叔壬基苯基酸（商品名"TritonN"系列）等。运些表面活性 剂可W单独使用，也可W两种W上混合使用。非离子性表面活性剂的含量没有特别限定，但 是可在相对于检体稀释液总重量为0.Ol~10. 0重量％的范围内使用，优选在0. 1~5. 0 重量％的范围内使用，更优选在0. 1~1.0重量％的范围内使用，进一步优选在0.3~1.0 重量％的范围内使用。
[0093] 作为本发明的稀释液中所用的乙締基类水溶性聚合物，优选具有含氧原子和氮原 子的极性基团的乙締基类水溶性聚合物，可W列举（例如）具有丙締酷胺、甲基丙締酷胺、 二甲基丙締酷胺、二甲基甲基丙締酷胺、乙締基化咯烧酬等乙締基类单体的双键断裂的结 构单元的聚合物。本发明的乙締基类水溶性聚合物也可W是乙締醇、醋酸乙締醋、丙締酸烧 基醋等具有含氧原子的极性基团的乙締基类单体W(例如）50摩尔％ ^下、优选30摩尔％ W下、特别优选15摩尔％W下的比例共聚而成的聚合物。作为本发明的乙締基类水溶性聚 合物优选的具体例子，可W列举聚乙締基化咯烧酬、二甲基丙締酷胺/乙締基化咯烧酬共 聚物（二甲基丙締酷胺的共聚比例为50摩尔％W下的共聚物）、乙締醇/乙締基化咯烧酬 共聚物（乙締醇的共聚比例为50摩尔％W下的共聚物）、醋酸乙締醋/乙締基化咯烧酬共 聚物（醋酸乙締醋的共聚比例为20摩尔％W下的共聚物）等非离子性的共聚物。运些乙 締基类水溶性聚合物的分子量为1万~100万、更优选为10万~100万、进一步优选为20 万~50万。乙締基类水溶性聚合物的含量没有特别限定，但相对于样本稀释液整体的重量 可W在0.01~5.0重量％的范围内使用，优选在0. 1~2.0重量％的范围内使用。
[0094] 优选的样本稀释液的组成为含有0. 1~1重量％的非离子表面活性剂、0. 05~ 0. 2M的碱金属无机盐、抑为7~11的缓冲剂、W及0. 1~1重量％的乙締基类水溶性聚 合物的水溶液。更优选为含有0. 1~1重量％的HLB值为13~18的非离子表面活性剂、 0. 05~0. 2M的碱金属无机盐、抑为7~11的Tris缓冲剂或Good'S缓冲剂、W及具有含 氧原子和氮原子的极性基团的0. 1~1重量％的乙締基类水溶性聚合物的水溶液。
[0095]本发明的样本稀释液可W用来稀释鼻拭子等粘度高、含固态物质的样本。通过用 样本稀释液稀释样本，防止样本堵塞层析介质并使样本的移动变得容易。另外，也可W防止 溶解在样本中的成分在层析介质上的非特异性吸附。
[0096]本发明的样本稀释液也可W作为用W展开液量少的样本的展开液使用。在样本的 液量少、供给到试样添加部的样本无法到达吸收部的情况下，通过追加供给本发明的样本 稀释液，从而确保样本通过判定部位并到达吸收部。
[0097]样本稀释液与免疫层析装置一起包含在本发明的检测试剂盒中。
[0098]本发明的RSV检测用试剂盒至少含有免疫层析装置和样本稀释液，并任选包含标 记试剂溶液。
[0099]此外，本发明的检测用试剂盒根据需要也可W包含样本取样装置、样本过滤器、阳 性对照和阴性对照。样本取样装置可根据样本的性质适当选择，可W列举（例如）消毒棉 签等。样本过滤器用于通过（例如）对采集的样本本身或者用样本稀释液稀释的样本进行 过滤来除去固态物质。 阳100] 下面说明本发明的检测RSV的原理。 阳101] 若将含有RSV抗原的样本液供给到免疫层析装置的试样添加部，则样本液通过毛 细管现象到达层析介质，并沿层析介质移动。 阳102] 通过在供给前将样本液与标记试剂溶液混合、或者使保持在标记试剂保持部的标 记试剂溶解于样本液、或者在样本液供给后供给标记试剂溶液，从而使样本液所含的RSV 抗原与标记试剂结合。 阳103]RSV抗原与标记试剂一起通过层析介质的判定部位。通过样本液与抗体的接触，固 定的抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体将RSV抗原捕获在判定部位。 阳104] 剩余的样本和标记试剂进一步沿着层析介质移动从而在吸收部被吸收。
[0105]样本含有RSV抗原的情况下，与标记试剂结合的F蛋白抗原和/或N蛋白抗原在 判定部位被捕获，因此在判定部位出现肉眼可见的信号。目p，判定部位出现的明显的信号意 味着样本含有RSV，并将样本判定为阳性。
[0106] 另一方面，在判定部位与标记试剂结合的RSV抗原未被W充分的量捕获的情况 下，判定部位不出现信号。运通常意味着样本不含RSV，或者即使含RSV，其量也在检测限W下，并将样本判定为阴性。 阳107] 根据本发明的RSV检测方法的具体步骤示例如下。
[0108] (1)向在判定部位固定有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特 异性结合的抗体的免疫层析装置供给样本液；
[0109] (2)与样本液同时或之后向免疫层析装置供给标记试剂溶液；
[0110] (3)使样本与标记试剂一起通过所述判定部位，并使样本与固定在判定部位的抗 体接触； 阳111] (4)在判定部位，检测标记试剂引起的显色； 阳11引 妨在检测到显色的情况下将样本判定为"RSV阳性"，在未检测到显色的情况下 将样本判定为"RSV阴性"。
[0113] 需要说明的是，步骤（1)中，样本液也可W是用样本稀释液稀释的样本。另外，步 骤（2)是任选的，例如在免疫层析装置中设置有标记试剂保持部的情况下可W省略。
[0114] 利用上述步骤可W进行样本中所含RSV的检测。特别是，与利用传统的免疫层析 法的检测方法相比，通过利用上述的步骤进行RSV的检测，可W大幅提高病毒的检测率。
[0115] 下面，利用实施例对本发明更具体地进行说明，但本发明并不受运些实施例的任 何限定。 阳116] 实施例 阳117](实施例1) 阳11引 （1)抗RSV单克隆抗体的制作
[0119] 用纯化RSV株或RSV感染细胞对BALB/c小鼠免疫，并通过采血确认针对RSV的F 蛋白或N蛋白的抗体值的上升。从确认抗体值上升的小鼠上摘出脾脏，通过凯勒等人的方 法化Ohleretal.，化Uire，vol，256，p495-497(1975))使之与小鼠骨髓瘤细胞融合。
[0120] 将所得融合细胞（杂交瘤）在37°C的恒溫箱中培养，通过使用固定了RSV的F蛋 白抗原或N蛋白抗原的板的ELISA来确认培养上清液的抗体值。针对分别来源于RSV的亚 型A和B的F蛋白或N蛋白，选择确认了培养上清液中的抗体值上升的杂交瘤。进一步进 行克隆W纯化（单克隆化）杂交瘤。 阳121] 将单克隆化的抗体产生杂交瘤腹腔内给予进行了姥較烧处理的BALB/c小鼠，约2 周后，采集含有抗体的腹水。使用ProteinA柱层析（アアシ卡厶公司制造）利用亲和纯化 从所得腹水中纯化IgG,从而得到抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆抗体。 阳122] (2)层析介质的判定部位的制作 阳123] 将上述（1)制作的抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆抗体W重量比1:1混合， 并用含5重量％异丙醇的憐酸缓冲液（pH7. 4)稀释到0. 5mg/mL的浓度从而制作抗体溶液。 [0124] 使用抗体涂布机度ioDot公司制造）将上述抗体溶液涂布到25X2. 5cm的硝化纤 维素膜（Sy术六公司制造：HF120)上，并在50°C下干燥30分钟，然后在室溫下干燥过夜， 从而在层析介质上制作判定部位。 阳125] (3)标记试剂溶液的制作
[0126] 使用与用于判定部位制作的抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体不同的从克隆所获得的 抗F蛋白抗体或抗N蛋白抗体，从而进行标记试剂的制作。 阳127] 向0. 5血金胶体悬浊液（田中貴金属工業社制造：平均粒径40nm)中加入0. 1血 用肥阳S缓冲液（pH7. 5)稀释到0.Img/mL浓度的抗F蛋白单克隆抗体或抗N蛋白单克隆 抗体，在室溫下静置10分钟。接着，加入0.ImL含10重量％牛血清白蛋白的肥阳S缓冲液 (pH7. 5)，并在室溫下静置10分钟。其后，充分揽拌，然后W8000Xg进行离屯、分离15分钟， 除去上清液后，加入0.ImL含1重量％牛血清白蛋白的憐酸缓冲液（pH7. 4)，从而制作含有 抗F蛋白抗体的标记试剂溶液或含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液。 阳12引 （4)免疫层析装置的制作
[0129] 将如上制作的含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液和含有抗N蛋白抗体的标记试剂 溶液W体积比1:1混合。向200yL混合后的标记试剂溶液中加入IOOiiL25重量％的海 藻糖水溶液，将所得的溶液均匀添加到16mmX100mm的玻璃纤维垫（Sy术六公司制造） 上，然后通过真空干燥机干燥，从而制作标记试剂保持部。然后，将具有判定部位的层析介 质、标记试剂保持部、作为试样添加部的玻璃纤维制的样本垫、用来吸收剩余的样本和标记 物的吸收垫粘贴在塑料制的底板上。并且用切割机切成宽5mm从而制成免疫层析装置。 阳130] (5)样本稀释液的制作 阳131] 制作由0.