一种磁性血小板吸附颗粒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属体外诊断试剂盒及新材料领域，具体涉及一种磁性血小板吸附颗粒及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞的细胞质脱落而成的，每个巨核细胞可产生 2000~7000个血小板。一个健康人每天生成血小板约1200亿个。血小板平均的分布在血 液中，循环血液中的血小板一般处于静止状态，当血管破裂时会大量聚集。正常人血液中的 血小板浓度为1〇〇~300X 109/L。一般情况下血小板呈双凸盘状，受到刺激后会伸出足突， 不规则状。直径约2~4 y m，厚0? 2~1. 5 y m，平均体积7 y m3。血小板没有细胞核，细胞 质呈淡蓝色，并含有黄色的颗粒。
[0003] 血小板在激活状态下降产生聚集反应，聚集（aggregation)指的是血小板彼此的 粘着，通常分两个时相。第一聚集相也叫可逆聚集相；第二聚集相也叫不可逆聚集相。引起 血小板聚集的物质叫致聚剂，也叫诱导剂。病理性致聚剂包括病毒、细菌、免疫复合物、药物 等。生理性致聚剂包括：二磷酸腺苷（ADP)、血栓烧A2 (Thromboxane A2)、胶原、凝血酶。
[0004] 而另一部分患者，尤其是一些冠脉PCI支架术后的患者，在使用阿司匹林+氯吡 格雷双联抗栓治疗过程中发生出血事件，被迫中断抗栓药物治疗、反复滴定合适的剂量，既 增加了患者痛苦，又进一步加剧了医患关系的紧张。在上述背景下，呼吁个体化抗血小板 药物的疗效监测、个体化药物治疗调整的呼声日渐高涨，而其中的涉及的核心技术血小板 功能检测仪，已经历60余年的发展，深究其工作原理无外乎以下四大类：1、光电比浊法：主 要包括经典的透光率集合度测定（LTA)法、VeiifyNo热# (Accumetrics，美国），前身为U1 tegra快速血小板功能分析仪（Ultegra RPFA)检测法等，使用光线穿过检测池，观察血小 板聚集过程中透光度由弱变强从而产生的光电流变化的曲线来测量血小板在各种促聚剂 引发下的聚集程度。2、血球计数法：主要包括美您、以及近期中国江苏英诺 华公司在此基础上学习、改良的血小板功能检测仪（863项目）CN201210006575、 CN201110425560、CN201220009703、CN201120531520、CN201220009721、CN201110425556、 CN201210006781，通过血球仪连续测量血小板在各种促聚剂引发下，血小板计数值由高到 低的变化曲线来推算血小板的聚集情况。3、黏度计检测法将原先用于工业用途的粘度计改 良后应用于凝血监测领域。主要包括第一代微孔粘度计一一PFA-100 (Siemens，德国），以及 后续的旋转运动粘度计--血栓弹力图分析仪（Thrombelastography，Hemonetics，美国）、 ('西芬斯办CFMS血栓弹力图仪，中国北京2012)和线型运动粘度计一一Sonoclot凝血与血 小板功能分析仪（Sienco,美国）。通过观察血小板聚集、凝血过程中血液凝块的粘度、弹性 等物理性状的改变来推算血小板功能。4、电阻抗检测法多见于专利文献中，观察在凝血过 程中血小板聚集导致的血液电阻抗变化继而推算出血小板功能，目前尚未见临床实际应用 的的商品化广品。
[0005] 目前国际主流的检测方法为Accumetrics公司的VeHfyNow#检测技术，如图1所 示，为Accumetrics公司的％rifyNow?.血小板功能检测试剂盒的结构，图2为Accumetrics 公司的血小板功能检测试剂盒中的血小板吸附颗粒示意图，其专利保护群中 的美国专利8, 574, 828、7, 790, 362、5, 922, 551陈述了一种使用P2Y12受体拮抗剂（代表药 物为噻氯吡啶、氯吡格雷等噻吩并吡啶类化合物）疗效检测的方法，其主要特征在于使用 "包裹GPIIb/IIIa受体的配体的聚苯乙烯或乳胶颗粒"的试剂，其含有"红外吸收染料"，在 800nm附近的红外波段通过光电比浊法检测P2Y12受体拮抗剂疗效的方法和装置。之所以 要使用"红外吸收染料"是因为US 5, 922, 551所提到的该产品早期使用了商品化的蓝色珠 子，在光源下发现其在氧合程度不同的全血样本中，由于氧合血红蛋白〇2Hb/脱氧血红蛋白 tHb消光度的不同导致测量值产生了较大的不确定度，因此自行制备了一种加有红外吸收 染料的珠子。美国专利7, 833, 793、8, 043, 826陈述了仅需要1滴血就通过荧光素/荧光素 酶检测ATP的消耗数量来实现阿司匹林疗效的方法和装置。
[0006] 美国专利7, 595, 169陈述了一种确定血小板聚集百分比法，应该指出的这份专利 的内容极为简单，仅仅是一个概念的名词解释，就如同注射用头孢曲松药品说明书，药学， 检验医学教科书这样的公开资料中所述的"某种药物的血浆蛋白结合率"其计算方法为 (被血浆蛋白吸附的药物八被血浆蛋白吸附的药物+游离药物）*1〇〇% )以及医学检测领 域类似的游离胆红素/总胆红素，游离三碘甲状腺素/三碘甲状腺素一般，所以这是从事该 领域的一般工程技术人员所能想到的常识性概念。
[0007] 美国专利7, 205, 115陈述了一种花生四烯酸在血小板功能测定法的反应试剂的 细节，详细陈述了的反应试剂的PH、粒径大小、反应物体积等细节，并划设了一个过于宽泛 的保护范围，其核心内容使用"一种抗氧化剂保护花生四烯酸"的方法在其实在食品、药品 中早已得到广泛共识并付诸于生产实践、产品营销宣传。美国专利7, 205, 115所述的花生 四烯酸是一种常见的食物成分，主要存在于花生油中，并最终被我国列入食品添加剂《GB 26401-2011花生四烯酸油脂》。而保护花生四烯酸的物质，诸如鱼肝油中的EPA(二十碳五 烯酸）和DHA (二十二碳六烯酸，俗称脑黄金），其能够抑制花生四烯酸转变为内过氧化物， 这在上世纪90年代中国史玉柱的巨人集团脑黄金产品的市场营销宣传（公共广播、电视、 报纸）中早已进入公共知识领域。类似的使用生育酚（主要成分维生素E)加入花生油以 防止油脂在烹调过程中过快氧化的做法早已通过鲁花、金龙鱼、福临门等油脂公司市场营 销宣传也早已为公众所知。因此美国专利7, 205, 115中的"一种抗氧化剂保护花生四烯酸" 也同样是一个从事该领域的一般工程技术人员所能想到的通用技术手段。
[0008] 美国专利7, 179, 652、6, 613, 573的检测方法，是基于血栓弹力图（TEG. RTM)的技 术，并没有使用光电比浊法。
[0009] 随着中国国内抗血小板药物（代表药物阿司匹林、氯吡格雷）个体化治疗需求的 日益增长，目前临床主要使用的血栓弹力图（TEG)技术由于其检测费用高（约400元/次） 测定时间长（10-30分钟）、不能进行批量分析、(血小板图）专利技术 的复杂性，导致其检测报告数据纷繁，甚至三甲医院的高年资医生、护士都难以读懂检测报 告，上述缺点使其难以在基层医疗机构开展。另一方面，目前国际公认上抗血小板药物检测 的主要方法主要是VerifylSkm#光电比浊法，其在国内刚刚取得批准文号上市，试剂盒价格 非常昂贵，因此尽早开发一种具有我国自主知识产权的血小板吸附颗粒作为体外诊断试剂 的核心材料，并继而研制相应的光比浊法血小板功能检测装置，其性能期望与 相当，但结构有所改进的体外诊断试剂检测装置，使其为患者提供更优的个体化医疗服务， 提高国内在该先进医疗器械制造领域的技术水平。
[0010] 为实现上述目标，本发明拟采用壳聚糖磁性微球包衣工艺来实现，所述的壳聚糖 磁性微球：以壳聚糖与磁性颗粒为原料制成的球形有机-无机物复合材料，近二十年来国 内外已有多篇文献报道了其制作工艺，检索文献列表：
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