烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC‑MS/MS检测方法与流程

技术特征：

1.烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法：其特征在于：包括以下步骤：

(1)样品处理：

称取烟叶样品粉末至10mL容量瓶中，加入甲醇3-5ml进行提取，超声，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液；

样品不稀释：取烟叶样品提取液5μL进样UPLC-MS/MS分析，主要用于降烟碱和亚硝基降烟碱含量测定，此时由于烟碱成分含量高，测定时，在烟碱出峰时间段不进行质谱采集；

样品稀释100倍：取烟叶样品提取液0.1mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀后取5μL进样UPLC-MS/MS分析，主要用于烟碱含量测定；

(2)HPLC-MS/MS分析：将处理后的样品用三重四级杆液质联用仪，在以下条件下进行分析

检测条件为：三重四级杆液质联用仪，液相条件：

流动相：A:水，用氨水调pH至11.0 B:甲醇

流速：0.3ml/min 进样量：5μL

柱温：45℃

色谱柱：Waters ACQUITYBEH C18,1.7μm,2.1*50mm Column

表1.梯度洗脱程序

Time/minA％B％09553.510904.010904.019556955

表2.质谱条件

其他质谱参数：

毛细管电压(kV):3.2kV；源温度(℃):120；

脱溶剂气温度(℃):350；脱溶剂气流量(L/Hr):800；

气帘气流量(L/Hr):50；驻留时间(s)：0.1s

(3)根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟的浓度。

2.根据权利要求1所述的烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：称取烟叶样品粉末20mg至10mL容量瓶中，加入甲醇3-5ml，超声30min，再用甲醇定容至刻度，摇匀后取上清液过膜，得烟叶样品提取液。

3.根据权利要求1所述的烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：步骤(3)所述标准曲线时制作时选用的标准溶液为：

烟碱系列溶液配制：将烟碱标准品100mg，加入2mL甲醇配制成50mg/mL的标准品母液，用稀释液(乙腈/水＝1/1，V/V)配制成浓度为0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500ng/mL的系列标准溶液。

混合标准品母液配制：取降烟碱和亚硝基降烟碱的母液，用稀释液配制成100μg/mL的混合标准品母液，用稀释液(甲醇/水＝1/1，V/V)配制成浓度为0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500ng/mL的系列标准溶液。

4.根据权利要求1所述的烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法对烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的检测限均为0.1ng/ml。

5.根据权利要求1所述的烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法对烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的定量限均为0.5ng/ml。

6.根据权利要求1所述的烟叶中烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法对烟碱、降烟碱和亚硝基降烟碱的检测范围为0.5-500ng/ml。