1M的磯 酸二氨钢和0.9%氯化钢溶液配制而成。TE缓冲液（pH 8.0)由lOmM tris(S哲甲基）氨 基甲烧和ImM己二胺四己酸制得，被用于稀释适配体。金银合金膜（100皿厚；金银质量比 50:50)购于常熟贵金属公司。所有的其他化学试剂都是分析纯级别，使用前未经进一步纯 化。电阻率为18. 25MQ . cm的超纯水被用来配置所有的水溶液。
[0032] 2. 2实验仪器与装置
[0033] 电化学实验装置与一个=电极系统相连接，包括一个被修饰的GCE工作电极（电 极表面积为0. 07cm2)，一个银/氯化银参比电极和一个销丝对电极。CV和DPV扫描图像由 CHI 660E电化学工作站（中国上海，辰华）获得。NPG的表面形态信息来源于日立S-4800 超高分辨率（UHR)场发射（阳）扫描电子显微镜。XI^S实验采用了赛默飞世尔科技ESCALAB 250XPS分光计。
[0034] 2. 3纳米多孔金的制备
[003引 NPG由脱合金法制得[26]。简而言么将金银合金薄膜在浓硝酸溶液中腐蚀后，由 于银被腐蚀掉，薄膜由银白色转变成了金色。
[0036] 2. 4aptamer/NPG/GCE探针的制备
[0037] aptamer/NPG/GCE探针的制备见方案图1。首先，GCE用氧化侣粉末（颗粒大小 分别为0. 3 y m和0. 05 y m)在鹿皮革上研磨至镜面抛光度，接着超声洗漆W除去电极表 面的氧化侣颗粒和其他的杂质，然后再分别用超纯水和己醇浸洗。该时，将已准备好的 NPG(8mm*8mm)通过物理吸附在作用平铺到GCE表面，沿GCE的面积将多余的NPG用纸巾擦 掉，得到的NPG/GCE。BPA的适配体在固定之前先要对其进行活化，具体做法为：取100 y L 适配体巧.0 y M)与10 y L二硫苏糖醇（0. 5mM)充分振荡混合，活化15分钟，然后用100 y L 己酸己醋对未反应的二硫苏糖醇及其它副产物进行萃取分离，萃取S次。取3 y L活化后的 BPA适配体巧.0 y M)滴至NPG/GCE上并静置一夜，使适配体通过S-Au键固定在NPG上，没 有被固定的适配体通过用TE缓冲溶液洗漆除去。最后，将5uL琉基丙酸（ImM)滴至电极 表面并静置30分钟，W对NPG上未固定适配体的位点进行封闭，用TE缓冲液洗漆后，即得 aptamer/NPG/GCE传感器探针，将其置于4°C的冰箱内储存待用。
[00測方案图1.处
[0039] 方案图1.基于纳米多孔金的适配体传感器的制备流程及BPA直接电化学检测原 理
[0040] 2. 5aptamer/NPG/GCE探针用于BPA的检测
[0041] 为了检测BPA，组装好的aptamer/NPG/GCE传感器探针需浸于含有BPA的PBS溶液 中30分钟。检测前，该探针需再用PBS溶液洗漆，再用置于PBS溶液中的S电极系统进行 检测。CV和DPV扫描图像可W显示出被捕获的BPA在NPG催化作用下的氧化还原反应。
[0042] 2、结果与分析
[004引3. 1NPG对于BPA的催化性能
[0044]图 1.处
[0045] 图1. (a) NPG/GCE，化)GCE，（C)金盘电极在含有200 y M BPA的PBS溶液中的CV扫 描图，（d)NPG/GCE在PBS溶液中的CV扫描图；内置图为NPG/GCE在含有50 uM BPA的PBS 溶液中的多圈CV扫描图。
[0046] 在组装aptamer/NPG/GCE之前，我们先用NPG/GCE作为工作电极研究了NPG对于 BPA的催化作用。在含有200yMBPA的PBS溶液中得到的CV图在0. 43V处显示出一个氧 化峰（图1.中的曲线a)，该与之前用其他电极得到的BPA的氧化峰位置相一致巧2]巧3]。 相对地，在不含BPA的PBS溶液中，CV扫描结果没有出现任何峰（图1.中的曲线d)，该说 明获得的氧化峰确实是BPA的峰。为了进一步证实NPG的电催化效果，我们分别用裸GCE 和金盘电极进行了对照实验。在含有200yMBPA的PBS溶液中，用GCE和金盘电极进行CV 扫描，结果都在0.5V附近得到了BPA的氧化峰（图1.中的曲线b和C)。明显地，用NPG/ GCE扫描得到的BPA的氧化峰过电势较低，峰电流大小分别达到了GCE电极的23倍和金盘 电极的9倍。该些证实了NPG对BPA有良好的电催化作用。根据该一实验结果，适配体修 饰纳米多孔金的传感器用于检测BPA能够大大提高检测灵敏度。
[0047] 用NPG/GCE在含有50 y M BPA的PBS溶液中进行连续扫描，CV扫描结果显示随着 扫描圈数的增加，氧化峰电流值在逐步减小（图1.内置图），该与之前报道中的描述相吻 合巧2]。产生该一现象的原因是由于溶液中的BPA在NPG表面发生了电聚合，占据了催化 活性位点，从而减弱了 NPG对BPA的电催化性能。但是，值得一提的是，在用aptamer/NPG/ GCE探针检测BPA的过程中，该一现象并未出现，该一点将会在接下来的3. 2部分中进一步 阐述。3. 2aptamer/NPG/BPA探针的表征
[0048]图 2.处
[0049] 图2. NPG的沈M表征图像（A和C)，aptamer/NPG的沈M表征图像炬和D);似NPG/ GCE 和 aptamer/NPG/GCE 的 XPS 表征光谱图；（F) (a)aptamer/NPG/GCE 和 〇3)BPA/aptame;r/ NPG/GCE在PBS溶液中的CV扫描图。
[0050] 我们用沈M对组装好的aptamer/NPG/GCE传感器探针进行了表征。结果显示，NPG 的孔径在20nm左右，该与金骨架部分的尺寸基本相同（见图2.A)。在高分辨率图像中，可 W清楚地观察到NPG的骨架表面是很干净的（见图2. C)。在修饰上适配体之后，骨架部分 变粗，孔径看起来变小了（见图2. B)。高分辨率图像中还可W看出在NPG的骨架表面上覆 盖上了一层薄膜（见图2. D)。
[0051] 为了进一步证实适配体固定到了电极表面，我们用XI^S对组装好的传感器探针进 行了测试。在对NPG/GCE和aptamer/NPG/GCE的XPS检测谱图中，位于284. 6eV处的Cls峰 作为了基准（见图2.巧。284. 6eV处的Cls峰对应的是C-C和C-H键，另外常见的532. lev 处的01s峰出现在了所有检测表面中。两个Au4f峰分别位于86. 2eV和83. 6eV处，出现在 了所有检测表面中。相较于NPG/GCE检测谱图，aptamer/NPG/GCE的图谱中多出现了位于 131. 9eV处的P化峰W及400.0 eV处的Nls峰，前者对应着磯酸盐，其是适配体中一种关键 的结构物质巧4];后者对应于DNA碱基中的C-N键。XI^S测试结果进一步证实我们成功地 制备了 aptamer/NPG/GCE传感器探针。
[0052] 我们在S电极体系中对由aptamer/NPG/GCE传感器探针捕获的BPA的电化学性质 进行了研究。在空白试验中，在不含BPA的PBS溶液中，aptamer/NPG/GCE探针扫描结果没 有显示出氧化还原峰（图2. F中的曲线a)。接着，将aptamer/NPG/GCE探针浸于含50 y M BPA的PBS溶液中，使适配体捕捉溶液中的BPA。再用PBS溶液洗掉表面未固定的BPA，将获 得的BPA/aptamer/NPG/GCE置于PBS溶液中进行检测。得到的曲线b (图2. F中）显示了 一对位于0. 35/0. 28V左右的氧化还原峰，它对应着探针上适配体捕获的BPA的氧化还原反 应。另外，在PBS溶液中，BPA/aptamer/NPG/GCE在不用扫速下得到的CV图的峰电流值与 扫速的关系可见图3.。BPA的氧化还原电流随着扫速的增大而增大，阳极电流和阴极电流 值都与扫速成正比关系，该说明了适配体很好地将BPA固定在了电极的表面。W上实验结 果都证实了适配体可W成功地识别并捕获BPA。有趣的是，被捕获的BPA的电化学性质与体 相溶液中溶解的BPA有所不同，因为后者只有氧化峰出现（见图1)。而且，对适配体探针捕 获的BPA进行多圈CV扫描的结果显示峰电流的大小并未发生变化（见图2. F中的曲线b)， 而溶液中的BPA的氧化峰电流值是随着扫描圈数的增加而逐步减小的（见图1.)。该现象 的出现可归结于W下两种原因；第一，适配体对BPA的捕获缩短了 BPA和NPG之间的距离， 从而使NPG对BPA氧化还原反应的催化作用更加容易进行。第二，每个BPA分子都是被一 个适配体分子捕获的，该可W阻止BPA在电极表面发生不可逆的聚合，而溶液中的BPA由于 可自由运动会出现该种聚合现象。
[0053]图 3.处
[0054] 图3. (A)在0.1M PBS溶液中，BPA/aptamer/NPG/GCE在不同扫速下的CV图，炬） 峰电流与扫速的线性拟