一种快速定量检测氧化乐果残留的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种快速定量检测氧化乐果残留的方法。
【背景技术】
[0002]近年来,有机磷农药(organophosphorus pesticides, Ops)由于具有高效和使用成本低等特点，在世界农业中起着极其重要的作用，是主要的杀虫剂之一。有机磷农药属于中、高毒性农药，具有内吸毒性，在环境中残留量大，大部分难降解，在保护农作物的同时，也造成环境的严重污染，并且直接或间接危及人体健康。氧化乐果属于有机磷农药中应用最广、最多的一种，与其他有机磷农药一样其优点和危害同时并存:氧化乐果采用高浓度灌根施药即导致土壤污染，污染的土壤再经雨水冲刷流入河水中，导致水污染；在防治地面作物害虫时，通常采用涂茎或喷洒的方法施药，药物被植株的茎、叶吸进植株体内，在杀灭害虫的同时造成氧化乐果在植物体内大量残留，通过食物链产生毒害作用，及时发现和检测氧化乐果残留具有十分重要的实际意义。近年来，对有机磷农药残留检测的研究越来越多，手段与方法也不断更新，常见的方法主要有波谱法、色谱法和酶抑制法。波谱法灵敏度不高，一般只做为定性的鉴别方法用于粗选；色谱法是目前检测有机磷农药的最主要检测方法，又分为气相色谱法、薄层色谱法和高效液相色谱法三类，气相色谱法是进入20世纪50年代以后，在柱层析的基础上发展起来的一种新型的仪器分析方法，是目前应用最广的分析方法；薄层色谱法受分析的灵敏度、定量困难的制约，应用较少；液相色谱法与气相色谱法相比，不受样品的挥发度和热稳定性的限制，适合于大分子、不稳定的化合物的分析，但其在速度、灵敏度和便捷方面不如气相色谱法，并且耗费要高出很多。气相色谱法在分析有机磷农药时，是利用不同的有机磷农药在固定相中分离，经不同的检测器检测扫描绘出气相色谱图，通过保留时间来定性，通过峰高或峰面积与标准曲线对照来定量，气相色谱仪的使用条件要求高，对使用环境和操作条件要求严格，使用人员要经过专门的培训，操作繁琐，前左右理比较麻烦，耗时长，没有特定的设备和条件无法实现快速、定量检测。酶抑制法是利用有机磷农药有抑制胆碱酯酶活性的作用，从而影响乙酰胆碱或丁酰胆碱在胆碱酯酶作用下产生胆碱、乙酸或丁酸的反应，使分解产物乙酸或丁酸减少，由此根据指示剂颜色或反应液pH值的变化，达到检测有机磷农药的目的。AOAC在1964年最早公布了该方法检测有机磷农药；美国的中西部研究院(MidwestResearch Institute)于1985年报道的农药检测酶片(Enzyme Ticket),可测出水中0.1?10 ng /L有机磷(OPS)或氨基甲酸酯类农药；我国农业部环境保护科研监测所李治祥等1989年也做了类似报道。2002年新颁布的中华人民共和国国家标准GB /T18630 - 2002将酶抑制法作为蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检验方法。目前酶抑制法主要有膜电极法和纸片法，具体是将乙酰胆碱(AchE )吸附在载体(电极或纸片)上，遇到有机磷农药时，乙酰胆碱(AchE)活性被抑制，电极的读数指示变化或纸片的颜色变化可定性检测有机磷农药。酶抑制法的优点是操作简便，速度快，不需昂贵的仪器，适合现场检测以及大批样品的筛选检测，不足之左右是精确度低，重复性、回收率还有待提高，并且该法仅限于蔬菜、水果和食品类有机磷农药残留的定性检测，快速、定量的检测还未见有应用。
[0003]现有一些技术研究报道表明，有机磷农药分子中含有P=O或P=S双键结构，该结构特征表现出在紫外特定波长下显示稳定吸收峰值的特性，这一特性仅用于不同有机磷农药的定性检测，利用这一特性，对有机磷农药残留进行定量检测是可行的，但此类技术至今未见有报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种快速定量检测氧化乐果残留的方法。
[0005]本发明的方法利用氧化乐果分子中所含P=O双键结构在紫外特定波长下显示稳定吸收峰值的特性建立，用紫外分光光度计对氧化乐果水溶液进行测定，其在紫外波长210nm处显示最大的稳定吸收峰值，峰值图见附图，不同浓度的氧化乐果水溶液与其吸光度值的大小成正比，二者在坐标系中呈现正比例变化趋势，以浓度为横坐标、以其对应的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，即求得回归方程，依此测定计算出待检样品的氧化乐果含量，具体步骤如下:
步骤一，配制不同氧化乐果终浓度的标准水溶液:取氧化乐果标准溶液，以氧化乐果终浓度为O做为基准，按照0.5或1.0的浓度梯度配制一组不同氧化乐果终浓度的标准水溶液；
步骤二，标准曲线的制作:取步骤一配制的不同氧化乐果终浓度的标准水溶液，以氧化乐果终浓度为O的标准水溶液为空白对照，用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值，紫外波长210nm，重复做三次，求其平均值，以不同终浓度为横坐标，以其对应的吸光度平均值为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程Y=aX+b (b=0), a, b为常数；
步骤三，污染样品的测定:取污染样品的水溶液以氧化乐果终浓度为O的标准水溶液为空白对照，用紫外分光光度计测定污染样品的吸光度值，紫外波长210nm，重复做三次，求得平均值；
步骤四，结果计算:将步骤三求得的平均值代入回归方程Y=aX+b (b=0)，计算得出污染样品氧化乐果的含量。
[0006]本方法对氧化乐果污染的土壤、水、叶菜中氧化乐果含量的测定如下:
氧化乐果污染土壤中氧化乐果含量的测定
土壤样品处理为:将不含氧化乐果的土样和氧化乐果污染的土样分别经由风干、研磨、过100目筛的处理，制得空白土样和污染土样。
[0007]测定步骤为:
步骤一，配制不同氧化乐果终浓度的土样上清液:取6个50mL的三角瓶，各加入0.50g空白土样，按照1.0的浓度梯度，分别添加氧化乐果标准溶液使其空白土样含氧化乐果的终浓度分别为O、1.0,2.0,3.0,4.0,5.0g/kg 土，然后分别加入1mL去离子水，摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心10 min,取上清液,制得不同氧化乐果终浓度的土样上清液；
步骤二，标准曲线的制作:以步骤一中氧化乐果终浓度为0.0g/kg 土的土样上清液为空白对照，用紫外分光光度计分别测出土样上清液的吸光度值，紫外波长210nm，重复做三次，求得各自的吸光度平均值，以不同终浓度为横坐标，以其对应的吸光度平均值为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程Y±=aX+b (b=0), a, b为常数；
步骤三，污染土样上清液的测定:准确称取0.50g污染土样于50mL三角瓶中，加入1mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心1min,取上清液得污染土样上清液，以步骤一中氧化乐果终浓度为0.0 g/kg 土的土样上清液为空白对照，用紫外分光光度计测定其吸光度值，紫外波长210nm，重复做三次，求得污染土样上清液的吸光度平均值；
步骤四，结果计算:将步骤三所得的吸光度平均值代入回归方程Y±=a±X+b (b=0)，计算得出污染土样氧化乐果的含量。
[0008]氧化乐果污染水中氧化乐果含量的测定
步骤一，配制不同氧化乐果终浓度的标准水溶液:取6支试管，各加入1ml去离子水，按照0.5的浓度梯度，分别加入氧化乐果标准溶液，制成氧化乐果终浓度分别为0.0,0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/L 的标准水溶液；
步骤二，标准曲线的制作:以步骤一中氧化乐果终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空