烟用香精中甜味剂和防腐剂同时测定的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种烟用香精中甜味剂和防腐剂同时测定的方法，属于烟用辅料化学 成分检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 2011年，国家卫生部、农业部等根据风险监测和监督抽查中发现的问题，公布了 151种食品和饲料中非法添加物质名单，其中包括47种可能在食品中"违法添加的非食用物 质"、22种"易滥用食品添加剂"和82种"禁止在饲料、动物饮用水和畜禽水产养殖过程中食 用的药物和物质"。山梨酸、甜蜜素、苯甲酸、安赛蜜和糖精钠是151种非法添加物名单中的 "易滥用食品添加剂"，GB2760-2014《食品添加剂使用标准》对其添加量有严格的规定。
[0003] 烟用香精有合成香料和天然提取物等，其化学成分主要为糖、醇，酯等化合物。合 理的加香对于提高或改善卷烟的香味，提高保润性和改善燃烧性等有重要作用。
[0004] 对于传统卷烟样品，消费者主要通过烟气来吸食样品，烟用香精不是直接作用于 消费者，但对于新型烟草制品如口含烟，设计者需要兼顾产品的口感，通过在香精中添加一 定量的甜味剂，可以改善口含烟的吃味。另外，许多烟用香精是天然提取物，为防霉败变质， 可添加防腐剂延长保存期。在人们消费口含烟的同时，香精中的这些添加剂将通过口腔直 接进入人体，因此有必要对其含量进行准确测定。
[0005] 有关食品中甜味剂和防腐剂的测定，已经报道的方法有薄层层析法、液相色谱法、 气相色谱质谱法、离子色谱法和液相色谱串联质谱法等。烟草行业关于烟用香精中防腐剂 (山梨酸、苯甲酸等)和甜味剂(甜蜜素）的测定推荐液相色谱法和离子色谱法。安赛蜜和糖 精钠这两种甜味剂的测定暂无相关方法推荐。实际工作中，烟用香精中多种甜味剂和防腐 剂的共同测定多采用液相色谱法，但甜蜜素(环己基氨基磺酸钠）的测定较少应用液相，主 要是因为甜蜜素在紫外可见光范围内不被吸收，采用高效液相测定前必须进行柱前衍生， 操作较为繁琐，同时也不易实现多种成分的准确测定。
[0006] 液相色谱法检测甜味剂和防腐剂均采用紫外检测器，各成分的定量限均大于〇.3μ g/mL，但在实际样品中多种成分同时添加，某些成分的含量可能偏低，在定量限附近或者低 于定量限，在这种情况下将难以实现所有成分的准确测定。例如，行业标准测定甜蜜素采用 AS11HC分析柱，通过调节柱温和淋洗液浓度可以将甜蜜素与其他离子的基线分离，但是标 准曲线的线性范围只适合浓度大于10yg/mL样品的测定，并且AS11HC分析柱对安赛蜜、糖精 钠这两种强保留离子洗脱仍较为困难。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种烟用香精中甜味剂和防腐剂同时测定的方法。
[0008] 为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
[0009] 烟用香精中甜味剂和防腐剂同时测定的方法，包括以下步骤：
[0010] 1)取待测样品稀释，并调节溶液pH值为9~10，萃取，萃取液过Oasis HLB柱净化， 过滤备用；
[0011] 2)取滤液进行离子色谱分析，对照标准曲线计算得到待测样品中甜味剂和防腐剂 的含量。
[0012] 所述甜味剂为甜蜜素、安赛蜜、糖精钠中的一种或多种。
[0013] 所述防腐剂为山梨酸类（山梨酸及其盐)和/或苯甲酸类(苯甲酸及其盐）。
[0014] 步骤1)中待测样品为水溶性样品或水不溶性样品，水溶性样品可直接用水稀释， 再用NaOH调节溶液pH值，后通过高速匀浆法对样品进行提取（即萃取，如在转速8000~ 12000rpm下勾衆提取1~2min)，萃取液为清液可直接过Oasis HLB柱净化;对于水不溶性样 品，需要先用水与醇的混合液(醇为短链醇，C1~C4,具体可选择甲醇或乙醇，醇与水的体积 比为1:3~4)稀释，再用NaOH调节溶液pH值，后通过高速匀浆法(转速8000~12000rpm)萃取 样品，萃取液为清液时，可直接过Oasis HLB柱净化，萃取液为悬浊液时，需采用高速离心机 进一步分离，取上清液过Oasis HLB柱净化分析。
[0015]步骤1)中Oasis HLB柱能去除样品中的有机杂质，以亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮单体按一定比例组成的大孔共聚物为填料，相较C18柱，HLB柱吸附剂的表面 积大，容量约为C18柱的3倍，净化效率更高。
[0016] 步骤1)中过滤采用的滤膜应当根据待过滤液性质选择。当待测样品为水溶性样品 时，稀释剂采用水时，滤膜选用水系滤膜即可，如孔径〇.45μπι的聚醚砜或醋酸纤维素酯滤 膜；当待测样品为水不溶性样品时，稀释剂采用醇与水的混合液，滤膜需选用有机系滤膜， 如孔径0.22μπι的尼龙滤膜。
[0017] 步骤2)中离子色谱分析采用DI0NEX ICS3000型离子色谱仪，检测器为电导检测 器，色谱条件为：阴离子分析柱IonPac AS17C，规格4mm X 250mm;保护柱IonPac AG17C，规格 4mm X 50mm;淋洗液为Κ0Η溶液，梯度洗脱，梯度条件：0·0~13.0min 5mmol/L，13 · 1~ 23.Omin 70mmol/L,23.1 ~30.0min 5mmol/L，系统流速为0.8mL/min;抑制电流174mA，进样 量25yL，采集时间30min。
[0018] 步骤2)中标准曲线的制作方法为:取甜味剂和防腐剂的标准物质配制成系列浓度 的混合标准溶液，经离子色谱分析后以峰面积对应物质浓度作回归分析，得到物质浓度与 峰面积的关系曲线。
[0019] 本发明的有益效果：
[0020] 山梨酸、甜蜜素、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠这5种分子中都带有易电离的阴离子基 团，因此可选用离子色谱分析法，通过阴离子交换分离同时测定样品中5种成分的含量。本 发明根据不同类型烟用香精的理化特性，分类净化去除香精中干扰测定的杂质，并采用 AS17C分析柱和电导检测器对样品中3种甜味剂和2种防腐剂进行一次进样，同时分离测定。 该测定方法的线性范围较宽，可以实现山梨酸、甜蜜素、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠在0.1~?〇μ g/mL范围内的含量测定，相较行业推荐的测定方法，该方法的定量限更低（<0.2yg/mL)，取 样量更少，可满足低含量成分的检测需求，同时测定效率高，30min内可实现5种成分的同时 测定。
[0021] 上述5种分子中3种为弱保留离子，2种为强保留离子，保留性质区别显著，采用两 阶等浓度淋洗液，低浓度淋洗完成后立即切换到高浓度，可以最大限度地节省分析时间，并 在两阶分析中获得平稳的基线和良好的峰形。
【附图说明】
[0022] 图1为实施例1中混合标准溶液6的离子色谱图；
[0023] 图2为实施例1中水溶性样品的离子色谱图；
[0024] 图3为实施例2中水不溶性样品的离子色谱图。
【具体实施方式】
[0025] 下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0026] 实施例1
[0027] 烟用香精(水溶性样品）中甜味剂和防腐剂同时测定的方法，包括以下步骤：
[0028] 1)样品前处理
[0029] 准确称取0.1232g样品至50mL具塞三角瓶中，加水50mL，并用NaOH调节溶液pH值 9.5，高速匀浆(转速10000印111)提取1.51^11，经0&8丨8!11^柱(经31^甲醇和31^水活化)净化 (流速< 1. OmL/min)后，过0.45μπι聚醚砜滤膜，弃去前几毫升滤液，收集后续滤液待测； [0030] 2)配制混合标准溶液
[0031]采用pH 9.5的NaOH溶液配制系列浓度的混合标准溶液，标准物质的具体浓度见下 表1;
[0032] 表1混合标准溶液浓度表 [0033]
[0034]根据GB2760-2014,甜蜜素、安赛蜜、糖精钠、山梨酸、苯甲酸这5种物质限量随食品 的类型有所区别，但总体限量范围在0.1~5g/kg之间。当待测样品取样量0.1~0.2g，稀释 倍数40~50倍时，标准曲线需要覆盖0.2~lOyg/mL含量样品的测定，而上述标准曲线范围 为0.1~lOyg/mL，可以满足甜蜜素、安赛蜜、糖精钠、山梨酸、苯甲酸这5种物质允许添加量 的测定要求，并且相对于行业推荐方法中甜蜜素的测定，标准曲线测定范围降低10倍；另 外，混合标准溶液中各成分的最高浓度应小于l〇yg/mL，这是因为AS17C柱填料基质是无孔 的EVB-DVB聚合物，选择性高，适合复杂体系样品分析，单位体积的离子交换功能基数量少， 在25yL的进样条件下，高于此浓度的待测成分峰型会拖尾，这也