可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法与流程

技术特征：

1.一种可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：包括标准物质：

标准物质包括特征肽段及其内标肽段，肽段序列为：

组合方式如下：

(1)、所述标准物质的特征肽段单独使用或者与其他特征肽段配成两种混合特征肽段使用；

(2)、内标肽段单独使用，或与其他特征肽段配成两种或多种混合内标物质使用；

(3)、所述标准物质的特征肽段与其内标肽段配成的单一内标物质单独使用，或与另外一种单一内标物质同时使用；

(4)、内标肽段与其他内标肽段混合使用。

2.根据权利要求1所述的可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括反应试剂：

反应试剂，由以下成分组成：

3.根据权利要求1所述可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：

1)标准物质

①用以实现本发明试剂盒的标准物质是标准特征肽段，是单一标准物质，或配成双混合标准物质，使用其中的一种或多种；

单一标准物质I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

单一标准物质II

特征肽段2 AEFVEVTK

双混合标准物质

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

②用以实现本发明试剂盒的内标肽段，是单一内标肽段，或配成双混合内标肽段，可使用其中的一种或多种；

单一内标肽段I

内标肽段1 DAFLGSFLYEYSR

单一内标肽段II

内标肽段2 AEFVEVTK

双混合内标肽段

内标肽段1 DAFLGSFLYEYSR

内标肽段2 AEFVEVTK

③将上述特征肽段与其内标肽段联合使用，是单一内标物质，或配成混合内标物质，使用其中的一种或多种；

单一内标物质I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

内标肽段1 DAFLGSFLYEYSR

单一内标物质II

特征肽段2 AEFVEVTK

内标肽段2 AEFVEVTK

混合内标物质I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

内标肽段1 DAFLGSFLYEYSR

混合内标物质II

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

内标肽段2 AEFVEVTK

混合内标物质III

④用以实现本发明方法的牛血清白蛋白检测试剂盒中的标准物质是单剂、或是双剂或多剂，根据上述方法自由组合或选择其中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：所述标准物质的内标肽段是特征肽段中任一、二或多个氨基酸上的C、H、O、N被同位素标记后的肽段，其中，一个氨基酸上的C、H、O、N四个元素可同时被标记，或任意1～3个元素被标记。

5.根据权利要求1所述可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：所述标准物质配成单剂、双剂或多剂。

6.根据权利要求1所述可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：所述胰蛋白酶为序列级胰蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一种。

7.根据权利要求2所述可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒，其特征在于：所述反应试剂配成单剂。

8.利用权利要求1所述的可实现牛血清白蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒所实施的牛血清白蛋白含量测定方法，其特征在于：该方法步骤如下：

(1)将待测样品加入碳酸氢铵，涡旋，加入二硫苏糖醇，温育振荡，再加入碘乙酰胺，温育振荡，放置至室温后，再加入胰蛋白酶，温育振荡，最后加入甲酸终止反应。

(2)将标准物质和(1)步骤中最终酶解产物分别注入(超)高效液相色谱-串联四极杆质谱仪中检测，或将内标物质和(1)步骤中含内标肽段的最终酶解产物分别注入(超)高效液相色谱-三重四极杆质谱仪中检测，检测后通过母离子和子离子的质荷比(m/z)及特征肽段的保留时间(t_R)进行定性鉴别，色谱峰峰面积变化测算出牛血清白蛋白的绝对含量；

温度控制在25～60℃范围，温育时间控制在0.5～12h，振荡频率控制在800～2500rmp，涡旋时间控制在2～10min，室温控制在18-22℃范围；

被测牛血清白蛋白样品与反应试剂的比例控制在1/1到1/100(v/v)。

9.根据权利要求8所述牛血清白蛋白含量测定方法，其特征在于：所述步骤(2)为：将特征肽段和(1)步骤中最终酶解产物分别注入(超)高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪中检测，或将混合内标物质和(1)步骤中含内标肽段的最终酶解产物分别注入(超)高效液相色谱-三重四极杆质谱仪中检测，通过m/z和t_R进行定性，色谱峰峰面积变化测算出牛血清白蛋白的含量。