生产）。
[0049] 采用本发明提供的试剂盒，能够以超高灵敏度测定cTnl浓度；检测灵敏度例如达 至Ij lpg/mL，功能灵敏度例如达到2. 5pg/mL。配合化学发光免疫分析仪使用，可实现全自动、 快速、灵敏、定量地检测样本中cTnl浓度结果。本发明所能实现的检测灵敏度高于现有技 术5至200倍，因而能够更加灵敏地检测出样本中的cTnl含量，进而为AMI的早期诊断提 供更加准确的检测结果，提高AMI早期诊断的敏感性，从而能够及早准确诊断出AMI，为AMI 的治疗提供更充足的时间。
【附图说明】
[0050] 图1是使用本发明提供的cTnl检测试剂盒检测样本中的cTnl含量的原理示意 图；其中，图中各标记意义如下：
[0051] _ 一CTnI抗原；着一磁性微球；?一样本中的其他成分；Y-针对CTnI的抗 体； < 一标记有ABEI的cTnl抗体；-包被磁性微球的cTnl抗体； 一光信号。
[0052] 图2显示了实施例8和实施例9的线性测试结果对比。
[0053] 图3显示了实施例10和实施例11的线性测试结果对比。
【具体实施方式】
[0054] 下面将通过具体实施例对本发明做进一步地说明，应理解，本发明的范围并不限 于此。
[0055] 制备1 :包被cTnl的单抗或多抗的磁性微球悬浮液的制备
[0056] 此制备步骤使用的免疫磁性微球选择Merck公司生产的浓度为100mg/mL，羟基为 95mg KOH/g的纳米磁性微球悬浮液。
[0057] A溶液的配制（pH3. 6醋酸缓冲液）：称取2. 55g三水合乙酸钠，用4500mL纯化水 溶解，再加入HmL乙酸，混匀后，用纯化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0058] 将磁性微球中悬浮于5倍于包被体积的上述pH3. 6醋酸缓冲液，使磁球浓度为 20mg/mL ;再加入1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐（CMC)，使其浓度为IOmg/ mL ;按所得溶液与cTnl单抗或多抗的重量比为Img :12 μ g的比例加入纯化的cTnl单抗或 多抗，放入恒温震荡水浴箱中37°C反应24小时。
[0059] 以0· lmol/1的PBS缓冲液：纯化水=1:9的体积比配制pH为7. 4的PBS缓冲液 500mL，加入2. 5g BSA混匀溶解，即为磁珠清洗液。将温浴好的磁性微球倒入烧杯中，然后 置于磁铁上沉淀后，倒掉上清，加入5倍体积的磁性微球清洗液搅拌清洗，然后放置在磁铁 上，待上清液清亮后倒掉上清液，重复该清洗步骤四次。
[0060] 磁性微球的悬浮：将清洗后的磁性微球加入包被体积的BSA水溶液（5g/L，含Ig/ L叠氮钠），得到磁性微球悬浮液中，悬浮浓度为20mg/mL，此悬浮液体积即为此制备步骤所 述的包被体积。
[0061] 制备2 :包被有链霉亲和素的磁性微球悬浮液的制备
[0062] 此制备步骤使用的免疫磁性微球选择Merck公司生产的浓度为100mg/mL，羟基为 95mg ΚΟΗ/g的纳米磁性微球悬浮液。
[0063] A溶液的配制（pH3. 6醋酸缓冲液）：称取2. 55g三水合乙酸钠，用4500mL纯化水 溶解，再加入HmL乙酸，混匀后，用纯化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0064] 将磁性微球加入与包被体积等量的上述pH3. 6醋酸缓冲液悬浮，使磁性微球浓度 为20mg/mL，再加入CMC (使其浓度为10mg/mL)，按所得溶液与链霉亲和素的重量比为Img : 12 μ g的比例加入链霉亲和素，放入恒温震荡水浴箱中37°C反应24小时
[0065] 磁性微球清洗液的配制：以0. lmol/1的PBS缓冲液：纯化水=1:9的体积比配制 pH为7. 4的PBS缓冲液500mL，加入2. 5g BSA混匀溶解，即为磁珠清洗液。
[0066] 将温浴好的磁性微球倒入烧杯中，然后置于磁铁上沉淀后，倒掉上清，加入5倍体 积的磁性微球清洗液搅拌清洗，然后放置在磁铁上，待上清液清亮后倒掉上清液，重复该清 洗步骤四次。
[0067] 磁性微球的悬浮：将清洗后的磁性微球加入包被体积的BSA水溶液（5g/L，含Ig/ L叠氮钠），得到磁性微球悬浮液中，悬浮浓度为20mg/mL，即为包被有链霉亲和素的磁球的 悬溶液。
[0068] 制备3 :包被有FITC单抗或多抗的磁性微球悬浮液的制备
[0069] 此制备步骤使用的免疫磁性微球选择Merck公司生产的浓度为lOOmg/mL，羟基数 为95mg KOH/g的纳米磁性微球悬浮液。
[0070] A溶液的配制（pH3. 6醋酸缓冲液）：称取2. 55g三水合乙酸钠，用4500mL纯化水 溶解，再加入HmL乙酸，混匀后，用纯化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0071] 将磁性微球加入与包被体积等量的pH3. 6醋酸缓冲液悬浮，使磁性微球浓度为 20mg/mL，再加入CMC，使其浓度为10mg/mL，按所得溶液与FITC单抗或多抗的重量比为Img : 12 μ g的比例加入FITC单抗或多抗，放入恒温震荡水浴箱中37°C反应24小时
[0072] 磁性微球清洗液的配制：以0. lmol/1的PBS缓冲液：纯化水=1:9的体积比配制 pH为7. 4的PBS缓冲液500mL，加入2. 5g BSA混匀溶解，即为磁珠清洗液。
[0073] 将温浴好的磁性微球倒入烧杯中，然后置于磁铁上沉淀后，倒掉上清，加入5倍体 积的磁性微球清洗液搅拌清洗，然后放置在磁铁上，待上清液清亮后倒掉上清液，重复该清 洗步骤四次。
[0074] 磁性微球的悬浮：将清洗后的磁性微球加入包被体积的BSA水溶液（5g/L，含lg/L 叠氮钠），得到磁性微球悬浮液，悬浮浓度为20mg/mL，即为包被有FITC单抗或多抗的磁球 的悬溶液。
[0075] 制备4 :标记有ABEI的cTnl单抗或多抗溶液的制备
[0076] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL烧杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力搅拌器上备用。选用截留量为14000的透析袋， 量取合适的尺寸，取Img cTnl单抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸缓冲液（F溶液）调整 至Ij lmL，放入透析液中，透析2小时，搅拌速度400rpm。将透析好的溶液装入小白瓶中（每 瓶ImL)，加入300 μ g ABEI-半琥珀酰胺酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯，37°C反应2小时，得到标 记ABEI的cTnl抗体溶液。
[0077] 安装好G-25凝胶柱，用纯化水洗脱干净后，再用pH值7. 4的PBS缓冲液对反应溶 液进行平衡洗脱。
[0078] 凝胶柱平衡洗脱完毕后，将标记好ABEI的cTnl抗体溶液过柱纯化，然后收集出现 峰值的溶液。
[0079] 将收集好的蛋白溶液，加入等体积的含0. 5g/mL的BSA的保护液，既得。
[0080] 制备5 :cTnI单抗或多抗标记的生物素溶液的制备
[0081] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL烧杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力搅拌器上备用。选用截留量为14000的透析袋， 量取合适的尺寸，取ImgcTnI单抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸缓冲液（F溶液）调整 至Ij ImL,倒入透析袋中，扎紧透析袋另一端，放入透析液中，透析2小时，搅拌速度400rpm。
[0082] 将活化的生物素溶于DMF中，按照生物素与cTnl单抗或多抗的摩尔比为20:1的 比例将二者混合反应2h。
[0083] 将反应后的液体用0. lmol/L PBS于4°C透析24小时，即制成cTnl单抗或多抗的 生物素溶液。
[0084] 制备6 :标记cTnl单抗或多抗的FITC溶液的制备
[0085] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL烧杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力搅拌器上备用。选用截留量为14000的透析袋，量 取合适的尺寸，取Img的cTnl单抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸缓冲液（F溶液）调整 到 lmL，倒入透析袋中，扎紧透析袋另一端，放入透析液中，透析2小时（搅拌速度400rpm)。
[0086] 透析好的溶液装入小白瓶中（每瓶ImL)，加入100 μ g FITC，室温反应2. 5小时， 得到标记cTnl单抗或多抗的FITC溶液。
[0087] 配制pH7. 4PBS缓冲液作为层析柱的平衡液；层析柱用纯化水冲洗24小时后，连接 平衡液与层析柱平衡30分钟；放干上表面液体，加入上述标记cTnl单抗或多抗的FITC溶 液，再次放干表面液体。加入适量平衡液，连通上下管道，下方连接核酸蛋白检测仪（纯化 前预热2小时）调整光亮和精确度。调零，收集峰值时间段的液体，即为所需要的标记cTnl 单抗或多抗的FITC溶液。
[0088] 制备7 :cTnI单抗或多抗标记的链霉亲和素溶液的制备
[0089] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL烧杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 水定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力搅拌器上备用。选用截留量为14000的透析 袋，量取合适的尺寸备用。取Img cTnl单抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸缓冲液（F溶 液）调整到lmL，倒入透析袋中，扎紧透析袋另一端，放入透析液中，透析2小时（搅拌速度 400rpm)
[0090] 透析好的溶液装入小白瓶中（每瓶ImL)，加入50 μ g链霉亲和素，37°C反应2小 时，得到标记cTnl抗体的链霉亲和素溶液。
[0091] 安装好G-25凝胶柱，用纯化水洗脱干净后，在用pH值7. 4的PBS缓冲液进行平衡 洗脱。
[0092] 凝胶柱平衡洗脱完毕后，将标记好cTnl抗体的链霉亲和素过柱纯化，然后收集出 现峰值的溶液。
[0093] 将收集好的蛋白溶液，加入等体积的含0. 5g/mL的BSA保护液，即得。
[0094] 制备8 :cTnI单抗或多抗标记的FITC单抗或多抗溶液的制备
[0095] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL烧杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力搅拌器上备用。选用截留量为14000的透析袋， 量取合适的尺寸备用。取Img cTnl单抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸缓冲液（F溶液） 调整到ImL,倒入透析袋中，扎紧另一端，放入透析液中，透析2小时（搅拌速度400rpm)。
[0096] 透析好的溶液装入小白瓶中（每瓶ImL)，加入50 μ gFITC单抗或多抗，37°C反应2 小时，得到标记cTnl抗体的FITC单抗或多抗溶液。
[0097] 安装好G-25凝胶柱，用纯化