一种黄芩素电化学检测方法及其专用电化学检测器的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种化学检测方法，更具体的说涉及一种黄芩素电化学检测方法及其专用电化学检测器。
技术背景
[0002]β -⑶(环状糊精，β -cyclodextrin)，是由七个葡萄糖单元组成的环状低聚糖，是环糊精中最易得到、价格最低、使用最多的一种，其疏水内腔和吸水表面组成环形，此结构可作为聚集位点使各种各样的客体分子聚集在空腔中。同时，β-CD具有水溶性和环境友好性，可以提高功能材料的水溶性和稳定性。Pd_GR(石墨烯/钯复合纳米材料)，结合了石墨烯比表面积大的优越性能和Pd纳米粒子良好的催化性能，利用β -CD和Pd-GR的优势，制备一种简单、实用、高效、灵敏、精确、价廉的快速选择性测定黄芩素的电化学传器，并尝试应用实际样品黄芩中黄芩素含量。
[0003]黄芩素(5，6，7-三羟黄酮)，是中药黄芩主要有效成分，是含量最高的黄酮类化合物之一。单体为黄色棱柱状结晶，溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、醋酸乙酯、热冰醋酸，微溶于氯仿和硝基苯，几乎不溶于水。黄芩素具有多种功效，如抗菌、抗病毒、抗过敏、抗血栓、抗凝血、抗癌、抑制炎症反应、保肝、利胆、利尿、清除自由基等，具有较好的临床应用价值，目前主要用于呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎、慢性阻塞性肺病、传染性肝炎、急慢性胃肠炎及细菌性痢疾、肾盂肾炎等，并显示出了较好的疗效。因此，开发一种快速、简便、高效的方法黄芩素检测分析方法具有重要的理论和实际意义。
[0004]现已经建立多种黄芩素的测定方法，主要有气相色谱、液相色谱、液相色谱和质谱联用、气相色谱和质谱联用、毛细管电泳等，这些方法具有很好的灵敏度，但是，往往需要较高的技术含量、繁杂的预处理过程且价格比较昂贵。与之相比，电化学传感器具有成本低、省时、制备简单、操作简便、灵敏度高、选择性好、能够实现微型化和在线检测等优点，在黄酮类药物检测方面有了广泛关注。Guo等成功制备了 2，6-二甲基-β-CD功能化石墨烯修饰电极用于同步检测黄酮类化合物异槲皮苷和黄芩素，并应用于实际样品人体血清中两物质的含量分析(Z.G.Liu, A.Zhang, Y.J.Guo, C.Dong, B1sensors and B1electronics58(2014)242 - 248)。Chen等利用分子印迹聚合物SBA-15成功测定了大鼠组织中黄芩素含量。到目前为止，利用β-CD和Pd-GR优良性能制备的电化学传感器应用于黄芩中黄芩素含量的测定尚未有报道。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明提供了一种黄芩素快速选择性检测方法，将中药材或中成药制剂粉碎成粉末，用无水乙醇搅拌提取12h，过滤定溶得到供试液。使用配置β-CD-Pd-GR/GCE纳米复合修饰电极电化学传感器对供试液进行检测分析，确定黄芩素的含量。
[0006]黄芩素快速选择性检测的专用电化学传感器；所述传感器的三电极体系中，以饱和甘汞电极为参比电极，铂丝为对电极，所述传感器的工作电极为:由超分子β-CD和功能化石墨烯Pd-GR修饰制备的β -⑶-Pd-GR/GCE纳米复合修饰电极。
[0007]所述β -⑶-Pd-GR纳米复合修饰电极的制备方法包括以下步骤:
[0008]1)将 1.016g 过硫酸钾(K2S208)、1.1136g 五氧化二磷(P205)、4.8mL 浓 H2S04M^置于50mL烧杯中，然后加入0.6g石墨粉，在85°C下水浴4.5h。得到的黑色物质称为预氧化物，将其抽滤后用二次蒸馏水进行洗涤，干燥。次日，在小于20°C的冰浴和搅拌条件下于预氧化物中缓慢加入24mL浓H2S0jP 3.0g研磨后的高锰酸钾(KMnO 4)。然后将混合物放在35°C的水浴中搅拌2h至溶液显棕灰色，逐滴加入50mL水稀释，半小时在搅拌下加入热的二次水140mL和30%的H202 2mL至溶液为亮黄色。洗涤过滤至溶液到达中性，抽滤，60°C下真空干燥12h，制备得到G0 (氧化石墨烯)。
[0009]2)取32mg粉末状的G0(氧化石墨烯)加入盛有60mL水的烧杯中，超声45min使其充分分散。然后将此均一的分散液置于圆底烧瓶中加入llOmL水，搅拌下加入55yL85wt.%的肼和385 μ L 25wt.%的氨，在95°C油浴条件下持续搅拌lh。将所得悬浮液抽滤，洗涤并在真空下干燥，制备得到GR(还原石墨烯)。
[0010]3)将150 μ L浓度为lg/mL的氯化钯和32g氧化石墨粉末加入盛有60mL水的烧杯中，超声2h使其充分分散。然后将分散液置于圆底烧瓶中加入110mL，用NaOH调节pH >13，加入4mL85%的水合肼。将混合液置于95°C油浴4h，取出后加7.5mL水，在室温下搅拌48h0抽滤、洗涤、真空40°C下烘干，得到Pd-GR。
[0011]4)将质量比2% β -⑶溶解到精制的Ν，Ν- 二甲基甲酰胺，超声lh，向溶液中加入Pd-GR粉末，使得Pd-GR浓度为0.25mg mL \超声混合均匀后，得到β -⑶-Pd_GR分散液。
[0012]5)取5 μ Li3 -CD - Pd_GR分散液滴涂到打磨干净的玻碳电极(GCE)表面，60°C干燥，制得β _⑶-Pd_GR纳米复合修饰电极。
[0013]本发明的有益技术效果是:本发明的黄芩素电化学传器的制备方法，其制备成本低廉、工艺简单、操作简易，使用本方法制备的电化学传感器不仅能够成功检测黄芩素，而且还具有灵敏度高，稳定性好。
【附图说明】
[0014]图1 β -⑶-Pd-GR/GCE纳米复合修饰电极的制备，中药黄芩中黄芩素的提取及其电化学检测流程图；
[0015]图2 β -CD - Pd-GR/GCE纳米复合修饰电极检测黄芩素的线性曲线图。
【具体实施方式】
[0016]实施例1 β -CD - Pd-GR/GCE纳米复合修饰电极的制备
[0017]步骤1:将 1.016g 过硫酸钾(K2S20s)、1.1136g 五氧化二磷(P205)、4.8mL*H2S0jg合置于50mL烧杯中，然后加入0.6g石墨粉，在85°C下水浴4.5h。得到的黑色物质称为预氧化物，将其抽滤后用二次蒸馏水进行洗涤，干燥。次日，在小于20°C的冰浴和搅拌条件下于预氧化物中缓慢加入24mL浓H2S0jP 3.0g研磨后的高锰酸钾(KMnO 4)。然后将混合物放在35 °C的水浴中搅拌2h至溶液显棕灰色，逐滴加入50mL水稀释，半小时在搅拌下加入热的二次水140mL和30 %的H202 2mL至溶液为亮黄色。洗涤过滤至溶液到达中性，抽滤，60°C下真空干燥12h，制备得到G0 (氧化石