一种用气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体有关物质的方法
【技术领域】
[0002] 本发明属于分析化学领域，具体涉及气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体及其有 关物质的方法。
【背景技术】
[0003] 米诺膦酸是一种氮杂芳基双膦酸盐衍生物，临床上用于治疗骨质疏松及由骨质疏 松症和恶性肿瘤引起的骨溶解。米诺膦酸通过抑制破骨细胞内的焦磷酸法尼酯合成酶，抑 制破骨细胞的骨吸收功能，进而使骨代谢循环减退。米诺膦酸化#SS[l-hyd r0Xy-2-(imidazo[ 1,2-a]pyridin-3-yl)ethylidenejbisphosphonic acid monohydrate，分子式 为C9H12N2O7P2 · H2〇。米诺膦酸中间体化学名为Ethyl trans-4-〇x〇-2_butenoate，分子式为 C6H803,结构式为：
W音:: 在合成米诺膦酸的过程中，需要控制一些重要中间体的纯度，以减少副反应的发生和 杂质的生成，从而提高产物收率和纯度。对于米诺膦酸中间体Ethyl trans-4-〇x〇-2-butenoate，需要控制的有关物质有2个，即Glyoxal 1,1-dimethyl acetal solution(有关 物质A)，结构式为：
和Ethy 2_(dietho xyphosphoryl)acetate)(有关物质B)，结构式为：
米诺膦酸中间体中的杂质去除不完全，将会影响药物纯度和质量。因此，实现分离测定 米诺膦酸中间体及其有关物质，可以保证合成米诺膦酸过程中反应物的纯度，减少副反应 的发生和杂质的生成，提高产物收率和纯度，在米诺膦酸的生产及其质量控制方面具有重 要的现实意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种分析米诺膦酸中间体Ethyl trans-4-〇x〇-2-butenoate的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现米诺膦酸中间体与其有关物质的 分离和测定，以保证米诺膦酸中间体的纯度，减少副反应的发生，提高产物收率。
[0005] 本发明所述的一种测定米诺膦酸中间体有关物质的方法，是选用合适的溶剂将样 品溶解，采用聚硅氧烷类毛细管色谱柱； 上述所说的溶剂可以为二甲基亚砜、N，N_二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、异丙醚中的一种 或几种。
[0006] 上述所说的色谱柱选自品牌为Agilent、0HI0 VALLEY或SGE的色谱柱。
[0007] 上述所说的色谱柱为非极性或弱极性聚硅氧烷类毛细管色谱柱。
[0008] 本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现： 1) 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，分别用溶剂将其溶解，配制成每lmL含米诺膦 酸中间体及其有关物质〇. 1~l〇mg的样品溶液； 2) 设置进样口温度为180~300°C，载气流速为2.0~5. OmL/min，程序升温法，升温程序 为初始温度40°C，恒温1~lOmin，以每分钟5~15°C的升温速率至150°C，恒温8~20min，检 测器温度为220~320°C，分流比为1:1~50:1; 3) 取1)的样品溶液1~5yL，注入气相色谱仪，完成米诺膦酸中间体及其有关物质的分 离测定。
[0009] 其中： 气相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为Agilent 6890N气相色谱仪 氢火焰离子化检测器 色谱柱:DB-1 毛细管色谱柱(Agilent，30π/ 0 · 53mm，1 · 5μπι); 进样口温度:280°C; 检测器温度:280°C; 载气(氮气)流速:4. OmL/min; 分流比：10.0:1; 进样体积：lyL 柱箱升温程序：
本友明利用气相色谱法，米用聚硅氧烷类非极性毛细管色谱枉（30m'0.53mm，1.5μπι)， 能快速有效地分离测定米诺膦酸中间体及其有关物质，本发明解决了米诺膦酸中间体及其 有关物质的分离测定问题，从而减少了合成米诺膦酸副反应的发生和产物的收率，结果见 附图1~5。
[0010]
【附图说明】
[0011]图1为实施例1时溶剂(二甲基亚砜)的气相色谱图； 图2为实施例1时米诺膦酸中间体及其有关物质气相色谱图； 图3为实施例1时米诺膦酸中间体气相色谱图； 图4为实施例2时米诺膦酸中间体及其有关物质气相色谱图； 图5为实施例3时米诺膦酸中间体及其有关物质气相色谱图。
【具体实施方式】： 以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本 发明涉及的米诺膦酸中间体的含量测定及其有关物质检测方法作进一步的详细说明，但不 应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的 技术均属于本发明的范围。
[0013] 实施例1 仪器与条件 色谱仪:Agilent 6890N气相色谱仪； 检测器:氢火焰离子化检测器； 色谱柱:DB-1 毛细管色谱柱(Agilent，30π/ 0 · 53mm，1 · 5μπι); 柱温:初始温度40°C，恒温5min，以每分钟10°C的升温速率至150°C，恒温8min; 进样口温度:280°C; 检测器温度:280°C; 载气(氮气)流速:4.0mL/min; 分流比：10.0:1; 进样体积：lyL 实验步骤 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，用二甲基亚砜溶解，配制成每lmL含米诺膦酸中 间体及其有关物质各0.1~10.〇mg的溶液；另取二甲基亚砜作为空白溶液。按上述色谱条件 进行分析，记录色谱图。结果见附图1~3,图1为空白溶液色谱图；图2中保留时间13.163min 的色谱峰为米诺膦酸中间体，其余色谱峰为米诺膦酸的有关物质。图3中保留时间 13.293min的色谱峰为米诺膦酸中间体。图1~图3表明：本发明的方法，可以有效地将米诺 膦酸中间体与其有关物质分离，并可以准确进行定量检测，以计算出米诺膦酸中间体的纯 度。
[0014] 实施例2 仪器与条件 色谱柱:DB-1 毛细管色谱柱(Agilent，30π/ 0 · 53mm，1 · 5μπι); 柱温:初始温度40°C，恒温5min，以每分钟10°C的升温速率至150°C，恒温8min; 进样口温度:280°C; 检测器温度:280°C; 载气(氮气)流速:3.9mL/min; 分流比：10.0:1; 进样体积：lyL 实验步骤 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，用二甲基亚砜溶解，配制成每lmL含米诺膦酸中 间体及其有关物质各0.1~10.〇mg的混合溶液;另取二甲基亚砜作为空白溶液。将上述米诺 膦酸中间体及其有关物质混合溶液、空白溶液分别注入气相色谱仪，按上述色谱条件进行 分析，记录色谱图。结果见附图4,图4中保留时间13.263min的色谱峰为米诺膦酸中间体，其 余色谱峰为米诺膦酸的有关物质。
[0015] 实施例3 仪器与条件 色谱柱:DB-1 毛细管色谱柱(Agilent，30π/ 0 · 53mm，1 · 5μπι); 柱温:初始温度40°C，恒温5min，以每分钟10°C的升温速率至150°C，恒温8min; 进样口温度:275°C; 检测器温度:280°C; 载气(氮气)流速:4.0mL/min; 分流比：10.0:1; 进样体积：lyL 实验步骤 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，用二甲基亚砜溶解，配制成每lmL含米诺膦酸中 间体及其有关物质各0.1~10.〇mg的混合溶液;另取二甲基亚砜作为空白溶液。将上述米诺 膦酸中间体及其有关物质混合溶液、空白溶液分别注入气相色谱仪，按上述色谱条件进行 分析，记录色谱图。结果见附图5,图5中保留时间13.174min的色谱峰为米诺膦酸中间体，其 余色谱峰为米诺膦酸的有关物质。
[0016] 本发明对所述米诺膦酸中间体及其有关物质分析方法的以下项目进行了验证： 1、 系统适用性实验 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，分别用二甲基亚砜溶解样品，配制成含米诺膦 酸中间体及其有关物质的供试液。按实施例1的色谱条件进行气相色谱分析，记录色谱图。 由图2可见此条件下有关物质与主峰之间分离度符合要求。 2、 进样重复性试验 将米诺膦酸中间体及其有关物质的供试液，按实施例1的色谱条件，重复进样6次，考察 方法的重复性。由结果可加，该方法重复性良好。_
3、 溶液稳定性 取米诺膦酸中间体及其有关物质的供试液，按实施例1的色谱条件，分别于〇、1、2、4、6 小时后进样，考察本品定量测定时溶液稳定性，由结果可见，本样品溶液于6小时内稳定。
4、 耐用性 通过微调进样口温度、载气流速和色谱柱品牌等色谱条件，我们进一步考察了方法的 耐用性。结果发现，该方法对不同品牌的色谱柱、进样口温度变化±5°C、载气流速变化± O.lmL/min等条件下耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同进样口温度、载气流速条件下，米 诺膦酸中间体及其有关物质保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。 5、 定量限 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，精密称定，分别用二甲基亚砜溶解样品，配制成 响应的供试液，再精密量取供试液适量，逐级稀释，实施例1的色谱条件进样考察。各物质定 量限数据如下表所示。
【主权项】
1. 一种气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体有关物质的方法，其特征在于：用合适的 溶剂将样品溶解，采用聚硅氧烷类毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器检测。2. 根据权利要求1所述的分离测定方法，溶剂可以为二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、 甲醇、乙醇、异丙醚中的一种或几种。3. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Agilent、OHIO VALLEY或 SGE的色谱柱。4. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱为非极性或弱极性聚硅氧烷类毛细管 色谱柱。5. 根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤： 1) 取米诺膦酸中间体及其有关物质适量，分别用溶剂将其溶解，配制成每lmL含米诺膦 酸中间体及其有关物质〇. 1~l〇mg的样品溶液； 2) 设置进样口温度为180~300°C，载气流速为2.0~5. OmL/min，程序升温法，升温程序 为初始温度40°C，恒温1~lOmin，以每分钟5~15°C的升温速率至150°C，恒温8~20min，检 测器温度为220~320°C，分流比为1:1~50:1; 3) 取1)的样品溶液1~5yL，注入气相色谱仪，完成米诺膦酸中间体及其有关物质的分 离测定。6. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2)所说的载气为氮气或氦气。7. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2)所说的载气流速优选4mL/min。8. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2)所说的检测器温度优选280°C。9. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2)所说的程序升温法， 优选以下升温程序。 升温速率(°C/min) |温度(°C) |保持时间(min) _/__40__5_ 10__150__8_
【专利摘要】本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用气相色谱法分离测定米诺膦酸中间体Ethyl？trans-4-oxo-2-butenoate有关物质化学纯度的方法，该方法采用聚硅氧烷类非极性毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器，可以定量测定米诺膦酸中间体及其有关物质的含量，从而有效控制合成米诺膦酸过程中反应物的纯度，减少副反应的发生和杂质的生成，提高产物收率。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
【IPC分类】G01N30/60, G01N30/02
【公开号】CN105467027
【申请号】CN201510794424
【发明人】孙冬雪, 刘秋叶
【申请人】北京万全德众医药生物技术有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月18日