专利名称：唐氏综合征检测、分析方法及检测中所用芯片的制备方法
唐氏综合征检测、分析方法及检测中所用芯片的制备方法技术领域：
本发明属于生物医学研究及临床应用领域，具体涉及一步检测法在唐氏综 合征检测、分析方法中的应用及检测中所用芯片的制备方法。背景技术：
唐氏综合征又称21三体综合征，是常见的染色体异常病之一，发 病率约为1 /750。目前，对于唐氏综合征的检测采用的是对母体血清 中两项标志物一曱胎蛋白(AFP)和绒毛膜促性腺激素(HCG)的指标进 行筛查，通过对AFP和HCG的定量测定和数据结果分析，计算出唐氏综 合征的危险系数。
早在20多年前就开始出现了产前筛查的方法，从那以后得到逐步发展。直 到20世纪80年代初，母亲的年龄和病史是可提供进行唐氏综合征筛查的唯一 方法。这一状况自20世纪80年代中期开始发生了改变，当时Cuckle证明，把 母亲的血清AFP和HCG与母亲年龄结合起来，可以从实质上提高检测结果的准 确率。
目前，在唐氏检测方法中，对母体血清中AFP和HCG这两个指标进行检 测的主要方法是ELISA板检测法。ELISA板检测法检测的基础是抗原或抗体的 固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体-ELISA板表面上的AFP和HCG 的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记反应物的抗原或抗体既保留其免疫 学活性，又保留酶的活性。在测定时，首先，将待检测标本与固相载体-ELISA 板表面上的AFP和HCG的抗原或抗体起反应；其次，用洗涤的方法使固相载体 -ELISA板上形成的AFP和HCG抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开；最后， 加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体-ELISA板上。此时固 相载体上的酶量与待检测标本中受检物质的量呈一定的比例。加入底物后，底 物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据 呈色的深浅进行定性或定量分析。
ELISA板检测存在的缺陷在于对需要检测的母体血清中AFP和HCG这两项 指标必须分两次进行才企测。操:作过程中必须对AFP和HCG这两个项目按不同比 例分别稀释血清，这样就使操作过程复杂繁瑣，在对母体血清中AFP和HCG这两个项目进行检测过程中需要进行重复性检测，逸就导妖了检测过程需要耗费
大量时间。检测一人份就需要耗时6小时、同时检测IO人份耗时8小时、同时 检测20人份耗时10小时，这样就影响了检测的效率，而且每次必须自己配置 标准品并制定标准曲线再通过标准曲线进行计算得出检测结果，不能对检测结 果中AFP和HCG这两个检测项目同时实现联合定量分析，对于一佥测结果也不能 实现精确的判断。
发明内容
为了解决现有技术中的存在的检测效率低并且不能实现对AFP和HCG这两 个检测项目进行同时联合定量检测的问题，本发明提供了一种运用一步检测法 结合唐氏综合征;险测方法。
为了解决现有技术中的存在的检测效率低、不能对4全测结果中AFP和HCG 这两个检测项目实现联合定量分析并对检测结果进行准确判断的问题，本发明 提供了 一种对唐氏综合征检测结果的分析方法。
为了配合唐氏综合征检测方法的进行，本发明提供了一种唐氏综合征检测 中所用芯片的制备方法。
本发明解决第一个技术问题所采用的方案是提供一种唐氏综合征检测方 法，该方法包括步骤第一步、将待检测标本与酶结合物混合，形成甲胎蛋白 -甲胎蛋白酶标抗体复合物和绒毛膜促性腺激素-绒毛膜促性腺激素酶标 抗体复合物；第二步、将第一步中所述甲胎蛋白-甲胎蛋白酶标抗体复合物和 绒毛膜促性腺激素-绒毛膜促性腺激素酶标抗体复合物滴加到检测芯片上， 进行反应；第三步、将底物滴加到所述第二步已完成反应的芯片上，进行显色 处理。
根据本发明的一优选实施例上述第二步又包括子步骤首先、用洗涤液 润洗所述检测芯片；其次、将甲胎蛋白-曱胎蛋白酶标抗体复合物和绒毛膜 促性腺激素-绒毛膜促性腺激素酶标抗体复合物滴加到检测芯片上，进行反 应；最后、用洗涤液洗涤上一步反应完成后的芯片，去除未与所述芯片上甲胎 蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体相结合的物质。
根据本发明的一优选实施例所述3000ml洗涤液中包括硼酸盐缓冲液 950ml-1200ml、吐温-20 (原倍)38 ml-42ml和去离子水1700ml-2050ml。
根据本发明的一优选实施例所述酶结合物通过酶标抗体稀释液稀释甲胎 蛋白抗体酶标抗体原液和绒毛膜促性&长激素抗体酶标抗体原液制成，稀释后 使得曱胎蛋白定量化检测范围为10—150ng/ml、绒毛膜促性腺激素定量化检测范围为l一12ug/ml。
根据本发明的一优选实施例所述500mL酶标抗体稀释液配制包括含有 0. 14 - 0. 16M磷酸盐緩冲液(PH7. 4 ) 500 ml、小牛血清白蛋白20. 00 g - 30. OOg、 浓度为1%-5%石克柳汞5 ml。
根据本发明的一优选实施例所述底物包括底物A和底物B，通过所述底物 A与所述底物B液以15: 1的比例混合而成；其中，所述底物A包括0. 2mo1/1 三羟曱基氨基甲烷盐酸盐緩冲液与0. 003g/ml l-萘酚溶液，通过940 - 960: 55-65的体积配比，充分搅拌，混合均匀制成；所述底物B中过氧化氢在灭菌水 中的终浓度为0. 15% —0. 25°/。，并搅拌均匀。
本发明解决第二个技术问题所采用的方案是提供一种唐氏检测结果分析 方法，该方法包括步骤第一步、进行所述芯片上信息的采集、分析；第二步、 输入待检测孕妇检测所需数据；第三步、根据公式
Risk = Risk—A伊Risk—Hcg *——^——计算唐氏检测风险数值。
Risk—Age
根据本发明一优选实施例所述第二步中待检测孕妇检测所需数据指标包 括末次月经时间、孕妇年龄、孕周、胎数、孕妇体重和既往病史。
根据本发明一优选实施例所迷第三步中
， 一1*( afjj-mean — a^>*0.74 )
曱胎蛋白风险Risk一Afp-^5j^A
a/2*;t *std — afp
1 *f afp-mean — a^p ) * e 5 L std —a印 J
1*( licg-niean —1，c,2 08丫 a 2 、std Vicg J
绒毛膜促性腺激素风险Risk一Hcg:^承d
V^^*std—hcg
1 " hcg-mean — hcg 、
2 L std hcg 乂
年龄风险<formula>formula see original document page 6</formula>本发明解决第三个技术问题所采用的方案是提供一种检测中所用芯片的制 备方法，该方法包括步骤第一步、将所述芯片上的膜面用去离子水浸泡5-10 分钟,取出晾干；第二步、将曱胎蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体用磷酸盐緩沖液稀释到l. Omg/ml;第三步、通过点样装置将所述第二步稀释后的甲胎 蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体固定在经所述处理后的所述膜面上；第四 步、将所述芯片膜组装成芯片使用。
本发明的有益效果是与传统检测方法比较，避免了对孕妇血清中项目指 标的连续反复检测，实现了AFP、 HCG两种项目指标的一次性检测完成，大大缩 短检验和分析的时间，在保障检测准确性的同时，提高了临床检验的效率；检 测结果采取数据化显示，定性、半定量和定量相结合，并且具备强大的数据储 存和调用统计功能，操作高度自动化，简便快速，10-20分钟可以完成检测， 显著的提高了检测效率，并且可方便进行单人份操作。
图l.是本发明唐氏综合征检测、分析方法及检测中所用芯片的制备方法中 唐氏综合征检测所用芯片制备方法流程图。 图2.是唐氏综合征^f企测方法流程图。 图3.是唐氏综合征检测结果分析过程流程图。 图4.是AFP理想检测曲线图。 图5.是HCG理想检测曲线图。
图6.是根据实验得到的AFP、 HCG实验结果数据图。
图7.是根据实验得到的AFP检测曲线图。
图8.是根据实验得到的HCG检测曲线图。
图9.是芯片阅读分析装置数据库存储的AFP标准曲线检测数据图。
图10.芯片阅读分析装置数据库存储的AFP标准曲线图。
图ll.AFP检测曲线方程验证数据图。
图12.芯片阅读分析装置数据库存储的HCG标准曲线^r测数据图。 图13.芯片阅读分析装置数据库存储的HCG标准曲线图。 图14. HCG检测曲线方程验证数据图。 图15.底物反应原理图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本实用新型进一步说明。
请参阅图l，本发明唐氏综合征检测、分析方法及检测中所用芯片的制备方法 中唐氏综合征检测所用芯片制备方法流程图。如图1所示，唐氏综合征检测所用 芯片制备方法包括步骤首先、将制备检测芯片时所用的芯片反应膜-NC膜用 去离子水浸泡5-10分钟，浸泡好捞出晾干。根据生产芯片的规格型号，在裁膜 机上进行剪裁；其次、将AFP单克隆抗体和HCG单克隆抗体分别按抗体给定的浓度用磷酸盐(PBS)稀释液稀释到l. Omg/ral;再;吏、将稀释好的AFP单克隆抗体 和HCG单克隆抗体放入市场上购买的芯片点样装置，将AFP单克隆抗体和HCG单克 隆抗体点到NC膜上并进行固定，将抗体固定在NC膜上后，采用含O. 1%-0. 5W、牛 血清白蛋白(BSA)的封闭液进行封闭处理；最后、将经过固定抗体前、后处理 过的NC膜片按顺序装配到壳体内，整个芯片由壳体、NC膜片、吸水材料组成。
在运用唐氏综合征检测芯片进行唐氏检测的过程，可以参阅图2,本发明唐 氏综合征检测、分析方法及检测中所用芯片的制备方法中唐氏综合征检测方法 流程图。如图2所示，该检测方法包括步骤
第一、将待检测标本与酶结合物进行混合，使待检测标本-孕妇血清中的 待^r物质AFP与HCG同各自相对应的酶标抗体充分结合，形成AFP—AFP酶标抗 体复合物和HCG—HCG酶标抗体复合物。在待检测标本与酶结合物混合过程中， 通过酶标抗体稀释液稀释AFP和HCG两种酶标抗体原液，稀释后使得对AFP定 量化检测范围为10—150ng/ml、 HCG定量化检测范围为l一12ug/ml。 其中酶标抗体稀释液的配置包括PBS、 BSA、硫柳汞，例如，在本实施例中，酉己 置5 00mL酶标抗体稀释液，需要O. 15MPBS ( PH7. 4 ) 500 ml、 25.00 g BSA、浓 度为1%-5。/。的碌u柳汞5 mL。其中，0.15M PBS ( PH7. 4 )溶液的配制包括通过 将0. 24 g KH2P04、 2. 90 g Na2HP04 . 12H20、 8. 00 g NaCl和0. 20 g KC1，加去 离子水定容至1000mL,用HC1溶液调PH值至7. 4左右后再用500mL试剂瓶分装， 高压灭菌25min。
第二步、将第一步中待检测标本与酶结合物的混合体滴加到检测芯片的检 测窗口内，该混合体在下渗的过程中会同检测芯片上的AFP抗体和HCG抗体充 分接触，并发生如下反应AFP—AFP酶标抗体复合物同4全测芯片上的AFP抗体 结合，形成AFP固相抗抗体一AFP—AFP酶标抗体复合物；HCG—HCG酶标抗体复 合物同冲企测芯片上的HCG抗体结合，形成HCG固相抗抗体一HCG—HCG酶标抗体。 为了达到更好的反应效果，在进行反应前应用洗涤液润洗固定有AFP抗体和HCG 抗体的NC膜面，反应完成后，用洗涤液再次清洗所述NC膜面，去除未与所述 NC膜上抗体相结合的物质。此时检测芯片上带有的酶量与标本中受检物质的量 呈一定的相关。生物芯片所用的洗涤液包括硼酸盐緩冲液(TBE )、吐温-20 (Tween-20)和去离子水。各成分的配比例如在本实施例中3000ml洗涤液各 成分的含量为硼酸盐緩冲液1000ml、 Tween-20 (原倍)40ml和去离子水 1960ml,上述物质经充分混合搅拌10min，分装后置于4。C环境下保存。其中TBE緩冲液的配制过程包括称量54g TrisBase，倒入r000ifll烧杯；称量27. 5克 硼酸，倒入1000ml烧杯；往1000ml烧杯中加入800ml去离子水，通过磁力搅拌 器搅拌5分钟，使得TrisBase和硼酸充分溶解到去离子水中；再加入10ml0.， 乙二胺四乙酸纳(EDTA)溶液；将上述混合溶液再倒入1000 ml量筒通过去离 子水定容至1000ml,利用磁力搅拌器搅拌；最后、将溶解混合均匀后的液体倒入 1 OOOml磨口瓶，即可盖上瓶盖备用。EDTA溶液配制过程包括第 一步、称量46. 5 3g 乙二胺四乙酸二钠，倒入500ml烧杯；第二步、往烧杯中加入200ml去离子水， 通过^f兹力拌器进行搅拌使得乙二胺四乙酸二钠溶解到去离子水中；第三步、填 加NaOH将上步中经过混合后溶液的PH值调至8. 0;第四步、溶解混勻后液体倒 入500 ml量筒内通过去离子水将上述混合溶液定容至250ml;第五步、定容后 液体倒回500ml烧杯,磁力搅拌器搅拌；第六步、将第五步中混匀均匀的液体倒 入500ral刻度瓶，盖紧瓶盖；最后，将EDTA溶液放置于4°C—8°C的环境下存放 备用。
唐氏综合征检测方法中的最后一步是将酶催化底物滴加到已完成反应的芯 片上，进行显色处理，根据颜色反应的程度进行待检物质AFP与HCG的定量分 析。底物的反应原理图可以参阅图15,如图15所示，其中l-萘酚为供氢体， HA为受氢体，在辣根过氧化物酶(HRP )的催化作用下两者迅速发生氧化还原 反应，使检测芯片的NC膜上固定的抗体点表面上产生大量的蓝紫色的1-萘酚多 聚体沉淀。颜色反应的程度反映检测芯片上辣根过氧化物酶(HRP)量的多少， 而检测芯片的NC膜上带有的酶量与标本中受检物质的量呈一定的相关，因此就 可以达到定性或定量分析的目的。在上述底物反应的过程中所用到的底物包括 底物A和底物B，所述底物是通过将所述底物A与所述底物B液以15: 1的 比例混合而成。其中，底物A的成分包括Tris-HC1緩冲液和l-萘酚，各成 分的配比为0. 2molA Tris-HC1 (PH7. 4)緩冲液与0. 003g/ml 1-萘酚溶液的体 积配比为950: 60。在本实施例中，在配置底物A时，釆用在0. 2mol/l Tris-1IC1 (P1I7. 4)緩冲液950ml中填加0. 003g/ml 1-萘酚溶液60ml经充分搅拌混匀,分 装后置于4t:环境下避光保存，即可获得底物A。其中底物A的组分中0. 2mol/l Tris-HC1 ,. 4)緩冲液的配制方法是通过在12. 14 g的Tris-base中填加去 离子水约450 ml,经过搅拌混匀后，加入高浓度HC1将液体的PH值调至7. 4, 再搅拌均匀，倒入500ml量筒中，用去离子水定容到500ml,倒回烧杯内搅拌均 匀后4保存备用。0. 003g/mll-萘酚的配制方法是通过在0. 15 g的1-萘酚中用 乙醇定容至50ml,液体混合均匀后将液体置于4。C的避光环境下密闭保存备用。底物B的成分包括HA和灭菌水，各成分配比为HA在灭菌水中的终浓度为 0.15% —O. 25%。制备方法，在本实施例中采用将浓度在30%的H202 450jil-750 用灭菌水定容到90ml，待搅拌混匀后，可以将溶液分装到4。C环境下，进 行保存。
相对于常规的芯片检测方法，本发明采取的是 一 步检测法的新模式对 AFP和HCG进行检测。即将AFP、 HCG的标记抗体直接与待测标本混合， 期间通过 一 步法来提高检测灵敏度。
采用一步法检测模式两者的理想检测曲线，其中AFP理想曲线如 图4所示、HCG理想曲线如图5所示。
实验中用到的试剂包括酶标稀释液；酶标抗体；固定有AFP、 HCG 单抗的芯片；洗涤液；底物；PBS和标准品。实验的操作步骤包括 首先、用PBS将AFP标准品分梯度分别稀释成10 ng/ml、 20 ng/ml、 30 ng/ml、 4G ng/ml、 80 ng/ml和160 ng/ml;用PBS将HCG标准品 分别稀释成lug/ml、 1.5ug/ml、 2ug/ml、 2. 5ug/ml、 4ug/ml和5ug/ml。其次、 将酶标抗体浓度稀释至使用浓度；最后、按一步法同时进行检测。上 述实验得到的AFP、 HCG实验结果数据可以参阅图6。针对上述实验数据得出 如图7所示的AFP ;f金测曲线图和如图8所示HCG检测曲线图。 通过上面附图可以看出实验结果与理论推导的结果是吻合的。 在本发明中采取了 一步检测法的新模式对母体血清中的AFP和 HCG的含量进行纟全测。将HCG、 AFP的标记抗体直接与4寺测标本混合， 将这样的反应模式运用到唐氏综合征检测中，可以明显的提高检测的 效率。
对于芯片反应结果的分析过程可以参阅图3本发明唐氏综合征检测、分析 方法及检测中所用芯片的制备方法中唐氏综合征检测结果分析过程流程图。如 图3所示，该检测方法包括步骤首先、将需要分析的芯片放入芯片阅读分析 装置中，通过芯片阅读装置开始进行芯片上数据信息的采集并进行分析，得到 生物芯片上AFP和HCG的灰度值，再与芯片阅读分析装置数据库存储的标准曲 线参数，通过标准曲线方程进行计算，得到标本的浓度值。
芯片阅读分析装置数据库存储的标准曲线的制作过程包括首先、用PBS ^夸AFP的才示准品分另'J稀释成10 ng/ml、 20 ng/ml 、 30 ng/ml、 40 ng/ml、 60 ng/ml 、 80 ng/tnl、 120ng/ml 、 160 ng/ml。用阴性血清将HCG才示准品分另寸稀释成0. 5 ug/ml 、 lug/ml 、 2 ug/ml 3ug/ml、 4ug/ml、 6 ug/ml、 8 ug/ml、 12 ug/ml;其次、将酶标抗体浓度稀释至最佳使 用浓度，按一步法进行检测。检测完成后读值，检测结果数据值可以 参阅图9芯片阅读分析装置数据库存储的AFP标准曲线检测数据图。根据如图 9所示的检测数值，得到如图10所示的芯片阅读分析装置数据库存储的AFP标 准曲线图，该图的曲线方程为Y=L 0079X-5. 9804 (方程中X代表灰度值， Y代表AFP浓度)。
对方程进行验证，取前期实验中所做的结果经计算对比，结果可 以参阅如图11所示的AFP检测曲线方程验证数据图。由图11可以看 到该AFP曲线方程公式能准确的计算出血清中所含AFP的含量。
HCG用阴性血清稀释后检测结果数据可以参阅图U,根据检测数值， 得到芯片阅读分析装置数据库存储的HCG标准曲线，如图13所示，该曲线的 方程为Y = 45. 54e °。衡(方程中X代表灰度值，Y代表HCG浓度)。随机 抽取试剂盒检测过的孕妇血清，即为已知HCG浓度的血清，用芯片进 行检测验证，所得数据结果经计算对比可得如图14所示的HCG标准曲 线方程验证数据图。通过该图中数据可见，该HCG标准曲线方程公式也 能准确的计算出血清中所含HCG的含量。
检测标本中AFP和HCG浓度的换算；将待测标本通过芯片阅读装置进行检 测，根据芯片阅读装置凄t据库内存储的标准曲线，系统软件会自动计算出检测 标本中AFP和HCG的含量。同时，检测标本中AFP和HCG的浓度值会被记录并 判断是否影响芯片阅读装置的数据库。如有影响，则将新的数据补充到原数据 库内，该次的检测结果便可以作为下一次检测的比对数据库资料，影响下一次 的检测结果。如没有影响，则仍继续用原来数据库内存储的数据资料。在得到 标本的浓度值后，芯片阅读装置的系统软件会把浓度值与芯片阅读装置数据库 中存储的数据进行比较得到该待检测标本中AFP和HCG两指标的中位数，再 把该中位数代入计算公式中计算，得到风险值AFP和HCG两个指标的风险数值。 同样，待检测标本中AFP和HCG两指标的中位数及每一次检测过程的中位值也 会被记录下来，并自动生成分布图，作为下一次检测的比对数据库资料。
然后，芯片阅读分析装置的软件系统会提示检测人员输入待检测孕妇的相 关信息，这些信息包括末次月经时间、孕妇年龄、孕周、胎数和孕妇体重等信息
根据风险值AFP和HCG这两个指标的计算计算出AFP的风险值和HCG的风 险值。AFP风险值和HCG风险值的计算公式为
<formula>formula see original document page 12</formula>Afp风险的计算公式为Risk—Afp-^^d-afp
V^* ;r * std 一 a*
afp-mean — af^、 承 2 、ski— a p 乂
1 / hcg-mean — hcg*2 08 )
2 Lstd —Iicg 」
Hcg风险的计算公式为RiSk—HCg=^*Std-hcg
1 J licg-mean 一hcg ) *e H std一hcg 乂
V2*;r *stdhcg
年龄风险指标的计算公式为Risk—Age《=6327=(。 95)，因为，芯片阅
读分析装置对待检测芯片分析的过程，是根据中国正常人群妊娠中期(孕14-20 周)妇女血清标本中AFP、 HCG含量数据库，计算AFP和HCG的正常人群中位数。 在定量分析计算出标本AFP、 HCG实际含量后，综合孕妇末次月经时间、孕妇年 龄、孕周、胎数和孕妇体重和既往病史等信息得到唐氏综合征的危险系数的。
唐氏综合征检测结果分析过程的最后一步是设备会针对采集到的芯片信 息，结合待检测孕妇的相关信息对唐氏风险根据公式
Risk = Risk—A伊Risk—Hcg*~~^~~ ，进行计算，得到最终的唐氏风险，并判断结果。
Risk—Age
唐氏综合征危险系数的临界值为1 /27 5 ,当芯片阅读装置最后计算出来 的危险系数大于该临界值，系统会建议受检者做产前诊断，如抽取羊
水，做羊水细胞培养染色体核型分析等；当危险系数小于临界值，则 胎儿为唐氏综合征的危险较小，可以继续妊娠。
上述的详细描述仅是示范性描述，本领域技术人员在不脱离本发明所保护 的范围和精神的情况下，可根据不同的实际需要设计出各种实施方式。
权利要求
1. 一种唐氏综合征检测方法，其特征在于所述唐氏综合征检测的方法包括步骤a1.将待检测标本与酶结合物混合，形成甲胎蛋白-甲胎蛋白酶标抗体复合物和绒毛膜促性腺激素-绒毛膜促性腺激素酶标抗体复合物；a2.将a1步所述甲胎蛋白-甲胎蛋白酶标抗体复合物和绒毛膜促性腺激素-绒毛膜促性腺激素酶标抗体复合物滴加到检测芯片上，进行反应；a3.将底物滴加到所述a2已完成反应的芯片上，进行显色处理。
2. 根据权利要求1所述的唐氏综合征检测方法，其特征在于所述a2步 又包括子步骤a21.用洗涤液润洗所述^r测芯片；a22.将曱胎蛋白-曱胎蛋白酶标抗体复合物和绒毛膜促性腺激素-绒 毛膜促性腺激素酶标抗体复合物滴加到检测芯片上，进行反应；a23.用洗涤液洗涤所述a22步反应完成后的芯片，去除未与所述芯片上甲 胎蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体相结合的物质。
3.根据权利要求2所述的唐氏综合征检测方法，其特征在于所述3000ml洗涤液中包括硼酸盐緩冲液950ml-l200ml、吐温-20 (原倍)38 nil-"ml 和去离子水170(M-2050ml。
4. 根据权利要求1所述的唐氏综合征检测方法，其特征在于所述酶结合 物通过酶标抗体稀释液稀释曱胎蛋白酶标抗体原液和绒毛膜促性腺激素酶 标抗体原液制成，稀释后使得甲胎蛋白定量化检测范围为10—150ng/ml、 绒毛膜促性腺激素定量化检测范围为l一12ug/ml。
5. 根据权利要求4所述的唐氏综合征检测方法，其特征在于所述酶标抗 体稀释液500mL的量配制包括含有0. 14 — 0. 16M磷酸盐緩冲液(PH7. 4 )500 ml、 小牛血清白蛋白5.00 g-10. 00g、浓度为1%-5°/ 硫柳汞5 ffll。
6. 根据权利要求1所述的唐氏综合征检测方法，其特征在于所述底物包 括底物A和底物B,通过所述底物A与所述底物B液以15: 1的比例混合而 成；其中，所述底物A包括0. 2rao1/1三羟甲基氨基曱烷盐酸盐緩冲液与 0. 003g/ml 1-萘酚溶液，通过940 - 960: 55-65的体积配比，充分搅拌，混合 均匀制成；所述底物B中过氧化氢在灭菌水中的终浓度为0.15% —O. 25%,并搅 拌均匀。
7. —种唐氏综合征检测结果分析方法，其特征在于所述唐氏综合征检测结果分析包括步骤bl.对反应完成后的所述芯片上信息的采集、分析； b2.输入待检测孕妇检测所需数据指标；b3.根据公式<formula>formula see original document page 3</formula>计算唐氏检测风险数值。
8. 根据权利要求7所述的唐氏检测结果分析方法，其特征在于所述b2 步中待检测孕妇检测所需数据指标包括末次月经时间、孕妇年龄、孕周、胎数、 孕妇体重和既往病史。
9. 根据权利要求7所述的唐氏4企测结果分析方法，其特征在于所述b3中曱胎蛋白风险<formula>formula see original document page 3</formula>绒毛膜促性腺激素风险<formula>formula see original document page 3</formula>年龄风险<formula>formula see original document page 3</formula>°
10. —种唐氏综合征检测中所用芯片的制备方法，其特征在于所述芯片的制备方法包括步骤cl.将所述芯片上的膜面用去离子水浸泡5-10分钟，取出晾干； c2.将甲胎蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体用磷酸盐緩冲液稀释到 1. Omg/ml;c3.通过点样装置将所述c2步稀释后的曱胎蛋白抗体和绒毛膜促性腺激 素抗体固定在经所述c 1处理后的所述膜面上； c4.将所述芯片膜组装成芯片使用。
全文摘要
本发明涉及一步检测法在唐氏综合征检测、分析方法中的应用及检测中所用芯片的制备方法。是通过将待检测标本与酶结合物相混合，再将此混合物与检测芯片上的甲胎蛋白抗体和绒毛膜促性腺激素抗体进行反应，通过添加辣根过氧化物酶催化底物实现显示反应，并通过芯片阅读装置对芯片反应结果进行数据采集、分析的一种唐氏综合征的检测方法。该方法与传统检测方法比较，避免了对孕妇血清中各项目指标的连续反复检测，实现了多种项目指标的一次性检测完成，大大缩短检验和分析的时间，在保障检测准确性的同时，提高了临床检验的效率。
文档编号G06F19/00GK101285837SQ20071007400
公开日2008年10月15日 申请日期2007年4月10日 优先权日2007年4月10日
发明者吴玲智, 王小明, 王荣娥, 许元峰, 谢德康, 黄列波 申请人:深圳欣康基因数码科技有限公司