5%Tween20、0. 6%聚乙締基化咯烧酬（PVP)K-90(分子量36万）、含有 1.0%牛血清白蛋白和150mM氯化钢的Tris缓冲溶液（P册.0)形成的溶液，并作为用于稀 释处理鼻拭子、咽拭子、鼻吸液、鼻涕或洗鼻液等样本的样本稀释液。 阳132] 化）测定
[0133] 使用如上制作的免疫层析装置和样本稀释液，按照W下的方法判定样本中的RS 病毒存在与否。
[0134]用上述样本稀释液将从感染RSV的人采集的鼻涕稀释10倍、50倍、100倍。将运 些试样120yL供给到免疫层析装置的样本垫上使之展开，并在10分钟后用肉眼进行判定。 判定部位上可W明显地确认到红线的设为"+++"，可W确认到红线的设为"++"，可W确认 到红线但颜色较淡的设为"+"，未确认到红线的设为结果在表1中示出。 阳135](比较例1) 阳136] (1)层析介质的判定部位的制作
[0137] 仅使用抗F蛋白单克隆抗体，用与上述实施例1的（2)相同的方法制作层析介质 的判定部位。使用的抗F蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于相同 克隆的抗体。 阳13引 （2)免疫层析装置的制作
[0139] 用与上述实施例1的（3)相同的方法，制作仅含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液， 并用与上述实施例1的（4)相同的方式制作免疫层析装置。
[0140] 做测定 阳141] 使用上述实施例1的（5)所记载的样本稀释液，用与实施例1的（6)相同的方式， 进行样本的测定。结果在表1中示出。 阳1创（比较例。 阳143] (I)层析介质的判定部位的制作
[0144] 仅使用抗F蛋白单克隆抗体，用与上述实施例1的（2)相同的方式制作层析介质 的判定部位。使用的抗F蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于不同 克隆的抗体。
[0145] (2)免疫层析装置的制作 阳146] 用与上述实施例1的（3)相同的方法，制作仅含有抗F蛋白抗体的标记试剂溶液， 并用与上述实施例1的（4)相同的方式制作免疫层析装置。 阳147]做测定
[0148] 使用上述实施例1的（5)所记载的样本稀释液，用与实施例1的（6)相同的方式， 进行样本的测定。结果在表1中示出。 阳149](比较例如 阳150] (1)层析介质的判定部位的制作 阳151] 仅使用抗N蛋白单克隆抗体，用与上述实施例1的（2)相同的方式制作层析介质 的判定部位。使用的抗N蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于相同 克隆的抗体。 阳152] (2)免疫层析装置的制作 阳153] 用与上述实施例1的（3)相同的方法，制作仅含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液， 并用与上述实施例1(4)相同的方式制作免疫层析装置。
[0154]做测定
[0K5] 使用上述实施例1的（5)所记载的样本稀释液，用与实施例1的（6)相同的方式， 进行样本的测定。结果在表1中示出。
[0156](比较例4)
[0157] (1)层析介质的判定部位的制作
[0158] 仅使用抗N蛋白单克隆抗体，用与上述实施例1的（2)相同的方式制作层析介质 的判定部位。使用的抗N蛋白单克隆抗体是与实施例1的判定部位所用的抗体来源于不同 克隆的抗体。
[0159] (2)免疫层析装置的制作 阳160] 用与上述实施例1的（3)相同的方法，制作仅含有抗N蛋白抗体的标记试剂溶液， 并用与上述实施例1的（4)相同的方式制作免疫层析装置。 阳161] (3)测定
[0162] 使用上述实施例1的（5)所记载的样本稀释液，用与实施例1的（6)相同的方式， 进行样本的测定。结果在表1中示出。 阳16引表1 [0164]
阳1化](实施例2)判定部位中抗体比率的研究
[0166] (1)层析介质的判定部位的制作
[0167] 用与上述实施例1的（2)相同的抗F蛋白单克隆抗体和抗N蛋白单克隆抗体进行 判定部位的制作。使抗F蛋白抗体（抗FP抗体）和抗N蛋白抗体（抗NP抗体）的混合比 变为2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5，用与上述实施例1的（2)相同的顺序制作判定部位。 阳1側 似免疫层析装置的制作
[0169] 用与上述实施例1的（3)相同的方法，制作含有抗F蛋白抗体的标记试剂和含有 抗N蛋白抗体的标记试剂。使它们的混合比变为2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5，使用各混合溶 液，用与实施例1的（4)相同的方式制作免疫层析装置。 阳170]做测定 阳171] 使用上述实施例1的（5)所记载的样本稀释液，用与实施例1的（6)相同的方式， 进行样本的测定。结果在表2中示出。 阳172] 样本1的测定（样本为50倍稀释）
[0175]样本2的测定（样本为50倍稀释）
阳178]根据表I的比较例3和4的结果，样本I和样本2均存在RSV抗原。然而，样本2所含的F蛋白抗原容易通过抗F蛋白抗体捕获，与此相对，样本1所含的F蛋白抗原难W通 过抗F蛋白抗体捕获。尽管样本中的F蛋白的捕获难易程度具有多样性，表2和3的结果 表明，在判定部位固定了抗F蛋白抗体和抗N蛋白抗体的情况下，通常抗N蛋白抗体的比率 高的一方得到较强的阳性信号。目P，通过更多地在判定部位固定抗N蛋白抗体，可W提供无 论样本中的RSV抗原的状态如何，都能高灵敏度地检测的免疫层析装置。 阳179]产业实用性
[0180]本发明通过在判定部位组合使用与F蛋白特异性结合的抗体和与N蛋白特异性结 合的抗体，与传统的利用免疫层析法的检测试剂盒相比，提供了高灵敏度且RSV的检测率 显著提高的免疫层析装置。 阳181]因此，本发明在RSV感染症的临床检查的产业领域中是有用的，具有产业实用性。
【主权项】
1. 一种免疫层析装置，其含有这样的层析介质而构成，该层析介质具有固定化有与 RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。2. 根据权利要求1所述的免疫层析装置，其实质上由试样添加部、层析介质和吸收部 构成。3. 根据权利要求2所述的免疫层析装置，还含有标记试剂保持部。4. 根据权利要求1至3中任意一项所述的免疫层析装置，其中与F蛋白特异性结合的 抗体是与亚群A和亚群B各自的RSV株的F蛋白中的任一者或者这二者特异性结合的抗体。5. -种利用免疫层析法的RSV的检测用试剂盒，其含有免疫层析装置和样本稀释液， 该免疫层析装置含有这样的层析介质而构成，该层析介质具有固定化有与RSV的F蛋白特 异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。6. 根据权利要求5所述的检测用试剂盒，其中免疫层析装置实质上由试样添加部、层 析介质和吸收部构成。7. 根据权利要求6所述的检测用试剂盒，其中免疫层析装置还含有标记试剂保持部。8. 根据权利要求6所述的检测用试剂盒，其中检测用试剂盒还含有标记试剂溶液。9. 一种RSV的检测方法，其使用了免疫层析装置，该免疫层析装置具有固定化有与RSV 的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异性结合的抗体的判定部位。10. -种利用免疫层析法检测RSV的方法，包括以下步骤： (a) 向在判定部位固定化有与RSV的F蛋白特异性结合的抗体和与RSV的N蛋白特异 性结合的抗体的免疫层析装置供给含有样本的样本液的步骤； (b) 使在步骤（a)中供给的样本液与标记试剂一起通过所述判定部位的步骤； (c) 在判定部位，使含有标记试剂的样本液与固定化的抗体接触的步骤；以及 (d) 在检测到由标记试剂引起的显色的情况下将样本判定为"RSV阳性"的步骤。11. 根据权利要求10所述的方法，还包括在向免疫层析装置供给之前，用样本稀释液 稀释样本的步骤。12. -种改善RSV的检测率的方法，其利用了根据权利要求10或11中任意一项所述的 方法。
【专利摘要】本发明提供一种在层析介质的判定部位上使用了与RSV的F蛋白特异性结合的抗体、RSV的简便且高灵敏度的免疫层析装置以及利用免疫层析法的检测用试剂盒，以及使用了它们的RSV的检测方法。本发明涉及在层析介质的判定部位上不仅使与RSV的F蛋白特异性结合的抗体固定，还使与RSV的N蛋白特异性结合的抗体固定化的免疫层析装置和利用免疫层析法的检测用试剂盒，以及使用了它们的RSV检测方法。
【IPC分类】G01N33/543, G01N33/569
【公开号】CN105324669
【申请号】CN201480035447
【发明人】小坂美惠子, 田口宏美, 酒井登, 伊藤大辅, 岩本久彦
【申请人】爱芙乐赛制药株式会社, 田中贵金属工业株式会社
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年6月20日
【公告号】EP3012633A1, US20160139125, WO2014203988A1