视黄醇结合蛋白的测定 检测工具：日立7060型自动分析仪。
[002引分析方法:两点终点法;主波长:570加1，副波长::样品量:化1 (微升）；R1:200ul; R2:50ul;反应方向：上升;测定溫度:37°C;样品与R1混匀后，于第10秒读取吸光度A1;于3~ 5min时加入R2,于5min后读取吸光度A2。反应吸光度的计算为A2与A1的差值。
[0024] 计算方法:多点定标，根据吸光度与参考血清的值作剂量/响应曲线，样品含量可 根据其吸光度值在剂量/响应曲线上算出。
[0025] 实施例3视黄醇结合蛋白检测试剂盒性能评价 1.分析灵敏度评估 采用5 %牛血清白蛋白溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连 续检测20次，计算20次结果的均值与标准差SD。^空白均值加两倍标准差(+2SD)作为报告 方法的检测限。从表1可见，灵敏度为2.68mg/L。
[0026] 表 1
2.高值线性评估 将1份低值血清（1 Omg/L)和1份高值血清（lOOmg/L)按9:1、4:1、2:1、1:2、1:4、1:9 (样本 顺序编号为1~6号），制备出6个不同浓度样本，每个样本重复测定2次，从表2可见， 本发明检测试剂盒的最高检测范围可达到91mg/L，判定依据r2 > 0.990。
[0027] 表 2
3.精密度评估 使用2个不同视黄醇结合蛋白含量的人血清样品，测定本发明检测试剂盒的批内精密 度。使用3个批号试剂盒分别测定1个人血清样品20次，计算本发明检测试剂盒的批间相对 极差。结果表明，本发明检测试剂盒的批内精密度为5.3%和4.19% (见表3)，而批间相对极 差为2.98%(见表4)。
[0028] 表3
4. 准确性(回收实验)评估 选择合适浓度的常规检测样本，分为体积相同的3份。在其中2份样本中加入不同量的 待测物标准，制成2个不同加入浓度的回收样本，计算加入的待测物的浓度。在另一份样本 中加入同样量的无被测物的溶剂，制成基础样本。对回收样本和基础样本进行3次重复测定 分析，取其均值进行计算。（见表5) 表5
5. 干扰试验 在同一份人血清样品中分别加入不同含量的干扰物质后进行测定。加入干扰物质后的 测定值除W加入干扰物质前的测定值即为回收率，试验结果表明胆红素、血红蛋白、甘油Ξ 醋W及类风湿性因子的不同浓度W下时，对检测结果无显著干扰视黄醇结合蛋白的回 收率在90%~110%之间为准）。（见表6)。
[0029] 表 6
1.本发明的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成 本低的优点。
[0030] 2.本发明采用的视黄醇结合蛋白检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得视 黄醇结合蛋白的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别 是对急诊能实现快速定量检测。
[0031] W上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施 例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，运些改进和润饰也 应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2,所述的试剂R1 为适当的缓冲液； 所述的试剂R2是用视黄醇结合蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒置于缓冲液中，所述试 剂R2的制备步骤包括： 步骤（1):在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒(胶乳）中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚 胺(EDAC)，得到激活的胶乳颗粒； 步骤(2):将步骤（1)激活的胶乳颗粒和视黄醇结合蛋白抗体混合，待反应结束后再加 入葡萄糖封闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即视黄醇结合蛋白抗体 致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于缓冲液中。2. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：步骤(2)中视黄醇 结合蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在试剂R2中的浓度为0.08~0.28克/100ml。3. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于:所述试剂R1中的缓 冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳 酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液缓冲液中至少一种。4. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于:所述试剂R2中的缓 冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳 酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液缓冲液中至少一种。5. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：步骤（1)中乙基二 甲基胺丙基碳化二亚胺:聚苯乙烯胶乳颗粒的重量比为〇. 5~5:100。6. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于:所述视黄醇结合蛋 白抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体。7. 根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于:所述步骤（1)中的 聚苯乙烯胶乳颗粒其平均粒径在0.01~0.2mm之间。
【专利摘要】本发明公开了一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为的缓冲液；所述的试剂R2为视黄醇结合蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒与缓冲液的混合物。1.本发明的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的优点。2.本发明采用的脂蛋白a(视黄醇结合蛋白)检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得脂蛋白a(视黄醇结合蛋白)的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急诊能实现快速定量检测。
【IPC分类】G01N33/577, G01N33/68, G01N33/531
【公开号】CN105486875
【申请号】CN201610052958
【发明人】陆雪龙, 宋高峰, 李清华, 周裕国
【申请人】宁波天康生物科技有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2016年1月26日