至溶液 pH为7. 4 (7. 0-8. 0均可）、离子强度(λ1M。
[0148] 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS在溶液中的浓度均为lmg/ mL，反应20分钟后离心弃上清。
[0149] 以所述PB缓冲液（平衡前的）复溶弃上清后的沉淀物，在复溶后的溶液中加入抗 体（Cat. :4M23,Hytest)至4E2浓度为0· 5mg/mL，混合包被lh，加入BSA(牛血清蛋白）至 BSA最终浓度为1 %，终止反应。
[0150] 2)针对ΜΥ0抗原标记标识物焚光微球（Cat. :BM551，BangsLaboratories)标记， 包括：
[0151] lmg荧光微球平衡至pH为8. 0、浓度0. 01M的PBS溶液至荧光微球浓度为0.lmg/ mL〇
[0152] 然后分别加入EDC(1乙基3(3二甲基氨丙基）碳化二亚胺）与NHS(N羟基琥珀酰 亚胺），至EDC与NHS在溶液中的浓度均为0. 5mg/mL，活化30分钟后，离心弃上清。
[0153] 对弃上清之后的沉淀物以PBS(磷酸缓冲盐溶液，phosphatebuffersaline)溶 液复溶，加入抗体MYO(Cat. :8M50,Hytest)，标记20分钟，加入BSA至BSA的浓度为1 %，终 止反应。
[0154] 3)免疫微流控芯片同实施1。微流控芯片制备：PMMA经注塑、压印、改性、功能输 入、键合成型，其中功能输入包括，包被4E2免疫磁珠输入滤血模块，标记ΜΥ0荧光微球输入 免疫标记模块。
[0155] 4)样品检测：ΜΥ0 抗原（Cat. :8M50,hytest)被稀释为 50ng/mL~1000ng/mL，分 别与平衡液混合均匀；
[0156] 取100μL上样至加样室，并启动检测设备，计时15分钟，分别检测线性相关性以 及各浓度变异系数。
[0157] 5)在相同的条件下实验10次，得到线性相关性及变异系数的统计结果如下：
[0158] 表2不同浓度的ΜΥ0抗原线性相关性及变异系数的统计结果
[0159]
[0160] 实施例3
[0161] 本实施例针对C反应蛋白进行说明。
[0162] 1)包被有能与血液中CRP蛋白特异性结合的抗体的免疫磁珠制作包括：免疫磁珠 经MES缓冲液平衡，至溶液pH至4. 5-5. 5 (优选为5)、离子强度0. 1Μ;
[0163] 然后分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS的终浓度均为lmg/mL，反应20分钟 后。离心弃上清，并以所述PBS缓冲液（平衡前）复溶弃上清之后的沉淀物，加入抗体CRP135 (Cat. :4C28,Hytest)至CRP135 的最终浓度为 0· 5mg/mL，混合包被lh，加入BSA至 BSA的最终浓度为1 %，终止反应。
[0164] 2)针对CRP抗原标记标识物胶体金（自制）标记：40nm胶体金溶液以K2C03溶液 平衡至pH为9 (8. 5-9. 5内均可），加入抗体CRP36 (Cat. :4C28,Hytest)，标记1小时，加入BSA至所述BSA在溶液中的最终浓度为1 %终止反应，终止反应后离心；
[0165] 以离子强度为0. 1M、pH为8. 0的PBS缓冲液复溶离心后的沉淀物，直至复溶后的 溶液体积为终止反应时的〇. 1倍。
[0166] 3)免疫微流控芯片同实施1。微流控芯片制备：PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯）经注 塑、压印、改性、功能输入、键合成型，其中功能输入包括，包被CRP135免疫磁珠输入滤血系 统，标记CRP36标记胶体金输入免疫标记模块。
[0167] 4)样品检测：CRP抗原（Cat. :8C72,hytest)被稀释为 5ng/mL~250ng/mL，分别 与平衡液混合均匀，取100yL上样至加样室，并启动检车设备，计时15分钟，分别检测线性 相关性以及各浓度变异系数。
[0168] 5)在相同的条件下实验10次，得到线性相关性及变异系数的统计结果如下：
[0169] 表3不同浓度的CRP抗原线性相关性及变异系数的统计结果
[0170]
[0171]
[0172] 实施例4
[0173] 本实施例针对心脏型脂肪酸结合蛋白（FABP)举例说明。
[0174] 1)包被有能与血液中FABP特异性结合的抗体的免疫磁珠制作包括：
[0175] 免疫磁珠经MES缓冲液平衡，至溶液pH为4-5 (优选为4. 5)、离子强度0. 1M;
[0176] 平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS的浓度均为lmg/mL，反应20 分钟后。离心弃上清，对弃上清之后的沉淀物以所述MES缓冲液（平衡前）复溶，加入抗体 FABP5B5 (Cat. :4F29,Hytest)至FABP5B5 浓度为 1.Omg/mL，混合包被 1 小时，加入BSA至 BSA浓度为1%，终止反应。
[0177] 2)针对FABP抗原标记标识物量子点标记：包括：lmg量子点平衡pH为7. 4、浓度 为0. 01M的PBS溶液至量子点终浓度为0.lmg/mL;
[0178] 然后分别加入EDC与NHS，至EDC与NHS的终浓度均为0. 5mg/mL，活化30分钟后， 离心弃上清。将弃上清之后的沉淀物以所述PBS溶液（平衡前）复溶之，加入抗体FABP 28 (Cat. :4F29,Hytest)，标记20分钟，加入BSA至BSA浓度为1 %终止反应。
[0179] 3)免疫微流控芯片同实施1。微流控芯片制备：PMMA经注塑、压印、改性、功能输 入、键合成型，其中功能输入包括，包被FABP5B5免疫磁珠输入滤血系统，标记FABP28标 记胶体金输入免疫标记模块。
[0180] 4)样品检测：FABP抗原（Cat. :8F65,hytest)被稀释为 2. 5ng/mL~50ng/mL，分 别与平衡液混合均匀，取100μL上样至加样室，并启动检车设备，计时15分钟，分别检测线 性相关性以及各浓度变异系数。
[0181] 5)在相同的条件下实验10次，得到线性相关性及变异系数的统计结果如下：
[0182] 表4不同浓度的FABP抗原线性相关性及变异系数的统计结果
[0183]
[0184] 实施例5
[0185] 本实施例针对N端脑钠肽前体（NT-proBNP)为例说明。
[0186] 1)包被有能与血液中NT-proBNP蛋白特异性结合的抗体的免疫磁珠制作包括：
[0187] 免疫磁珠平衡PBS缓冲液至pH为6-7 (优选的PH选择为6. 5)，离子强度0. 01M;
[0188] 在平衡后的溶液中分别加入EDC与NHS，至所述EDC与NHS的浓度均为lmg/mL，反 应20分钟后离心弃上清；
[0189] 将离心去上清之后的沉淀物以所述PBS缓冲液（平衡之前）复溶，在复溶之后的 溶液中加入抗体18H5(Cat. :4NT1，Hytest)至18H5浓度为lmg/mL，混合包被1小时，加入 BSA至（BSA)浓度为1%，终止反应。
[0190] 2)针对NT-proBNP标记标识物量子点标记：lmg量子点平衡至pH为7. 5-8. 5 (优 选为8.0)、浓度0. 01M的PBS溶液，至量子点终浓度为0.lmg/mL，平衡后分别加入EDC与 NHS，至EDC和NHS的浓度均为0. 5mg/mL，活化30分钟后，离心弃上清。对弃上清之后的沉 淀物以所述PBS溶液复溶，加入抗体15F11 (Cat. :4NT1，Hytest)，标记30分钟，加入BSA至 BSA的浓度为1 %，终止反应。
[0191] 3)免疫微流控芯片同实施1。微流控芯片制备：PMMA经注塑、压印、改性、功能输 入、键合成型，其中功能输入包括，包被18H5免疫磁珠输入滤血系统，标记15F11量子点输 入免疫标记模块。
[0192] 4)样品检测：NT-proBNP抗原（Cat. :8NT2，hytest)被稀释为 150pg/mL~9000pg/ mL，将NT-proBNP抗原与平衡液混合均匀，取100μL上样至加样室，并启动检车设备，计时 15分钟，分别检测线性相关性以及各浓度变异系数。
[0193] 5)在相同的条件下实验10次，得到线性相关性及变异系数的统计结果如下：
[0194] 表5不同浓度的NT-proBNP抗原线性相关性及变异系数的统计结果
[0195]
[0196] 实施例6
[0197] 本实施例针对髓过氧化物酶（ΜΡ0)为例说明。
[0198] 1)包被有能与血液中ΜΡ0蛋白特异性结合的抗体的免疫磁珠制作包括：
[0199] 免疫磁珠平衡PB缓冲液至pH为7. 5-8. 5,离子强度为0. 01M;
[0200] 在平衡后的溶液中，分别加入EDC与NHS，直至EDC与NHS的浓度均为lmg/mL，反 应20分钟后离心弃上清，对去上清剩余的沉淀物以所述PB缓冲液复溶，在复溶得到的溶液 中加入抗体19H2(Cat. :4M43,Hytest)至抗体19H2的浓度为0. 5mg/mL，混合包被1小时， 然后加入BSA至BSA浓度为1 %，终止反应。
[0201 ] 2)针对ΜΡ0抗原标记标识物荧光微球：lmg荧光微球平衡pH为6. 5-7. 5 (优选的 的PH可以选择7)、浓度0. 1M的PBS溶液至所述荧光微球的浓度为0.lmg/mL，然后分别加 入EDC与NHS至所述EDC和NHS的浓度均为0. 5mg/mL，活化30分钟后，离心弃上清。
[0202] 将弃上清后的沉淀物以所述PBS溶液（平衡之前的PBS溶液）复溶，在复溶得到的 溶液中加入抗体18B7 (Cat. :4M43,Hytest)，标记20分钟，然后加入BSA至BSA的浓度1 %， 终止反应。
[0203] 3)免疫微流控芯片同实施1。微流控芯片制备：PMMA经注塑、压印、改性、功能输 入、键合成型，其中功能输入包括，包被19H2免疫磁珠输入滤血模块，标记18B7荧光微球输 入免疫标记模块。
[0204] 4)样品检测：ΜΡ0抗原（Cat. :8M80,hytest)被稀释为浓度范围为25ng/mL~ 500ng/mL，稀释后的抗原分别与平衡液混合均匀，取100μL上样至加样室，并启动检车设 备，计时15分钟，分别检测线性相关性以及各浓度变异系数。
[0205] 5)在相同的条件下实验10次，得到线性相关性及变异系数的统计结果如下：
[0206] 表6不同浓度的ΜΡ0抗原线性相关性及变异系数的统计结果
[0207]
[0208]
[0209] 本发明中，样品与包被抗体的磁珠混合进入微流控通道，经通道缓冲后与对位抗 体的免疫标识物结合形成"抗原抗体三明治结构"（参考图2所示，其中标记抗体即