一种吡噻菌胺残留量的gc-ms/ms快速测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种吡噻菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，更具体地说是采用气 相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性定量测定猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌肉及制品等脂肪 含量高的动物源性食品中残留的吡噻菌胺含量的方法，属于农药残留量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002]吡噻菌胺(Penthiopyrad)是日本三井化学公司研发的新颖酰胺类杀菌剂，英文通 用名为 penthiopyrad，试验代号：MTF-753，商品名为 Afetofluapro XAS 登录号：183675-82-3,化学名称为(RS)-N-[2-(l，3-二甲基丁基)-3-噻吩基]-甲基-3-(三氟甲基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺，化学结构式为：
[0003] 吡噻菌胺与现有的羧酰胺类杀菌剂有不同的杀菌谱，除了与现有羧酰胺类杀菌剂 一样对担子菌有效外，其对子囊菌、不完全菌亦有效，现被推荐用于防治对其他杀菌剂具抗 性的灰霉病和白粉病。该药剂通常使用的有效成分剂量为100~200g/hm 2,其被广泛应用于 果树、蔬菜、草坪等众多作物，防治锈病、菌核病、灰霉病、霜霉病、苹果黑星病和白粉病。 Penthiopyrad于2008年在日本获得首次批准，用于果树、蔬菜和观赏植物，后又于2011年11 月在加拿大获准登记。商标名为Vertisan和Fontelis(均以penthiopyrad 200g/L为其活性 成分）和Treoris (penthiopyrad 100g/L+chlorothalonil (百菌清）250g/L)的3个产品主要 用在果树、蔬菜和田间作物上，在实际应用发现吡噻菌胺具有很广阔的应用前景。
[0004] 随着吡噻菌胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的欧盟、加拿大和澳大 利亚等国家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量 (MRL)，加拿大规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为0.01~ 30mg/kg;澳大利亚规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为 0.01~5mg/kg;欧盟规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为 0.01~30mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应 的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均 实行0.01mg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对吡噻菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜和 水果中吡噻菌胺残留检测方法，这些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定蔬 菜和水果中吡噻菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留具有快 速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未配置该 仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动相或色 谱柱，这样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，这一定程度 上制约了 LC-MS/MS的应用。使用气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)分析食品农产品中农药残留 具有快速、简便、灵敏度高、选择性强等优点，可实现几百种农药的多残留分析，但迄今为止 未见食品农产品中吡噻菌胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道，但迄今为止未见食品农产 品中吡噻菌胺残留量的GC-MS/MS检测方法的报道。另外，众所周知，QuEChERS前处理技术已 成为农药残留分析中应用最广的样品前处理方法，但QuEChERS方法主要适用于低脂肪含量 的高含水基质，如大部分的水果蔬菜，在面对高脂肪含量基质时能力有限，一般需要增加正 己烷除脂、冷冻样品提取液去脂等步骤，但效果有限。近年来有些公司推出了增强型脂质去 除专利产品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去除具有直链经类结构的脂 类干扰物，包括游离脂肪酸、胆固醇、甘油三酯、磷脂等。该产品已被制成基质固相分散萃取 剂，经水活化后可直接通过分散固相萃取流程对提取液中的脂类杂质进行去除，本发明应 用该前处理方法净化动物源性食品时发现，该方法简单高效、对脂类物质去除效果好，建立 EMR基质分散净化、气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)定性和定量分析动物源性食品中吡噻菌 胺残留量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种吡噻菌胺残留量的GC-MS/MS快速测定方法，主要用于测 定动物源性食品等脂肪含量尚的食品农广品中啦_菌胺残留量。
[0007] 为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种吡噻菌胺残留量的GC-MS/MS 快速测定方法，包括如下步骤：
[0008] (1)提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腈溶液均质提取，然后 加入氯化钠和无水硫酸镁，剧烈涡旋lmin后离心。
[0009] 净化 将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，祸旋 lmin后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行 盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混 合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含吡噻菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化残 渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的吡噻菌胺系列标准工作液。 [0011] (4)测定和结果计算 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化 后的样品液注入GC-MS/MS进行测定，测得样品液中吡噻菌胺的色谱峰面积，代入基质标准 工作曲线，得到样品液中吡噻菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品 中吡噻菌胺残留量;若上机溶液中吡噻菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012]步骤(1)中样品若为动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚Ο . 25μπι;进样口温度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2 °C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线温度:290°C。 [0014]步骤(4)中质谱条件为：电离模式：电子轰击电离(EI，70eV);离子源温度280°C;碰 撞气:氩气;多反应监测扫描方式MRM，监测参数为：
[0015] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0016] 本发明的有益效果在于：
[0017] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-MS/MS应用于粮谷、动物源性食品中吡噻菌胺 定性确证和定量检测，平均回收率为96.7%~100.7%，平均相对标准偏差(RSD)为5.0%~ 6.1%，检出限低于0.085yg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能 满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及 对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0018] 图1为添加在空白猪肉基质中的吡噻菌胺标液的GC-MS/MS选择离子色谱图。
[0019] 图2为不含吡噻菌胺的猪肉空白样品的GC-MS/MS选择离子色谱图。
[0020] 图3为以不含吡噻菌胺的猪肉空白样品为基质配制的吡噻菌胺标准工作曲线。
【具体实施方式】
[0021] 现以以下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0022] 实施例中使用的仪器与试剂 T18Basic均质器（IKA，Germany) ;CR21GHI离心机（日立，Japan) ;MS3基本型旋祸混合器 (IKA，Germany) ;TurboVap LV型样品自