磁控诱导自组装快速成膜制备谷胱甘肽印迹传感器的方法
【专利摘要】本发明公开了一种磁控诱导自组装快速成膜制备谷胱甘肽印迹传感器的方法。该方法依次包含电极预处理、Fe3O4PANI-rGO复合纳米粒制备、复合纳米粒与印迹层复合物共同预组装、经磁控诱导自组装修饰电极、电聚合形成印迹聚合物以及模板分子洗脱6步。本发明中制备方法操作简便、价格低廉、响应灵敏、抗干扰能力强、稳定性和重现性良好，可实现血浆中谷胱甘肽的高效、灵敏和快速检测，对临床相关疾病的诊疗有重要意义。
【专利说明】磁控诱导自组装快速成膜制备谷胱甘肽印迹传感器的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分析检测【技术领域】，具体涉及一种磁控诱导自组装快速成膜用于制备谷胱甘肽印迹传感器的方法。
【背景技术】
[0002]谷胱甘肽(glutath1ne, GSH)是存在于生物体内的一种重要的非蛋白巯基化合物，作为一种重要的生物还原剂在生物体内发挥着重要的作用，如解毒作用、维持细胞稳定性、抗氧化/硝基化损伤等[1]。GSH的消除与人体多种疾病密切相关，如糖尿病、艾滋病和神经退行性疾病等[2]。因此，测定生物样品中GSH的含量对相关疾病的诊断和治疗具有重要意义和实用价值。
[0003]电化学传感器灵敏度高、设计简单、价格低廉、有良好的稳定性及重复利用性、可实现实时监测因而应用广泛[3]。但选择性差成为其发展的瓶颈，而分子印迹技术具有专一性强、抗恶劣环境能力强的特点，将二者结合在一起相得益彰，在食品检验、环境监测、化学品和医药生产中具有很大的应用前景[4]。分子印迹聚合物用作传感器的敏感材料已成为分子印迹技术的一个重要应用，把这种以分子印迹聚合物作为敏感材料的电化学传感器称为分子印迹电化学传感器。其与近年来研究较多的生物敏感材料电化学传感器相比，不易被生物降解破坏，可重复利用，制备简单，并且耐高温、高压、酸、碱和有机溶剂，因此有望成为生物材料的理想替代品。
[0004]分子自组装具有可原位自发形成，热力学稳定，覆盖度高缺陷少，分子有序排列，可人为设计载体表面结构，简单易得等主要特征，利用MSA制备电化学元件已成为了当今研究的热点。而随着人们对粒子在磁场下取向行为的认识逐步走向成熟，磁场已经成为一种新型的自组装动力。利用磁控诱导自组装技术形成结构高度有序的新型材料，在磁场磁化力作用下，使得磁性颗粒的易磁化轴沿着磁场方向一致排列，形成一维有序的磁性纳米结构。将磁场诱导自组装技术引入MIPs的制备为形成结构有序，厚度可控的聚合物膜创造了有利条件。
[0005]磁性纳米粒具有生物相容性优良、导电性高和毒副作用小和易分离的优点。石墨烯是一种六边形晶格构成的有着完美的二维晶体结构，片状的，单层的，具有优异的导电、导热和力学性能，巨大的比表面积，为新型纳米电化学传感器的发展提供良好的载体。聚苯胺因具有多样的结构，独特的掺杂机制、优异的物理化学性能、良好的稳定性和原料的价廉易得等优点，而成为聚合物研究的热点。将三者相结合形成的三元复合纳米粒充分利用三种纳米材料的优点，得到高比表面积、高导电性，具有催化活性的纳米材料。目前，将磁控诱导三元复合纳米粒的自组装用于谷胱甘肽分子印迹电化学传感器的制备还未见报道。
【发明内容】
[0006]本方法采用自组装技术的研究前沿磁控诱导自组装技术，以磁场诱导三元复合纳米粒自组装修饰电极。在磁场的作用下，Fe3O4OPAN1-rGO (Fe3O4O聚苯胺-还原石墨烯)三元复合纳米粒沿着外磁场方向组装成结构有序的网络结构。调节磁场强度可实现在分子水平上控制薄膜的厚度、组成及结构，其修饰后不仅大大增强了电极的灵敏度，也为MIPs膜有序结构的形成创造了有利条件。在此修饰电极表面以谷胱甘肽为模板分子，Fe304@PAN1-rG0为功能单体，吡咯为共同功能单体和交联剂，恒电位聚合制备出对谷胱甘肽具有高效识别性的高灵敏分子印迹电化学传感器，并实现了血浆样品中谷胱甘肽的灵敏快速检测。该方法快捷简便，具有良好回收率和重现性，为临床谷胱甘肽的监测提供了一种新方法。
[0007]本发明的目的是通过以下方式实现的:
[0008]一种磁控诱导自组装快速成膜用于制备谷胱甘肽印迹传感器的方法，该方法包括以下步骤:
[0009]a)电极预处理:磁性玻碳电极经Al2O3悬浊液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗；
[0010]b) Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒子制备:将氧化石墨烯与Fe3O4OPANI复合纳米粒按照质量比为1: 10?1:30的比例共同预组装，然后加入水合肼进行还原，恒温搅拌6?10h，磁性分离,洗涤至中性,得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒；
[0011]c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含功能单体，氯化钾，硫酸，谷胱甘肽和Fe304@PAN1-rG0复合纳米粒的混合溶液，充氮后密封，室温避光环境中放置2?8h，完成功能单体、谷胱甘肽与Fe304@PAN1-rG0纳米粒的预组装；
[0012]d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒的预组装液，氮吹后，插入磁性电极吸附，磁场强度为0.32?1.6T ;
[0013]e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法电聚合，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干；
[0014]f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除谷胱甘肽。
[0015]步骤“c) ”中谷胱甘肽与功能单体的摩尔浓度比为1:30?1:50，功能单体优选为五元杂环类化合物，优选五元杂环类化合物为吡咯。
[0016]步骤b)中水合肼的作用为还原剂。
[0017]步骤“d) ”中插入磁性电极吸附时间为5?20min，磁性电极的磁场强度为0.32?
1.6T，优选磁性电极的磁场强度为0.64?1.28T，最优选0.96T，此吸附的过程为磁控诱导自组装的过程。
[0018]步骤“e) ”中恒电位方法中恒电位为0.3?0.8V ;恒电位聚合时间为200?500s。
[0019]步骤“ f) ”中电洗脱的时间为2?8min。
[0020]优选谷胱甘肽，Fe304@PAN1-rG0纳米粒，功能单体，氯化钾和硫酸的质量比是1:0.26:4.4:6.2:0.03 ?1:0.46:13.1:12.4:0.39。
[0021]Fe3O4OPANI复合纳米粒的制备方法如下:含Fe3O4纳米粒和苯胺的盐酸溶液中，其中Fe3O4纳米粒和苯胺的质量比为1:1?1:3，加入过硫酸铵于O?5°C下反应得墨绿色液体，磁性分离，洗涤至中性，真空干燥，得Fe3O4OPANI复合纳米粒。含Fe3O4纳米粒和苯胺的盐酸溶液中盐酸的浓度可为0.1mol L'
[0022]Fe3O4OPANI的制备具体可按照以下步骤:称取4?5g FeCl3- 6H20与I?3gFeCl2-4H20于250mL三颈瓶中，搅拌溶解，温度升至80°C时加入8?1mL氨水并反应I?3h。纯水洗至中性,制得Fe3O4纳米粒。将制得的Fe3O4纳米粒倒入250mL烧杯中，加入10mL浓度为0.1mol L—1的盐酸,加入I?6mL苯胺。搅拌分散半小时后,超声条件下滴加8?1mL浓度为0.1mol Γ1的过硫酸铵(每半分钟一滴)，并控制温度在O?5°C下反应3h，得墨绿色液体。磁性分离,洗涤至中性,真空干燥24h，得Fe3O4OPANI复合纳米粒。
[0023]Fe3O4iPAN1-rGO的制备:在10mL的三颈瓶中，取6.5mg ml/1氧化石墨烯(GO) 2?8mL,溶于40mL去离子水，超声lh。然后加入制备好的Fe3O4OPANI复合纳米粒，其与氧化石墨烯质量比为30:1?10:1，80°C预组装反应lh，加入0.2?0.4mL还原剂水合肼，恒温搅拌6?12h。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe304@PAN1-rG0三基元复合纳米粒。
[0024]2.通过以下方法对本发明电化学传感器进行检测，电化学传感器制备步骤同实施例2:
[0025]电化学检测方法和条件:
[0026]循环伏安法(CV)法:CV法:检测电位范围为-0.2?0.6V，扫描速率为10mV -S^10
[0027]差示脉冲法(DPV)法:检测电位范围为-0.8?0.6V,电位增量为0.004V,振幅为0.06V，脉冲宽度为0.2s，采样宽度为0.04s，静止时间为4s。
[0028]探针溶液:含Immol.Γ1铁氰化钾的0.1mol.T1KCl溶液。
[0029]测试前电极在H2SO4溶液中电洗脱至背景电流恢复。为使吸附完全，实验中可选择谷胱甘肽的富集时间为lOmin。
[0030]3.采用本发明磁控诱导的谷胱甘肽分子印迹膜电化学传感器对已知浓度溶液的静态吸附测试:制备好的MIES在取浓度范围分别为2.0X 10_8?1.0X 10_6mol.Γ1的谷胱甘肽溶液进行测试，所测得浓度分别在2.0 X 10_8?5.0 X 10_5mol.Γ1成较好的线性，计算可知检测限为3nmol.I71 (S/N = 3)。
[0031]4.测样过程:取医院获得受试者血浆，预处理后将其配制pH 7.0的PBS溶液，采用DPV法测定样品中谷胱甘肽的浓度。
[0032]5.磁场强度的变化对印迹膜的影响:考察了磁场强度从0.32T?1.6T变化时，制备的印迹传感器电流响应的变化，发现磁场强度在0.96T时，电流响应值最大，此条件下制备的印迹传感器灵敏度最高。进一步的考察了磁场强度变化时形成的印迹膜的厚度及表面结构的变化。当磁场强度太低，特别是低于0.64T时，所形成的印迹膜厚度较小，表面虽然均匀但稀疏，此时导电性较差且印迹效率低，传感器灵敏度差。当磁场强度太高，高于1.28T时，所形成的印迹膜厚度较大，表面聚集且不均匀，此时纳米粒的过快聚集和模板分子的嵌入过深导致印迹效率依然较低，传感器的灵敏度依然较差。当磁场强度为0.64?1.28T时，所形成的印迹膜厚度适中约为4.5?5.5 μ m，表面均匀，有利于电传导和提高印迹效率，此时的印迹传感器的灵敏度较高。同时比较了不加磁场所形成的膜的表面结构，发现不加磁场所形成的膜稀疏且不均匀，进一步证实磁场是诱导复合纳米粒有序自组装的有效动力，图6能谱表征图进一步说明了这一结果。
[0033]与现有技术比较本发明的有益效果:
[0034]1.将分子印迹与电化学传感器结合，提高了电化学传感器的选择性，实现了血浆样品中谷胱甘肽的选择性快速检测。
[0035]2.采用磁控自组装技术，通过调节磁性电极的磁场强度可实现在分子水平上控制薄膜的厚度、组成及结构，其修饰后不仅大大增强了电极的灵敏度，缩短了自组装时间，且制备方便、操作简单、价格低廉，同时也为MIPs膜有序结构的形成创造了有利条件。
[0036]3.得益于三元复合纳米粒的高导电性和催化活性，进一步放大电化学信号，制备了高灵敏的谷胱甘肽印迹传感器。
[0037]4.采用电聚合制备的聚吡咯膜层稳定、完整、致密，导电性好，与基体的结合情况较好，大大增加了电极的比表面积和灵敏度，利用该性质可以制备具高灵敏度的分子印迹聚合物膜。
【专利附图】
【附图说明】
[0038]图1为MIES制备过程的EIS表征图(a.裸电极b.洗脱前c.洗脱后d.吸附后)，表明磁场诱导Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒吸附到电极并电聚合后(曲线b)，电极阻抗相对于裸电极(曲线a)降低，说明Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒掺杂形成的MIPs膜导电性良好。经过模板分子洗脱(曲线c)后，电极阻抗再次降低，证明模板分子被洗脱而形成相应印迹孔穴。而模板分子吸附之后(曲线d)，电极阻抗增加几乎恢复到洗脱前的水平，证实模板分子进入了印迹孔穴阻碍铁氰化钾探针分子到达电极表面。
[0039]图2为MIES制备过程的CV图(a.裸电极b.洗脱前c.洗脱后d.吸附后)。磁场诱导Fe3O4OPAN1-rGO纳米粒在MGCE电极表面有序自组装，电聚合后(曲线b)形成致密均匀的MIPs膜，峰电流值相对于裸电极(曲线a)有明显增大。这是由于Fe304@PAN1-rG0纳米复合材料导电性能优越，增加了电极的电流响应。洗脱模板分子后(曲线c)峰电流值进一步增加，表明洗脱前包埋有模板分子的印迹聚合物阻碍了探针分子传递至电极表面，而洗脱模板分子后的印迹聚合物内形成了 GSH的特有识别孔穴，可使探针分子通过空穴传递至电极表面发生电化学氧化还原反应从而产生放大的响应电流。吸附模板分子之后(曲线d)，峰电流值几乎恢复到洗脱前的水平，证实模板分子进入了印迹孔穴阻碍探针分子到达电极表面。
[0040]图3有无磁性纳米粒制备MIES电化学响应比较图(a.裸电极b.有纳米粒c.无纳米粒)。掺杂Fe3O4OPAN1-rGO的复合纳米粒(曲线b)相对于裸电极(曲线a)与无纳米粒(曲线c)峰电流值有明显增大，表明掺杂Fe304@PAN1-rG0纳米粒大大增加MIES的导电性和电催化活性。
[0041]图4为选择性吸附实验电流响应结果图。本实验中选择另外5种人体内常见干扰物(抗坏血酸，尿酸，多巴胺，半胱氨酸，氧化型谷胱甘肽)考察了本发明实施例1方法制备的MIES和非分子印迹电化学传感器(NIES)的选择性能:以DPV法测定电极在谷胱甘肽溶液中吸附后的电流响应，记录峰电流值Itl ;同法分别测定电极在含谷胱甘肽与干扰物的混合溶液中吸附后峰电流值Im，结果表明20倍浓度干扰物对MIES测定谷胱甘肽的电流响应影响很小，Iffl/10的值为0.92?1.1，表明制备的传感器选择性优异。
[0042]图5为磁场强度变化时MIES洗脱前后的电流差值图。可见在0.96T时响应最高，Δ Ip的值为92 μ A。
[0043]图6A-G为扫描电镜图，H为有无磁场时所形成的印迹膜的能谱图。
[0044]其中，A和D为磁场强度为0.32Τ时形成的印迹膜，B和E为磁场强度为0.96Τ时形成的印迹膜，C和F为磁场强度为1.6Τ时形成的印迹膜，G为不加磁场形成膜的表面结构。
[0045]A-C表明磁场强度变化时形成的印迹膜的厚度，图A、B、C分别表明，磁场强度为0.32，0.96，1.6T时，所形成的印迹膜的厚度分别为3.2 μ m，5.1 μ m和6.9 μ m。D-F表明磁场强度变化时形成的印迹膜表面结构的变化。图D-F表明，随着磁场强度的变化，膜的表面结构发生了改变，说明可以通过改变磁场强度来控制所形成的印迹膜的微观结构和厚度。图G为不加磁场所形成的膜表面结构，相对于磁场诱导下形成的均匀有序的结构，其表面的结构稀疏且不均匀，表明磁场是诱导三元复合纳米粒有序自组装的有效动力。图H中I为磁场强度0.96T下的能谱图，II为无磁场强度的能谱图，进一步证实了上述结果。
【具体实施方式】
[0046]以下通过实施例对本发明做进一步解释说明:
[0047]药品和试剂=Al2O3 (0.05 μ m,上海辰华仪器有限公司)，谷胱甘肽(还原型)(西亚试剂研究中心)，氯化钾(KC1，分析纯，国家集团化学试剂有限公司)，铁氰化钾(K3Fe(CN)6,分析纯，上海新宝精细化工厂)，无水乙醇(分析纯，国家集团化学试剂有限公司)，六水合氯化铁(国药集团化学试剂有限公司)，四水合氯化亚铁(温州市化学用料厂)，过硫酸铵(上海凌峰化学试剂有限公司)，氢氧化钠(NaOH，南京化学试剂有限公司)，盐酸(HC1，溧阳东方化学试剂有限公司)，批咯(pyrrole，分析纯，阿拉丁试剂有限公司)，硫酸(H2SO4，上海化学试剂有限公司)，磷酸二氢钠(NaH2PO4,分析纯，南京化学试剂有限公司)，磷酸氢二钠(Na2HPO4，分析纯，上海凌峰化学有限公司)，水合肼(H2N-NH2，上海实验试剂有限公司)，氮气(工业级，南京五十五所)，实验用水为二次蒸馏水。
[0048]以下实施例中，Fe3O4OPANI的制备:称取 4.72g FeCl3_6H20 与 1.72g FeCl2_4H20 于250ml三颈瓶中，搅拌溶解，温度升至80°C时加入1ml氨水并反应lh。纯水洗至中性，制得Fe3O4纳米粒。将制得的Fe3O4纳米粒倒入250mL烧杯中，加入10mL浓度为0.1mol L—1的盐酸，加入4mL苯胺。搅拌分散半小时后,超声条件下滴加8mL浓度为0.1mol I71的过硫酸铵(每半分钟一滴)，并控制温度在O?5°C下反应3h，得墨绿色液体。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe3O4OPANI复合纳米粒。
[0049]实施例1
[0050]a)电极预处理:磁性玻碳电极(Φ = 5mm)经0.05 μ m的Al2O3悬池液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗2min。
[0051]b) Fe3O4iPAN1-rGO复合纳米粒子制备:在10mL的三颈瓶中，取6.5mg ml/1氧化石墨烯(G0)3mL，溶于40mL去离子水，超声lh。然后加入制备的0.5g Fe3O4OPANI复合纳米粒，80°C预组装反应lh，加入0.3mL还原剂水合肼，恒温搅拌10h。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒。
[0052]c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含2.5mmol L^1GSH(谷胱甘妝)，0.3mg Ι/?θ^ΟΡΑΝΙ-γΟΟ 复合纳米粒，10mmol L-1 批咯，2mmol L^1H2SO4,0.1molL^iKCI的混合水溶液5mL，充氮后密封，室温避光环境中搅拌5h，完成功能单体、模板分子与交联剂的预组装。
[0053]d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPANI的预组装液，氮吹1min后,插入磁性电极吸附5min,磁性电极的磁场强度为0.32T。
[0054]e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法在0.5V下电聚合400s，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干。
[0055]f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱5min，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除模板分子。
[0056]实施例2
[0057]a)电极预处理:磁性玻碳电极(Φ = 5mm)经0.05 μ m的Al2O3悬池液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗2min。
[0058]b) Fe3O4iPAN1-rGO复合纳米粒子制备:在10mL的三颈瓶中，6.5mg ml/1氧化石墨烯(G0)6mL，溶于40mL去离子水，超声lh。然后加入制备的0.5g Fe3O4OPANI复合纳米粒，80°C预组装反应lh，加入0.2mL还原剂水合肼，恒温搅拌10h。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒。
[0059]c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含2.5mmol L^1GSH(谷胱甘妝)，0.3mg L-1Fe3O4OPAN1-rGO 复合纳米粒，75mmol ΤΓ1 批 P各，Immol L_1H2S04,0.1molL^1KCl的混合水溶液5mL,充氮后密封,室温避光环境中搅拌6h,完成功能单体、模板分子与交联剂的预组装。
[0060]d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPANI的预组装液，氮吹1min后,插入磁性电极吸附1min,磁性电极的磁场强度为0.96T。
[0061]e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法在0.5V下电聚合300s，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干。
[0062]f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱4min，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除模板分子。
[0063]实施例3
[0064]a)电极预处理:磁性玻碳电极(Φ = 5mm)经0.05 μ m的Al2O3悬池液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗2min。
[0065]b) Fe3O4iPAN1-rGO复合纳米粒子制备:在10mL的三颈瓶中，取6.5mg ml/1氧化石墨烯(G0)5mL，溶于40mL去离子水，超声lh。然后加入制备的0.5g Fe3O4OPANI复合纳米粒，80°C预组装反应lh，加入0.3mL还原剂水合肼，恒温搅拌10h。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒。
[0066]c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含2.5mmol L^1GSH(谷胱甘妝)，0.3mg Ι/?θ^ΟΡΑΝΙ-γΟΟ 复合纳米粒，125mmol L-1 批咯，lmmol L_1H2S04,0.1molL^iKCI的混合水溶液5mL，充氮后密封，室温避光环境中搅拌4h，完成功能单体、模板分子与交联剂的预组装。
[0067]d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPANI的预组装液，氮吹1min后,插入磁性电极吸附15min,磁性电极的磁场强度为1.28T。
[0068]e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法在0.6V下电聚合450s，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干。
[0069]f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱6min，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除模板分子。
[0070]实施例4
[0071]a)电极预处理:磁性玻碳电极(Φ = 5mm)经0.05 μ m的Al2O3悬池液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗2min。
[0072]b) Fe3O4iPAN1-rGO复合纳米粒子制备:在10mL的三颈瓶中，取6.5mg ml/1氧化石墨烯(G0)4mL，溶于40mL去离子水，超声lh。然后加入制备的0.5g Fe3O4OPANI复合纳米粒，80°C预组装反应lh，加入0.2mL还原剂水合肼，恒温搅拌10h。磁性分离，洗涤至中性，真空干燥24h，得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒。
[0073]c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含2.5mmol L^1GSH(谷胱甘妝)，0.3mg L-1Fe3O4OPAN1-rGO 复合纳米粒,90mmol L-1 批咯，2mmol L^1H2SO4,0.1molL^iKCI的混合水溶液5mL，充氮后密封，室温避光环境中搅拌4h，完成功能单体、模板分子与交联剂的预组装。
[0074]d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPANI的预组装液，氮吹1min后,插入磁性电极吸附1min,磁性电极的磁场强度为0.64T。
[0075]e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法在0.8V下电聚合350s，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干。
[0076]f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱4min，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除模板分子。
[0077]参考文献
[0078][I]Gunaratnam M, Grant MH.Cr (VI) inhibits DNA, RNA and protein synthesesin hepatocytes:1nvolvement of glutath1ne reductase, reduced glutath1ne andDT-diaphorase[J].Toxicol, in Vitro,2008，22:879-886.
[0079][2]Raffa Mj Mechri A，Othman LB，et al.Decreased glutath1ne levelsand ant1xidant enzyme activities in untreated and treated schizophrenicpatients[J].Prog.Neuro-Psychophj2009，33:1178-1183.
[0080][3]Zhu LLj Cao YH，Cao GQ.Electrochemical sensor based on magneticmolecularly imprinted nanoparticles at surfactant modified magnetic electrodefor determinat1n of bisphenol[J].B1sens.B1electron, 2014, 54:258-261.
[0081][4] Li HF，Xie CGj Li SQj Xu K.Electropolymerized molecular imprintingon gold nanoparticle-carbon nanotube modified electrode for electrochemicaldetect1n of triazophos[J].Colloid Surface B，2012，89:175-181.
【权利要求】
1.一种磁控诱导自组装快速成膜用于制备谷胱甘肽印迹传感器的方法，其特征在于该方法包括以下步骤: a)电极预处理:磁性玻碳电极经Al2O3悬浊液抛光后，分别用无水乙醇、去离子水超声清洗； b)Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒子制备:将氧化石墨烯与Fe3O4OPANI复合纳米粒按质量比为1:10?1:30的比例共同预组装，然后加入水合肼进行还原，恒温搅拌6?10h，磁性分离，洗涤至中性，得Fe3O4OPAN1-rGO三基元复合纳米粒； c)复合纳米粒子与印迹层氢键复合物共同预组装:配制含功能单体，氯化钾，硫酸，谷胱甘肽和Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒的混合溶液，充氮后密封，室温避光环境中放置2?8h，完成功能单体、谷胱甘肽与Fe304@PAN1-rG0纳米粒的预组装； d)经磁场诱导自组装修饰电极:取含有功能单体、谷胱甘肽以及Fe3O4OPAN1-rGO复合纳米粒的预组装液，氮吹后，插入磁性电极吸附，磁场强度为0.32?1.6T ; e)电聚合形成印迹聚合物:接步骤d，以恒电位方法电聚合，取出后，去离子水反复淋洗，氮气吹干； f)洗脱模板分子:以恒电位方法在&304溶液中电化学洗脱，继而用大量双蒸水反复冲洗，去除谷胱甘肽。
2.根据权利要求1所述的磁控诱导自组装快速成膜用于制备谷胱甘肽印迹传感器的方法，其特征在于，其中谷胱甘肽与功能单体的摩尔浓度比为1:30?1:50。
3.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于步骤“c)”中功能单体为五元杂环类化合物。
4.根据权利要求3所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于所述的五元杂环类化合物为吡咯。
5.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于步骤“d)”中插入磁性电极吸附时间为5?20min。
6.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于步骤“e)”中恒电位为0.3?0.8V。
7.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于步骤“e)”中恒电位聚合时间为200?500s。
8.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于步骤“f)”中电洗脱的时间为2?8min。
9.根据权利要求1所述的分子印迹膜电化学传感器的制备方法，其特征在于Fe3O4OPANI复合纳米粒的制备方法如下:含Fe3O4纳米粒和苯胺的盐酸溶液中，其中Fe3O4纳米粒和苯胺的质量比为1:1?1: 3，加入过硫酸铵于O?5°C下反应得墨绿色液体，磁性分离，洗涤至中性,真空干燥,得Fe3O4OPANI复合纳米粒。
【文档编号】G01N27/26GK104407027SQ201410782854
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月16日 优先权日:2014年12月16日
【发明者】周学敏, 姜慧君, 朱婉莹, 江郭一, 李昺之, 蔡奇志 申请人:南京医科大学