速为 0? 8mL/min；
[0042] 柱温箱升温程序：初始温度40°C保持2min后，以5°C/min升温至180°C，再以 10°C/min升温至 280°C，保持lOmin。
[0043] 质谱条件：采用EI源、正离子检测，电离能量为70eV，离子源温度230°C，传输线温 度280°C，扫描模式为全扫描，扫描范围33~450m/z，无溶剂延迟。
[0044] (4)数据分析及鉴定：色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用 NIST11谱库对各挥发性成分进行定性分析。各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法 得到，结果取不同处理的平均值。
[0045] 结果如表1以及图1~6不。
[0046] 表1.甲鱼肉中挥发性成分的组成和相对含量（n= 3)。
[0047]
[0050]由图1可以看出，随着甲鱼肉固相微萃取体系中的酸度或者碱度的增加，挥发性 风味物质的萃取富集效果增加，上述方法所测得结果的丰度明显上升，从而使方法的灵敏 度提高。
[0051] 参见图2~6,酸法辅助固相微萃取与减法辅助固相微萃取所测得挥发性物质成 分和含量结果基本一致，所选甲鱼肉挥发性组分中鉴定出化合物为44个（取匹配得分多85 的确认为该化合物，最大值100)，可辨认的挥发性成分及其保留时间列于表1。保留时间及 峰面积用安捷伦MassHunter工作站计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
[0052] 实施例2
[0053] 不同条件下酸碱法辅助测定甲鱼肉中风味物质，包括以下步骤：
[0054] (1)取待测的甲鱼肉样品用液氮完全冷冻，然后立即打碎成粉末，再用盐酸水溶液 或氢氧化钠水溶液与甲鱼肉粉末按质量比1:1混匀，获得混合液。
[0055] 本实施例中设置5个不同pH处理，分别是取pH为2或4的盐酸水溶液、pH为9或 11的氢氧化钠水溶液以及去离子水（pH为7)，与甲鱼肉粉末按质量比1:1混匀，获得混合 液。
[0056] 上述盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液在使用前于4°C冰箱降温至4°C。
[0057] (2)迅速称取混匀后的混合液5g至于20mL顶空瓶中，加入lgNaCl，用带有PTFE/ 蓝色硅胶隔垫的空心磁性金属盖密封，由多功能全自动样品前处理平台MPSXT(德国 Gerstel公司）进行全自动顶空固相微萃取操作。
[0058] 本实例中设置3个不同的固相微萃取条件，分别如下：
[0059] 条件1 :预热温度50°C，平衡时间30min，萃取温度50°C，萃取时间60min。
[0060] 条件2 :预热温度60°C，平衡时间30min，萃取温度60°C，萃取时间60min。
[0061] 条件3 :预热温度60°C，平衡时间30min，萃取温度60°C，萃取时间30min。
[0062] 顶空固相微萃取操作中，采用1cm50/30ymDVB/PDMS/CAR萃取头，孵化器震荡速 度为 250rpm。
[0063] (3)气相色谱-质谱分析：完成萃取后萃取头于气相色谱（AgilentGC7890)进样 口采用不分流进样模式250°C解析5min，完成解吸附及分离后用质谱仪（Agilent5977A) 对各挥发性成分进行鉴定。
[0064] 气相色谱所采用色谱柱为HP-5MS，30m，0. 25mm，i.d. 0. 25ym，高纯氦气为载气，流 速为 0? 8mL/min；
[0065] 柱温箱升温程序：初始温度40°C保持2min后，以5°C/min升温至180°C，再以 10°C/min升温至 280°C，保持lOmin。
[0066] 质谱条件：采用EI源、正离子检测，电离能量为70eV，离子源温度230°C，传输线温 度280°C，扫描模式为全扫描，扫描范围33~450m/z，无溶剂延迟。
[0067] (4)数据分析及鉴定：色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用 NIST11谱库对各挥发性成分进行定性分析。
[0068] 结合实例1所测得的甲鱼肉中各挥发性成分的各嗅觉阈值与所测定的平均相对 含量，根据以下公式（1)计算各化合物的风味贡献值，取气味贡献值大于1的为甲鱼肉的主 要风味物质，从而得到甲鱼中主要的风味物质包括壬醛、庚二烯醛等9种化合物，详见表2。
[0069] 气味贡献值=相对含量/气味阈值（ug/kg) (1)
[0070] 以此9种风味物质为目标化合物，对不同固相微萃取条件下不同pH体系辅助固相 微萃取9种甲鱼鱼肉风味物质所测定的结果进行主成分分析（PCA)，结果如图7示。
[0071] 表2甲鱼肉中主要风味物质及其气味特征
[0072]
[0073] 由图7以看出，第一主成分（PC-1)的贡献率达80. 9%，3组萃取条件下5个pH值 辅助固相微萃取所测得结果随轴依次分布。各条件下不同的pH值辅助的样品测定结果明 显分开，其中PH2和pHll在第一主成分上的得分相近并明显高于其他pH值，不采用酸碱法 辅助（pH=7)的测定结果得分最低。由此可见在不同条件下，采用酸碱法辅助都可以明显 提高甲鱼肉中风味物质的富集效果及检测丰度。
【主权项】
1. 一种酸碱法辅助测定甲鱼肉中挥发性风味物质的方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 取待测甲鱼肉粉末，与盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液进行混合，得到混合液； (2) 采用顶空固相微萃取技术对混合液中的挥发性风味物质进行吸附萃取； (3) 利用气相色谱-质谱分析技术对挥发性风味物质进行鉴定。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐酸水溶液的pH为2~4 ;所述氢氧化 钠水溶液的pH为9~11。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐酸水溶液的pH为2 ;所述氢氧化钠水 溶液的pH为9。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液与甲鱼 肉粉末的质量比为1:1。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2)中，顶空固相微萃取采用 50/30 y mDVB/PDMS/CAR 萃取头。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，顶空固相微萃取前，将混合液置于50°C下预 热 30min。7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，顶空固相微萃取时，萃取温度为50°C，萃取 时间为30min。8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3)中，气相色谱分析时，采用以下程序 升温：初始温度40°C保持2min后，以5°C /min升温至180°C，再以10°C /min升温至280°C， 保持IOmin。9. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3)中，质谱分析条件为：采用EI源、 正离子检测，电离能量为70eV，离子源温度230°C，传输线温度280°C，扫描模式为全扫描， 扫描范围33~450m/z。
【专利摘要】本发明公开了一种酸碱法辅助测定甲鱼肉中挥发性风味物质的方法，该方法包括以下步骤：(1)取待测甲鱼肉粉末，与盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液进行混合，得到混合液；(2)采用顶空固相微萃取技术对混合液中的挥发性风味物质进行吸附萃取；(3)利用气相色谱-质谱分析技术对挥发性风味物质进行鉴定。本发明在检测前向甲鱼肉样品中加入酸性或者碱性的水溶液，调节了待检测样品的酸碱度，促进了甲鱼肉中挥发性风味物质的挥发能力，提高了萃取效率，进而提高了检测方法的灵敏度。
【IPC分类】G01N30/06
【公开号】CN105021743
【申请号】CN201510460752
【发明人】罗自生, 徐艳群
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月30日