4. 2的冲洗液用量为10-100 μ 1，优选40 μ 1。
[0057] 7)检测条件：血液用量可为5-100 μ 1，经过实验优选20 μ 1进行加样。检测温度 可为4-60°C，以室温25°C为例。反应时间可为0. 5-5min，本实施例优选Imin进行观察。
[0058] 7)检测卡组装：具体操作中按照附图的结构模式优选采用蜡染及蜡浸技术，将通 道设计为图中任一结构，本实施例以图3所示为例。也可结合微流控技术、芯片技术等其他 方式。将已包被2-抗A、3-抗B抗体、4-抗D抗体宽为5-15cm的长方形棉浆纸粘贴到PVC 背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合试剂的6/7/8-反应垫固定到5-泳动 垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成l-5mm宽度的试纸条，作为正定型试纸条保存备 用。同时，将10/11-抗原垫贴于PVC背衬板上，其后固定5-泳动垫，将包被溴甲酚绿混合 试剂的12/13-反应垫固定到泳动垫末端，最后固定9-吸水垫，将试纸切割成l-5mm宽度的 试纸条，作为反定型试纸条保存备用。本实施优选宽2_，长2. 5cm的试纸条作为通道检测 试纸。正定型加样垫材料为棉桨纸，反定型为全血滤膜，本实施例优选宽I. 4cm，长0. 5cm尺 寸作为加样垫。正反定型检测所在方向可根据需要调整，本实施例优选左侧为正定型，右侧 为反定型。本实施例6/7反应垫为正定型检测垫，8-反应垫为Rh(D)检测垫，12/13反应垫 为反定型检测垫。将正反定型加样垫和检测试纸条粘贴于各对应通道中，作为检测内置区。 本装置外壳优选长方形，宽I. 8cm，长6. 5cm，外壳两端设置加祥口，在反应垫处设结果观察 窗口，将检测内置区装载到外壳中。
[0059] 8)样品检测：在左右两侧1-加样垫滴加 20μ1 A型全血，然后在10-抗原垫 处滴加 A型红细胞，11-抗原垫处滴加 B型红细胞，30s后分别在左右滴加40 μ 1冲洗 液，观察红细胞与抗体或血浆是否发生凝集反应，滴加冲洗液后室温条件下Imin可观察 6/7/8/12/13-反应垫得出检测结果
[0060] 9)肉眼结果判断：
[0061] 如图4、5、6所示，所有反应垫出现蓝绿色或者灰褐色本次检测方为有效。若6、8、 13反应垫出现蓝绿色，7、12出现灰褐色该血型为A+;若6、13反应垫出现蓝绿色，7、8、12出 现灰褐色该血型为Α_;若7、8、12反应垫出现蓝绿色，6、13出现灰褐色该血型为B +;若7、12 反应垫出现蓝绿色，6、8、13出现灰褐色该血型为Β_;若6、7、8反应垫出现蓝绿色，12、13出 现灰褐色该血型为AB+;若6、7反应垫出现蓝绿色，8、12、13出现灰褐色该血型为AB 若8、 12、13反应垫出现蓝绿色，6、7出现灰褐色该血型为0+;若12、13反应垫出现蓝绿色，6、7、8 出现灰褐色该血型为〇_;检测结果如下一览表（表一）所示，其中Y-蓝绿色，N-灰褐色。
[0062]
【主权项】
1. 一种便携式血型系统检测试纸，其特征在于，该试纸由以下部件组成，固相载体，固 相载体上设置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依 次搭接，抗体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂。
2. 根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述抗原垫与加样垫间还搭接有用于分 离血浆和红细胞的分离垫。
3. 根据权利要求2所述的试纸，其特征在于，所述抗体垫为一个或相连的多个，其预包 被的血型抗体为ABO、Rh血型抗体；采用IgM、IgG、IgM-IgG混合抗体；所述抗原垫预包被抗 原为ABO血型抗原。
4. 根据权利要求3所述的试纸，其特征在于，所述ABO血型抗体为抗A、抗B;Rh血型抗 体为抗D、抗C、抗c、抗E、抗e抗体；所述ABO抗原为A型红细胞和B型红细胞；其预包被方 法为物理吸附、竞争性结合、磁珠固定法。
5. 根据权利要求4所述的装置，其特征在于，所述试纸中，加样垫、抗体垫及泳动垫采 用棉浆纸、印花纸、吸墨纸，所述分离垫为全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜；所述反 应垫为棉浆垫、玻璃纤维垫；所述吸水垫为滤纸、纤维素纤维、纸巾纸。
6. 根据权利要求5所述的试纸，其特征在于，所述试纸由固相载体及载体上的五个独 立检测通道构成，所述检测通道的各检测通道的加样垫连通或者不连通，设置抗原垫的两 检测通道上，加样垫、分离垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；两抗原垫上分别包 被A型红细胞和B型红细胞；设置抗体垫的三个检测通道上，加样垫、抗原垫、泳动垫、反应 垫、吸水垫依次搭接；三个抗体垫上分别包被抗A抗体、抗B抗体及Rh血型的抗D抗体。
7. 根据权利要求1-6任一所述的试纸，其特征在于，所述检测通道采用蜡染、蜡浸、微 流控或芯片法制备。
8. 根据权利要求1-6任一所述的试纸，其特征在于，所述显色试剂为：溴甲酚绿混合试 剂、溴甲酚紫混合试剂、考马斯亮蓝试剂；混合试剂的辅助试剂为十二烷基聚乙二醇醚或吐 温20,添加柠檬酸及柠檬酸钠试剂，调PH值至4. 2±0. 5,配成的蛋白质的显色试剂。
9. 根据权利要求8所述的试纸，其特征在于，所述固相载体为有机玻璃、聚乙烯、ABS塑 料、聚氯乙烯材料或聚对苯二甲酸乙二醇酯。
10. 根据权利要求8所述的试纸，其特征在于，所述试纸有外壳或无外壳，外壳为有机 玻璃、聚苯乙烯、聚碳酸酯类透明或不透明的塑料；其外观为圆形、椭圆形、正方形或长方 形；外壳按需设有加样区，观察区，信息粘贴区，握持区；加样区、观察区形状为方形、圆形。
11. 一种利用上述试纸检测血型的方法，其特征在于，包括如下步骤： 将待检测血样由加样垫加入，血样中的RBC表面抗原与抗体垫预包被的抗体结合反 应，经过抗体垫选择性结合后剩余的血样物质继续运动经泳动垫分离，并滴加冲洗液使未 凝集的血样物质与反应垫的显色试剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有 效层析至反应垫；血液中带有的抗体的血浆经加样垫及分离垫与血液中的RBC分离，与抗 原垫预包被的RBC反应凝集，未凝集的血样物质经冲洗液冲洗后与反应垫的显色剂反应显 色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；吸水垫在检测通道末端吸 取多余液体，提高液体由前向后运动速度，缩短检测时间。
12. 根据权利要求11所述的方法，其特征在于，该方法包括正定型检测及反定型检测， 正定型检测为在每一通道的抗体垫上预包被血型抗体，从加样孔滴加血液样本后，血液样 本中的RBC表面抗原与抗体垫中预包被的抗体结合反应；反定型检测为在抗原垫上包被 红细胞，从加样孔滴加全血后，通过分离垫自动分离血浆和RBC，使血浆与通道中预包被的 RBC发生反应，若RBC凝集；待滴加冲洗液后，已经凝集的RBC无法移动，而血液中未凝集的 血浆通过层析作用与反应垫的显色试剂反应形成蓝绿色复合物；若RBC未发生凝集，则未 凝集的RBC和血浆通过层析与反应垫的显色试剂反应，形成灰褐色复合物，从而快速进行 正反定型血型鉴定。
13. 根据权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述冲洗液为：柠檬酸-柠檬酸 钠冲洗液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬 酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、 苯二甲酸氢盐中的任一种，冲洗液PH值为4. 2±0. 5,用量为5-100y1。
14. 根据权利要求11所述的方法，其特征在于，滴加样本后，检测的环境温度为 4-60°C，通过离心方式或添加全血辅助液加速样本在检测条上层析速度的方式缩短检测时 间。
15. 根据权利要求11所述的方法，其特征在于，结果判读方法为肉眼观察或结合常规 光谱检测仪器自动得出。
【专利摘要】本发明公开了一种便携式血型系统检测试纸，该试纸由以下部件组成，固相载体，固相载体上设置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接，抗体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂。本发明试纸可快速、准确检测ABO、Rh、MNS、Kell、Kidd等多种血型系统，可根据POCT检测需要进行项目选择，以适合医院、家庭以及野外紧急等多种情况。
【IPC分类】G01N33-80
【公开号】CN104730258
【申请号】CN201510106833
【发明人】罗阳, 张洪, 邱晓沛
【申请人】罗阳
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月12日