一种白参菌的指纹图谱检测方法与流程

文档序号:19348021发布日期:2019-12-06 21:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,以裂裥菌素对照品为参照,采用高压液相色谱法测定其指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)供试品溶液的制备:将白参菌冷冻干燥,粉碎,取5-20g,精密称定,加入10%醋酸50-100ml浸泡24h,再加50-70%甲醇超声提取1-2小时,放冷,再称定重量,加甲醇补足重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;

(2)对照品溶液1的制备:取裂裥菌素对照品5~10mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;

(3)对照品溶液2的制备:分别取氨基酸混合对照品5~10mg,置50ml量瓶中,加0.05mol/l盐酸使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;

(4)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~15μl,注入液相色谱仪,记录50min分钟内的色谱图,用指纹图谱软件对图谱进行处理,即得白参菌的指纹图谱。

3.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述氨基酸混合对照品选自8种人体必需氨基酸和其他非必需12种氨基酸,8种人体必需氨基酸分别为缬氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,苏氨酸,甲硫氨酸,赖氨酸,苯丙氨酸和色氨酸,非必需12种氨基酸分别为半胱氨酸、丝氨酸、甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、精氨酸、组氨酸、脯氨酸。

4.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:将白参菌冷冻干燥,粉碎,取5-20g,精密称定,加入10%醋酸80ml浸泡24h,再加55%甲醇超声提取1小时,放冷,再称定重量,加甲醇补足重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;

(2)对照品溶液1的制备:取裂裥菌素对照品6mg,置50ml量瓶中,加甲醇使溶解,并稀释至刻度,摇匀。精密吸取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;

(3)对照品溶液2的制备:分别取氨基酸混合对照品5mg,置50ml量瓶中,加0.05mol/l盐酸使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;

(4)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录50min分钟内的色谱图,用指纹图谱软件对图谱进行处理,即得白参菌的指纹图谱。

5.根据权利要求2所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述高压液相色谱测定的色谱条件为:采用mcigelsca04(4.6×150mm)色谱柱,以甲醇为流动相a,以5%甲醇-水为流动相b,梯度洗脱,流速1-10ml/min,柱温25~40℃,检测波长185-400nm;理论塔板数按裂裥菌素峰计算应不低于3000。

6.根据权利要求3所述的白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,所述色谱测定的梯度洗脱过程为:

分钟a(甲醇)b(5%甲醇-水)0~158→5592→4515~25554525~5055→8845→1250~708812

7.如权利要求1~6中任一项所述白参菌的指纹图谱检测方法得到的白参菌

指纹图谱,其特征在于:所述图谱中有17个共有峰。

8.根据权利要求7所述白参菌的指纹图谱检测方法,其特征在于,以7号为对照峰,17个共有峰相对保留时间及相对相对峰面积及峰归属如下表:

峰号相对保留时间相对峰面积峰归属10.1010.198异亮氨酸20.1930.242精氨酸30.5090.438亮氨酸40.5790.667天冬氨酸50.8160.292丙氨酸60.8600.229缬氨酸71.0001.000裂裥菌素81.0880.458苏氨酸91.2410.625天冬酰胺101.3250.125组氨酸111.3900.146甲硫氨酸121.5610.188丝氨酸酪氨酸131.7540.167色氨酸141.8420.938谷氨酸152.2060.208赖氨酸162.2630.104苯丙氨酸172.7320.167脯氨酸


技术总结
本发明公开了一种白参菌的指纹图谱检测方法,以裂裥菌素对照品为参照,采用高压液相色谱法测定其指纹图谱。本发明建立了白参菌HPLC特征指纹图谱,克服现有质量标准的单一性和片面性;能全面反映出白参菌的质量信息,从而能够达到更加全面、有效地控制白参菌质量的目的。本发明方法所得白参菌指纹图谱的峰多,峰形好,易于鉴别,相似性高,准确可靠。

技术研发人员:曾灿丽;卢洪成
受保护的技术使用者:湖南宇山玉月农业科技有限公司
技术研发日:2019.09.04
技术公布日:2019.12.06
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