一种便携式血型系统检测试纸及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医疗血型检测领域，特别涉及一种便携式血型系统检测试纸，可快速、 准确检测ABO、Rh、丽S、Kell、Kidd等多种血型系统，可根据POCT检测需要进行项目选择， 以适合医院、家庭以及野外紧急等多种情况。
【背景技术】
[0002] 血型是对血液分类的方法，通常是指红细胞（RBC)的分型，其依据是RBC表面是否 存在某些可遗传的抗原物质。已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有32种，与人类 输血关系最密切的是ABO血型系统，其次是Rh血型系统，还有MNS、Kell等系统也与某些疾 病息息相关。血型鉴定是指对血液成分中细胞表面抗原进行鉴定的技术。快速、准确的血 型鉴定技术对遗传学、法医学、临床医学等学科都有广泛的实用价值，因此具有重要的理论 和实践意义。血型鉴定对输血至关重要，尤其在医学创伤性大出血、脏器移植、新生儿溶血 等时，以不相容的血型输血可能导致溶血反应的发生，造成溶血性贫血、肾衰竭、休克以至 死亡。因此，快速、准确、简单的筛查血型可为抢救危急病人，应对突发事件提供保障。
[0003] 目前血型筛查方法主要分为凝集法和基因法两大类。凝集法的原理为检测受检者 血液中RBC表面抗原，只要RBC表面存在相应抗原，即可与相应的抗体发生凝集反应。包括 传统的玻片法、纸片法、试管法，后续发展起来的微柱法和卡式法。其优点是速度较快，但受 抗体保存条件限制，不适用于野外紧急条件使用。第二类为基因法，主要通过特异性引物对 RBC基因进行分型，以此对各种血型进行鉴定，尤其适合于复杂血型的鉴定。然而，其检测速 度慢，成本高，不适合于临床常规检测。所以上述方法，都不能避免检测速度慢、操作不便、 成本高等问题。因此，研发操作简便、快速准确的新型血型鉴定方法，能够在第一时间获得 血型信息，从而为抢救赢得时间，挽救宝贵生命，这对于提高紧急情况下的医疗救治水平具 有重要意义。
[0004] 为了操作简便、提高血型检测速度，人们进行了如下探索：
[0005] 中国专利[200820179524. 1](公开号为 201302573)公开了一种用于 ABO, Rh-D 的 血型鉴定卡。该卡以塑料或胶质纸作为基板，在基板上的血清凹槽内包被干燥的标准抗A、 抗B、抗D血清，以此进行血型鉴定。该鉴定卡易携带，适用性好，易保存，可弥补传统玻片 法发生冷凝集现象的不足。但该方法仅为正定型方法，但缺少质控，容易出现假阴性和假阳 性。
[0006] 中国专利[200920041078. 2](公开号为201382943)公开了一种采用迀移层析法 检测人ABO和RhD血型定型的试剂卡，在反应膜上设抗A检测线、抗B检测线、抗RhD检测 线、质控线。检测线为对应的单克隆抗体，质控线为多克隆抗体。以检测线和质控线显示红 色进行相应的结果判断。该方法检测成本较低。但在质控线处抗原抗体需二次反应，增加检 测时间。同时因血液颜色为红色，检测线和质控线依据显示红色进行结果判读，误差较大， 特异性有待提尚。
[0007] Noiphung等报道了一种可同时检测的ABO (Α/Β/ΑΒ/0)血型和Rh(D)的血型检测 试纸条；但其因采用红细胞与血浆层析距离比进行结果鉴定，要求血液样本的红细胞比容 (HCT)低于42%，且需1 : 2稀释后方可进行检测，其操作不简便。同时，正常人群HCT - 般范围约为37%~50%，其检测的样本范围较小，不能满足普通人血型检测需求。单纯依 靠红细胞与血浆层析距离比进行结果验证，缺乏质控对照，导致其结果特异性较差。
[0008] 所有上述方法均缺乏对血型检测装置的质控，存在一定的假阴性和假阳性，且检 测时间较长，无法真正实现POCT检测以及满足紧急情况下的使用，极大限制了其应用价 值。
【发明内容】
[0009] 为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种便携式血型系统检 测试纸，该试纸是利用血液抗原抗体反应以及蛋白质显色反应原理，在试纸基质上预包被 血型抗体或抗原，在反应垫上固定蛋白质显色试剂，以此进行快速血型鉴定。本发明的便携 式血型检测装置检测区主要包含正定型检测区和反定型检测区。正定型检测区为在每一通 道的试纸基质上预包被血型抗体，反应垫预固定显色试剂。从加样孔滴加血液样品后，血液 中的RBC表面抗原可与通道中预包被的血型抗体结合反应。反定型检测为在试纸基质上包 被红细胞，从加样孔滴加全血后，通过分离垫自动分离血浆和红细胞，使血浆与通道中预包 被的红细胞发生反应，从而快速进行正反定型血型鉴定。
[0010] 为达到上述目的，本发明的技术方案为：
[0011] -种便携式血型系统检测试纸，该试纸由以下部件组成，固相载体，固相载体上设 置有检测通道，检测通道上加样垫、抗体垫或抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接，抗 体垫预包被血型检测剂，反应垫上固定有显色试剂。
[0012] 进一步的，所述抗原垫与加样垫间还搭接有用于分离血浆和红细胞的分离垫。
[0013] 进一步的，所述抗体垫为一个或相连的多个，其预包被的血型抗体为ABO、Rh血型 抗体；采用IgM、IgG、IgM-IgG混合抗体；所述抗原垫预包被抗原为ABO血型抗原。
[0014] 进一步的，所述ABO血型抗体为抗A、抗B ;Rh血型抗体为抗D、抗C、抗c、抗 e抗体；所述ABO抗原为A型红细胞和B型红细胞；其预包被方法为物理吸附、竞争性结合、 磁珠固定法。
[0015] 进一步的，所述试纸包括加样垫、抗体垫及泳动垫的基质为棉衆纸、印花纸、吸墨 纸，所述分离垫其基质为全血滤膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜；所述反应垫为棉浆垫、玻 璃纤维垫；所述吸水垫为滤纸、纤维素纤维、纸巾纸。
[0016] 进一步的，所述试纸由固相载体及载体上的五个独立检测通道构成，所述检测通 道的各检测通道的加样垫连通或者不连通，设置抗原垫的两检测通道上，加样垫、分离垫、 抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；两抗原垫上分别包被A型红细胞和B型红细胞； 设置抗体垫的三个检测通道上，加样垫、抗原垫、泳动垫、反应垫、吸水垫依次搭接；三个抗 体垫上分别包被抗A抗体、抗B抗体及Rh血型的抗D抗体。
[0017] 进一步的，所述检测通道采用蜡染、蜡浸、微流控或芯片法制备。
[0018] 进一步的，所述显色试剂为：溴甲酚绿混合试剂、溴甲酚紫混合试剂、考马斯亮蓝 试剂；其配合的辅助试剂为十二烷基聚乙二醇醚或吐温20,添加柠檬酸及柠檬酸钠试剂， 调PH值至4. 2 ±0. 5,配成的蛋白质显色混合试剂。
[0019] 进一步的，所述固相载体为有机玻璃、聚乙烯（PE)、ABS塑料、聚氯乙烯材料（PVC) 或聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET)。
[0020] 进一步的，所述加样垫，泳动垫，抗体垫采用棉浆纸、印花纸、吸墨纸或硝酸纤维素 膜；分离垫采用全血滤膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；反应垫采用棉浆垫或玻璃纤维 垫。
[0021] 进一步的，所述试纸可以有外壳或无外壳。外壳可为有机玻璃（PMM)、聚苯乙烯 (PS)、聚碳酸酯（PC)等透明或不透明的塑料；其外观可为圆形、椭圆形、正方形、长方形等 设计；可根据需求进行外壳更换，外壳可按需设加样区，观察区，信息粘贴区，握持区等，加 样区、观察区形状可为方形、圆形，或其他任一形状设计。
[0022] 一种利用上述试纸检测血型的方法，包括如下步骤：
[0023] 将待检测血样由加样垫加入，血样中的RBC表面抗原与抗体垫预包被的抗体结合 反应，经过抗体垫选择性结合后剩余的血样物质继续运动经泳动垫分离，并滴加冲洗液使 未凝集的血样物质与反应垫的显色试剂反应显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否 有效层析至反应垫；血液中带有的抗体的血浆经加样垫及分离垫与血液中的RBC分离，与 抗原垫预包被的RBC反应凝集，未凝集的血样物质经冲洗液冲洗后与反应垫的显色剂反应 显色，依据不同颜色判断相应血型及血样是否有效层析至反应垫；吸水垫在检测通道末端 吸取多余液体，提高液体由前向后运动速度，缩短检测时间。
[0024] 进一步的，该方法包括正定型检测及反定型检测，正定型检测为在每一通道的抗 体垫上预包被血型抗体，从加样孔滴加血液样本后，血液样本中的RBC表面抗原可与抗体 垫中预包被的抗体结合反应；反定型检测为在抗原垫上包被红细胞，从加样孔滴加全血后， 通过分离垫自动分离血浆和RBC，使血浆与通道中预包被的RBC发生反应，若RBC凝集；待 滴加冲洗液后，已经凝集的RBC无法移动，而血液中未