入3滴检测液；
[0038]步骤六，5分钟判断结果，10分钟后的结果无效。
[0039]本发明提供的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡及其制备和使用方法，本发明基于胶体金免疫层析技术，检测时，样品中的猪瘟抗原与胶体金包被的抗体结合形成抗原抗体复合物，并沿着试纸流向NC膜的另一端，当该复合物流到膜上的检测线区时，固定在膜上的特异性抗体捕获该复合物并逐渐凝集成一条可见的检测线，未结合的胶体金抗体流过检测线区被质控线的二抗捕获并形成可见的质控线，质控线出现则表明免疫层析发生，即试纸有效；检测线线出现则表明样品中含有猪瘟病毒，5分钟即可判定结果，具有诊断时间短，特异性强的特点。
【附图说明】
[0040]图1是本发明实施例提供的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡结构示意图；
[0041]图中:1、PVC底板；2、样品垫；3、金标记抗体玻璃纤维膜；4、硝酸纤维素包被膜；5、吸水纸；6、检测线；7、质控线。
[0042]图2是本发明实施例提供的图1的俯视图示意图；
[0043]图3是本发明实施例提供的检测结果为猪瘟病毒阳性示意图；
[0044]图4是本发明实施例提供的检测结果为阴性示意图；
[0045]图5是本发明实施例提供的检测结果无效示意图；
[0046]图6是本发明实施例提供的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡的使用方法流程图；
[0047]图7是本发明实施例提供的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡的制备方法流程图。
【具体实施方式】
[0048]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0049]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0050]如图1所示，本发明实施例的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡主要包括:PVC底板1、样品垫2、金标记抗体玻璃纤维膜3、硝酸纤维素包被膜4、吸水纸5、检测线6、质控线7 ;
[0051]PVC底板1、样品垫2、涂覆(每毫升金标记抗体溶液涂覆10平方厘米的玻璃纤维素膜)胶体金颗粒标记(金标)抗猪瘟病毒的单克隆抗体的金标记抗体玻璃纤维膜3、包被膜4和吸水纸5 ；
[0052]包被膜4的底面粘贴在PVC底板I上面，硝酸纤维素包被膜4两端的上面分别粘贴玻璃纤维膜3和吸水纸5，玻璃纤维膜3远离硝酸纤维素包被膜4的一端的上面粘贴样品垫2，硝酸纤维素包被膜4的上面设有检测线6包被抗猪瘟病毒的单克隆抗体，质控线7包被抗鼠抗体，硝酸纤维素包被膜4为硝酸纤维素膜，检测线6包被抗猪瘟病毒的单克隆抗体；抗猪瘟病毒的单克隆抗体及抗鼠抗体分别固定于硝酸纤维素包被膜4上并呈两条线平行排列，形成检测线6、质控线7，通过检测线6和质控线7的显色来进行定性。
[0053]本发明的原理是:试纸条中含均匀分布的胶体金标记抗猪瘟病毒的单克隆抗体，抗猪瘟病毒的抗体以及抗鼠IgG抗体分别固定在硝酸纤维素膜上并呈两条条平行线排列，抗鼠IgG在上方为质控线(阴性对照)，抗猪瘟病毒抗体下为检测线。
[0054]当待检样品中含有猪瘟病毒时，猪瘟病毒与金标记的抗猪瘟病毒抗体结合形成抗原抗体免疫复合物，随样品从硝酸纤维素包被膜上流过，包被膜上的抗猪瘟病毒抗体与之结合，检测线上形成红色带，检测结果为猪瘟病毒阳性(如图3所示)。
[0055]当待测样品中未猪瘟病毒时，金标记的抗猪瘟病毒抗体无法与硝酸纤维素包被膜上的、抗猪瘟病毒抗体结合，致使金标记的抗猪瘟病毒抗体无法在膜上滞留，检测区不能形成红色带(即检测线6)检测结果为阴性(如图4所示)。质控区如有红色带形成标志该试纸条的检测结果有效，否则，该试纸条的检测结果无效(如图5所示)。
[0056]如图6所示，本发明实施例的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡的使用方法包括以下步骤:
[0057]S601:用棉签蘸取鼻腔分泌物或取血液检测；
[0058]S602:鼻腔分泌物，将棉签浸入样品稀释液试管，充分搅拌混匀后，静置少许时间，用一次性滴管取上清液作为检测液；
[0059]S603:血清，采血1ml，1500转/分钟，离心，用一次性滴管取血清作为检测液；
[0060]S604:将未开封的试纸卡和检测样品恢复至室温；
[0061]S605:将试纸卡水平放置，用滴管向试纸卡孔缓慢逐滴加入3滴检测液；
[0062]S606:5分钟判断结果，10分钟后的结果无效。
[0063]如图7所示，本发明实施例的用于检测猪瘟的快速诊断检测试纸卡的制备方法包括以下步骤:
[0064]S701:胶体金溶液的制备，将双蒸水置磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾，按终浓度为万分之二的量迅速加入浓度为I %的氯金酸溶液，煮沸5分钟；再按所加入氯金酸溶液1.8倍的体积量加入浓度为I %的柠檬酸三钠溶液，煮沸10分钟后，冷却至室温，用双蒸水定容至氯金酸终浓度为万分之二，常温避光保存备用；
[0065]S702:金标抗体玻璃纤维膜的制备，用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5，按25 μ g抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗猪瘟病毒的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按5 %体积量加入浓度为10 %的BSA溶液，混匀，静置5分钟，1000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用；
[0066]S703:硝酸纤维素包被膜的制备，在硝酸纤维素膜上喷涂抗猪瘟病毒的单克隆抗体及抗鼠IgG抗体，并呈两条线平行排列，分别形成所述的检测线和质控线，37°C烘干处理2小时，置装有干燥剂的密封袋中保存备用；
[0067]S704:大板组条，各组分规格(长X宽):PVC底板:30cmX 7.6cm ;样品垫:30cmX 3.0cm ;金标记抗体玻璃纤维膜:30cmX0.7cm ;硝酸纤维素包被膜:30cmX2.0cm ;吸水纸:30cmX3.2cm ；
[0068]S705:用切条机将大板切成单个人份，每人份宽度为4毫米，随机抽检，灵敏度能检出室内质控，条带显色程度达到一个“ + ”号，无非特异性条带；
[0069]S706:将I份已切好的试纸条、一包干燥剂和一根塑料滴管装在铝箔袋内，用封口机密封，密封完毕后放入试剂盒中，常温干燥保存。
[0070]在步骤S702中，上述10% BSA溶液、标记洗涤液和金标抗体保存液的具体组分配比如下:
[0071]10% BSA溶液:每100mL双蒸水中含牛血清白蛋白10g ；
[0072]标记洗涤液??每100mL双蒸水中含牛血清白蛋白4g，2g聚乙二醇8000，聚乙烯吡咯烷酮2g，蔗糖2g，Tris 1.21 lg，并调节pH至8.1 ；
[0073]金标抗体保存液:每100mL双蒸水中含牛血清白蛋白25g，5g聚乙二醇8000，Tris 10.2g，氢氧化钠2.5g，7.5mL吐温-20，并调节pH至8.5 ;
[0074]在步骤S703中，检测线，调试喷膜仪，喷液量为I μ 1/cm,用包被缓冲液稀释抗猪瘟病毒的单克隆抗体，浓度为2.0mg/mL，用喷膜仪喷涂划线；
[0075]质控线，调试喷膜仪，喷液量为I μ 1/cm,用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为2mg/mL，用喷膜仪喷涂划线；
[0076]上述包被缓冲液的具体组分配比为??每100mL双蒸水中含牛血清白蛋白0.0lg,十二水合磷酸氢二钠30.072g，磷酸二氢钾2.176g ；
[0077]包被膜上所划两条条线应细致均匀，间隔0.3cm ;
[0078]在步骤S704中，各组