测定糖代谢能力的方法及用于该方法的组合物的制作方法_3

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in · mL/ng) "(纵轴)的相关关系。
[0089] [图5]表示实验例3的结果。表示在大鼠 (ZDF Fatty、ZDF lean)的各周龄时施 予U-13C-葡萄糖经口施予液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。
[0090] [图6]表示实验例4(2-1)的结果。表示向禁食条件下的第1组(对照组)和第 2组(糖尿病组)分别经口施予U-13C-葡萄糖水溶液(50ymol/4mL/kg)后测得的呼出气 中的A 13C(%。)的推移。
[0091] [图7]表示实验例4 (2-2-1)的结果。表示分别向第1组(对照组)和第2组(糖尿 病组)同时经口施予葡萄糖水溶液(450mg/4mL/kg)和U- 13C-葡萄糖水溶液(50μπι〇1/4πι?ν kg)后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。
[0092] [图8]表示实验例4(2-2-2)的结果。表示向第1组(对照组)和第2组(糖尿 病组)分别经口施予葡萄糖水溶液(450mg/4mL/kg)、于30分钟后经口施予U- 13C-葡萄糖 水溶液(50ymol/4mL/kg)后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。
[0093] [图9]表示实验例4(2-2-3)的结果。表示向第1组(对照组)和第2组(糖尿 病组)分别经口施予葡萄糖水溶液(450mg/4mL/kg)、于30分钟后静脉施予U- 13C-葡萄糖 水溶液(50ymol/4mL/kg)后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。
[0094] [图10]表示实验例4(2-2-4)的结果。表示向第1组(对照组)和第2组(糖尿 病组)分别经口施予葡萄糖水溶液(2g/4mL/kg)、于30分钟后静脉施予U- 13C-葡萄糖水溶 液(SOym0Iz^mIVkg)后测得的呼出气中的Λ13(:(%。)的推移。
[0095] [图11]表示实验例4(2-2-5)的结果。表示向第1组(对照组)和第2组(糖尿 病组)分别以4mL/kg的量经口施予经肠营养剂(蛋白质和氨基酸制剂:商品名"Racol (注 册商标)配合经肠用液")、于30分钟后静脉施予U-13C-葡萄糖水溶液(50 ymol/4mL/kg) 后测得的呼出气中的Δ13(:(%。)的推移。
[0096] [图12]表示实验例5的结果。表示3组大鼠(Α组:健康组、B组:糖尿病重度发 病组、C组:糖尿病中度发病组)中的、糖尿病治疗药施予前(未处置)的A 13C(%。)的推 移和糖尿病治疗药(二甲双胍)施予后的δ13(:(%。)的推移。
[0097] [图13]表示实验例6的结果。表示各组大鼠(对照组:二 -、1型糖尿病 组:_ □ _、膜岛素施予4h_糖尿病组:-Λ -、膜岛素施予24h_糖尿病组:-·-)的呼出气 模式(A13C (%。)的推移)。
【具体实施方式】
[0098] (I)对与标记C-呼气试骀相关的术语及分析方法的说明
[0099] 本发明的糖代谢能力测定方法以采用13C-呼气试验等标记C-呼气试验为基础。因 此,在说明本发明之前,对与标记C-呼气试验相关的术语及其分析方法进行说明(" 13c-呼 气试验的实际基础和实践的应用第8项:13c-呼气试验数据分析法",松林恒夫、松山涉, 13C 医学应用研宄会,PP. 102-111)。
[0100] 需要说明的是,此处,作为本发明中使用的"同位素 C或O中的至少一方"的一个 例子,示例13C进行说明。
[0101] (I)S13C 值(%〇)
[0102] 表示同位素的存在比例时,采用将同一元素中组成比例最高的元素作为分母的同 位素比(R)。因此,碳13( 13c)的R值用以碳12(1?)作为分母的下式表示。
[0103] R=13CV12C......(式 1)
[0104] 由于R是非常小的数值,因此难以直接进行测定。为了更准确地进行定量而使用 质谱仪时,常与标准物质进行比较,测定结果用下式定义的S值表示。
[0105] δ 13C= ([RSAM/RSTD]-1) Χ1000 ......(式 2)
[0106] δ 13C : δ 13C 值(%。)
[0107] Rsam:样品气中的13C存在比例
[0108] Rstd:标准气中的13C存在比例
[0109] 需要说明的是,使用来自石灰石的二氧化碳(PDB)作为标准气时,Rstd为R pdb = 0.0112372〇
[0110] (2) A13C 值(%。)
[0111] 如下式所示," A13C值(%。)"是指将施予试剂前的δ 13C值(即,天然存在的13C的 δ值)作为背景(back ground)从施予试剂后的δ 13C值中减去而得到的值(A13C)。
[0112] A13C(%〇) = ( δ 13C)t-( δ 13C)〇......(式 3)
[0113] Δ 13C (%。): δ 13C 值变化量(%〇 )
[0114] (δ 13C) t:施予试剂后t小时时的δ 13C值(%。)
[0115] ( δ 13C)。:施予试剂前0小时时的δ 13C值(%。)
[0116] (3)呼出气中的 13C 浓度13C :atom% )
[0117] 呼出气中的13C浓度(% 13C :atom%)用下式定义。
[0118] % 13C = [13C/(13c+12c)] XlOO
[0119] 为了将(1)中定义的相对值δ 13C值转换为总碳中的13C含量(%)(其为通常的 浓度的概念)的形式,可以采用下述的方法。
[0120] 首先,将上述式的右边的分母和分子除以12C,基于(式1)转换为R,则成为下式。
[0121] % 13C = [R/(R+1)] XlOO......(式 4)
[0122] 将(式2)中求出的Rsam代入该R中进行整理,则成为下式,可以用δ 13C值表示13C 浓度(% 13C)。
[0123] % 13C = {[( δ 13C/1000)+1] XRpdbX1〇〇}/{[[( δ 13c/1000)+l] XRPDB]+1} · · ·
[0124] (式 5)
[0125] % 13C : 13C 浓度(atom% )
[0126] δ 13C : δ 13C 值(%。)
[0127] Rpdb:PDB标准气中的13C存在比例=0.0112372
[0128] (4) 13C 浓度的变化量(Δ % 13C)
[0129] 如下式所定义地那样,呼出气中的13C浓度13C)的变化量(Λ % 13C),可以通过 将施予前0小时的13C浓度〔(% 13Otl)从施予t小时后的13C浓度〔(% 13c)t〕中减去而求 出。
[0130] Δ % 13C = (% 13C) t-(% 13O0......(式 6)
[0131] Δ % 13C :13C 浓度变化量(atom% )
[0132] (% 13C) t:施予试剂t小时后的13C浓度(atom% )
[0133] (% 13〇。:施予试剂前0小时时的13C浓度(atom% )
[0134] (5) Δ 13C值(%。)与13C浓度变化量(Δ % 13C)的关系
[0135] 13C的天然存在比例(R)为约0. 011,即使在施予标记试剂的情况下,呼出气中的增 加量也仅为+〇. 001~〇. 002左右。因此,可以视为天然存在比例R - 0,用R表示% 13C的 (式4)可以用下式进行近似。
[0136] % 13C = [R/ (R+l) ] X 100 ^ RX 100
[0137] 使用上述近似式,首先利用作为δ 13C的定义的(式2)求出Rsm,将其代入上述式 的R中进行整理,则可得到计算 13C浓度的近似(式7)。
[0138] % 13C = [( δ 13C/l000)+l] XRpdbX 100......(式 7)
[0139] 将其代入(式6),则如下式(式8)所示,可以由Λ 13C算出Λ % 13C。
[0140] Δ % 13C = (% 13C)t-(% 13O0
[0141] = {[( δ 13C) t_( δ 13C)0]/1000} XRpdbXIOO
[0142] = (Λ 13CXRpdb)/10......(式 8)
[0143] Δ % 13C : 13C 浓度变化量(atom% )
[0144] Δ 13C : δ 13C 值变化量(%。)
[0145] Rpdb:PDB标准气中的13C存在比例=0. 0112372
[0146] (II)用于测宙糖代谢能力的组合物
[0147] 本发明的用于测定糖代谢能力的组合物以经至少一个同位素 C标记的葡萄糖作 为有效成分,所述葡萄糖将在机体内被转化为标记的CO2气体而被排出至呼出气中。可在 本发明中使用的标记C-葡萄糖具有下述特性:施予至受试者后,根据体内的糖代谢能力而 进行糖代谢,以含有标记C的二氧化碳(其反映了受试者糖代谢能力的大小)的形式排出 至呼出气中。
[0148] 作为可用于标记构成葡萄糖的碳原子的同位素,没有特别限定,具体可举出13C及 14C。上述同位素无论为放射性及非放射性均可,但从安全性的观点考虑优选为非放射性同 位素。作为上述同位素,可优选举出 13C。
[0149] 同位素元素-标记葡萄糖是以下述方式标记而成的:随后经由糖代谢途径生成的 CO2的至少一部分被同位素标记。例如,作为如上所述的葡萄糖,可以举出葡萄糖的1位或 6位、2位或5位、以及3位或4位中任一方的至少1个碳原子被同位素标记而形成的化合 物,具体而言,可以举出I- 13C标记葡萄糖、2-1?标记葡萄糖、3-1?标记葡萄糖。此外,也可 以是葡萄糖的1位、2位、3位、4位、5位及6位的全部碳原子被同位素标记而形成的物质。 如下文所述的实验例1所示,从" Δ 13C (%。)"的上升速度(换言之,施予13C标记葡萄糖后, 以13CO2的形式被排出至呼出气中的速度)考虑,优选3位或4位的碳原子被同位素标记而 形成的葡萄糖(例如,3- 13C标记葡萄糖、4-1?标记葡萄糖),以及1位、2位、3位、4位、5位 及6位的全部碳原子被同位素标记而形成的葡萄糖。
[0150] 用13C、14C及18O等同位素标记葡萄糖等化合物的方法没有特别限定,可广 泛采用通常所使用的方法(佐佐木,"5. 1稳定同位素在临床诊断中的应用":化学领 域107 "稳定同位素在医?药学、生物学中的应用",pp. 149-163(1975),南江堂;梶原, RADIOISOTOPES, 41,45-48(1992)等)。上述同位素标记化合物、特别是实施例中示出的13C 标记-葡萄糖均可以以商业方式获得,简便起见也可以使用相关的市售品。
[0151] 关于本发明的组合物,只要基本上满足下述条件即可,并不特别限定其形态、标记 C-葡萄糖以外的成分、各成分的配合比例、组合物的制备方法等,所述条件
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