质分析，有利于有效追踪合成过程 中产生的杂质。
【附图说明】
[0034] 图1是本发明实施例1中样品1的高效液相色谱图； 图2是本发明实施例1中样品2的高效液相色谱图； 图3是本发明实施例1中样品3的高效液相色谱图； 图4是本发明实施例1中样品4的高效液相色谱图； 图5是本发明实施例1中样品5的高效液相色谱图； 图6是本发明实施例1中样品6的高效液相色谱图； 图7是本发明实施例2中样品7的高效液相色谱图； 图8是本发明实施例3中样品8的高效液相色谱图； 图9是本发明实施例4中样品9的高效液相色谱图； 图10是本发明实施例5中样品10的高效液相色谱图； 图11是本发明实施例6中样品11的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局 限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范 围。
[0036] 在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均 可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规 方法。
[0037] 实施例1: 一种快诺丽衍生物及其中间体的杂质检测分析方法： (1)色谱条件： 色谱柱：C18,4. 6mmX25畑1，5Pm检测波长；240nm 进样量；1〇UL 流速：1. 5ml/min 柱温；3(TC 流动相：水、甲醇和己腊， (2)按下列操作方法进行分析，程序梯度洗脱同表1。
[0038] 操作；分别精密称取快诺丽衍生物或其合成所涉及中间体样品广6适量，置于容 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含Img样品的溶液，摇匀，精密量取10μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图见附图广6,结果见表2和表3。
[0039]表2
表3
由表2和表3的结果可W看出本方法用于快诺丽衍生物或其合成所涉及中间体样品检 测时，主峰与相邻杂质的分离度均大于1. 5,有良好的分离效果，用于庚酸快诺丽检测时所 有杂质各自之间分离度均大于1. 5,适合准确定量各个杂质。
[0040] 实施例2 一种庚酸快诺丽的杂质检测分析方法： (1)色谱条件： 色谱柱：C18,4. 6mmX25畑1，5Pm检测波长；230nm 进样量；1〇UL 流速：1. 3ml/min 柱温；4(TC 流动相：水、甲醇和己腊 (2)按下列操作方法进行分析，程序梯度洗脱同表1。
[0041]操作；精密称取庚酸快诺丽样品7适量，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻 度，制成每1ml含Img样品的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色 谱图见附图7,结果见表4。
[0042] 表 4
由表4的结果可W看出该方法用于庚酸快诺丽样品检测时，主峰与相邻杂质的分离度 大于1.5,有良好的分离效果。
[004引 实施例3 一种庚酸快诺丽的杂质检测分析方法： (1) 色谱条件： 色谱柱；C18,4. 6mmX25畑1，5化 检测波长；254nm 进样量；10μΙ 流速：1.Oml/min 柱温；25°C 流动相：水、甲醇和己腊， (2) 按表5进行程序梯度洗脱 表5
操作：精密称取庚酸快诺丽样品8适量，适当容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制 成每1ml含Img样品的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图 见附图8,结果见表6。
[0044]表 6
由表6的结果可W看出该方法用于庚酸快诺丽样品检测时，主峰与相邻杂质的分离 度大于1.5,有良好的分离效果。
[004引 实施例4 一种庚酸快诺丽的杂质检测分析方法： (1) 色谱条件： 色谱柱：C18,4. 6mmX25畑1，5Pm检测波长；240nm 进样量；10μL 流速；2ml/min 柱温；4(TC 流动相：水、甲醇和己腊， (2) 按表7进行程序梯度洗脱 表7
操作：精密称取庚酸快诺丽样品9适量，适当容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制 成每1ml含0. 5mg样品的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱 图见附图9,结果见表8。
[0046]表 8
由表8的结果可W看出该方法用于庚酸快诺丽样品检测时，主峰与相邻杂质的分离度 大于1.5,有良好的分离效果。
[0047] 实施例5 一种庚酸快诺丽的杂质检测分析方法： (1) 色谱条件： 色谱柱；C18,4. 6mmX25畑1，5化 检测波长；240nm 进样量；10μΙ 流速：1. 5ml/min 柱温；25°C 流动相：水、甲醇和己腊， (2) 按表9进行程序梯度洗脱 表9
操作：精密称取庚酸快诺丽样品10适量，适当容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制 成每1ml含Img样品的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图 见附图10,结果见表10。
[0048]表 10
由表10的结果可W看出该方法用于庚酸快诺丽样品检测时，主峰与相邻杂质的分离 度大于1.5,有良好的分离效果。
[004引 实施例6 一种庚酸快诺丽的杂质检测分析方法： (1) 色谱条件： 色谱柱：C18,4. 6mmX25畑1，5Pm检测波长；240nm 进样量；10μL 流速：1. 5ml/min 柱温；3(TC 流动相：水、甲醇和己腊， (2) 按表11进行程序梯度洗脱 表11
操作：精密称取庚酸快诺丽样品11适量，适当容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制 成每1ml含2mg样品的溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图 见附图11，结果见表12。
[0050] 表 12
由表12的结果可W看出该方法用于庚酸快诺丽样品检测时，主峰与相邻杂质的分离 度大于1.5,有良好的分离效果。
[0051] 上述优选实施例只是用于说明和解释本发明的内容，并不构成对本
【发明内容】
的限 巧||。尽管发明人已经对本发明做了较为详细地列举，但是，本领域的技术人员根据
【发明内容】
部分和实施例所掲示的内容，能对所描述的具体实施例做各种各样的修改或/和补充或采 用类似的方式来替代是显然的，并能实现本发明的技术效果，因此，此处不再一一赏述。本 发明中出现的术语用于对本发明技术方案的阐述和理解，并不构成对本发明的限制。
【主权项】
1. 一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于包括： (1) HPLC色谱分析主要参数： a、 色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； b、 流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0~25min，按体积百分比， 流动相水：甲醇：乙臆=45%~20% : 0%~35% : 30%~73%，水+乙醇+乙臆=100% ; c、 检测波长为230~254nm ; (2) 检测方法： 取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样 品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。2. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的炔诺酮衍生物选自符合式I结构的化合物，所述的中间体选自符合式Π 结构的 化合物，其中，R 为-C0CH3, -C0(CH2)4CH3, -C0(CH2)5CH3, -C0(CH2)6CH3 ;其中 R' 为-H，-CH20H。3. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的步骤（2)中流速为1~2ml/min。4. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的步骤（2)中柱温为20~40°C。5. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的样品溶液的浓度为0. 5~2mg/ml。6. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的进样中的进样量为5~20μ L。7. 如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在 于，所述的流动相梯度洗脱之后，进行第二梯度洗脱：25~50min，水、甲醇和乙腈组成流动 相，梯度洗脱的体积百分比为：流动相水：甲醇：乙腈=40%~0% : 35%~0% : 30%~100% ，XK +甲醇+乙腈=100%。8. 如权利要求7所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征 在于，所述的第二梯度洗脱之后，进行第三梯度洗脱：50~60min，水、甲醇和乙腈组成流动 相，梯度洗脱的体积百分比为：流动相水：甲醇：乙腈=〇%~40% :0%: 100%~60%，水+甲 醇+乙腈=100%。9. 一种庚酸炔诺酮及其中间体的HPLC杂质检测分析方法： a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； b、 流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0~25min，按体积百分比， 流动相水：甲醇：乙臆=45%~20% : 0%~35% : 30%~73%，水+甲醇+乙臆=100% ; c、 检测波长为230-254nm ; d、 取庚酸炔诺酮或其中间体·适量，精密称定甲醇溶解并稀释成浓度为0. 5-2 mg/ml 的样品溶液，摇匀，进样10 μ L，在l-2ml/min的流速和25-40°C的柱温下进行高效液相色谱 分析，记录色谱图， 所述的中间体为符合式::结构的化合物，其中 R' 为-H，-CH20H。10. 如权利要求9所述的一种庚酸炔诺酮及其中间体的HPLC杂质检测分析方法，其特 征在于，在所述的流动相梯度洗脱之后，进行第二梯度洗脱：25~50min，水、甲醇、乙腈三 相流动相梯度洗脱的体积百分比为：流动相水：甲醇：乙腈=40%~0% : 35%~0% : 30%~ 100% ,水+甲醇+乙腈=100%。11. 如权利要求10所述的一种庚酸炔诺酮及其中间体的HPLC杂质检测分析方法，其特 征在于，在所述第二梯度洗脱之后，进行第三梯度洗脱：50~60min，水、甲醇、乙腈三相流 动相梯度洗脱的体积百分比为：流动相水：甲醇：乙腈=〇%~40% :0%: 100%~60%，水+ 甲醇+乙腈=100%。
【专利摘要】本发明涉及一种甾体化合物的杂质分析方法，特别是涉及一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，包括：（1）选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为水、甲醇和乙腈；检测波长为230～254nm；（2）取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明可快速准确的实现炔诺酮衍生物的杂质分析，尤其适用于庚酸炔诺酮的杂质分析，同时可用于炔诺酮衍生物中间体的杂质分析，可有效追踪合成过程中产生的杂质。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105277633
【申请号】CN201410358984
【发明人】王咏, 芦飞, 李文君
【申请人】浙江仙琚制药股份有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年7月26日