专利名称：海蛰毒素源杀虫剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及海洋生物技术领域，具体讲是一种海蜇毒素源杀虫剂，是利用海蜇毒素作高效、低毒的生物源杀虫剂。
背景技术：
目前多数农药毒性高、残留高、污染重，已严重影响了农业的可持续发展，甚至影响到人体健康。吃蔬菜农药中毒的现象时有发生，例如北京市技术监督局曾经对蔬菜残留农药进行过检测，结果令人吃惊，合格率只有60％-80％，以至于有人感叹，“吃蔬菜等于吃污染”。因此，开发活性高、毒性低、选择性强、环境相容性好的生物源农药，已是迫在眉睫。另一方面，就是抗药性问题，近几年来，由于农药的大量连续使用，许多害虫的抗药性发展迅速，如小菜蛾，许多国家和地区已报道了小菜蛾对各种杀虫剂产生了抗药性。如DDT、有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯都发生了抗药性，此外，过去认为不容易产生抗药性的微生物杀虫剂Bt，现在亦产生了抗药性。再一方面，我国海蜇资源丰富，在海蜇大量存在时，它将干扰人们在海上的几乎所有活动，如娱乐，游泳，养渔业，更重要的是它伤及人的身体，如果被它刺到，能产生多种症状，包括疼痛、皮肤蛰痕、水肿、神经抑制、心跳停止、麻痹和死亡等，给人类的生活带来很大的威胁。所以利用海蜇资源制备生物杀虫剂，利国利民。现有的海蜇毒素分离提取技术，产率低、速度慢且生物活性极易丧失。
(三)技术内容本发明的目的就是利用丰富的海蜇资源，提取具有生物活性的海蜇毒素蛋白，同时制备活性高、毒性低、选择性强、环境相容性好、抗药性强的海蜇毒素源杀虫剂。
本发明的任务是由以下技术方案完成的，研制了一种海蜇毒素源杀虫剂。从活体海蜇触角中提取的海蜇毒素，按下列组分的重量/体积比制配海蜇毒素1-5体积份，稳定剂 1.5-20重量份，磷酸缓冲液 500-1000体积份；将上述组分混合均匀，制配成杀虫剂。
本海蜇毒素源杀虫剂所说的海蜇毒素，其浓度为5-150mg/ml的海蜇毒素。
本海蜇毒素源杀虫剂所说的海蜇毒素，其提取工艺步骤是，(1)将海蜇触角从活体海蜇上切除，并置于-80---20℃的低温下保存；(2)将称量的海蜇触角均匀绞碎，细胞破碎，加入1.0--5倍的重量/体积比的磷酸缓冲溶液中，放入4℃下，浸泡0.5-2h；(3)在4℃下，转速13000rpm，离心20min，取上清液；残渣用1.5--3倍的重量/体积比的磷酸缓冲溶液二次浸取，在4℃下，浸泡0.5-2h；再在4℃下，转速13000rpm，离心20min；合并两次离心的上清液；(4)用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白为标准，测定合并的上清液中海蜇毒素浓度；(5)用渗透浓缩法，将(3)中的合并的上清液浓缩至所需浓度。
本海蜇毒素源杀虫剂所说的稳定剂是苯甲酸，和/或抗坏血酸(Vc)，和/或乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。
本海蜇毒素源杀虫剂，还可再加入表面活性剂是0.1-0.5重量份的C7-C19醇聚氧乙烯醚。
本海蜇毒素源杀虫剂，还可再加入叶面附着增强剂是1-10体积份的壳聚糖。
本发明的优点在于(1)本产品对十字花科植物的主要害虫，如小菜蛾，菜青虫等具有较强的防治杀伤作用；
(2)本产品对人、畜无毒害；(3)本产品对环境无污染；(4)海蜇的剩余部分，可加工成食用海蜇；生产本产品的残渣可用来作肥料；(5)本产品充分利用了海蜇这种丰富的海洋生物资源，使海蜇这种低值资源获得高值化发展；(6)在本杀虫剂的配制过程中，使用C7-C19醇聚氧乙烯醚作为表面活性剂，它是非离子型的，泡沫少，具有降低液体表面张力的功能，使药液能均匀的施展在页面上，且能够抑制杀虫剂主要成分蛋白质的变性。
(7)在本杀虫剂的配制过程中首次加入叶面附着增强剂壳聚糖，它能够在叶面形成一层薄膜，有利于杀虫剂在叶面分布均匀，并能够提高杀虫剂的稳定性，此外，壳聚糖还能够促进植物的生长发育；(8)在本杀虫剂的配制过程中，添加了抗坏血酸，苯甲酸和EDTA，抗坏血酸具有抗氧化性，能够防止毒素中的二硫键被氧化，与常用的抗氧化剂二巯基乙醇相比，在实验操作过程中，它对人体无毒，苯甲酸具有防腐性，能够抑制细菌的生长，且比较廉价，EDTA为螯合剂，海蜇毒素中含有金属蛋白酶，金属蛋白酶会使所需的蛋白质发生降解，甚至改变蛋白质的活性，金属蛋白酶需要金属阳离子，如Ca2+，Mg2+，Mn2+等，才能充分发挥作用，用EDTA与二价金属阳离子螯合，可以封阻金属蛋白酶与海蜇毒素的作用，从而提高了速度、稳定性和产率。
(四)实施例本发明的保护范围不仅局限于下列实施例中。
一、海蜇毒素提取的实施例(1)将一定量活体海蜇的海蜇触角用超声波破碎仪破碎，加入3.5倍的10mM，PH6的磷酸缓冲溶液(PB)中，放入4℃下，浸泡0.5h；
(2)在4℃下，转速13000rpm，离心20min，取上清液；残渣用2.5倍的重量/体积比的10mM，PH6的磷酸缓冲溶液(PB)二次浸取，在4℃下，浸泡0.5h；再在4℃下，转速13000rpm，离心20min；合并两次离心的上清液；(3)用考马斯亮兰染色法(该法选自《蛋白质分子基础》，陶慰孙等编，高等教育出版社)，以牛血清白蛋白为标准，测海蜇毒素在595nm处的吸光度(A595)，根据朗伯比尔定律，进而算出上清液中海蜇毒素的浓度(Cmg/ml)。
(4)用渗透浓缩法(该法选自《蛋白质分子基础》，陶慰孙等编，高等教育出版社)，将合并的上清液浓缩至5-150mg/ml。
表1海蜇毒素提取的实施例
二、海蜇毒素源杀虫剂的制备实施例将100mg/ml的海蜇毒素，壳聚糖为30％的酸溶液按表2配方制备海蜇毒素杀虫剂。表2海蜇毒素源杀虫剂的配方实施例
将上述实施例中的海蜇毒素源杀虫剂，稀释500倍，进行田间药效试验，以清水为对照，取得良好的防治效果，见表3。表3海蜇毒素源杀虫剂防治菜青虫田间效果调查结果
权利要求
1.一种海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于从活体海蜇触角中提取的海蜇毒素，按下列组分的重量/体积比制配海蜇毒素1-5体积份，稳定剂 1.5-20重量份，磷酸缓冲液 500-1000体积份；将上述组分混合均匀，制配成杀虫剂。
2.根据权利要求1所述海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于所说的海蜇毒素，其浓度为5-150mg/ml的海蜇毒素。
3.根据权利要求1或2所述海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于所说的海蜇毒素，其提取工艺步骤是，(1)将海蜇触角从活体海蜇上切除，并置于-80---20℃的低温下保存；(2)将称量的海蜇触角均匀绞碎，细胞破碎，加入1.0--5倍的重量/体积比的磷酸缓冲溶液中，放入4℃下，浸泡0.5-2h；(3)在4℃下，转速13000rpm，离心20min，取上清液；残渣用1.5--3倍的重量/体积比的磷酸缓冲溶液二次浸取，在4℃下，浸泡0.5-2h；再在4℃下，转速13000rpm，离心20min；合并两次离心的上清液；(4)用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白为标准，测定合并的上清液中海蜇毒素浓度；(5)用渗透浓缩法，将(3)中的合并的上清液浓缩至所需浓度。
4.根据权利要求1所述海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于所说的稳定剂是苯甲酸，和/或抗坏血酸，和/或乙二胺四乙酸二钠。
5.根据权利要求1所述海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于该杀虫剂，再加入表面活性剂是0.1-0.5重量份的C7-C19醇聚氧乙烯醚。
6.根据权利要求1所述海蜇毒素源杀虫剂，其特征在于该杀虫剂，再加入叶面附着增强剂是1-10体积份的壳聚糖。
全文摘要
本发明公开了一种海蜇毒素源杀虫剂。从活体海蜇触角中提取制得的海蜇毒素，按下列组分的重量/体积比制配海蜇毒素是1－5体积份，稳定剂是1.5－20重量份，磷酸缓冲液是500－1000体积份；将上述组分混合均匀，制配成杀虫剂。本杀虫剂对十字花科植物的主要害虫，如小菜蛾，菜青虫等具有较强的防治杀伤作用；对人、畜无毒害；对环境无污染；海蜇的剩余部分，可加工成食用海蜇；生产本产品的残渣可用来作肥料；本杀虫剂充分利用了海蜇这种丰富的海洋生物资源，使海蜇这种低值资源获得高值化发展。
文档编号A01N63/00GK1402990SQ0213559
公开日2003年3月19日 申请日期2002年10月9日 优先权日2002年10月9日
发明者李鹏程, 于华华 申请人:中国科学院海洋研究所