本发明涉及一种检测方法，具体是一种检测饲料中糖分的方法。
背景技术：
饲料，是所有人饲养的动物的食物的总称，比较狭义地一般饲料主要指的是农业或牧业饲养的动物的食物。饲料（Feed）包括大豆、豆粕、玉米、鱼粉、氨基酸、杂粕、添加剂、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、甜高粱等十余个品种的饲料原料。
饲料中的糖分是动物体生长过程中最重要的摄入营养之一，因此饲料中的糖分含量直接决定了饲料的质量，饲料的质量差就可能造成动物体生长缓慢、营养不良等情况，造成养殖户的经济损失，因此饲料中的糖分含量检测显得尤为重要，现有技术对糖分的检测中均存在一定的缺陷，如利用色谱方法(HPLC、GC)直接分析多糖中单糖组分，用间接方法(苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法)分析多糖含量；前者由于前处理工作过于复杂(如HPLC需要样品衍生化、GC需预先转化成易挥发性、热稳定的衍生物)，尤其是分析得到的仅是单糖组分或还原糖情况等，不利于被广泛应用。后者虽然比较简单，但是由于难于找到一种合适的对照品，加上准确度很难保证。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种检测饲料中糖分的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测饲料中糖分的方法，包含以下步骤，
A、样本选取：将待测的饲料样本，置于90℃环境下的电热鼓风烘箱中，干燥1.5h后用高速粉碎机进行粉碎，过20目筛后，从过滤后的样本中取出10g，加入500ml的80％乙醇，120摄氏度条件下水浴回流提取1h，趁热抽滤；滤渣中加入20倍滤渣重量的80％热乙醇，超声振荡1min，抽滤，重复一次，放置于45℃低温干燥环境下备用；
B、样本粗加工：称取步骤A中得到的备用样品，加入50倍样品重量的12摄氏度无菌蒸馏水，在60℃下，超声辅助提取30min，将提取液用布氏漏斗减压抽滤后，滤液减压浓缩至100mL，用300mL95％乙醇沉淀，边加边搅拌，放于4℃低温条件下醇沉一天，10000r/min，冷冻离心，沉淀用无水乙醇洗涤3次，于冷冻干燥器中干燥至恒重，即得精制的茶树花多糖制品，称重，备用，
C、标准曲线绘制：首先称取0.20g蒽酮，加入100mL75％浓硫酸，溶解混匀，制成蒽酮-硫酸溶液，然后称取200mg烘至恒重的葡萄糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取10mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；准确吸取工作液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL具塞试管，用水定容至1mL，再加入上述的蒽酮-硫酸溶液4mL，摇匀，冰浴冷却后，沸水浴煮沸10min后，再冰浴冷却10min，在620nm波长下检测吸光度；葡萄糖标准样品浓度及对应吸光度绘制标准曲线的线性关系为y＝9.5686x-0.0058，相关性r＝0.9995，线性范围：0mg/mL～0.2mg/mL；
D、糖分含量测定：采用离子色谱法对饲料中的糖分含量进行精确的测定，称取一定量的葡萄糖，将其配制成各个对照品浓度为10ug/mL的混合对照品，用离子色谱进行检测，称取应步骤B处理得到的样本51.9mg，加入4mL，2mol/L的三氟乙酸进行溶解后充入氮气封口，120℃水解6h，水解结束后，离心，取上清液，在40℃下，用氮吹仪吹干，用甲醇溶解吹赶残留的三氟乙酸，重复3次，最后定容至50mL，过0.45um微孔膜，进行离子色谱分析；
E、结果计算。
作为本发明进一步的方案：所述离子色谱法的工作条件为：流速：1.0mL/min，进样量10uL，柱温30℃，安培积分检测，金电极，Dionex公司CarboPacPA10250mm×3mm，流动相：A：water；B：100mMNaOH；C：100mMNaOH/0.5MNaAc；梯度洗脱：0～20min：70％A，30％B；21～25min：90％B→80％B，10％C→20％C；25～35min：80％B→50％B，20％C→50％C；36～46min：70％A，30％B；根据茶树花多糖水解后单糖溶液离子色谱图的保留时间和峰面积，计算出上述11个单糖的总质量占精制的茶树花多糖制品的质量的百分比，即为茶树花多糖含量c2(％)。
作为本发明进一步的方案：所述步骤E的具体方法是：分光光度法检测饲料中糖分的检测浓度乘以换算因子得到最终饲料中糖分的含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明检测饲料中糖分的方法利用分光光度法检测的便捷、简单、设备成本低的优点，又能避免离子色谱法检测的前期处理复杂、设备成本高、不利推广的缺点，该方法同样适用于茶树其他组织中多糖的分析，以及其他途径天然产物源中多糖含量检测分析。同时还能避免因为检测液本身颜色而引起的误差，同时在得出正确含量的情况下简化检测方法。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
一种检测饲料中糖分的方法，包含以下步骤，
A、样本选取：将待测的饲料样本，置于90℃环境下的电热鼓风烘箱中，干燥1.5h后用高速粉碎机进行粉碎，过20目筛后，从过滤后的样本中取出10g，加入500ml的80％乙醇，120摄氏度条件下水浴回流提取1h，趁热抽滤；滤渣中加入20倍滤渣重量的80％热乙醇，超声振荡1min，抽滤，重复一次，放置于45℃低温干燥环境下备用；
B、样本粗加工：称取步骤A中得到的备用样品，加入50倍样品重量的12摄氏度无菌蒸馏水，在60℃下，超声辅助提取30min，将提取液用布氏漏斗减压抽滤后，滤液减压浓缩至100mL，用300mL95％乙醇沉淀，边加边搅拌，放于4℃低温条件下醇沉一天，10000r/min，冷冻离心，沉淀用无水乙醇洗涤3次，于冷冻干燥器中干燥至恒重，即得精制的茶树花多糖制品，称重，备用，
C、标准曲线绘制：首先称取0.20g蒽酮，加入100mL75％浓硫酸，溶解混匀，制成蒽酮-硫酸溶液，然后称取200mg烘至恒重的葡萄糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取10mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；准确吸取工作液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL具塞试管，用水定容至1mL，再加入上述的蒽酮-硫酸溶液4mL，摇匀，冰浴冷却后，沸水浴煮沸10min后，再冰浴冷却10min，在620nm波长下检测吸光度；葡萄糖标准样品浓度及对应吸光度绘制标准曲线的线性关系为y＝9.5686x-0.0058，相关性r＝0.9995，线性范围：0mg/mL～0.2mg/mL；
D、糖分含量测定：采用离子色谱法对饲料中的糖分含量进行精确的测定，称取一定量的葡萄糖，将其配制成各个对照品浓度为10ug/mL的混合对照品，用离子色谱进行检测，称取应步骤B处理得到的样本51.9mg，加入4mL，2mol/L的三氟乙酸进行溶解后充入氮气封口，120℃水解6h，水解结束后，离心，取上清液，在40℃下，用氮吹仪吹干，用甲醇溶解吹赶残留的三氟乙酸，重复3次，最后定容至50mL，过0.45um微孔膜，进行离子色谱分析；
E、结果计算。
离子色谱法的工作条件为：流速：1.0mL/min，进样量10uL，柱温30℃，安培积分检测，金电极，Dionex公司CarboPacPA10250mm×3mm，流动相：A：water；B：100mMNaOH；C：100mMNaOH/0.5MNaAc；梯度洗脱：0～20min：70％A，30％B；21～25min：90％B→80％B，10％C→20％C；25～35min：80％B→50％B，20％C→50％C；36～46min：70％A，30％B；根据茶树花多糖水解后单糖溶液离子色谱图的保留时间和峰面积，计算出上述11个单糖的总质量占精制的茶树花多糖制品的质量的百分比，即为茶树花多糖含量c2(％)。
步骤E的具体方法是：分光光度法检测饲料中糖分的检测浓度乘以换算因子得到最终饲料中糖分的含量。
本发明的工作原理是：本发明检测饲料中糖分的方法利用分光光度法检测的便捷、简单、设备成本低的优点，又能避免离子色谱法检测的前期处理复杂、设备成本高、不利推广的缺点，该方法同样适用于茶树其他组织中多糖的分析，以及其他途径天然产物源中多糖含量检测分析。同时还能避免因为检测液本身颜色而引起的误差，同时在得出正确含量的情况下简化检测方法。