样 品的DAS含量的体外检测，开辟了DAS含量检测的新方法，与化ISA方法相比，具有操作简便、 检测速度快、精密度高、重复性好、检测结果不受操作影响等优势。
【附图说明】
[0026 ]图1为本发明实施例提供的标准曲线。
[0027] 图2为本发明实施例提供的采用本发明免疫比浊法与化ISA检测样本DAS含量对比 图。
[0028] 图3为本发明实施例提供的采用本发明免疫比浊法与化ISA检测样本DAS含量相关 性。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明不限于W下具体实施例。
[0030] 实施例1
[0031 ] BSA偶联的DAS抗原的制备：
[0032] 1. BSA的活化处理:准确称量牛血清白蛋白（BSA)66mg，用0 . OlM抑=7.2PBS缓冲 液5ml溶解;称取IOmgMES，加入上述溶解液中，置于2-8°C环境中反应半小时；
[0033] 2.量取活化BSA产物IOmg，置于一个干净的IOml试管中，加0.0 lM抑=7.2PBS至体 积4ml，加入邸C/N服(7mg/3mg)，混匀至清澈透明，室溫下静置25分钟；
[0034] 3.准确量取乙酷精胺5mg，加入上述反应体系，混匀至清澈透明，PH值调至10，室溫 下反应5小时；
[0035] 4.反应产物在0.OlM抑=7.2PBS透析液1000 ml中透析48小时，中间换液4次；
[0036] 5.用0.01M pH=7.2PBS调整终浓度至2mg/ml;
[0037] 6.分装于干净EP管中（0.5ml/管），-20°C冰箱中保存备用。
[003引 实施例2
[0039] 1.BSA的活化处理:准确称量牛血清白蛋白（BSA)66mg，用0.05MpH=8.OPBS缓冲液 5ml溶解;称取IOmg MES，加入上述溶解液中，置于2-8°C环境中反应半小时；
[0040] 2.量取活化BSA产物IOmg，置于干净的IOml试管中，加0.05M PH = 8. OPBS至体积 4ml，加入邸C/N服（10mg/5mg)，混匀至清澈透明，室溫下静置15分钟；
[0041 ] 3.量取精胺IOmg，加入至上述反应体系，混匀至清澈透明，PH值调制11.2，室溫下 反应4小时；
[0042] 4.反应产物在0.05M抑=8. OPBS透析液1000 ml中透析48小时，中间换液4次；
[0043] 5.在2-8°C环境中，向反应体系内加入60iil乙酸酢，2-8°C环境下反应1小时；
[0044] 6.反应产物在0.05M抑=8.OPBS透析液1000 ml中透析48小时，中间换液4次；
[004引 7.用0.05M pH=8. OPBS调整终浓度至2mg/ml，分装于干净EP管中（0.5ml/管），-20 °C冰箱中保存备用。
[0046] 实施例3
[0047] 1.乙酷精胺的合成：W20mg精胺与10化无水乙酸为合成原料，加入ImL的0.1 M pH =7.2PBS中，在2-8°C环境中反应60分钟，反应期间不停揽拌混匀；
[004引2.将上述所得到的乙酷精胺与偶联剂4mg GMBS在2mL 0.1M pH=7.2PBS缓冲溶液 中混合，室溫下反应3小时；
[0049] 3.将IOmg BSA与4mg乙酷琉基班巧酸在2mL 0.1 MPBS缓冲溶液中混合，室溫下反映 3小时；加入10化0.1 M径胺，室溫下反应30分钟除去乙酷基;0.1 M抑=7.2PBS缓冲液中透 析4小时，除去反应杂质；
[0050] 4.将乙酷精胺-GMBS偶联产物与上述琉基化修饰的BSA混合，室溫下反应4小时； 1000 mL的0.1 M抑=7.2PBS缓冲液中透析24小时，-20°C保存备用。
[0051 ] 实施例4
[0052] 1.乙酷精胺的合成：W20mg精胺与10化乙酸酢或乙酸为合成原料，在2-8°C环境中 加入到ImL的O. OlM抑=7.2PBS反应60分钟，反应期间不停揽拌混匀；
[0053] 2.取活化BSA产物IOmg,置于干净的IOml试管中，加入4mL 0.OlM pH= 7.2PBS中， 再加入邸C/N服(8mg/4mg)，混匀至清澈透明，室溫下静置45分钟；
[0054] 3.取上述方法合成的乙酷精胺，加入反应体系，混匀至清澈透明，PH值调至11，室 溫下反应4小时W上；
[0055] 4.反应产物在0.OlM抑=7.2PBS透析液1000 ml中透析48小时，中间换液4次；
[0056] 5.用0.01M pH=7.2PBS调整终浓度至2mg/ml;
[0057] 6.分装于干净EP管中（0.5ml/管），-20°C冰箱中保存备用。
[005引 实施例5
[0059] 1.称取精胺20mg，将其与4mg偶联剂GMBS在ImL 0.01M抑= 6.5PBS缓冲溶液中混 合，室溫下反应1.5小时；
[0060] 2.将活化BSA IOmg与4mg乙酷琉基班巧酸在2mL 0.01M pH=6.5PBS缓冲溶液中混 合，室溫下反应3小时；加入10化0.1 M径胺，室溫下反应30分钟除去乙酷基;0.0謹M PBS缓 冲液1000 mL中透析4小时，除去反应杂质；
[0061 ] 3.将精胺-GMBS偶联产物与上述琉基化修饰的BSA混合，室溫下反应4小时；
[0062] 4.0.01M pH=6.5PBS缓冲液l，000ml中透析24小时，中间换液2次；
[0063] 5.在2-8°C环境中，向反应体系内加入60iil乙酸酢，2-8°C反应1小时；
[0064] 6.反应产物在0.OlM抑=6.5PBS透析液1000 ml中透析48小时，中间换液4次；
[006引 7.用0.0 lM pH=6.5PBS调整终浓度至2mg/ml，分装于干净EP管中（0.5ml/管），-20 °C冰箱中保存备用。
[0066] 实施例6
[0067] 多克隆抗体或经筛选所得的单克隆抗体。
[0068] 抗体制备方法过程如下：
[0069] 1.使用上述所制备的抗原作为免疫原，免疫羊、兔、鼠等动物，经多次免疫后获得 含有抗DAS抗体的血浆/血清或者可表达抗DAS抗体的效应B细胞；
[0070] 2.获得血浆/血清后，通过蛋白G层析柱纯化获得试剂盒开发所需多克隆抗体；
[0071 ] 3.获得可表达抗DAS抗体的效应B细胞后，将B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选， 获得同时具有表达抗DAS抗体及无限增殖功能的杂交瘤细胞株，进行扩大培养后，富集细胞 上清，通过蛋白A层析柱纯化获得单克隆抗体。
[0072] 实施例7
[007引抗DAS抗体的制备
[0074] 一、免疫原为乙酷精胺分子偶联在载体蛋白BSA上所得的产物(具体操作详见实施 例1-实施例5)
[007 引 浓度：2mg/ml
[0076] 二、动物选择与免疫
[0077] ( -）、动物选择
[0078] 选择与所用骨髓瘤细胞同源的Ba化/c健康雌性小鼠，鼠龄在6~10周。为避免小鼠 反应不佳或免疫过程中死亡，同时免疫5只小鼠，编号1-5号。
[0079] (二）、免疫方案
[0080] I、初次免疫
[0081] 将300ug抗原溶于PBS中，加等体积的福氏完全佐剂(CFA)，乳化成油包水状，采用 腹腔及背部皮下多点注射，0.5ml/只，=周后进行第二次免疫；
[0082] 2、第二次免疫
[0083] 将300ug抗原溶于PBS中，加等体积的福氏不完全佐剂（IFA)，乳化成油包水状，采 用腹腔及背部皮下多点注射，0.5ml/只，=周后进行第=次免疫；
[0084] 3、第S次免疫
[0085] 将30化g抗原溶于PBS中，加等体积的福氏不完全佐剂（IFA)，乳化成油包水状，采 用腹腔及背部皮下多点注射，0.5ml/只，一周后采血检测抗血清活性；
[0086] 4、抗血清活性检测化LI SA法检测抗血清活性）
[0087] 4.1实验步骤
[008引 4.1.1抗原包被
[0089] 纯抗原浓度2mg/ml，用包被液稀释后取10化1加入聚苯乙締酶联检测板各孔中，4 °C过夜后，洗液洗涂3次。
[0090] 4.1.2 封闭
[0091] 每孔加20化1封闭液，4°C过夜或37°C两小时后，洗涂3次，拍干。置4°C冰箱保存备 用。
[0092] 4.1.3 ELISA检测
[0093] 1)检测血清效价时，对血清做倍比稀释，IOOiil/孔，W正常小鼠血清为阴性对照， 37°C解育30min，洗涂3次，拍干。
[0094] 2)加羊抗鼠-HRP，效价为105，10化1/孔，37°C解育30min，洗涂3次，拍干。
[009引 3)显色：加入A、B液各50iU/孔，37°C显色15min。
[0096] 4)终止:加入终止液50iil/孔。
[0097] 5)读数：W450nm，630nm双波长测定各孔OD值，W与阴性对照孔OD值的比值(P/N) 大于2.1为限，作为判断为阳性或确定效价的临界点。
[009引经检测，5只小鼠活性强度为:4#〉5#〉1#〉3#〉2#，两周后加强免疫4#小鼠。
[0099] 5、加强免疫
[0100] 将50ug抗原与0. SmlPBS混合，尾静脉注入4#小鼠体内，S天后进行细胞融合。
[0101] S、细胞融合
[0102] ( -）、饲养细胞制备 [010引1、试剂耗材：
[0104] 1.1 RPMI-1640完全培养液；
[0105] 1.2 RPMI-1640不完全培养液；
[0106] 1.3 HAT培养液；
[0107] 1.4 离屯、机；
[0108] 1.5其他材料:细胞稀释液，血细胞计数板，盖玻片，无 菌离屯、管，96孔细胞培养板， 眼科剪刀、綴子，大綴子，平皿，一次性Iml注射器，一次性IOml注射器。
[0109] 2、实验动物
[0110] Ba化/c或昆明健康小鼠（雌