一种基于金/二硫化钼/石墨烯纳米复合材料的适体传感器对溶菌酶的灵敏测定方法与流程

文档序号:13195620阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种溶菌酶电化学适体传感器的制备方法,包括如下步骤:1)采用L-半胱氨酸法制备二硫化钼/石墨烯(MoS2/GR);2)制备金纳米(AuNPs)颗粒,粒径为10-13nm;3)制备金纳米颗粒/二硫化钼/石墨烯(AuNPs/MoS2/GR)复合溶液:将1mgMoS2/GR分散在1mL超纯水中,超声30min,接着加入1mL制备的AuNPs后避光震荡30min,制得AuNPs/MoS2/GR复合材料溶液。4)溶菌酶报告探针-适体双链(DNAduplex)的制备:亚甲基蓝(MB)修饰的溶菌酶报告探针(P-MB):5’-SH-C6-GTGCAGAGCTAAGTAACTCTGCAC-MB-3’与溶菌酶适体(A-Lys):5’-ATCAGGGCTAAAGAGTGCAGAGTTACTTAG-3’组装成双链DNAduplex;5)适体传感器的制备:玻碳电极预处理后,将制备的AuNPs/MoS2/GR复合材料溶液滴涂在玻碳电极电极(GCE)表面,避光晾干,制得AuNPs/MoS2/GR/GCE;将制备的AuNPs/MoS2/GR/GCE电极浸在溶菌酶报告探针-适体双链溶液中,培育制得溶菌酶电化学适体传感器。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4)中,溶菌酶报告探针溶解在100mMPBS中并暗处理1h打开二硫键,然后将10μM溶菌酶报告探针加入到10μM溶菌酶适体溶液中,稀释所得溶液至浓度为1μM后加热至90℃并持续5min,温度降至室温后在37℃下培育2h使双链形成。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤5)中,玻碳电极的预处理为:将在金相砂纸上打磨后的裸玻碳电极用0.3μm的Al2O3粉打磨成镜面,二次水清洗后,相继在二次水和乙醇溶液中超声30s;将清洗干净的电极在0.5mol/L的硫酸溶液中循环伏安至稳定,二次水冲洗干净后,室温晾干或用氮气吹干。4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤5)中,AuNPs/MoS2/GR/GCE的制备过程为:取7.00μLAuNPs/MoS2/GR复合材料溶液,滴涂在电极表面,避光晾干,制得AuNPs/MoS2/GR/GCE。5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤5)中,AuNPs/MoS2/GR/GCE电极在溶菌酶报告探针-适体双链溶液中培育后用清洗液清洗修饰后的电极,用1mM6-巯基-1-己醇封闭电极,避光放置1h,将电极再\t次用二次水和清洗液清洗,制得溶菌酶电化学适体传感器。6.根据权利要求1-5任一项制备方法制得的溶菌酶电化学适体传感器。7.一种利用权利要求6所述溶菌酶电化学适体传感器检测溶菌酶的方法,包括:1)将传感器在溶菌酶溶液中37℃培育70-90min,然后浸泡在100mMPBS+140mMNaCl+5mMMgCl2,pH7.4的缓冲溶液中20-40min;2)将传感器在100mMPBS+140mMNaCl+5mMMgCl2,pH7.4的缓冲溶液中利用方波伏安法(SWV)对电化学信号进行检测。8.权利要求6所述电化学适体传感器的再生方法,包括:将传感器在1μM适体溶液中培育2h的方法再生,所述适体溶液为1μM适体、100mMPBS、100mMNaCl、1mMMgCl2,pH7.4,所述适体序列为5’-ATCAGGGCTAAAGAGTGCAGAGTTACTTAG-3’。
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