一种丹参素硫化物的液-质检测方法及其在丹参原药材质量控制中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药材质量管控方法，更具体的说涉及一种丹参素硫化物的 液-质检测方法及其在丹参原药材质量控制中的应用。 技术背景
[0002] 硫磺熏蒸方法被长期应用于食品、农产品及药材等产品门类的贮藏养护和加工过 程，其主要目的是实现防腐、防霉、防虫蛀，以及有利于干燥和增色等。药材硫磺熏蒸法是 部分药材加工养护的传统方法之一。2004年，国家食品药品监督管理局下发了《关于对中 药材采用硫磺熏蒸问题的批复》明确规定，"对于在市场流通领土的部分中药才和中药材饮 品，通过采用硫磺熏蒸或浸泡达到外观漂白的行为，应按违反《药品管理法》第四十九条、第 七十五条的规定进行查处"。2005版及2010版《药典》均明确取消了在药材加工环节中采 用硫磺熏制方法，表明了国家将在中药行业中禁止或限制使用硫磺。
[0003] 传统方法对药材采用硫磺熏蒸的检测方法是，对硫磺熏蒸药材"望""闻""尝""捏" 的简易鉴别方法。一"望"，又称为看，凡是过于鲜艳或发白的药材要警惕；二"闻"，凡是熏 过的都有一股刺鼻的硫磺味；三"尝"，大多数硫磺药材放进嘴里能尝到一种异常的酸味； 四"捏"，硫磺熏蒸后的中药材要比未熏蒸的重，含水量偏高。采用仪器检测方法主要是对二 氧化硫进行检测。二氧化硫含量的测定方法有多种，2010版《中国药典》一部规定为直接滴 定法，此外文献还报道有比色法、滴定法、色谱法、化学发光法、快速检验试剂盒检验法等方 法。
[0004] 但是现代研宄发现。被硫磺熏蒸之后，药性也会发生变化。硫磺毕竟是一种化学物 质，很有可能会跟药材成分中的活性基团发生反应。比如二氧化硫，它本身就是一个很强的 还原剂，它会跟其中一些羟基活性激素发生反应，这样会改变中药材原有的一些化学成份， 从而影响到药效或者产生不良反应、副作用。经过硫磺熏蒸处理的药材在制成成品药后，二 氧化硫等硫化物被除去，但是被二氧化硫等还原剂改变的化学成分继续停留在药物中；往 往难以对原药材的质量进行控制，导致部分不合格药材进入成品药市场。
【发明内容】
[0005] 为解决上述的问题，本专利申请提供了一种通过检测含丹参成品药及提取物中是 否含有硫化物_丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及丹参素酯亚硫酸酯异构体来判断所使 用的丹参原药材是否经过硫磺熏蒸加工（炮制）的检测方法。
[0006] 所述的丹参素硫化物的液-质检测方法，包括样品制备、采用超高效液相色谱-四 极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对样品进行检测、将样品的超高效液相色谱图以及一二级 质谱图进行结构解析鉴定出丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯（丹 参素酯亚硫酸酯的异构体）的化学成分；其中，所述的超高效液相色谱条件为：
[0007] 检测系统：超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统；
[0008] 色谱柱：100X2. 1mm，I. 9ymC18 柱；
[0009] 色谱条件为：以0. 1 %甲酸水为A流动相，乙腈为B流动相，按下述进行梯度洗脱；
[0010]0_20min，A流动相的体积百分比变化为95 % - 80 %，B流动相的体积百分比变化 为 5%- 20% ;
[0011] 20-35min，A流动相的体积百分比变化为80 % - 45 %，B流动相的体积百分比变化 为 20%- 55% ;
[0012] 35-43min，A流动相的体积百分比变化为45% - 0,B流动相的体积百分比变化为 55%- 100% ;
[0013] 其中，液相流速0. 3mL/min，进样量：1yL，检测波长为254nm，柱温为30°C。
[0014] 其中，所述质谱检测条件为：
[0015] 离子源为：HESI源，正负离子切换模式，离子源温度300°C，喷雾电压2. 8kV，鞘气 压力35arb，辅助气压力lOarb，离子传输管温度300°C;
[0016] -级质谱米用全扫描模式，分辨率为70000 ;
[0017] 二级质谱采用数据依赖扫描模式，分辨率17500 ;二级质谱碎片采用高能碰撞诱 导解离方式获得；
[0018] HCD归一化碰撞能量为35. 0%，扫描范围m/z115-1000。
[0019] 丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯的检测在含丹参成品药 物及丹参原药的质量控制中的应用，其技术关键在于：通过检测丹参成品药物及丹参原药 是否含有丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯中的一种或几种判断含 丹参成品药物所使用的丹参及丹参原药是否进行过硫磺漂白的非法炮制。
[0020] 本发明的有益技术效果是：本发明解决了从成品药终端检测判断成品药使用的丹 参药材是否经过了硫磺熏制的非法炮制的技术瓶颈，为药监机构提供了一种药品质量监控 的新途径，是药品质量检测领域的一种技术突破。
【附图说明】
[0021] 图1香丹注射液总离子流图；
[0022] 图2峰3的一级、二级质谱图；
[0023] 图3峰3的同位素实测值与理论值图；
[0024] 图4峰7、峰8提取离子流图和多级质谱图；
[0025] 图5峰7的二级质谱图；
[0026] 图6峰8的二级质谱图。
【具体实施方式】
[0027] 实施例1超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱检测方法的考察
[0028] 1 材料
[0029] 仪器：Q-Exactive液质联用系统（DionexUltiMate3000液相色谱仪， Q-Exactive质谱仪）（美国ThermoFisherScientific公司）；色谱柱：ThermoScientific HypersilGoldC18 柱（100X2. 1mm，1.9ym)
[0030]试剂与药品：市售香丹注射液（批号：12042605)，乙腈（色谱纯，美国Thermo FisherScientific公司），甲酸（色谱纯，美国Tedia公司），水为重蒸馏水。
[0031] 2仪器方法
[0032] 样品处理：精密吸取香丹注射液lmL，水浴挥尽水分，残渣加甲醇20mL溶解， 0. 45ym有机滤膜滤过，即得。
[0033] 色谱条件：流动相：A相：0. 1 %甲酸水，B相：乙腈。梯度洗脱，流动相梯度条件如 下：
[0034]
【主权项】
1. 一种丹参素硫化物的液-质检测方法，包括样品制备、采用超高效液相色谱-四极 杆-静电场轨道阱高分辨质谱对样品进行检测、将样品的超高效液相色谱图以及一二级质 谱图进行结构解析鉴定出丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯化学成 分；其特征在于：所述的超高效液相色谱条件为： 检测系统：超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统； 色谱柱：100X2.1mm，1.9ymC18 柱； 色谱条件为：以0. 1%甲酸水为A流动相，乙腈为B流动相，按下述进行梯度洗脱： 0-20min，A流动相的体积百分比变化为95% - 80%，B流动相的体积百分比变化为 5% - 20% ; 20-35min，A流动相的体积百分比变化为80% - 45%，B流动相的体积百分比变化为 20% - 55% ; 35-43min，A流动相的体积百分比变化为45% - 0,B流动相的体积百分比变化为 55% - 100% ; 其中，液相流速0. 3mL/min，进样量：1yL，检测波长为254nm，柱温为30°C。
2. 根据权利要求1所述的丹参素硫化物的液-质检测方法，所述四极杆-静电场轨道 阱高分辨质谱的质谱检测条件为： 离子源为：ffiSI源，正负离子切换模式，离子源温度300°C，喷雾电压2. 8kV，鞘气压力 35arb，辅助气压力10arb，离子传输管温度300°C; 一级质谱采用全扫描模式，分辨率为70000 ; 二级质谱采用数据依赖扫描模式，分辨率17500 ;二级质谱碎片采用高能碰撞诱导解 离方式获得； HCD归一化碰撞能量为35. 0%，扫描范围m/z115-1000。
3. 丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯的检测在含丹参成品药物 及丹参原药的质量控制中的应用。
4. 根据权利要求3所述的丹参素硫酸酯的检测在含丹参成品药物及丹参原药的质量 控制中的应用，其特征在于：通过检测含丹参成品药物及丹参原药是否含有丹参素硫酸酯、 丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯中的一种或几种判断含丹参成品药物所使用的 丹参及丹参原药是否进行过硫磺漂白的非法炮制。
【专利摘要】一种丹参素硫化物的液-质检测方法，包括样品制备、采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对样品进行检测、将样品的超高效液相色谱图以及一二级质谱图进行结构解析鉴定出丹参素硫酸酯、丹参素酯亚硫酸酯及异丹参素酯亚硫酸酯化学成分；本发明解决了从成品药终端检测判断成品药使用的丹参药材是否经过了硫磺熏制的非法炮制的技术瓶颈，为药监机构提供了一种药品质量监控的新途径，是药品质量检测领域的一种技术突破。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104764833
【申请号】CN201510223277
【发明人】秦剑, 陈晓虎, 邹江
【申请人】重庆市食品药品检验所
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年5月5日