研究更是罕见，开发利用山豆根根瘤菌资源、提高山豆根原料药材的质量已经 成了市场迫切请求。
【发明内容】
[0003] 本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004] 本发明还有一个目的是提供一种应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方 法，本发明通过人工给山豆根接种根瘤菌，可W明显促进山豆根根瘤的形成，植株的有效成 分含量大幅度增加，提高了药材质量，其原因可能是生物碱是含氮化合物，氮素的供给利用 在山豆根生物碱的生物合成和积累中起重要作用。
[000引为了实现根据本发明的运些目的和其它优点，提供了一种应用根瘤菌提高山豆根 有效药用成分含量的方法，包括W下步骤：
[0006] 将根瘤菌菌液分布于山豆根植株的根系周围，之后将山豆根植株于日间25~30 °C、夜间20~25°C、光强2500~35001X条件下培养160~190天，其中，在培养过程中添加 化虹aeus无氮营养液。
[0007] 优选的是，所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述根瘤菌 菌液的制作过程如下：
[000引步骤一、破碎经表面灭菌处理的山豆根根瘤，取其汁液，用所述汁液在加有0.02~0.03g/L刚果红的YMA固体培养基上划线，25~30°C恒溫培养至菌落出现，连续培养，获得根 瘤菌菌株；
[0009] 步骤二、将根瘤菌菌株接种到YMA液体培养基中，得根瘤菌菌液。
[0010] 优选的是，所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述山豆根 植株经W下步骤培育得到：
[0011] 选取体积比为1:1的水洗河沙和赔石为培育基质，115~125°C高压灭菌0.5~ 1.5h；
[0012] 将山豆根种子于55~65°C水中浸泡至吸胀，自然冷却，用体积浓度为75%的乙醇 和质量分数为0.1%的氯化隶进行表面消毒，在所述培育基质中25~30°C培养至发芽后，移 栽，得待接种的山豆根植株，其中，花盆经过W下处理:用质量分数为5%的高儘酸钟溶液浸 泡5~化后洗净。
[0013] 优选的是，所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述步骤一 中山豆根根瘤的表面灭菌处理，具体为:挑选新鲜、饱满、个大的山豆根根瘤，在无菌的条件 下，体积浓度为95%的乙醇侵泡0.5~1.5min，无菌水冲洗2~4次，质量分数为0.1%的氯化 隶侵泡2~4min，无菌水冲洗3~5次。
[0014] 优选的是，所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述根瘤菌 菌液的用量为一棵山豆根植株1~4mL。
[0015] 优选的是，所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，培养时间为 180 天D
[0016]本发明至少包括^下有益效果：
[0017] 本发明通过人工给山豆根接种根瘤菌，可W明显促进山豆根根瘤的形成，植株的 有效成分含量大幅度增加，提高了药材质量，其原因可能是生物碱是含氮化合物，氮素的供 给利用在山豆根生物碱的生物合成和积累中起重要作用；
[0018]本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0019] 图巧本发明中的山豆根根瘤菌的生长曲线。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，W令本领域技术人员参照说明书 文字能够据W实施。
[0021] 应当理解，本文所使用的诸如"具有"、"包含及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
[0022] <实施例1〉
[0023]-种应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，包括W下步骤：
[0024]将根瘤菌菌液分布于山豆根植株的根系周围，之后将山豆根植株于日间25°C、夜 间20°C、光强25001x条件下培养160天，其中，在培养过程中添加化虹aeus无氮营养液。
[0025]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述根瘤菌菌液的制作 过程如下：
[0026]步骤一、破碎经表面灭菌处理的山豆根根瘤，取其汁液，用所述汁液在加有0.02g/ L刚果红的YMA固体培养基上划线，25°C恒溫培养至菌落出现，连续培养，获得根瘤菌菌株；
[0027]步骤二、将根瘤菌菌株接种到YMA液体培养基中，得根瘤菌菌液。
[0028]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述山豆根植株经W下 步骤培育得到：
[0029] 选取体积比为1:1的水洗河沙和赔石为培育基质，115°C高压灭菌0.化；
[0030]将山豆根种子于55°C水中浸泡至吸胀，自然冷却，用体积浓度为75%的乙醇和质 量分数为0.1%的氯化隶进行表面消毒，在所述培育基质中25°C培养至发芽后，移栽，得待 接种的山豆根植株，其中，花盆经过W下处理：用质量分数为5%的高儘酸钟溶液浸泡化后 洗净。
[0031]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述步骤一中山豆根根 瘤的表面灭菌处理，具体为:挑选新鲜、饱满、个大的山豆根根瘤，在无菌的条件下，体积浓 度为95%的乙醇侵泡0.5min，无菌水冲洗2次，质量分数为0.1%的氯化隶侵泡2min，无菌 水冲洗3次。
[0032]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述根瘤菌菌液的用量 为一棵山豆根植株ImL。
[0033] <实施例2〉
[0034] -种应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，包括W下步骤：
[0035]将根瘤菌菌液分布于山豆根植株的根系周围，之后将山豆根植株于日间28°C、夜 间23°C、光强30001x条件下培养180天，其中，在培养过程中添加化虹aeus无氮营养液。
[0036]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述根瘤菌菌液的制作 过程如下：
[0037]步骤一、破碎经表面灭菌处理的山豆根根瘤，取其汁液，用所述汁液在加有 0.025g/L刚果红的YMA固体培养基上划线，28°C恒溫培养至菌落出现，连续培养，获得根瘤 困困株；
[0038]步骤二、将根瘤菌菌株接种到YMA液体培养基中，得根瘤菌菌液。
[0039]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述山豆根植株经W下 步骤培育得到：
[0040] 选取体积比为1:1的水洗河沙和赔石为培育基质，120°C高压灭菌化；
[0041]将山豆根种子于60°C水中浸泡至吸胀，自然冷却，用体积浓度为75 %的乙醇和质 量分数为0.1%的氯化隶进行表面消毒，在所述培育基质中28°C培养至发芽后，移栽，得待 接种的山豆根植株，其中，花盆经过W下处理：用质量分数为5%的高儘酸钟溶液浸泡5.化 后洗净。
[0042]所述的应用根瘤菌提高山豆根有效药用成分含量的方法，所述步骤一