理
[0027] 玻璃纤维素膜用含有表面活性剂的缓冲液(配方：100mMPB(pH7.4)，其中含有 2%化(：1，2%654、0.5%酪蛋白、0.1%吐溫-20、0.5%59和5%薦糖)浸泡进行预封闭后，50 °C干燥过夜;通过Biodot仪器的airjet喷头，将标记有时间分辨巧光物质乳胶微球的PCT单 克隆抗体按照祉1/cm的量超声喷雾至宽为1cm的玻璃纤维素膜上，50°C干燥过夜，制备得到 样品结合垫。
[0028] 本实施例之中，所述时间分辨巧光物质乳胶微球为含館乳胶微球，即时间分辨巧 光物质为铜系元素館与乳胶的结合物;根据需要，所述时间分辨巧光物质可W调整为铜系 元素、铜系元素与乳胶的结合物、铜系元素的馨合物中的一种;铜系元素可W为館，铺，衫或 铺中的一种。3)组装
[0029] 将步骤2)得到的样品结合垫固定叠压在步骤1)得到的硝酸纤维素膜的一端，并将 吸水膜固定叠压在硝酸纤维素膜的另一端，用裁膜仪按每条4mm的宽度进行裁剪，并装入层 析条壳体中，即得成品。
[0030] 本实用新型的试纸条利用双抗夹屯、法进行检测:将待测样品量取75化滴加到样品 垫上，样品中的PCT与样品垫上时间分辨巧光物质标记的PCT单克隆抗体结合，形成抗原-标 记抗体复合物。经层析原理，依次与硝酸纤维素膜上的另一个表位的PCT抗体(T线）和羊抗 鼠 IgG抗体(C线）形成抗体-抗原-标记抗体复合物。在时间分辨巧光分析仪的激发光激发 下，标记元素显现巧光，结合的标记抗体越多，巧光强度越高，从而进行定量检测。
[0031] 健康人群血清PCT平均浓度应<0.1 ng/mM受到细菌感染后血清PCT水平急剧上升。 在血清PCT浓度为0.25ng/ml <PCT<0.5ng/ml时，表明为细菌感染可能存在;在血清PCT浓度〉 0.5ng/ml时，则反映细菌感染的存在。
[0032] 实验例:样品的定量检测
[0033] 1.标准曲线制作
[0034] 1.1取PCT校准品一套，具体值见下表
[0035]
[0036] 1.2检测方法
[0037] 1.2.1取校准品75μ1，加入本实用新型实施例制备的层析条中样品窗口；
[0038] 1.2.2 10分钟之后，用时间分辨巧光定量分析仪定量检测发光值。
[0039] 1.2.3每个校准品检测2次，取T/C值的平均值。具体结果见下表：
[0040]
[0041 ] 1.3标准曲线制备
[0042] 根据上述检测结果，WT/C值的对数值为X轴，W浓度的对数值为Y轴进行线性回 归，得到线性方程y = 0.998X-2.2305，r2 = 0.999。
[0043] 2精密度测试：
[0044] 2.1取制备好的9张层析条，配置一个浓度(40ng/mL)的PCT工作校准品，
[0045] 2.2取75μ1样品，一次性加入层析条的检测口；
[0046] 2.3待样品层析lOmin之后，用时间分辨巧光定量分析仪对结果进行扫描分析，结 果如下表，说明本实用新型的PCT时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条精密度良好。
[0047]
[004引 3准确性测试：
[0049] 3.1 配置 0.5ng/mL，化 g/mL，lOng/mL，40ng/mL，120ng/mL 浓度的工作校准品。
[(X)加]3.2各取75μ1样品，一次性加入层析条的检测口；
[0051 ] 3.3待样品层析lOmin之后，用时间分辨巧光定量分析仪对结果进行扫描分析，结 果如下表，说明本实用新型的PCT时间分辨巧光纳米免疫层析定量检测试纸条准确度良好。
[0化2]
1?~w上所述，仅为本实用新型较佳实施例而已，故不能依此限定本实用新型实施的' 范围，即依本实用新型专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本实用新 型涵盖的范围内。
【主权项】
1. 一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:包括背衬底板， 该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠 压在硝酸纤维素膜的两端上;该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的PCT单克隆 抗体;该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的PCT单克隆抗 体，该质控线包被有羊抗鼠 IgG。2. 根据权利要求1所述的一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征 在于:所述时间分辨荧光物质为镧系元素、镧系元素与乳胶的结合物、镧系元素的螯合物中 的一种。3. 根据权利要求2所述的一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征 在于:所述镧系元素为铕，钺，钐或镝中的一种。4. 根据权利要求1所述的一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征 在于:所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜。5. 根据权利要求4所述的一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征 在于：所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥而 得。6. 根据权利要求1所述的一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征 在于:所述试纸条外还包裹有一壳体。
【专利摘要】本实用新型公开了一种PCT时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的PCT单克隆抗体；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的PCT单克隆抗体，该质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型具有灵敏度高，特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点，可广泛应用于PCT的临床免疫检验和科学研究中。
【IPC分类】G01N33/533, G01N33/577
【公开号】CN205333641
【申请号】CN201521134641
【发明人】钟伟波, 许元峰, 卢志珍
【申请人】厦门依柯利斯医疗科技有限公司
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2015年12月30日