br>[0069] 表3不同时间黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢中磺胺甲噁唑和N4-乙酰基-磺胺 甲噁唑的浓度
[0070]
[0071] 注:ND为未检出
[0072]其它实施步骤与实施例1相同。
[0073] 实施例3:
[0074]制备的黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鲍和卵巢中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑标准物质均匀 性检验
[0075]使用实施例1中的方法口灌磺胺甲噁唑后第216h采集5尾黄颡鱼的肌肉、肝脏、肾 脏、鳃和卵巢，每尾采集黄颡鱼的背部肌肉，去皮后切成小块，用高速匀质机（1以1]1^1^-TURRAX T18 basic)将黄颡鱼的肌肉匀质，制备出肌肉中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准 物质，-20°C冷冻保存，有效期为3个月。打开黄颡鱼的鳃盖，采集黄颡鱼的鳃弓和鳃丝于 10mL离心管中，用小剪刀将其剪碎后，用高速匀浆机(S-10手持式高速匀浆机)将其匀质，_ 20 °C冷冻保存，有效期为3个月；采集黄颡鱼的卵巢组织于50mL离心管中用高速匀质机(IKA ULTRA-TURRAX T18 basic)将黄颡鱼的卵巢匀浆，制备出卵巢中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残 留标准物质，_20°C冷冻保存，有效期为3个月；采集黄颡鱼的肝脏、肾脏组织分别放于小塑 料封口袋中，用手在袋外将袋内肝脏和肾脏组织碾碎，分别制备出肝脏和肾脏中N 4-乙酰 基-磺胺甲噁唑残留标准物质，_20°C冷冻保存，有效期为3个月。黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃 和卵巢样品前处理和样品中的检测N 4-乙酰基-磺胺甲噁唑按照实施例1的方法进行，检测 结果见表4。
[0076]表4黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物 质均匀性检测结果
[0077]
[0078]
[0079] 其它实施步骤与实施例1相同。
[0080] 实施例4:
[0081 ]将采集的黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢样品在-20 °C条件下储存10d、30d、 60d、90d后，肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢中的N4-乙酰基-磺胺甲噁唑的检测按照实施例1的 方法进行，检测结果见表5和表6。
[0082]表5黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物 质稳定性检测结果
[0083]
[0084]
[0085] 表6黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢，_20°C保存90d后的N4-乙酰基-磺胺甲噁唑 检测值与进行均匀性检测获得的N 4-乙酰基-磺胺甲噁唑平均初始值的变化率
[0087]其它实施步骤与实施例1相同。
【主权项】
1. 一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备方法，其步骤是： A、 选取60g~90g已确认不含磺胺甲噁唑和N4-乙酰基-磺胺甲噁唑的雌性黄颡鱼，在水 族箱内养一周，用于制备黄颡鱼肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢组织中N 4-乙酰基-磺胺甲噁唑 残留标准物质，淡水养殖条件，水温为25°C~26°C，pH为7.9~8.1，连续充气，溶解氧值2 5.0 mg/L； B、 称取0.84g磺胺甲噁唑溶解在5 mL的二甲基甲酰胺中，再用水稀释定容至100 mL，配 制成8.4 mg/mL的磺胺甲惡唑溶液； C、 按60mg/kg黄颡鱼体重的剂量口灌磺胺甲噁唑溶液，将口灌磺胺甲噁唑后的黄颡鱼 放在水族箱中观察有无回吐，选择没有回吐的黄颡鱼用于制备N 4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留 标准物质； D、 将没有回吐的黄颡鱼放入另一水族箱中，养殖过程中不饲喂任何饲料； E、 从水族箱中取养殖192 h-240 h后的黄颡鱼，分别采集新鲜黄颡鱼的背部肌肉、肝 脏、肾脏、鳃和卵巢组织，将相同组织合并； F、 将采集新鲜黄颡鱼的背部肌肉，去皮后切成块，用高速匀质机将黄颡鱼的肌肉匀质， 制备出肌肉中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质，-20 °C冷冻保存； G、 打开黄颡鱼的鳃盖，用采集新鲜黄颡鱼的鳃弓和鳃丝于离心管中，将其剪碎后，用高 速匀浆机将其匀质，_20°C冷冻保存； H、 采集新鲜黄颡鱼的卵巢组织于离心管中用高速匀质机将黄颡鱼的卵巢匀浆，制备出 卵巢中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质，-20 °C冷冻保存； I、 采集新鲜黄颡鱼的肝脏、肾脏组织分别放于塑料封口袋中，将袋内肝脏和肾脏组织 碾碎，分别制备出肝脏和肾脏中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质，-20°C冷冻保存； 黄颡鱼各组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑定量分析方法如下： J、 将黄颡鱼肝脏、肾脏、鳃、卵巢和肌肉组织的样品进行处理:从采集新鲜黄颡鱼的肝 脏、肾脏、鳃、卵巢和肌肉组织中，分别称取肝脏、肾脏、鳃、卵巢和肌肉组织样品，分别放到 离心管中，加入50 yL 1 yg/mL的磺胺甲噁唑同位素内标:磺胺甲噁唑-d4,再加入5 mL乙 腈，振荡30 s，超声2 - 4min，再加入1 g无水硫酸钠，振荡30 s，8000 r/min离心4一6 min， 转移上层液体到离心管中，再向残渣中加入4 mL乙腈，振荡30 s，8000 r/min离心4一6min， 合并两次乙腈提取液于同一离心管中，置49一51°C氮吹仪上氮吹至干，加入lmL定容溶液溶 解残渣，振荡30 s，加入试剂A，振荡30 s，8000 r/min，离心4一6 min，弃去上层液体，下层 液体过0.22 μπι聚醚砜水系滤头过滤，获得从肝脏、肾脏、鳃、卵巢组织中提取、净化后含N4-乙酰基-磺胺甲噁唑供HPLC-MS/MS分析的液体； K、 HPLC-MS/MS的分析条件：色谱柱:Hypersil GOLD C18色谱柱;柱温：34 - 36°C，流速： 0.2 mL/min;流动相:有机相为试剂B，水相为试剂C和试剂D的水溶液，梯度洗脱程序:有机 相与水相初始的体积比为20 : 80,维持1 min;从1 min到3 min，有机相与水相的体积比由 20 : 80均匀变为45 : 55;从3.0 min到7.5 min，有机相与水相的体积比45 : 55不变;再 从7.5 min到7.6 min，有机相与水相的体积比由45 : 55均匀变为20 : 80;7.6 min到8.5 min，有机相与水相的体积比维持20 : 80不变;进样量10 uL; L、 离子化模式:大气压电喷雾离子源，正离子模式;检测方式采用选择反应监测模式； 喷雾电压:3500 V;蒸发气温度:48 - 52°C;鞘气压力35 arb;辅助气压力5 arb;碰撞气及压 力：氩气纯度2 99.999,1.5 m Torr;离子传输毛细管温度：348 - 352°C;Q1 PW 0.7,Q3 PW 0.7 〇2. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中Ν4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于：所述的试剂Α是甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、环己烷试剂中的任意一 种。3. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于：所述的试剂B是乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸、甲酸试剂中的任意一 种。4. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的定容溶液为试剂B与蒸馏水按一定体积比混合配制而成，试剂B与 蒸馏水的体积比为10:90-30:70。5. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的试剂C是乙酸、甲酸、氢氟酸、氨水中的任意一种。6. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的试剂D是磷酸二氢铵、乙酸铵、甲酸铵、磷酸氢二铵中的任意一种。7. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的试剂C和试剂D的水溶液是蒸馏水中加入试剂C和试剂D配制而成， 试剂C在蒸馏水中的体积比为0.05%-0.5%，试剂D在蒸馏水中的质量比为5 mM-20 mM。8. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的试剂C和试剂D的水溶液的配制为:移取50 yL-5000 yL试剂C，称 取0.38 g-1.54 g试剂D加入1 L蒸馏水中混匀后配制而成。9. 根据权利要求1所述一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备 方法，其特征在于:所述的定容溶液的配制为:移取10 mL-30 mL试剂B加入90 mL-70 mL蒸 馏水混匀配制成定容溶液。
【专利摘要】本发明公开了一种黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质的制备方法，步骤是：A、选取已确认不含磺胺甲噁唑和N4-乙酰基-磺胺甲噁唑的雌性黄颡鱼；B、将磺胺甲噁唑用二甲基甲酰胺溶解，再用水稀释，配制成磺胺甲噁唑溶液；C、按60mg/kg黄颡鱼体重的剂量口灌磺胺甲噁唑溶液，将口灌磺胺甲噁唑后的黄颡鱼放在水中观察；D、选择没有回吐的黄颡鱼制备N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质，采集黄颡鱼背部肌肉、肝脏、肾脏、鳃和卵巢分别匀质，制备出黄颡鱼组织中N4-乙酰基-磺胺甲噁唑残留标准物质，冷冻保存。方法易行，操作简便，并对制备出的标准物质进行定值，均匀性和稳定性检验。
【IPC分类】G01N33/12, G01N1/28
【公开号】CN105699144
【申请号】CN201610100917
【发明人】刘永涛, 徐春娟, 艾晓辉, 余琳雪, 宋雅琪, 杨红
【申请人】中国水产科学研究院长江水产研究所
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年2月24日