合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。
[0037] (10)-种利用免疫层析法的RSV检测方法，包括W下步骤：
[0038] (a)向在判定部位固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白 特异性结合的抗体的免疫层析装置供给含有样本的样本液的步骤；
[0039] 化）使步骤（a)中供给的样本液与标记试剂一起通过所述判定部位的步骤；
[0040] (C)在判定部位，使含有标记试剂的样本液与固定化的抗体接触的步骤；W及
[00川 （d)在检测到由标记试剂引起的显色的情况下将样本判定为"RSV阳性"的步骤。
[0042] (11)根据上述（10)所述的方法，还包括在向免疫层析装置供给之前，用样本稀释 液稀释样本的步骤。
[0043] (12) -种改善RSV的检测率的方法，其利用了上述（10)或（11)中任意一项所述 的方法。 W44] 发明的效果
[0045] 本发明的免疫层析装置中，使与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结合 的抗体固定化在层析介质上从而形成判定部位。通过在同一个判定部位上混合使用运两 种抗体，可W高效捕获RSV抗原，与各抗体单独固定的检查试剂盒相比，可W增强阳性样本 测定时的信号，并且可W提供灵敏度高、可靠性高、且简便的RSV的迅速诊断试剂盒。由于 阳性信号被增强，因此即使样本中所含病毒量较少也能高灵敏度地检测RSV，并且即使是由 感染初期的患者得到的样本，也能正确地判定RSV的存在。另外，即使根据需要而将样本稀 释，也能高灵敏度地检测RSV，因此可W防止鼻拭子、咽拭子等粘性高的样本直接展开时产 生的问题，即，样本无法在层析介质中移动而无法判定，或者样本中RSVW外的成分吸附在 层析介质中从而产生非特异性的信号运样的问题。
[0046] 此外，即使在样本中所含的F蛋白的抗原性消失的情况下，固定在本发明的判定 部位的与N蛋白特异性结合的抗体也能将RSV抗原捕获在判定部位上，因此本发明能够将 含RSV的样本正确地判定为阳性。例如即使F蛋白的抗原性消失也能确切地判定RSV的存 在，因此有可能在对F蛋白的抗原性有影响运样的严酷条件下对样本进行前处理或保存。 由此，对于传统上由于粘性过高等原因而不适于免疫层析法的样本，通过前处理或适当设 定保存条件，可W改性为能在预定时间内在层析介质中移动的状态，并且能够实现迅速而 正确的检测，而与样本的状态无关。
[0047] 本发明的免疫层析装置通过组合使用针对F蛋白的抗体和针对N蛋白的抗体，不 仅能够高灵敏度地检测低浓度的RSV，而且能够不遗漏且正确地将含有充分量的病毒的样 本判定为阳性。其结果，与传统的利用免疫层析法的检测试剂盒相比，能够大幅提高病毒的 检测率，并且可W显著改善与其他检测方法的阳性一致率。因此，本发明能够提供兼具与其 他检查方法相当的病毒检测率、W及免疫层析法特有的简便且迅速的优点的有用的RSV检 测方法。
【附图说明】 W48][图U图1是示出免疫层析装置的概况的截面图。免疫层析装置通常由试样添加 部（1)、具有判定部位（4)的层析介质（3)、吸收部（5)和底板（6)构成，并且可W任选设置 标记试剂保持部（2)。
【具体实施方式】
[0049] 进一步详细说明本发明的实施方案。
[0050] 本发明的特征在于，在判定部位上使用与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与N 蛋白特异性结合的抗体运二者，并且通过利用免疫层析法的原理，检测样本中RSV的F蛋白 和/或N蛋白，由此判定样本中RSV的存在。
[0051] 本发明中RSV的"与F蛋白特异性结合的抗体"是指特异性识别、结合对人有感染 性的RSV的F蛋白的抗体。
[0052] RSV是归属于副粘病毒科的RNA病毒的一种，分为A型和B型两个亚型。RSV的基 因序列已被确定。
[0053]RSV的F蛋白是存在于RSV表面的3种糖蛋白中的一种。F蛋白也称为融合蛋白， 其促进病毒的被膜和易感细胞的细胞膜的融合，并使病毒的核糖核蛋白能够侵入细胞质。F 蛋白还促进病毒感染细胞和与其相邻的细胞的细胞膜的融合，由此形成合胞体。
[0054] F蛋白是通过切断称为FO的F蛋白前驱体而生成的约50kDa的Fl多肤和约20kDa 的F2多肤通过二硫键结合而成的约70kDa的异二聚体蛋白。
[0055] 若干RSV株的F蛋白的氨基酸序列是已知的，（例如）RSVLong株的氨基酸序列 已在NCBI的GenBank数据库中作为编录号P12568公布。
[0056] 本发明中与RSV的F蛋白特异性结合的抗体只要是与对人有感染性的RSV株的F 蛋白特异性结合的抗体即可，可W是识别任意抗原决定基的抗体，可W是识别Fl多肤上的 抗原决定基的抗体、识别F2多肤上的抗原决定基的抗体、或者识别它们通过二硫键结合产 生的立体的抗原决定基的抗体。然而，为了防止由亚型不同而导致的病毒漏检，优选识别 RSV的亚型A和B中共同的抗原决定基、并且与亚型A和B中任何一个的病毒株的F蛋白都 结合的抗体。
[0057] 本发明中RSV的"与N蛋白特异性结合的抗体"是指特异性识别、结合对人有感染 性的RSV的N蛋白的抗体。
[0058]RSV的N蛋白也称作核蛋白，由391个氨基酸残基构成。N蛋白是称作核衣壳的核 糖核蛋白复合体的构成成分，并形成包围RSV的基因组RNA的螺旋结构。若干RSV株的N 蛋白的氨基酸序列是已知的，例如，RSVLong株的氨基酸序列已在NCBI的GenBank数据库 中作为编录号DD857370公布。N蛋白的氨基酸序列高度保存在亚型A和B的RSV株之间。
[0059] 本发明中与RSV的N蛋白特异性结合的抗体只要是与对人有感染性的RSV株的N 蛋白特异性结合的抗体即可，也可W是识别N蛋白上所有抗原决定基的抗体。然而，为了防 止由亚型不同导致的病毒漏检，优选识别RSV的亚型A和B中共同的抗原决定基、并与亚型 A和B中任何一个的病毒株的N蛋白都结合的抗体。
[0060] 作为本发明的抗体，可W是单克隆抗体，也可W是多克隆抗体，还可W是它们的抗 原结合片段。然而，从高结合亲和性、供给的稳定性、产品的品质管理的容易度等来考虑的 话，优选为单克隆抗体。
[0061] 可W在本发明中使用的抗体可W是根据已知的方法制造的，也可W从商业上得 到。
[0062] 本发明的识别F蛋白的抗体、或识别N蛋白的抗体的制造可通过使用RSV的F蛋白 或N蛋白作为免疫原，并将其给予小鼠、大鼠、豚鼠、狗、山羊、绵羊、猪、马和牛等产生抗体 的动物中来进行。关于作为免疫原使用的RSV的F蛋白或N蛋白，只要能够发挥作为免疫 原的作用即可，对其给予方式没有特别限定，例如，W纯化RSV、RSV感染细胞或其提取物、 纯化的蛋白、或合成了蛋白的氨基酸序列的一部分的肤的方式给予。在合成肤的情况下，F 蛋白和N蛋白的氨基酸序列如上所述是已知的。
[00例本发明中所用的抗体为多克隆抗体的情况下，可根据常规方法制造。例如，从上述 给予了免疫原的产生抗体的动物中采取血液，并与RSV的F蛋白或N蛋白进行抗原抗体反 应，通过亲和层析提纯等方法（该方法使用了结合有RSV的F蛋白或N蛋白的载体）来得 到与RSV的其他成分实质上不发生抗原抗体反应的免疫球蛋白组分。
[0064]本发明中所用的抗体为单克隆抗体的情况下，例如，可按照常规方法通过制备产 生目标抗体的杂交瘤来制造抗体。产生抗体的杂交瘤的制备可W通过（例如）W下方式进 行：从上述给予了免疫原的产生抗体的动物中取得脾脏细胞，并用已知的方法（例如，参照 化化re, 256:495-497(1975))使骨髓瘤细胞等肿瘤细胞与细胞融合。 阳〇化]作为从通过细胞融合所得的杂交瘤中筛选产生目标抗体的杂交瘤的方法，例如， 可W通过使用固定了F蛋白或N蛋白的微孔板的固定化ISA等方法来进行。
[0066] 本发明的抗体可W运样制备：在通常的细胞培养用的培养基中培养产生该抗体的 杂交瘤，并从培养上清液中回收从而制备。另外，也可W运样制备：通过给予到杂交瘤所来 源的动物的腹腔内，从而胆存腹水，并从该腹水中回收来制备。
[0067] 关于本发明的识别F蛋白的抗体或识别N蛋白的抗体，除了可如上所述制造W外， 还可W(例如）像特表2004-511807号公报所公开的那样，从多个制造商商购得到。作为 本发明的抗体，也可W使用像运样可商购得到的抗体。
[0068] 本发明的"免疫层析装置"实质上由试样添加部、层析介质和吸收部构成，并且可 W任选设置标记试剂保持部。
[0069] 本发明中所用的"层析介质"由多孔性的膜形成，只要能通过毛细管现象使含有样 本的样本液在其中移动即可，没有特别限定，可优选使用孔径平均为0. 3~15ym的多孔 膜。适当的层析介质是由不与溶解在