多种淀粉磷酸化酶活性增加的植物的制作方法

专利名称：多种淀粉磷酸化酶活性增加的植物的制作方法
技术领域：
本发明涉及基因修饰的植物细胞和植物，其中基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞或者野生型植物相比，淀粉磷酸化OK1蛋白质和淀粉磷酸化R1蛋白质的活性增加。此外，本发明涉及产生此类植物细胞和植物的工具和方法。该类型的植物细胞和植物合成经修饰的淀粉。本发明因此还涉及通过根据本发明的植物细胞和植物合成的淀粉、生产该淀粉的方法、该修饰的淀粉的淀粉衍生物的生产以及含有根据本发明淀粉的面粉。
此外，本发明涉及含有编码OK1蛋白质和R1蛋白质的序列的核酸分子和载体，以及含有这些核酸分子的宿主细胞。
由于当前植物成分作为可再生的原料来源的不断增加的重要性，生物技术研究的任务之一是尽力使这些植物原料适合加工工业的要求。此外，为了使得再生的原料用于尽可能多的应用领域，必须实现多种材料。
多糖淀粉由化学上一致的基本组分葡萄糖分子组成，但是构成了不同分子形式的复杂混合物，其在多聚化和分枝程度上显示出不同，因此在它们的物理-化学特征上很不相同。直链淀粉和支链淀粉之间存在差别，直链淀粉是由α-1，4-糖苷键连接的葡萄糖单位形成的基本上不分枝的聚合物，支链淀粉是分枝聚合物，其中通过额外的α-1，6-糖苷键形成分枝。直链淀粉和支链淀粉之间的另一基本差异在于分子量。根据淀粉的来源，直链淀粉的分子量为5×105-106Da，支链淀粉的分子量为107到108Da之间。这两种大分子可以通过它们的分子量和它们不同的物理-化学特征来区别，所述物理-化学特征可以最容易地通过它们不同的碘键合特征看到。
将直链淀粉视为线性聚合物，由α-1，4-糖苷键连接的α-D-葡萄糖单体组成。然而，在更近的研究中，已经表明存在α-1，6-糖苷键分枝点(约0.1％)(Hizukuri和Takagi，Carbohydr.Res.134，(1984)，1-10；Takeda等人，Carbohydr.Res.132，(1984)，83-92)。
淀粉的功能特征，如溶解度、凝沉行为、水结合能力、膜形成特征、粘性、粘附特征、冻融稳定性、酸稳定性、胶凝强度、淀粉的淀粉颗粒大小和其他特征受到直链淀粉/支链淀粉比、分子量、侧链分布模式、离子强度、脂类和蛋白质含量、淀粉的平均淀粉颗粒大小、淀粉颗粒形态等的影响。淀粉的功能特征还受到磷酸含量、淀粉的非碳组分的影响。需要区别单酯形式的共价结合葡萄糖分子的磷酸(下文称作淀粉磷酸酯)和结合淀粉的磷脂形式的磷酸。
淀粉磷酸酯的浓度取决于植物类型而不同。从而，某些玉米突变体合成具有增加浓度的淀粉磷酸酯的淀粉(蜡质玉米0.002％和高直链淀粉玉米0.013％)，而常规玉米种仅含有痕量淀粉磷酸酯。在小麦中同样发现少量淀粉磷酸酯(0.001％)，而在燕麦和高梁中没有淀粉磷酸酯。同样，在稻突变体比在常规稻种类(0.013％)中发现更少的淀粉磷酸酯。已经表明在球茎或者贮藏根淀粉合成植物中存在大量淀粉磷酸酯，如木薯淀粉(0.008％)、红薯(0.011％)、竹芋(0.021％)或者马铃薯(0.089％)。上面引用的关于淀粉磷酸酯含量的百分数值涉及各自淀粉干重并且由Jane等人(1996，CerealFoods World 41(11)，827-832)测定。
淀粉磷酸酯可以以单酯形式存在于聚合的葡萄糖单体的C-2、C-3或者C-6位(Takeda和Hizukuri，1971，Starch/St_rke 23，267-272)。植物合成的淀粉中磷酸的磷酸分布从而通常表明约30％到40％的磷酸残基共价结合在葡萄糖分子的C-3位，约60％到70％的磷酸残基共价结合在葡萄糖分子的C-6位(Blennow等人，Int.J.of Biological Macromolecules27，211-218)。Blennow等人(2000，Carbohydrate Polymers 41，163-174)测定了多种淀粉中结合在葡萄糖分子的C-6位的淀粉磷酸酯的浓度，所述淀粉为诸如马铃薯淀粉(取决于物种，7.8到33.5nMol/mg)、来自多种姜黄属种类的淀粉(1.8到63nMol/mg)、木薯淀粉(2.5nMol/mg淀粉)、稻淀粉(1.0nMol/mg淀粉)、绿豆淀粉(3.5nMol/mg淀粉)和高梁淀粉(0.9nMol/mg淀粉)。这些作者在大麦淀粉和来自玉米的多种蜡质突变体的淀粉中没有检测到结合在C-6位的淀粉磷酸酯。还没有建立植物的基因型和淀粉磷酸酯的浓度之间的联系(Jane等人，1996，Cereal Foods World 41(11)，827-832)。因此，当前不可能通过育种措施影响植物中淀粉磷酸酯的浓度。
以前描述了仅一种蛋白质对淀粉引入磷酸残基和葡萄糖分子的共价键。该蛋白质具有α-葡聚糖水二激酶(dikinase)的酶促活性(GWD，E.C.2.7.9.4)(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)，在科学文献中通常称作R1并且在马铃薯块茎中的贮藏淀粉中结合到淀粉颗粒(Loberth等人，1998，Nature Biotechnology 16，473-477)。在R1催化的反应中，离析物α-1，4-葡聚糖(淀粉)、腺苷三磷酸(ATP)和水被转化成产物葡聚糖磷酸(淀粉磷酸酯)、一磷酸和腺苷一磷酸。同时，ATP的γ磷酸残基被转移到水，ATP的β磷酸残基被转移到葡聚糖(淀粉)。R1将β-磷酸残基在体外从ATP转移到α-1，4-葡聚糖的葡萄糖分子的C-6和C-3位。通过体外反应得到的C-6磷酸和C-3磷酸的比率对应于存在于从植物分离的淀粉中的比率(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。马铃薯淀粉中存在的约70％的淀粉磷酸酯结合到淀粉的葡萄糖单体的C-6位，约30％结合在C-3位，这意味着R1优选磷酸化葡萄糖分子的C-6位。此外，通过使用来自玉米等的支链淀粉表明，R1可以磷酸化不含有共价结合的磷酸的α-1，4-葡聚糖(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)，即，R1能够在α-1，4-葡聚糖中从头引入磷酸。
在WO 02 34923中描述了通过过表达来自马铃薯的R1基因具有增加活性的R1蛋白质的玉米植物。这些植物与对应的不能检测到淀粉磷酸酯的野生型植物相比，合成大量的在葡萄糖分子的C-6位上存在淀粉磷酸酯的淀粉。
以前没有描述催化向淀粉导入共价结合的磷酸基团的反应的其他蛋白质。优选在淀粉的葡萄糖分子的C-3位和/或C-2位引入磷酸基团的酶也是未知的。除了增加植物中淀粉磷酸酯含量，也没有特异影响植物中淀粉的磷酸化、修饰植物合成的淀粉中的磷酸分布，和/或进一步增加淀粉磷酸酯含量的方法。
本发明的目的因此基于提供具有增加的磷酸含量和/或改变的磷酸分布的经修饰的淀粉以及合成这种经修饰淀粉的植物细胞和/或植物，以及产生所述植物和/或植物细胞的方法和手段。
通过权利要求书中描述的实施方案解决了该问题。
本发明因此涉及基因修饰的植物细胞和植物，其特征是它们与对应的没有基因修饰的对应野生型植物细胞或者野生型植物相比具有活性增加的至少一种OK1蛋白质和至少一种R1蛋白质。
本发明的第一方面涉及基因修饰的植物细胞或者植物，其中该基因修饰导致与没有基因修饰的野生型植物细胞或者野生型植物相比，增加至少一种OK1蛋白质的活性，同时增加至少一种R1蛋白质的活性。
同时，基因修饰可以是任何基因修饰，其导致与没有基因修饰的对应野生型植物细胞或者野生型植物相比，至少一种OK1蛋白质的活性增加和(同时)至少一种R1蛋白质的活性增加。
结合本发明，术语“野生型植物细胞”表示有关的植物细胞用作产生根据本发明的植物细胞的起始材料，即，除了所引入的基因修饰，它们的遗传信息对应于根据本发明的植物细胞的遗传信息。
结合本发明，术语“野生型植物”表示有关的植物用作产生根据本发明的植物的起始材料，即，除了所引入的基因修饰，它们的遗传信息对应于根据本发明的植物的遗传信息。
结合本发明，术语“对应”表示在几种对象的比较中，相互比较的有关对象保持在相同条件下。结合本发明，和与基因修饰的植物细胞或者植物比较的野生型植物细胞或者野生型植物有关的术语“对应”表示相互比较的植物细胞或者植物在相同培养条件下生长并且具有相同的(培养)年龄。
这里，在本发明范围内，术语“至少一种OK1蛋白质的活性增加”表示编码OK1蛋白质的内源基因的表达增加和/或细胞中OK1蛋白质的量增加和/或细胞中OK1蛋白质的酶促活性增加。
这里，在本发明范围内，术语“至少一种R1蛋白质的活性增加”表示编码R1蛋白质的内源基因的表达增加和/或细胞中R1蛋白质的量增加和/或细胞中R1蛋白质的酶促活性增加。
例如，通过测量编码OK1蛋白质或者R1蛋白质的转录物的量，可以确定表达的增加。这可以通过RNA印迹分析或者RT-PCR来进行。这里，增加优选表示与没有基因修饰的对应细胞相比转录物的量增加至少50％，尤其至少70％，优选至少85％，尤其优选至少100％。编码OK1蛋白质的转录物的量的增加也表示没有可检测量的编码OK1蛋白质的转录物的植物或者植物细胞在根据本发明的基因修饰后有可检测量的编码OK1蛋白质的转录物。编码R1蛋白质的转录物的量的增加也表示没有可检测量的编码R1蛋白质的转录物的植物或者植物细胞在根据本发明的基因修饰后有可检测量的编码R1蛋白质的转录物。
OK1蛋白质或者R1蛋白质的蛋白质量的增加导致有关植物细胞中这些植物蛋白质的活性增加，可以例如，通过免疫学方法，如蛋白质印迹分析、ELISA(酶联免疫吸附测定)或者RIA(放射免疫测定)来测定。这里，增加优选表示与没有基因修饰的对应细胞相比蛋白质的量增加至少50％，尤其至少70％，优选至少85％，尤其优选至少100％。OK1蛋白质的量的增加也表示没有可检测活性的OK1蛋白质的植物或者植物细胞在根据本发明的基因修饰后具有可检测量的OK1蛋白质。R1蛋白质的量的增加也表示没有可检测活性的R1蛋白质的植物或者植物细胞在根据本发明的基因修饰后具有可检测量的R1蛋白质。
生产与所指定的蛋白质特异反应，即特异结合所述蛋白质的抗体的方法是本领域技术人员已知的(见，例如，Lottspeich和Zorbas(Eds.)，1998，Bioanalytik，Spektrum akad，Verlag，Heidelberg，Berlin，ISBN3-8274-0041-4)。此类抗体的生产由一些公司(例如，Eurogentec，Belgium)以合同服务提供。下面进一步描述与OK1蛋白质特异反应的抗体的生产的可能性(见实施例10)。Lorberth等人(1998，Nature Biotechnology16，473-477)和Ritte等人(2000，Plant Journal 21，387-391)描述了可以通过免疫学方法用来确定R1蛋白质量的增加的抗体。
在本发明范围内，术语“OK1蛋白质”应该理解为表示将磷酸残基从ATP转移到已经磷酸化的淀粉(P-淀粉)的蛋白质。从拟南芥(Arabidopsisthaliana)sex1-3突变体的叶子分离的淀粉没有可检测量的共价结合的磷酸残基并且没有被OK1蛋白质磷酸化，即，根据本发明的OK1蛋白质需要已经磷酸化的淀粉作为转移额外磷酸残基的底物。优选地，将ATP的β磷酸残基从OK1蛋白质转移到淀粉并且将ATP的γ磷酸残基转移到水。作为额外的反应产物，在OK1蛋白质进行的P-淀粉的磷酸化反应期间形成AMP(腺苷一磷酸)。因此将OK1蛋白质称作[磷酸化的α-葡聚糖]-水-二激酶([P-葡聚糖]-水-二激酶)或者称作[磷酸化的淀粉]水-二激酶。
因此，OK1蛋白质催化根据下式的反应
优选地，在OK1蛋白质磷酸化的P-淀粉上在P-淀粉的葡萄糖分子的C-6位和/或C-3位中形成额外磷酸单酯键。尤其优选地，与对应的P-淀粉的葡萄糖分子的C-6位中的磷酸单酯键相比，在OK1蛋白质催化的P-淀粉的磷酸化中在C-3位形成一些额外的磷酸单酯键。
编码OK1蛋白质的氨基酸序列含有磷酸组氨酸结构域。磷酸组氨酸结构域例如由Tien-Shin Yu等人(2001，Plant Cell 13，1907-1918)描述。来自OK1蛋白质编码氨基酸序列的磷酸组氨酸结构域优选含有两个组氨酸。
在P-淀粉的通过OK1蛋白质的磷酸化反应的催化中，形成中间产物磷酸化的OK1蛋白质，通过它ATP的磷酸残基共价结合到OK1蛋白质的氨基酸。通过OK1蛋白质的自磷酸化形成该中间产物，即，OK1蛋白质自身催化导致该中间产物的反应。优选地，通过自磷酸化作用磷酸化编码OK1蛋白质的氨基酸序列的组氨酸残基，尤其优选作为磷酸组氨酸结构域的部分的组氨酸残基。
此外，根据本发明的OK1蛋白质对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性。
因为还没有描述需要P-淀粉作为底物以便将它们进一步磷酸化的酶，直到现在才将植物中已经磷酸化的淀粉的淀粉磷酸酯的浓度增加到超过一定量。这只有通过为植物的基因修饰使用根据本发明的蛋白质或者根据本发明的核酸分子才是可能的。OK1蛋白质的功能以及具有该功能的OK1蛋白质的制备的阐明表示只有合成具有修饰性质的淀粉的植物才可以基因修饰得到该效果。由于缺少可用的方法，植物合成的淀粉中磷酸分布的修饰直到现在才可能。通过制备根据本发明的蛋白质和根据本发明的核酸，现在天然淀粉中磷酸比率的修饰也是可能的。本发明的另一优点是，对于OK1蛋白质与R1蛋白质的同时协作，比当在空间或者时间上相互分离的各自蛋白质磷酸化淀粉或者P-淀粉时在淀粉中掺入更高量的磷酸。
在本发明范围内，术语“R1蛋白质”应该理解为表示将磷酸残基从ATP转移到淀粉的蛋白质。从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的淀粉没有可检测量的共价结合的磷酸残基而是从R1蛋白质磷酸化。这表示例如，从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的非磷酸化的淀粉用作R1蛋白质催化的磷酸化反应的底物。
优选地，ATP的β磷酸残基从R1蛋白质转移到淀粉并且ATP的γ磷酸残基转移到水。得到额外反应产物AMP(腺苷一磷酸)。因此将R1蛋白质称作[α-1，4-葡聚糖]-水-二激酶或者淀粉-水-二激酶(E.C.2.7.9.4；Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。
在R1蛋白质催化的淀粉的磷酸化中，与各自淀粉的葡萄糖分子的C-3位中磷酸单酯键相比，在葡萄糖分子的6-位得到更多额外的磷酸单酯键。通过R1蛋白质，在淀粉的葡萄糖分子的C-6位引入约60％到70％的磷酸残基，在淀粉的葡萄糖分子的C-3位引入约30％到40％的磷酸残基(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。
在通过R1蛋白质对淀粉的磷酸化反应的催化中，得到中间产物磷酸化的R1蛋白质，通过该中间产物ATP的磷酸残基共价结合到R1蛋白质的氨基酸(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。通过R1蛋白质的自磷酸化得到中间产物，即，R1蛋白质自身催化导致该中间产物的反应。编码R1蛋白质的氨基酸序列含有磷酸组氨酸结构域。磷酸组氨酸结构域例如，由Tien-Shin Yu等人(2001，Plant Cell 13，1907-1918)描述。来自R1蛋白质编码氨基酸序列的磷酸组氨酸结构域优选含有一个组氨酸。通过R1蛋白质的自磷酸化，编码R1蛋白质的氨基酸序列的磷酸组氨酸结构域中的组氨酸残基被磷酸化(Mikkelsen等人，2003，Biochemical JournalIntermediate Publication)，在2003年10月作为手稿BJ20030999公开；Mikkelsen等人，2004，Biochemical Journal 377，525-532)。
描述了来自不同物种的编码R1蛋白质的核酸序列和对应的氨基酸序列，所述物种为例如马铃薯(WO 97 11188，GenBank Acc.AY027522，Y09533)、小麦(WO 0077229，US 6,462,256，GenBank Acc.AAN93923，GenBank Acc.AR236165)、稻(GenBank Acc.AAR61445，GenBank Acc.AR400814)、玉米(GenBank Acc.AAR61444，GenBank Acc.AR400813)、大豆(GenBankAcc.AAR61446，GenBank Acc.AR400815)、柑桔(GenBank Acc.AY094062)和拟南芥(GenBank Acc.AF312027)。所鉴定的编码R1蛋白质的核酸序列和氨基酸序列由NCBI(http://www.ncbi.nim.nih.gov/entrez/)等公布，并且作为参考文献明确地包括在本申请的说明书中。
结合本发明，术语“增加的结合活性”将理解为蛋白质对第一种底物的亲和性与对第二种底物的亲和性相比增加。也就是说，在相同温育条件下结合第一种底物大于结合第二种底物的蛋白质的量显示出对第一种底物的增加的结合活性。
结合本发明，术语“淀粉磷酸酯”将理解为共价结合淀粉的葡萄糖分子的磷酸基团。
结合本发明，术语“非磷酸化的淀粉”将理解为不合有可检测量的淀粉磷酸酯的淀粉。描述了多种用于测定淀粉磷酸酯的量的方法。优选地，Ritte等人(2000，Starch/St_rke 52，179-185)描述的方法可以用于测定淀粉磷酸酯的量。尤其优选地，根据Kasemusuwan和Jane(1996，Cereal Chemistry73，702-707)描述的方法，通过31P-NMR进行淀粉磷酸酯的量的测定。
结合本发明，术语“磷酸化的淀粉”或者“P-淀粉”将理解为含有淀粉磷酸酯的淀粉。
例如，用在β位含有标记的磷酸残基的ATP(标记的ATP)，通过OK1蛋白质的体外温育，可以显示OK1蛋白质的活性。优选在ATP的β位特异标记磷酸残基，即，仅在β位的磷酸残基带有标记。优选使用放射性标记的ATP。尤其优选使用的是特异放射性标记磷酸残基的ATP，特别优选使用在β位用33P特异标记磷酸残基的ATP。如果OK1蛋白质与标记的ATP和没有磷酸化的淀粉温育，那么没有磷酸通过OK1转移到淀粉。优选使用拟南芥突变体sex1-3的叶子淀粉(Tien-Shin Yu等人，2001，PlantCell 13，1907-1918)。
然而，如果OK1蛋白质与P-淀粉在标记的ATP的存在下温育，那么可以随后显示共价结合到P-淀粉的标记的磷酸。优选使用来自拟南芥叶子的淀粉，尤其优选使用来自拟南芥sex1-3突变体的R1蛋白质的酶促磷酸化的淀粉(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。
例如，通过分离标记的P-淀粉(例如，通过乙醇沉淀方法、过滤、层析方法等等)与反应混合物的残余物并随后检测P-淀粉级分中标记的磷酸残基，可以显示P-淀粉中通过OK1蛋白质装配的经标记的磷酸残基。同时，例如，通过测定P-淀粉级分中存在的放射性的量(例如，通过闪烁计数器)，可以显示P-淀粉级分中结合的标记的磷酸残基。在“一般方法”的11项和实施例6中进一步描述了检测蛋白质的可能方法，其中必须将P-淀粉作为磷酸化反应的底物。
如文献中所述可以显示R1蛋白质的活性，例如(Mikkelsen等人，2003，Biochemical Journal Intermediate Publication.2003年10月作为手稿BJ20030999公开；Mikkelsen等人，2004，Biochemical Journal 377，525-532，Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。
例如，通过分析蛋白质磷酸化的P-淀粉，可以确定P-淀粉中葡萄糖单体的碳原子的哪些位置(C-2、C-3或者C-6)可以被OK1蛋白质优选磷酸化，如Ritte等人(2002，PNAS 99，7166-7171)所述。为此，将蛋白质磷酸化的P-淀粉用酸水解，然后通过阴离子交换层析分析。
优选地，通过NMR分析OK1蛋白质磷酸化的P-淀粉以便确定P-淀粉中葡萄糖单体的碳原子的哪些位置(C-2、C-3或者C-6)被磷酸化。鉴定通过OK1蛋白质催化的反应磷酸化的淀粉的葡萄糖分子的C-原子位置的一种尤其优选的方法在下面的一般方法第13项中描述。
例如，通过分析R1蛋白质磷酸化的淀粉，可以确定淀粉中葡萄糖单体的碳原子的哪些位置(C-2、C-3或者C-6)优选被R1蛋白质磷酸化，如Ritte等人(2002，PNAS 99，7166-7171)所述。为此，将蛋白质磷酸化的淀粉用酸水解，然后通过阴离子交换层析分析。
优选地，通过NMR分析OK1蛋白质磷酸化的P-淀粉或者R1蛋白质磷酸化的淀粉以便确定P-淀粉或者淀粉中葡萄糖单体的碳原子的哪些位置(C-2、C-3或者C-6)被磷酸化。鉴定通过OK1蛋白质或者R1蛋白质催化的反应磷酸化的淀粉的葡萄糖分子的C-原子位置的一种尤其优选的方法在下面的一般方法第13项中描述。
例如，通过Ritte等人(2002，PNAS 99，7166-7171)或者Mikkelsen等人(2003，Biochemical Journal Intermediate Publication.2003年10月作为手稿BJ20030999公开，Mikkelsen等人，2004，Biochemical Journal377，525-532)描述的，可以对R1蛋白质阐明磷酸化的蛋白质，其作为OK1蛋白质促进的P-淀粉磷酸化的中间产物。
为了阐明自磷酸化的中间产物的存在，首先不存在淀粉时用标记的ATP，优选在β磷酸位特异标记的ATP，尤其优选用在β磷酸位用33P特异标记的ATP温育OK1蛋白质。与这平行的是反应制备物2，其不使用标记的ATP，而是含有对应量的未标记的ATP，将该反应制备物2在其他相同的条件下温育。随后，向反应混合物1加入过量未标记的APT，向反应混合物2加入未标记的ATP和标记的ATP的混合物(与前面在反应混合物1中所用标记的ATP相同量，和与过量加入反应混合物1的未标记的APT相同量)，并进一步温育，然后将P-淀粉分别加入反应混合物1的部分A(部分1A)或者反应混合物2的部分A(部分2A)。通过变性蛋白质终止反应混合物的剩余部分1B和部分2B中的反应。可以通过本领域技术人员已知的方法终止反应混合物的部分B，所述方法导致蛋白质变性，优选通过加入十二烷基硫酸钠(SDS)。反应混合物的部分1A和部分2A至少再温育10分钟，之后也终止这些反应。各自反应混合物的部分A和部分B中存在的淀粉与反应混合物的剩余物分离。例如，如果通过离心分离各自淀粉，那么当离心完成时，在沉降的沉淀物中发现反应混合物的各部分A或者部分B的淀粉，并且在各自离心的上清液中发现各自反应混合物中的蛋白质。反应混合物的各自部分1A或者2A和各自部分1B或者2B的上清液可以随后通过变性丙烯酰胺凝胶电泳，然后通过所得丙烯酰胺凝胶的放射自显影进行分析。为了定量通过丙烯酰胺凝胶电泳分离的放射标记的蛋白质的量，可以使用例如，本领域技术人员已知的所称作的“磷成像”(phospho-imaging)方法。如果对反应混合物1的部分B的离心上清液中蛋白质的放射自显影或者通过“磷成像”分析表明与反应混合物1的部分A的离心上清液相比显著增加的信号，那么这表明促进淀粉磷酸化的蛋白质以自磷酸化的中间产物发生。反应混合物2的部分A和B作为对照并且将因此在放射自显影中或者通过“磷成像仪”的分析中不显示出离心上清液中显著增强的信号。
此外，如果必要，随后洗涤各自淀粉后，可以研究各自沉降的沉淀物中保留的反应混合物1和2的各自部分A的淀粉，以分析淀粉磷酸酯的存在，该淀粉磷酸酯具有对应于所用的标记ATP的标记。如果反应混合物1的部分A的淀粉含有标记的磷酸残基，并且如果反应混合物1的部分B的离心上清液的放射自显影与反应混合物1的部分A的离心上清液相比在放射自显影中显示出显著增强的信号，那么这表明促进淀粉磷酸化的蛋白质以自磷酸化的中间产物存在。反应混合物2的部分A和B作为对照并且将因此对于含有α-1，4-葡聚糖的沉降的沉淀物中用例如33P标记的α-1，4-葡聚糖不显示出显著增强的信号。下面在“一般方法”的第12项和实施例7中描述了阐明磷酸化的OK1蛋白质中间产物的可能方法。
通过将OK1蛋白质与P-淀粉和非磷酸化的淀粉在分开的制备物中温育，可以阐明OK1蛋白质对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性。所有非磷酸化的淀粉基本上都适于温育OK1蛋白质与非磷酸化的淀粉。优选地，使用非磷酸化的植物淀粉，尤其优选小麦淀粉，特别优选拟南芥突变体sex1-3的粒状叶子淀粉。从植物分离淀粉的方法例如是本领域技术人员已知的。本领域技术人员已知的所有方法基本上适于从适宜的植物种类分离非磷酸化的淀粉。优选地，使用下述分离非磷酸化淀粉的方法(见一般方法第二项)。
含有淀粉磷酸酯的所有淀粉都基本上适于温育OK1蛋白质与P-淀粉。化学上磷酸化的淀粉也可用于该目的。优选地，P-淀粉用于与OK1蛋白质温育，尤其优选额外(retrospectively)酶促磷酸化的植物淀粉，特别优选已经从拟南芥的sex-1突变体分离的额外酶促磷酸化的植物淀粉。
为了证明OK1蛋白质对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比增加的结合活性，将OK1蛋白质在分开的制备物中与P淀粉(制备物A)和与非磷酸化的淀粉(制备物B)温育。温育完成时，不结合制备物A和B的相关淀粉的蛋白质与淀粉分离并且与结合它们的蛋白质分离。随后除去制备物A中蛋白质和P-淀粉之间的键和制备物B中蛋白质和非磷酸化的淀粉之间的键，即，各自蛋白质溶解。制备物A和制备物B的溶解的蛋白质然后可以与存在于各自制备物中的有关淀粉分离。这之后，制备物A的分离的结合P-淀粉的蛋白质和制备物B的分离的结合非磷酸化淀粉的蛋白质可以通过本领域技术人员已知的方法分离，例如，通过凝胶过滤、层析方法、电泳、SDS丙烯酰胺凝胶电泳等方法分离。通过比较制备物A的分离的蛋白质的量与制备物B的对应的分离的蛋白质的量，可以确定一种蛋白质对于P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比是否有增加的结合活性。在下文实施例8中描述了可以用于阐明与非磷酸化的淀粉相比，蛋白质优选结合P-淀粉的方法。
SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列编码来自拟南芥的OK1蛋白质并且SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列编码来自稻(Oryza sativa)的OK1蛋白质。
在本发明的另一实施方案中，编码OK1蛋白质的氨基酸序列与SEQID NO 2或者SEQ ID NO 4中指定的序列有至少60％同一性，尤其至少70％同一性，优选至少80％同一性，特别优选至少90％同一性，特别优选至少95％同一性。
在本发明的另一实施方案中，OK1蛋白质具有磷酸组氨酸结构域。编码OK1蛋白质的氨基酸序列含有磷酸组氨酸结构域，其与SEQ ID NO 5中表示的来自拟南芥的OK1蛋白质的磷酸组氨酸结构域的氨基酸序列有至少60％同一性，尤其至少70％同一性，优选至少80％同一性，特别优选至少90％同一性，特别优选至少95％同一性。
本发明的另一实施方案涉及根据本发明的基因修饰的植物细胞或者根据本发明的基因修饰的植物，其中该基因修饰在于向植物细胞的基因组或者植物的基因组导入至少一种外源核酸分子。
在该上下文中，术语“基因修饰”表示向植物细胞的基因组或者植物的基因组导入同源和/或异源的外源核酸分子，其中这些分子的所述导入导致OK1蛋白质活性的增加和R1蛋白质活性的增加。
通过导入外源核酸分子修饰根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物的遗传信息。外源核酸分子的存在或者表达导致表型的改变。这里“表型的”改变表示细胞的一种或多种功能的优选的可测量的改变。例如，根据本发明的基因修饰的植物细胞和根据本发明的基因修饰的植物由于所导入的核酸分子的存在或者表达而显示出OK1蛋白质活性的增加和R1蛋白质活性的增加。
结合本发明，术语“外源核酸分子”将理解为指这种分子，其不在对应的野生型植物中天然地发生，或者不在野生型植物细胞中以具体的空间排列天然地发生，或者位于野生型植物细胞的基因组中的位置上，所述分子不天然存在于该位置上。优选地，外源核酸分子时是重组分子，其由不同元件组成，这些元件的组合或者特定空间排列不在植物细胞中天然发生。
原则上，外源核酸分子可以是实现在植物细胞或者植物中OK1蛋白质和R1蛋白质活性增加的任意核酸分子。
结合本发明，术语“基因组”将理解为指植物细胞中存在的遗传物质的全体。本领域技术人员已知，除了细胞核，其他隔室(例如，质体、线粒体)也含有遗传物质。
在另一实施方案中，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物的特征是至少一种外源核酸分子编码OK1蛋白质，优选来自拟南芥的OK1蛋白质或者来自稻的OK1蛋白质。
在另一实施方案中，外源核酸分子编码具有SEQ ID NO 2或者SEQ IDNO 4中表示的氨基酸序列的OK1蛋白质。
在另一实施方案中，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物的特征是至少一种外源核酸分子编码R1蛋白质，优选来自马铃薯的R1蛋白质或者来自稻的OK1蛋白质。
在另一实施方案中，外源核酸分子编码来自马铃薯的R1蛋白质，其具有GenBank Acc.Y09533中表示的氨基酸序列(22-JUL-2003 Rel.76，最新版本2)。编码来自马铃薯的R1蛋白质的核酸分子和氨基酸序列(GenBank Acc.Y09533)明确地包括在本申请的说明书中作为参考。
在另一实施方案中，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物的特征是第一种外源核酸分子编码R1蛋白质并且第二种外源核酸分子编码OK1蛋白质。
在植物细胞或者植物中用于基因修饰组装的外源核酸分子可以是单个核酸分子或者多个核酸分子。因此，它可以是含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列的核酸分子，以及这样的几种核酸分子，其中编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列在多种核酸分子中发生。编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列可以例如同时包含在载体、质粒或者线性核酸分子中，或者然而，是分别相互分开的两个载体、质粒或者线性核酸分子的成分。
如果编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列在相互分开的两种核酸分子中发生，那么它们可以同时导入(“共转化”)或者连续地(“超级转化”(supertransformation))导入植物细胞或者植物的基因组。相互分离的核酸分子还可以导入多种单个植物细胞或者一个种的植物中。从而可以产生植物细胞或者植物，其中至少一种OK1蛋白质或者至少一种R1蛋白质的活性增加。可以随后将其中OK1蛋白质活性增加的植物与其中R1蛋白质活性增加的植物杂交产生此类植物。
此外，可以用特征是已经具有增加活性的OK1蛋白质或者增加活性的R1蛋白质的突变细胞或者突变体代替野生型植物细胞或者野生型植物来导入外源核酸分子。突变体可以是自发(天然)发生的突变体以及通过定向使用诱变剂(如化学试剂、电离辐射)或者基因工程方法(例如，T-DNA活化标记、转座子活化标记、原位活化、体内诱变)产生的突变体。
因此，通过导入外源核酸分子也可以产生根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，所述导入导致在已经具有增加活性的OK1蛋白质的突变体细胞或者突变体中R1蛋白质的活性增加。通过导入外源核酸分子也可以产生根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物，所述导入导致在已经具有增加活性的R1蛋白质的突变体细胞或者突变体中OK1蛋白质的活性增加。
也可以产生根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物，其中OK1蛋白质活性增加的突变体与由于外源核酸分子的导入使得R1蛋白质活性增加的植物杂交。同样，可以产生根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物，其中R1蛋白质活性增加的突变体与由于外源核酸分子的导入使得OK1蛋白质活性增加的植物杂交。
许多技术可用来将DNA导入植物宿主细胞。这些技术包括使用根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或者发根土壤杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)作为转化介质用T-DNA转化植物细胞、原生质体融合、DNA的注射、电穿孔、通过生物射弹方法导入DNA，以及其他方法。植物细胞的土壤杆菌介导的转化已经详细研究并且在EP 120516；Hoekema，INThe Binary Plant Vector System Offsetdrukkerij Kanters B.V.，Alblasserdam(1985)，Chapter V；Fraley等人，Crit.Rev.Plant Sci.4，1-46和An等人EMBO J.4，(1985)，277-287中充分描述。对于马铃薯的转化，见例如Rocha-Sosa等人，EMBO J.8，(1989)，29-33。
通过基于土壤杆菌转化的载体对单子叶植物的转化也已经描述(Chan等人，Plant Mol.Biol.22，(1993)，491-506；Hiei等人，Plant J.6，(1994)271-282；Deng等人，Science in China 33，(1990)，28-34；Wilmink等人，Plant Cell Reports 11，(1992)，76-80；May等人，Bio/Technology 13，(1995)，486-492；Conner和Domisse，Int.J.Plant Sci.153(1992)，550-555；Ritchie等人，Transgenic Res.2，(1993)，252-265)。单子叶植物转化的备选系统是通过生物射弹方法转化(Wan和Lemaux，Plant Physiol.104，(1994)，37-48；Vasil等人，Bio/Technology 11(1993)，1553-1558；Ritala等人，Plant Mol.Biol.24，(1994)，317-325；Spencer等人，Theor.Appl.Genet.79，(1990)，625-631)、原生质体转化、部分透化的细胞的电穿孔和通过玻璃纤维导入DNA。具体地，玉米的转化已经在文献中多次描述(参考，例如，WO95/06128、EP0513849、EP0465875、EP0292435；Fromm等人，Biotechnology 8，(1990)，833-844；Gordon-Kamm等人，Plant Cell 2，(1990)，603-618；Koziel等人，Biotechnology 11(1993)，194-200；Moroc等人，Theor.Appl.Genet.80，(1990)，721-726)。
也已经描述了其他类型谷类的成功的转化，例如，大麦(Wan和Lemaux，见上文；Ritala等人，见上文；Krens等人，Nature 296，(1982)，72-74)和小麦(Nehra等人，Plant J.5，(1994)，285-297；Becker等人，1994，Plant Journal 5，299-307)的转化。所有上面的方法都适宜地包括在本发明的框架内。
通过导入OK1蛋白质和/或R1蛋白质基因修饰的植物细胞和植物等可以分别与野生型植物细胞和野生型植物区分，因为它们含有不在野生型植物细胞和野生型植物中天然发生的外源核酸分子，或者因为这种分子当前整合在根据本发明的植物细胞的基因组或者根据本发明的植物的基因组中的某个位置，在野生型植物细胞或者野生型植物中该位置不发生所述整合，即，在不同的基因组环境中。此外，该类型的根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物分别与野生型植物细胞和野生型植物不同，因为它们含有稳定整合到它们的基因组的至少一个拷贝的外源核酸分子，可能还含有在野生型植物细胞或者野生型植物中这种分子的天然发生的拷贝。如果导入根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物的外源核酸分子分别是在野生型植物细胞或野生型植物中已经天然发生的分子的额外拷贝，那么根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物可以与野生型植物细胞或野生型植物分别不同，具体是因为该额外的拷贝或者这些额外拷贝位于基因组中的某些位置上，在野生型植物细胞或野生型植物基因组的这些位置上不存在该拷贝或者这些拷贝。这可以例如，通过DNA印迹分析验证。
此外，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物可以优选分别与野生型植物细胞或野生型植物通过至少一种下面的特征相区别如果已经导入的外源核酸分子对于植物细胞或者植物是异源的，那么根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物具有所导入的核酸分子的转录物。这些可以例如，通过RNA印迹分析或者通过RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)验证。表达反义和/或RNAi转录物的根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物可以例如用特异核酸探针来验证，所述探针与编码所述蛋白质的RNA(在植物细胞中天然发生)互补。优选地，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物含有所导入的核酸分子编码的蛋白质。这可以通过免疫学方法，例如，尤其通过蛋白质印迹分析来证明。
如果已经导入的外源核酸分子与植物细胞或者植物是同源的，那么根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物可以由于例如所导入的外源核酸分子的额外表达而分别与野生型植物细胞或野生型植物不同。根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物优选含有外源核酸分子的转录物。这可以例如通过RNA印迹分析，或者通过所称作的定量PCR来证明。
在另一实施方案中，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物分别是转基因植物细胞或者转基因植物。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，其中编码OK1蛋白质的外源核酸分子选自a)核酸分子，其编码具有SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所给出的氨基酸序列的蛋白质；b)核酸分子，其编码的蛋白质包括质粒A.t.-OK1-pGEM中的插入序列(insertion)或者质粒pMI50中的插入序列编码的氨基酸序列；
c)核酸分子，其编码蛋白质，该蛋白质的序列与SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所给出的氨基酸序列有至少60％同一性；d)核酸分子，其编码蛋白质，该蛋白质的序列与质粒A.t.-OK1-pGEM中插入序列的编码区或者质粒pMI50中插入序列的编码区编码的氨基酸序列有至少60％同一性；e)核酸分子，其包括SEQ ID NO 1或者SEQ ID NO 3所示核苷酸序列或者其互补序列；f)核酸分子，其包括质粒A.t.-OK1-pGEM或者质粒pMI50中所含插入序列的核苷酸序列；g)核酸分子，其与a)、b)、e)或者f)中描述的核酸序列有至少70％同一性；h)核酸分子，其与a)、b)、e)或者f)中描述的核酸分子的至少一条链在严格条件下杂交；i)核酸分子，其核苷酸序列由于遗传密码简并性而与a)、b)、e)或者f)中鉴定的核酸分子的序列偏离；和j)核酸分子，其代表a)、b)、c)、d)、e)、f)、g)、h)或者i)中鉴定的核酸分子的片段、等位基因变体和/或衍生物。
SEQ ID NO 1中所示核酸序列是cDNA序列，其包括来自拟南芥的OK1蛋白质的编码区，SEQ ID NO 3中所示核酸序列是cDNA序列，其包括来自稻的OK1蛋白质的编码区。
含有编码来自拟南芥的根据本发明蛋白质(A.t.-OK1)的cDNA的质粒(A.t.-OK1-pGEM)根据布达佩斯条约在2004年3月8日保藏在德意志微生物保藏中心(German Collection of Microorganism and Cell CulturesGmbH，Maseheroder Weg 1b，38124 Braunschweig，德国)，保藏号为DSM16264，含有编码来自稻的另一根据本发明的蛋白质(O.s.-OK1)的cDNA的质粒(pMI50)在2004年3月24日保藏，保藏号为DSM16302。
在SEQ ID NO 2中所示氨基酸序列可以来自整合在质粒A.t.-OK1-pGEM中的cDNA序列的编码区并且编码来自拟南芥的OK1蛋白质。在SEQ ID NO 4中所示氨基酸序列可以来自整合在质粒pMI50中的cDNA序列的编码区并且编码来自稻的OK1蛋白质。本发明因此还涉及核酸分子，其编码具有OK1蛋白质的酶促活性的蛋白质，该蛋白质包括氨基酸序列，该氨基酸序列由质粒A.t.-OK1-pGEM中的插入序列或者质粒pMI50中的插入序列编码，其中所编码的蛋白质与可以来自A.t.-OK1-pGEM或者pMI50中插入序列的氨基酸序列有至少70％，优选至少80％，尤其优选至少90％，特别优选95％的同一性。
本发明还涉及核酸分子，其编码OK1蛋白质并且包括SEQ ID NO 1或者SEQ ID NO 3中所示核苷酸序列的编码区或者其互补序列，还涉及核酸分子，其包括质粒A.t.-OK1-pGEM或者质粒pMI50中含有的插入序列的核苷酸序列的编码区，还涉及核酸分子，其与所述核酸分子有至少70％，优选至少80％，尤其优选至少90％，特别优选至少95％的同一性。
借助于根据本发明的多种核酸分子或者根据本发明的一种核酸分子的序列信息，现在本领域技术人员可以从其他植物种类，优选从淀粉贮藏植物，优选从稻属的植物种类，尤其从稻或者从拟南芥分离同源序列。这可以例如，用常规方法，如用合适的杂交样品检查cDNA或者基因组文库来进行。本领域技术人员已知可以通过(简并)寡核苷酸和使用基于PCR的方法分离同源序列。例如，通过EMBL(http://www.ebi.ac.uk/Tools/index.htm)或者NCBI(National Center for Biotechnology Information，http://www.ncbi.nim.nih.gov/)可以进行的数据库检查也可以用于鉴定编码OK1蛋白质的同源序列。在该情况中，一种或多种序列指定为所称作的查询序列。该查询序列然后通过统计学计算机程序与所选数据库中包含的序列比较。这种数据库查询(例如，blast或者fasta检索)是本领域技术人员已知的并且可以通过多个供应商进行。如果例如，在NCBI(National Centerfor Biotechnology information，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行这种数据库查询，那么将使用为特定比较查询指定的标准设置。对于蛋白质序列比较(blastp)，这些设置为如下设置Limit entrez＝不活化(not activated)；过滤器(Filter)＝活化的低复杂性(low compexity activated)；期望值(Expect value)＝10；字长(word size)＝3；矩阵(Matrix)＝BLOSUM62；缺口成本(Gap costs)存在(Existence)＝11，延伸(Extension)＝1。对于核酸序列比较(blastn)，必须设置下面的参数Limit entrez＝不活化；过滤器＝活化的低复杂性；期望值＝10；字长＝11。
使用这种数据库检索，本发明中描述的序列可以用作查询序列以便鉴定编码OK1蛋白质的其他核酸序列和/或蛋白质。
通过上述方法，还可以鉴定和/或分离根据本发明的核酸分子，其与SEQ ID NO 1或者SEQ ID NO 3指定的序列杂交并且编码OK1蛋白质。在本发明范围内，术语“杂交”表示在例如Sambrock等人，MolecularCloning，A Laboratory Manual，第二版(1989)Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY)中描述的常规杂记条件下，优选在严格条件下杂交。特别优选地，“杂交”表示在下面的条件下杂交杂交缓冲液2xSSC；10xDenhardt溶液(Ficoll 400+PEG+BSA；比例1∶1∶1)；0.1％SDS；5mM EDTA；50mM Na2HPO4；250μg/ml鲱精DNA；50μg/ml tRNA；或者25mM磷酸钠缓冲液pH 7.2；1mM EDTA；7％SDS杂交温度T＝65到68℃洗涤缓冲液0.1xSSC；0.1％SDS洗涤温度T＝65到68℃。
原则上，与根据本发明的核酸分子杂交的核酸分子可以来自任何植物种类，所述核酸分子编码合适的蛋白质，优选它们来自淀粉贮藏植物，优选来自(系统的)禾本科(Poacea)的种类，特别优选来自稻属的种类。与根据本发明的分子杂交的核酸分子可以例如从基因组或者cDNA文库分离。该类型核酸分子的鉴定和分离可以用根据本发明的核酸分子或者这些分子的部分或者这些分子的反向互补序列，例如通过根据标准方法杂交(见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第二版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY)或者通过PCR扩增来进行。
精确地或者基本上具有SEQ ID NO 1或者SEQ ID NO 3表示的核苷酸序列或者这些序列的部分的核酸分子可以用作杂交样品。用作杂交样品的片段还可以是合成片段或者寡核苷酸，它们已经用确定的合成技术和基本上对应于根据本发明的核酸分子序列的序列生产。如果已经鉴定和分离了与根据本发明的核酸序列杂交的基因，那么应该进行该序列的测定和该序列编码的蛋白质的特征的分析以便确定是否涉及OK1蛋白质。在核酸或者氨基酸序列水平上的同源性比较和酶促活性的测定尤其适于该目的。OK1蛋白质的活性的测定可以如一般方法第11项中描述的进行。OK1蛋白质对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比优选的结合亲和性和自磷酸化可以用上面已经描述的方法和一般方法第8和12项中描述的方法阐明。
与根据本发明的核酸分子杂交的分子尤其包括根据本发明的核酸分子的片段、衍生物和等位基因变体，其编码来自植物，优选来自淀粉贮藏植物，优选来自(系统的)禾本科(Poacea)的种类，尤其优选来自稻属种类的OK1蛋白质。结合本发明，术语“衍生物”表示这些分子的序列与上述核酸分子的序列在一个或多个位置不同并且与这些序列有高度同一性。这里，由于缺失、加入、替代、插入或者重组，可以发生与上述核酸分子的偏离。
结合本发明，术语“同一性”是指在编码区的全长上至少60％的序列同一性，尤其至少80％，优选大于80％，尤其优选大于90％，特别是至少95％的同一性。结合本发明，术语“同一性”将理解为表示与其他蛋白质/核酸一致的氨基酸/核苷酸数目(同一性)，表示为百分数。优选通过计算机程序与其他蛋白质/核酸比较来确定同一性，对于氨基酸，使用SEQ ID NO2或者SEQ ID NO 4进行比较，对于核酸，使用SEQ ID NO 1或者SEQ IDNO 3。如果相互比较的序列具有不同长度，那么将以这种方法确定同一性，其中较短序列与较长序列共有的氨基酸数决定同一性的百分比商数。优选地，通过计算机程序ClustalW确定同一性，该程序是公知的并且公众可以得到(Thompson等人，Nucleic Acids Research 22(1994)，4673-4680)。ClustalW由Julie Thompson(Thompson@EMBL-Heidelberg.DE)和TobyGibson(Gibson@EMBL-Heidelberg.DE)、European Molecular BiologyLaboratory，Meyerhofstrasse 1，D 69117 Heidelberg，Germany使得公众可以得到。ClustalW还可以从不同因特网站下载，包括IGBMC(Institut deGénétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire，B.P.163，67404 IlIkirchCedex，France；ftp://ftp-igbmc.u-strasbg.fr/pub/)和EBI(ftp://ftp.ebi.ac.uk/pub/software/)以及从EBI(European Bioinformatics Institute，Welcome Trust Genome Campus，Hinxton，Cambridge CB10 1SD，UK)的所有镜像因特网站下载。
优选地，用ClustalW计算机程序的1.8版确定根据本发明的蛋白质和其他蛋白质之间的同一性。在这种情况下，必须设置下面的参数KTUPLE＝1，TOPDIAG＝5，WINDOW＝5，PAIRGAP＝3，GAPOPEN＝10，GAPEXTEND＝0.05，GAPDIST＝8，MAXDIV＝40，MATRIX＝GONNET，ENDGAPS(OFF)，NOPGAP，NOHGAP。
优选地，用ClustalW计算机程序的1.8版确定例如，根据本发明的核酸分子的核苷酸序列与其他核酸分子的核苷酸序列之间的同一性。在这种情况下，必须设置下面的参数KTUPLE＝2，TOPDIAGS＝4，PAIRGAP＝5，DNAMATRIXIUB，GAPOPEN＝10，GAPEXT＝5，MAXDIV＝40，TRANSITIONSunweighted。
此外，同一性表示在有关的几种核酸分子或者它们编码的蛋白质之间存在功能和/或结构等同性。与上述分子同源并且构成这些分子的衍生物的核酸分子通常是这些分子的变异，它们构成修饰，执行相同的生物学功能。同时，这些变异可以天然发生，例如，它们可以是来自其他植物物种的序列，或者它们可以是突变体，其中这些突变体可以以天然方式发生或者已经通过目标诱变导入。变异还可以是合成产生的序列。等位基因变体可以是天然发生的变体，也可以是合成产生的变体或者通过重组DNA技术产生的变体。由于遗传密码简并性而与根据本发明的核酸分子背离的核酸分子构成了特定形式的衍生物。
从根据本发明的核酸分子的不同衍生物编码的蛋白质具有某些共同的特征。这些特征包括例如，生物学活性、底物特异性、分子量、免疫学反应性、构象等等，以及物理特征，如在凝胶电泳中的电泳行为、层析行为、沉降系数、溶解度、光谱特征、稳定性；最适pH、最适温度等等。OK1蛋白质的优选特征已经在上文详细描述并且在这里相应地应用。
根据本发明的核酸分子可以是任意核酸分子，尤其DNA或者RNA分子，例如，cDNA、基因组DNA、mRNA等等。它们可以是天然发生的分子或者通过基因工程或者化学合成方法产生的分子。它们可以是单链分子，其含有编码或者非编码链，或者双链分子。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，其中编码R1蛋白质的外源核酸分子选自a)核酸分子，其编码具有SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 9、SEQ IDNO 11、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 15或者SEQ ID NO 17给出的氨基酸序列的蛋白质，b)核酸分子，其包括SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 14或者SEQ ID NO 16所示的核苷酸序列，或者互补序列；c)核酸分子，其核苷酸序列由于遗传密码简并性而与a)或者b)中鉴定的核酸分子的序列偏离；d)核酸分子，其与a)或者b)中描述的核酸序列有至少70％同一性，和e)核酸分子，其与a)或者b)中描述的核酸分子的至少一条链在严格条件下杂交。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，其中外源核酸分子选自a)T-DNA分子，其由于植物基因组中的整合(T-DNA活化标记)而导致OK1基因和/或R1基因的表达增加；b)DNA分子，其含有转座子，该转座子由于整合在植物基因组(转座子活化标记)中而导致OK1基因和/或R1基因的表达增加；
c)DNA分子，其编码OK1蛋白质和/或R1蛋白质，并且连接调节序列，该调节序列保证在植物细胞中的转录并且导致细胞中OK1蛋白质和/或R1蛋白质活性增加，d)通过体内诱变导入的核酸分子，该体内诱变导致在编码OK1蛋白质的至少一种内源基因中突变或者插入异源序列，其中该突变或者插入实现了编码OK1蛋白质的基因表达的增加，e)通过体内诱变导入的核酸分子，该体内诱变导致在编码R1蛋白质的至少一种内源基因中突变或者插入异源序列，其中该突变或者插入实现了编码R1蛋白质的基因表达的增加。
结合本发明，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物还可以通过使用所称作的插入诱变产生(综述文章Thorneycroft等人，2001，Journal ofexperimental Botany 52(361)，1593-1601)。结合本发明，插入诱变将理解为具体表示向编码OK1蛋白质和/或编码R1蛋白质的基因中或者基因附近插入转座子或者所称作的转移DNA(T-DNA)，从而由于该插入，有关细胞中OK1蛋白质和/或R1蛋白质的活性增加。
转座子可以是在细胞中天然发生的转座子(内源转座子)和不在所述细胞中天然发生但是通过基因工程方法，如细胞的转化导入细胞的转座子(异源转座子)。通过转座子改变基因的表达是本领域技术人员已知的。内源和异源转座子用作植物生物技术中的工具的综述见Ramachandran和Sundaresan(2001，Plant Physiology and Biochemistry 39，234-252)。
T-DNA插入诱变是基于来自土壤杆菌的Ti质粒的某些片段(T-DNA)可以整合到植物细胞的基因组这一事实。植物染色体中整合位置不是确定的，而是可以在任何点发生。如果T-DNA整合到构成基因功能的染色体部分或者染色体部分附近，那么这可以导致基因表达的增加和有关基因编码的蛋白质活性的改变。这里，插入基因组的序列(尤其转座子或者T-DNA)通过如下事实区别它们含有导致OK1基因的调节序列活化的序列(“活化标记”)。
根据本发明的植物细胞和植物可以通过所称作的“活化标记”方法产生(见，例如，Walden等人，Plant J.(1991)，281-288；Walden等人，Plant Mol.Biol.26(1994)，1521-1528)。这些方法是基于通过增强子序列，如花椰菜花叶病毒的35S RNA的增强子或者章鱼碱合酶增强子活化内源启动子。
结合本发明，术语“T-DNA活化标记”将理解为表示T-DNA片段，其含有增强子序列并且通过整合到植物细胞的基因组导致至少一种OK1蛋白质和/或至少一种R1蛋白质的活性增加。
结合本发明，术语“转座子活化标记”将理解为表示转座子，其含有增强子序列并且通过整合到植物细胞的基因组导致至少一种OK1蛋白质和/或至少一种R1蛋白质的活性增加。
在额外实施方案中，编码OK1蛋白质和/或R1蛋白质的根据本发明的DNA分子连接调节序列，该调节序列启动植物细胞中的转录并且导致细胞中OK1蛋白质和/或R1蛋白质活性增加。在该情况中，根据本发明的核酸分子以与调节序列“正义”的方向存在。
为了表达编码OK1蛋白质和/或R1蛋白质的根据本发明的核酸分子，这些核酸分子优选连接调节DNA序列，这些调节DNA序列保证在植物细胞中的转录。具体地，这些调节DNA序列包括启动子。通常，在植物细胞中有活性的任何启动子都适于表达。同时，可以选择启动子使得表达组成性地或者仅在某一组织、在植物发育的某一阶段或者在外部影响决定的某一时间发生。启动子可以与植物和与核酸分子是同源或者异源的。
适宜的启动子为例如，花椰菜花叶病毒的35S RNA启动子和用于组成性表达的来自玉米的泛蛋白启动子、用于在马铃薯中块茎特异地表达的patatin启动子B33(Rocha-Sosa等人，EMBO J.8(1989)，23-29)，或者仅确保在光合活性组织中表达的启动子，例如，ST-LS1启动子(Stockhaus等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84(1987)，7943-7947；Stockhaus等人，EMBO J.8(1989)，2445-2451)，或者为了胚乳特异的表达，来自小麦的HMG启动子、USP启动子、菜豆蛋白启动子、来自玉米的玉米醇溶蛋白基因的启动子(Pedersen等人，Cell 29(1982)，1015-1026；Quatroccio等人，Plant Mol.Biol.15(1990)，81-93)、谷蛋白启动子(Leisy等人，Plant Mol.Biol.14(1990)，41-50；Zheng等人，Plant J.4(1993)，357-366；Yoshihara等人，FEBS Lett.383(1996)，213-218)或者shrunken-1启动子(Werr等人，EMBO J.4(1985)，1373-1380)。然而，也可以使用仅通过外界影响在某一时间活化的启动子(见例如WO 9307279)。热休克蛋白的启动子允许简单地诱导，在这里尤其重要。此外，可以使用种子特异的启动子，如来自蚕豆(Vicia faba)的USP启动子，其保证在蚕豆和其他植物中种子特异地表达(Fiedler等人，Plant Mol.Biol.22(1993)，669-679；B_umlein等人，Mol.Gen.Genet.225(1991)，459-467)。
此外，可以存在终止序列(多腺苷酸化信号)，其可以用于向转录物加入多聚-A尾。转录物稳定化的功能归因于多聚-A尾。该类型的元件在文献中描述(参考Gielen等人，EMBO J.8(1989)，23-29)并且可以任意交换。
在启动子和编码区之间还可以存在内含子序列。此类内含子序列可以导致植物中表达的稳定性和增加的表达(Callis等人，1987，Genes Devel.1，1183-1200；Luehrsen，和Walbot，1991，Mol.Gen.Genet.225，81-93；Rethmeier，等人，1997；Plant Journal.12(4)895-899；Rose和Beliakoff，2000，Plant Physio.122(2)，535-542；Vasil等人，1989，Plant Physio.91，1575-1579；XU等人，2003，Science in China Series C Vol.46 No.6，561-569)。适宜的内含子序列为例如来自玉米的sh1基因的第一个内含子、来自玉米的多聚遍在蛋白基因1的第一个内含子、来自稻的EPSPS基因的第一个内含子或者来自拟南芥属的PAT1基因的前两个内含子之一。
此外，根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物可以通过所称作的“原位活化”产生。在该情况中，所导入的基因修饰实现内源OK1基因和/或R1基因的调节序列的改变，其导致OK1基因和/或R1基因的增加的表达。优选地，OK1基因和/或R1基因的活化通过内源OK1基因和/或R1基因的启动子或者增强子序列的“体内”诱变发生。在这种情况下，启动子或者增强子序列例如可以通过以这样的方法诱变改变，该方法使得产生的突变导致根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物中OK1蛋白质基因和/或R1基因的表达与野生型植物细胞或者野生型植物中OK1基因和/或R1基因的表达相比增加。启动子或者增强子序列的突变还可以导致根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物中OK1基因和/或R1基因在一定时间表达，在该时间它们将不在野生型植物细胞或者野生型植物中表达。
结合本发明，术语“OK1基因”将理解为表示编码OK1蛋白质，优选来自淀粉贮藏植物的OK1蛋白质，尤其优选来自拟南芥，特别优选来自稻的OK1蛋白质的核酸分子(cDNA、DNA)。
结合本发明，术语“R1基因”将理解为表示编码R1蛋白质，优选来自淀粉贮藏植物的R1蛋白质，尤其优选来自拟南芥，特别优选来自稻的R1蛋白质的核酸分子(cDNA、DNA)。
在所称作的“体内诱变”中，通过植物细胞的转化将杂合RNA-DNA寡核苷酸(“Chimeroplast”)导入植物细胞(Kipp，P.B.等人，Poster Session atthe″5th International Congress of Plant Molecular Biology″，21st-27thSeptember 1997，Singapore；R.A.Dixon和C.J.Arntzen，关于″MetabolicEngineering in Transgenic Plants″的会议报告，Keystone Symposia，CopperMountain，CO，USA，TIBTECH 15，(1997)，441-447；国际专利申请WO9515972；Kren等人，Hepatology 25，(1997)，1462-1468；Cole-Strauss等人，Science 273，(1996)，1386-1389；Beetham等人，1999，PNAS 96，8774-8778)。
RNA-DNA寡核苷酸的一部分DNA组分与内源OK1基因和/或R1基因的核酸序列同源，但是与内源OK1基因和/或R1基因的核酸序列相比，它具有突变或者含有异源区，该异源区被同源区包围。
通过RNA-DNA寡核苷酸的同源区和内源核酸分子的碱基配对，然后通过同源重组，RNA-DNA寡核苷酸的DNA组分中含有的突变或者异源区可以转移到植物细胞的基因组中。这导致一种或多种OK1蛋白质的活性增加。
所有这些方法都是基于外源核酸分子向植物细胞或植物的基因组中的导入并且因此基本上适于产生根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物。
令人惊奇地，已经发现根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物合成的淀粉与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞或者野生型植物的淀粉相比是受到修饰的。
根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物合成经修饰的淀粉，其在其物理-化学特征，尤其淀粉磷酸酯含量和/或磷酸分布方面与在野生型植物细胞或者野生型植物中合成的淀粉相比被改变，从而这更好地适于特定应用。
因为还没有描述仅磷酸化P-淀粉的酶，所以以前也不可能将植物中已经磷酸化的淀粉的淀粉磷酸酯的浓度增加超过某个量。这只有通过使用具有OK1蛋白质功能的酶或者通过制备编码OK1蛋白质的核酸分子用于植物的基因修饰才是可能的。
由于缺少可利用的手段，植物合成的淀粉的磷酸分布在以前也是不可能的。通过本发明，通过制备具有OK1蛋白质功能的酶或者通过制备编码OK1蛋白质的核酸分子，天然淀粉的磷酸比率的改变现在也是可能的。
因此，本发明还包括根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，其与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞或者野生型植物相比合成经修饰的淀粉。
结合本发明，术语“经修饰的淀粉”表示该淀粉与从对应的野生型植物细胞或者野生型植物得到的未修饰的淀粉相比具有改变的物理-化学特征。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物合成淀粉，其与从对应的野生型植物细胞或者野生型植物分离的淀粉相比具有增加浓度的淀粉磷酸酯和/或改变的磷酸分布。
结合本发明，术语“磷酸分布”将理解为表示结合到葡萄糖分子的C-2位、C-3位或者C-6位的淀粉磷酸酯关于来自淀粉的淀粉磷酸酯的总浓度的比例。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物合成淀粉，其与来自没有基因修饰的野生型植物的淀粉相比具有增加浓度的淀粉磷酸酯和/或改变的C-3磷酸与C-6磷酸的比。这里优选与来自没有基因修饰的野生型植物细胞或者没有基因修饰的野生型植物的淀粉相比，结合在C-3位的淀粉磷酸酯与结合在C-6位的淀粉磷酸酯的比增加的淀粉。
结合本发明，术语“C-3磷酸与C-6磷酸的比”将理解为表示分别结合在C-3位或者C-6位的淀粉的淀粉磷酸酯对有关淀粉的结合在C-3位和C-6位(C-3位+C-6位)的淀粉磷酸酯的总和的比例。
描述了多种用于测定淀粉磷酸酯的量的方法。优选地，Ritte等人(2000，Starch/St_rke 52，179-185)描述的方法可以用于测定淀粉磷酸酯的量。特别优选地，通过31P-NMR根据Kasemusuwan和Jane(1996，CerealChemistry 73，702-707)描述的方法进行淀粉磷酸酯的量的测定。
此外，含有根据本发明的植物细胞的基因修饰的植物也是本发明的主题。该类型的植物可以从根据本发明的植物细胞通过再生产生。
原则上，根据本发明的植物可以是任何植物种类的植物，即单子叶和双子叶植物。优选地，它们是有用的植物，即，由人们栽培用于食物或者技术，尤其工业目的的植物。
在另一实施方案中，根据本发明的植物是淀粉贮藏植物。
结合本发明，术语“淀粉贮藏植物”表示具有含有贮藏淀粉的植物部分的所有植物，例如，玉米、稻、小麦、黑麦、燕麦、大麦、木薯、马铃薯、西米、绿豆、豌豆或者高梁。
结合本发明，术语“马铃薯植物”或者“马铃薯”表示茄属(Solanum)种类的植物，尤其茄属的产块茎种类，特别是马铃薯(Solanum tuberosum)。
结合本发明，术语“小麦植物”表示小麦属(Triticum)的植物种类或者与小麦属植物杂交得到的植物，特别是出于商业目的用于农业的小麦属的植物种类或者与小麦属植物杂交得到的植物，尤其优选小麦(Triticumaestivum)。
结合本发明，术语“玉米植物”表示玉蜀黍属(Zea)的植物种类，特别是出于商业目的用于农业的玉蜀黍属的植物种类，尤其优选玉蜀黍(Zeamais)。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的(系统的)禾本科(Poaceae)的淀粉贮藏植物。优选这些为玉米或者小麦植物。
本发明还涉及根据本发明的植物的繁殖材料，其含有根据本发明的植物细胞。
这里，术语“繁殖材料”包括适于通过无性或者有性方式产生后代的植物的那些成分。例如，插条、愈伤组织培养物、根茎或者块茎适于植物繁殖。其他繁殖材料包括，例如，果实、种子、苗、原生质体、细胞培养物等等。优选地，繁殖材料是块茎并且尤其优选含有胚乳的谷粒。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的植物的可收获的植物部分，如果实、贮藏根、根、花、芽、嫩枝或者茎干，优选种子、谷粒或者块茎，其中可收获的部分含有根据本发明的植物细胞。
此外，本发明还涉及产生根据本发明的基因修饰的植物的方法，其中a)将植物细胞基因修饰，其中该基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比OK1蛋白质和R1蛋白质的酶促活性增加；b)从步骤a)的植物细胞再生植物；c)如果必要，用根据步骤b)的植物产生其他植物。
根据步骤a)导入植物细胞的基因修饰可以基本上为任意类型的基因修饰，其导致OK1蛋白质和R1蛋白质的活性增加。根据步骤(b)的植物的再生可以用本领域技术人员已知的方法进行(例如，″Plant Cell CultureProtocols″，1999，编者R.D.Hall，Humana Press，ISBN 0-89603-549-2中描述)。
根据本发明的步骤(c)的其他植物的产生可以例如，通过无性繁殖(例如，使用插条、块茎或者通过愈伤组织培养和完整植物再生)或者通过有性繁殖进行。这里，有性繁殖优选在受控的条件下进行，例如，所选的具有特定特征的植物相互杂交和繁殖。在该情况中，优选以如下方式进行选择根据步骤c)产生的其他植物显示出步骤a)中导入的修饰。
用于产生根据本发明的植物细胞的基因修饰可以同时或者在连续步骤中发生。同时，基因修饰可以是任何基因修饰，其导致至少一种OK1蛋白质和/或至少一种R1蛋白质的活性增加。它可以来自野生型植物以及野生型植物细胞，其中还没有发生用于减小至少一种OK1蛋白质或至少一种R1蛋白质的活性的先前基因修饰，或者来自已经基因修饰的植物细胞或者植物，其中已经通过基因修饰增加了至少一种OK1蛋白质或至少一种R1蛋白质的活性。用于导致OK1蛋白质的活性增加的基因修饰的方法与导致R1蛋白质活性增加的基因修饰方法是否相同是无关的，只要两种基因修饰一起导致相同植物细胞中OK1蛋白质和R1蛋白质的增加的活性。
在用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明的方法的另一实施方案中，基因修饰在于向植物细胞的基因组导入至少一种外源核酸分子，其中外源核酸分子的可用性或者表达导致细胞中OK1蛋白质和R1蛋白质的增加的活性。
在用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明的方法的另一实施方案中，基因修饰在于向植物细胞的基因组导入至少一种外源核酸分子，其中外源核酸分子含有编码OK1蛋白质和/或R1蛋白质的序列。
如上面已经对装配用来在植物细胞或植物中基因修饰的外源核酸分子所描述的，用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明方法的步骤a)可以涉及一种核酸分子或者多种核酸分子。上面提供的实施方案可以相应地应用于根据这里描述的本发明的方法。
在用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明的方法的另一实施方案中，该方法的步骤a)中的基因修饰在于导入外源核酸分子，该外源核酸分子含有至少一种编码R1蛋白质的序列和至少一种编码OK1蛋白质的序列。
在用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明的方法的另一实施方案中，该方法的步骤a)中的基因修饰在于导入多种外源核酸分子，其中至少一条第一种核酸分子含有编码R1蛋白质的序列并且至少一条第二种核酸分子含有编码OK1蛋白质的序列。
此外，特征在于具有增加活性的OK1蛋白质或者增加活性的R1蛋白质的突变细胞或者突变体可以代替野生型植物细胞或者野生型植物，用来导入外源核酸分子以实现根据本发明的方法。上面关于用于产生根据本发明的植物细胞或者植物的突变体的额外信息可以相应地在此应用。
在根据本发明方法的用于产生根据本发明的基因修饰的植物的另一实施方案中，至少一种外源核酸分子选自a)核酸分子，其编码具有SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所给出的氨基酸序列的蛋白质；b)核酸分子，其编码的蛋白质包括质粒A.t.-OK1-pGEM中的插入序列(insertion)或者质粒pMI50中的插入序列编码的氨基酸序列；c)核酸分子，其编码蛋白质，该蛋白质的序列与SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所给出的氨基酸序列有至少60％同一性；d)核酸分子，其编码蛋白质，该蛋白质的序列与质粒A.t.-OK1-pGEM中插入序列或者质粒pMI50中插入序列编码的氨基酸序列有至少60％同一性；e)核酸分子，其包括SEQ ID NO 1或者SEQ ID NO 3所示核苷酸序列或者其互补序列；f)核酸分子，其包括质粒A.t.-OK1-pGEM或者质粒pMI50中所含插入序列的核苷酸序列；g)核酸分子，其与a)、b)、e)或者f)中描述的核酸序列有至少70％同一性；h)核酸分子，其与a)、b)、e)或者f)中描述的核酸分子的至少一条链在严格条件下杂交；i)核酸分子，其核苷酸序列由于遗传密码简并性而与a)、b)、e)或者f)中鉴定的核酸分子的序列偏离；和j)核酸分子，其代表a)、b)、c)、d)、e)、f)、g)、h)或者i)中鉴定的核酸分子的片段、等位基因变体和/或衍生物。
在用于产生根据本发明的基因修饰的植物的根据本发明方法的另一实施方案中，来自马铃薯、小麦、稻、玉米、大豆、柑桔或者拟南芥的R1蛋白质编码至少一种外源核酸分子。对于编码来自所鉴定植物的R1蛋白质的所鉴定的核酸序列的参考已经在上文中进一步详细说明。
本发明的另一实施方案还涉及产生根据本发明的基因修饰的植物的方法，其中a)将植物细胞基因修饰，其中该基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比OK1蛋白质的酶促活性增加；b)从步骤a)的植物细胞再生植物；c)如果必要，用根据步骤b)的植物产生其他植物；和d)将根据步骤b)或者c)得到的植物与一种植物杂交，该种植物与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比R1蛋白质的酶促活性增加。
本发明的另一实施方案还涉及产生根据本发明的基因修饰的植物的方法，其中a)将植物细胞基因修饰，其中该基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比R1蛋白质的酶促活性增加；b)从步骤a)的植物细胞再生植物；c)如果必要，用根据步骤b)的植物产生其他植物；和d)将根据步骤b)或者c)得到的植物与一种植物杂交，该种植物与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比OK1蛋白质的酶促活性增加。
同时，可以如上面已经描述的基因修饰根据步骤a)的植物。根据步骤b)的植物的再生和根据步骤c)的额外植物的产生已经在上面进一步说明。
与根据两个最近的实施方案的步骤b)、c)或者步骤d)得到的植物或者植物后代杂交的植物可以是任何植物，其与对应的野生型植物相比OK1蛋白质或者R1蛋白质的活性增加。可以通过导致对应植物中有关蛋白质的活性增加的任何修饰引起OK1蛋白质或者R1蛋白质的活性增加。这些植物可以是通过基因工程方法修饰的突变体或者植物。突变体可以是自发(天然)发生的突变体以及通过定向使用诱变剂(如化学试剂、电离辐射)或者基因工程方法(例如，转座子活化标记、T-DNA活化标记、体内诱变)产生的突变体。通过基因工程方法产生的植物是通过插入诱变产生的突变体，尤其优选表达外源核酸分子的基因修饰的植物，特别优选其中外源核酸分子编码OK1蛋白质或者R1蛋白质的基因修饰的植物。
在另一实施方案中，根据本发明的方法用于产生根据本发明的基因修饰的植物用于产生淀粉贮藏植物。
在另一实施方案中，根据本发明的方法用于产生根据本发明的基因修饰的植物用于产生根据本发明的玉米或者小麦植物。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明的方法，其用于产生根据本发明的基因修饰的植物，其中基因修饰的植物与没有基因修饰的野生型植物相比合成经修饰的淀粉。
在用于产生基因修饰的植物的根据本发明的另一实施方案中，根据本发明的植物合成经修饰的淀粉，该淀粉与从对应的野生型植物分离的淀粉相比具有增加浓度的淀粉磷酸酯和/或改变的淀粉磷酸酯分布。
在用于产生基因修饰的植物的根据本发明的另一实施方案中，根据本发明的植物合成经修饰的淀粉，该淀粉与来自没有基因修饰的野生型植物的淀粉相比具有改变的C-3磷酸与C-6磷酸比。这里特别优选这样的淀粉，其与来自没有基因修饰的野生型植物的淀粉相比在C-3位结合的淀粉磷酸酯与C-6位结合的淀粉磷酸酯的比例增加。
本发明还涉及通过根据本发明的方法可以得到的植物。
令人惊奇地，已经发现根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物具有增加活性的OK1蛋白质和增加活性的R1蛋白质，合成经修饰的淀粉。
具体地，根据本发明的淀粉中增加量的淀粉磷酸酯得到了具有令人惊奇并且有利的特征的淀粉。通过增加比例的淀粉磷酸酯，根据本发明的淀粉提供了增加比例的带电基团，这些基团显著影响淀粉的功能特征。提供带电官能团的淀粉特别可以用于造纸工业，其中淀粉用于纸的涂布。具有良好粘附特征与带电分子的纸当涂布时尤其适于染料，如墨水、印刷颜料等等的吸收。
本发明还涉及从根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物、从根据本发明的繁殖材料或者从根据本发明的可收获的植物部分可以得到的经修饰的淀粉。
在另一实施方案中，本发明涉及来自淀粉贮藏植物，优选来自(系统的)禾本科的淀粉贮藏植物，尤其优选来自玉米或者小麦植物的根据本发明的经修饰的淀粉。
此外，本发明涉及产生经修饰的淀粉的方法，其包括从根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物、从这种植物的根据本发明的繁殖材料和/或者从这种植物的根据本发明的可收获的植物部分，优选从这种植物的根据本发明的淀粉贮藏部分提取淀粉的步骤。优选地，这种方法还包括在淀粉提取前收获培养的植物或者植物部分和/或这些植物的繁殖材料的步骤，并且还尤其优选在收获前培养根据本发明的植物的步骤。
从植物或者从植物的淀粉贮藏部分提取淀粉的方法是本领域技术人员已知的。此外，从不同的淀粉贮藏植物提取淀粉的方法描述于例如，StarchChemistry and Technology(出版商Whistler，BeMiller and Paschal(1994)，第二版，Academic Press Inc.London Ltd；ISBN 0-12-746270-8；见例如，Chapter XII，Page 412-468Maize and Sorghum StarchesManufacture；by Watson；Chapter XIII，Page 469-479Tapioca，Arrowroot and SagoStarchesManufacture；by Corbishley and Miller；Chapter XIV，Page479-490Potato starchManufacture and Uses；by Mitch；Chapter XV，Page 491 to 506Wheat starchManufacture，Modification and Uses；byKnight and Oson；和Chapter XVI，Page 507 to 528Rice starchManufacture and Uses；by Rohmer and Klem；Maize starchEckhoff等人，Cereal Chem.73(1996)，54-57，工业规模上玉米淀粉的提取通常通过所称作的“湿磨”进行。)。常用于从植物材料提取淀粉的装置为分离器、倾析器、旋液分离器、喷雾干燥器和流化床干燥器。
结合本发明，术语“淀粉贮藏部分”将理解为是指植物的这样的部分，其中与暂时的叶子淀粉相反，淀粉作为沉积物贮藏以存活更长时间。优选的淀粉贮藏部分是例如，块茎、贮藏根和谷粒，特别优选含有胚乳的谷粒，特别尤其优选含有玉米或者小麦植物的胚乳的谷粒。
通过根据本发明的用于产生经修饰淀粉的方法可以得到的经修饰的淀粉也是本发明的主题。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的经修饰的淀粉是天然淀粉。
结合本发明，术语“天然淀粉”表示通过本领域技术人员已知的方法从根据本发明的植物、根据本发明的可收获的植物部分、根据本发明植物的淀粉贮藏部分或者根据本发明植物的繁殖材料分离的淀粉。
此外，根据本发明的植物细胞或者根据本发明的植物用于生产经修饰的淀粉的用途是本发明的主题。
本领域技术人员已知通过例如热、化学、酶或者机械衍生，可以改变淀粉的特征。衍生淀粉尤其适于食品和/或非食品领域的不同应用。根据本发明的淀粉比常规淀粉更好地适于作为产生衍生淀粉的起始物质，因为它们由于更高的淀粉磷酸酯含量而具有更高比例的反应性官能团。
本发明因此还涉及衍生淀粉的生产，其中还衍生根据本发明的经修饰的淀粉。
结合本发明，术语“衍生的淀粉”将理解为表示根据本发明的经修饰的淀粉，在通过化学、酶、热或者机械方法从植物细胞分离后，该淀粉的特征已经改变。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的衍生的淀粉是已经用热和/或酸处理的淀粉。
在另一实施方案中，衍生的淀粉是淀粉醚，尤其淀粉烷基醚、O-烯丙基醚、羟基烷基醚、O-羧甲基醚、含氮淀粉醚、含磷酸的淀粉醚或者含硫的淀粉醚。
在另一实施方案中，衍生的淀粉是交联的淀粉。
在另一实施方案中，衍生的淀粉是淀粉接枝聚合物。
在另一实施方案中，衍生的淀粉是氧化的淀粉。
在另一实施方案中，衍生的淀粉是淀粉酯，尤其用有机酸引入淀粉的淀粉酯。尤其优选这些衍生的淀粉是淀粉磷酸酯、淀粉硝酸酯、淀粉硫酸酯、淀粉黄原酸酯、淀粉乙酸酯或者淀粉柠檬酸酯。
根据本发明的衍生的淀粉适于制药工业和食品和/或非食品领域的不同应用。生产根据本发明的衍生淀粉的方法是本领域技术人员已知的并且在一般文献中详细描述。关于衍生淀粉的生产的综述可以见例如，Orthoefer(Corn，Chemistry and Technology，1987，eds.Watson undRamstad，Chapter 16，479-499)。
通过根据本发明的用于生产衍生淀粉的方法可以得到的衍生淀粉也是本发明的主题。
此外，用于生产衍生淀粉的根据本发明的经修饰淀粉的用途也是本发明的主题。
通常将植物的淀粉贮藏部分加工成面粉。用于生产面粉的植物部分的实例为例如，马铃薯植物的块茎和谷类植物的谷粒。将这些植物的含有胚乳的谷粒碾磨并过筛以生产谷类植物的面粉。淀粉是胚乳的主要组分。对于不合有胚乳而是其他淀粉贮藏部分如块茎或者根的其他植物，通常通过减缩、干燥然后碾磨有关贮藏器官来生产面粉。植物胚乳的淀粉或者淀粉贮藏部分中所含淀粉是面粉的重要部分，从有关植物部分产生面粉。因此，面粉的特征也受到有关面粉中存在的淀粉的影响。根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物与对应的没有受到基因修饰的野生型植物细胞或者没有受到基因修饰的野生型植物相比合成经修饰的淀粉。因此，从根据本发明的植物细胞、根据本发明的植物、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获部分生产的面粉具有修饰的特征。面粉的特征还受到混合淀粉与面粉或者受到混合具有不同特征的面粉的影响。
本发明的另一主题因此涉及含有根据本发明的淀粉的面粉。
本发明的另一主题涉及从根据本发明的植物细胞、根据本发明的植物、根据本发明的植物的淀粉贮藏部分、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获的植物部分生产的面粉。根据本发明的植物的优选的淀粉贮藏部分是块茎、贮藏根和含有胚乳的谷粒。块茎来自马铃薯植物并且谷粒优选来自(系统的)禾本科植物；谷粒尤其优选来自玉米或者小麦植物。
结合本发明，术语“面粉”表示通过碾磨植物部分得到的粉末。如果必要，在碾磨之前干燥植物部分并且碾磨后缩减和/或过筛。
根据本发明的面粉特别通过它们的增加的水结合能力而区别，这是由于它们中存在的淀粉具有修饰的磷酸含量和/或修饰的磷酸分布。这例如对于食品工业的许多应用中，特别是焙烤产品的生产中面粉的加工所希望的。
本发明的另一主题是生产面粉的方法，其包括步骤碾磨根据本发明的植物细胞、根据本发明的植物、根据本发明的植物部分、根据本发明的植物的淀粉贮藏部分、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获材料。
通过碾磨根据本发明的淀粉贮藏部分可以生产面粉。本领域技术人员已知怎样生产面粉。优选地，生产面粉的方法还包括在碾磨前收获所培养的植物或者植物部分和/或这些植物的繁殖材料或者淀粉贮藏部分并且尤其还优选收获前培养根据本发明的植物。
结合本发明，术语“植物的部分”将理解为表示植物的所有部分，它们的全体作为成分代表完整植物。植物的部分为例如，枝条、叶子、根茎、根、甜菜根、块茎、豆荚、种子或者谷粒。
本发明的另一主题包括生产面粉的方法，其包括在碾磨前处理根据本发明的植物、根据本发明的植物的淀粉贮藏部分、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获的材料。
同时，所述处理可以为例如，热处理和/或干燥。热处理后干燥热处理的材料用于例如，从贮藏根或者块茎，例如，从马铃薯块茎生产面粉，热处理后进行碾磨。碾磨前对根据本发明的植物、根据本发明植物的淀粉贮藏部分、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获的材料的缩减同样代表本发明的处理。碾磨前除去植物组织，如谷粒的壳也代表本发明的碾磨前处理。
本发明的另一实施方案包括碾磨谷物处理产物后生产面粉的方法。同时，谷粒可以例如在碾磨后过筛以便生产例如多种类型的面粉。
本发明的另一主题是根据本发明的基因修饰的植物细胞、根据本发明的植物、根据本发明的植物部分、根据本发明植物的淀粉贮藏部分、根据本发明的繁殖材料或者根据本发明的可收获的材料的用途，用于生产面粉。
本发明的一个目的是提供工具，如DNA分子，例如，用于产生根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物，其与没有基因修饰的野生型植物细胞或者野生型植物相比合成修饰的淀粉。所提供的DNA分子含有编码OK1蛋白质的核酸序列。具有OK1蛋白质的酶促活性的蛋白质以前是本领域技术人员未知的。而且，不能提供这样的DNA分子，其允许产生根据本发明的植物细胞和根据本发明的植物和从它们合成的淀粉和从它们提取的面粉。
因此，本发明还涉及重组核酸分子，其含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列。
结合本发明，术语“重组核酸分子”将理解为表示一种核酸分子，其含有编码OK1蛋白质的核酸序列以及编码R1蛋白质的核酸序列并且其中编码OK1蛋白质和R1蛋白质的这些核酸序列存在的排列与它们天然存在于生物的基因组中的排列不同。除了编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列，该重组核酸分子可以还含有额外序列，它们天然存在的排列与它们在根据本发明的重组核酸分子中存在的排列不同。同时，所述额外序列可以是任意序列，优选调节序列(启动子、终止信号、增强子)，特别优选在植物组织中有活性的调节序列，尤其优选在贮藏淀粉的植物组织中有活性的调节序列。产生根据本发明的重组核酸分子的方法是本领域技术人员已知的并且包括基因工程方法，如通过连接作用连接若干核酸分子、核酸分子的基因重组或者重新合成(见，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第三版(2001)Cold SpringHarbour Laboratory Press，Cold Spring Harbour，NY.ISBN0879695773，Ausubel等人，Short Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons；第五版(2002)，ISBN0471250929)。
根据本发明的重组核酸分子的本发明的另一实施方案包含载体，尤其质粒、粘粒、病毒、噬菌体和基因工程中的其他常用载体，它们含有上述根据本发明的核酸分子。
在另一实施方案中，载体中包含的根据本发明的核酸分子连接调节序列，调节序列启动原核或者真核细胞中的表达。同时，术语“表达”可以表示转录以及转录和翻译。在该情况中，根据本发明的核酸分子可以以相对于调节序列“正义”方向存在和/或以“反义”方向存在。同时，根据本发明的重组核酸分子可以总体保持处于单个调节元件的控制下，或者它们可以每个都有它们各自的单独调节元件。
用于在原核生物，例如大肠杆菌，和在真核生物中表达的调节序列在文献中详细描述，尤其用于在酵母，如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表达的调节序列。蛋白质的不同表达系统和不同宿主生物的综述可以见例如，Methods in Enzymology 153(1987)，383-516和Bitter等人(Methodsin Enzymology 153(1987)，516-544)。
本发明的另一目的是宿主细胞，尤其原核或者真核细胞，其用根据本发明的重组核酸分子和/或用根据本发明的载体基因修饰，以及细胞，其来自该类型的宿主细胞并且含有根据本发明的基因修饰。
在另一实施方案，本发明涉及宿主细胞，尤其原核或者真核细胞，其用根据本发明的核酸分子或者根据本发明的载体转化，以及宿主细胞，其来自该类型的宿主细胞并且含有根据本发明的所述核酸分子或者载体。
宿主细胞可以是细菌(例如，大肠杆菌、土壤杆菌属细菌，尤其根瘤土壤杆菌或者发根土壤杆菌)或者真菌细胞(例如，酵母，尤其酿酒酵母，蘑菇属(Agaricus)，尤其二孢蘑菇(Agaricus bisporus)，曲霉属(Aspergillus)、木霉属(Trichoderma))，以及植物或者动物细胞。这里，术语“转化的”表示根据本发明的细胞用根据本发明的核酸分子基因修饰，因为它们除了它们的天然基因组之外还含有至少一种根据本发明的核酸分子。该核酸分子可以游离的存在于细胞，可能作为自我复制分子，或者它可以稳定整合到宿主细胞的基因组。宿主细胞优选为微生物。在本申请的范围内，这些理解为表示所有细菌和所有原生生物(例如，真菌，尤其酵母和藻类)，如在Schlegel“Allgemeine Mikrobiologie”(Georg Thieme Verlag(1985)，1-2)中定义。
优选根据本发明的宿主细胞是植物细胞。原则上，这些细胞可以是来自任何植物物种的植物细胞，即单子叶和双子叶植物。优选地，这些将是来自有用的农业植物的植物细胞，例如，来自为了食物或者技术目的，尤其工业目的而由人们栽培的植物的植物细胞。本发明优选涉及来自淀粉贮藏植物的植物细胞和植物(玉米、稻、黑麦、燕麦、大麦、木薯、马铃薯、西米、绿豆、豌豆或者高梁)，优选来自(系统的)禾本科植物的植物细胞，尤其优选来自玉米或者小麦植物的植物细胞。
本发明的主题还包括含有根据本发明的重组核酸分子或者根据本发明的载体的组合物。优选含有根据本发明的重组核酸分子，或者根据本发明的载体和宿主细胞的组合物。尤其优选宿主细胞是植物细胞，特别优选宿主细胞是玉米或者小麦植物的细胞。
本发明的另一主题涉及含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列的组合物。
同时，编码OK1蛋白质或者编码R1蛋白质的核酸序列可以一起存在于一个核酸分子中，或者存在于相互分开的几个核酸分子中。
根据本发明的组合物的另一方面涉及组合物，其可以用于产生根据本发明的宿主细胞，优选用于产生根据本发明的植物细胞。优选地，这涉及组合物，其含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列、根据本发明的重组核酸分子或者根据本发明的载体和生物射弹载体，该载体适于将核酸分子导入宿主细胞。优选的生物射弹载体是钨、金或者合成材料的颗粒。
根据本发明的组合物的另一实施方案涉及组合物，其含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列、根据本发明的重组核酸分子或者根据本发明的载体和植物细胞和合成的培养基。优选此类组合物除了植物细胞和合成的培养基外还含有聚乙二醇(PEG)。对于这些组合物，重组核酸分子存在于植物细胞的外面，即它位于被细胞膜包围的植物细胞的细胞内部的外面。
适于培养和/或转化植物细胞的合成的培养基是本领域技术人员已知的并且例如在文献中详细描述。许多不同的合成培养基也可以以专门的商标购买得到(例如，DUCHEFA Biochemie B.V.，Belgium)。
此外，本发明涉及根据本发明的组合物用于转化植物细胞的用途。
序列描述SEQ ID NO 1含有来自拟南芥的A.t.-OK1蛋白质的编码区的核酸序列。该序列插入载体OK1-pGEM-T和OK1-pDESTTM17中。
SEQ ID NO 2编码来自拟南芥的A.t.-OK1蛋白质的氨基酸序列。该序列来自SEQ ID NO 1所示的核酸序列。
SEQ ID NO 3含有来自稻的O.s.-OK1蛋白质的编码区的核酸序列。该序列插入载体pMI50。
SEQ ID NO 4编码来自稻的O.s.-OK1蛋白质的氨基酸序列。该序列来自SEQ ID NO 3所示的核酸序列。
SEQ ID NO 5编码来自拟南芥和稻的OK1蛋白质的磷酸组氨酸结构域的肽序列。
SEQ ID NO 6含有来自桔(Citrus reticulata)的C.r.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 7编码来自桔的C.r.-R1蛋白质的氨基酸序列。
SEQ ID NO 8含有编码来自拟南芥的A.t.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 9编码来自拟南芥的A.t.-R1蛋白质的氨基酸序列。
SEQ ID NO 10含有来自马铃薯(Solanum tuberosum)的S.t.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 11编码来自马铃薯的S.t.-R1蛋白质的氨基酸序列。
SEQ ID NO 12含有来自稻的O.s.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 13编码来自稻的O.s.-R1蛋白质的氨基酸序列。
SEQ ID NO 14含有来自大豆(Glycine max)的G.m.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 15编码来自大豆的G.m.-R1蛋白质的氨基酸序列。
SEQ ID NO 16含有来自玉米(Zea mays)的Z.m.-R1蛋白质的编码区的核酸序列。
SEQ ID NO 17编码来自玉米的Z.m.-R1蛋白质的氨基酸序列。
附图描述


图1变性丙烯酰胺凝胶，其用于鉴定来自拟南芥的蛋白质，与磷酸化的淀粉相比，该蛋白质优选结合非磷酸化的淀粉。标准蛋白质分子量标准参照物以迹线“M”显示。温育来自实施例1d)的对照制备物C后所得蛋白质以迹线“-”显示。与从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的非磷酸化淀粉温育后得到的拟南芥的蛋白质提取物(制备物B，实施例1d)以迹线“K”显示。从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离非磷酸化淀粉，将其在体外用R1蛋白质额外磷酸化后所得淀粉温育后得到的拟南芥的蛋白质提取物(制备物A，实施例1d)以迹线“P”显示。电泳完成时，用考马斯蓝对丙烯酰胺凝胶染色。
图2OK1蛋白质的自磷酸化作用的阐明。图2A)显示了完成电泳时用考马斯蓝染色的变性(SDS)丙烯酰胺凝胶。图2B显示了变性(SDS)丙烯酰胺凝胶的放射自显影。对两个凝胶的每一个应用相同量的相同样品M标准蛋白质分子量标准参照物；R1来自根据实施例7的反应容器1的样品(温育OK1蛋白质与ATP后)；R2来自根据实施例7的反应容器2的样品(温育OK1蛋白质与ATP后，蛋白质加热到95℃)；R3来自根据实施例7的反应容器3的样品(温育OK1蛋白质与ATP后，蛋白质在0.5M HCl中温育)；R4来自根据实施例7的反应容器4的样品(温育OK1蛋白质与ATP后，蛋白质在0.5M NaOH中温育)。
图3OK1蛋白质的淀粉磷酸化活性的阐明(见实施例6)。OK1蛋白质与从拟南芥sex1-3突变体分离的非磷酸化的淀粉温育(制备物A)和从拟南芥sex1-3突变体分离的在体外用R1蛋白质额外磷酸化的淀粉温育(制备物B)。制备物C与制备物B相同，只是该制备物不用OK1蛋白质温育。对每种制备物(A、B、C)进行两次独立的测试(测试1和测试2)。图示了从OK1蛋白质导入非磷酸化的淀粉(制备物A)和磷酸化的淀粉(制备物B)的33P-标记的磷酸的各自量(以cpm(每分钟计数)测量)。
图4分别从R1蛋白质和OK1蛋白质磷酸化的淀粉的葡萄糖分子的C-原子位置的比较(见实施例9)。OK1蛋白质(制备物A)在用33P-标记的ATP存在下与从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的在体外用R1蛋白质额外磷酸化的淀粉温育。R1蛋白质(制备物B)在用33P-标记的ATP存在下与从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的淀粉温育。温育完成时，进行淀粉的总的水解并通过HPAE层析分离所得水解产物。作为标准，分离前向水解产物加入葡萄糖-6-磷酸和葡萄糖-3-磷酸。通过HPAE层析分离的水解产物以单独级分收集。所加入的葡萄糖-6-磷酸随级分15洗脱，所加入的葡萄糖-3-磷酸随级分17洗脱。随后研究所得级分中放射性标记的磷酸的存在。图示了各级分中测量的33P标记的磷酸的量，其以cpm(计数/分钟测量)，所述磷酸通过OK1蛋白质或者R1蛋白质导入磷酸化的淀粉的水解产物中。
图5.OK1蛋白质的自磷酸化的证明。图5A显示了蛋白质印迹。图5B显示了变性(SDS)丙烯酰胺凝胶的放射自显影。对两个凝胶的每一个应用相同量的相同样品。OK1蛋白质与随机放射性标记的ATP或者在γ位特异放射性标记的ATP温育。完成孵育时，将蛋白质分别加热到30℃或者95℃，或者在0.5M NaOH或者0.5M HCl中温育。
图6.在OK1蛋白质催化的反应中ATP的β-磷酸残基向淀粉转移的阐明。在γ位用33P特异标记的ATP或者随机化的33P ATP用于通过OK1蛋白质磷酸化淀粉，该淀粉已经通过R1蛋白质在体外磷酸化并且从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离。在任一实验中没有加入称作“对照”的OK1蛋白质。每个测试制备物独立地测试两次。显示了两次测试的结果。
图7.当R1蛋白质和OK1蛋白质同时参与反应时，磷酸化反应中磷酸化活性增加的阐明。给出了通过测量不同淀粉中放射性(cpm)，从有关淀粉中放射性标记的ATP(随机化的33P-ATP)开始的磷酸的掺入。为此，小麦淀粉以天然形式与R1蛋白质(制备物1-2，制备物1-2)或者OK1蛋白质(制备物2)温育或者以体外磷酸化的小麦淀粉的形式与OK1蛋白质温育(制备物3)。制备物4含有与R1蛋白质和OK1蛋白质同时温育的天然小麦淀粉。每种制备物重复进行三次。给出了各自制备物1-2的总体和制备物3用于比较。
图8.通过R1蛋白质和OK1蛋白质的协同导致增加的活性的阐明。通过R1蛋白质，体外磷酸化的小麦淀粉分别与纯化的R1(制备物1)蛋白质或者纯化的OK1蛋白质(制备物2)在分开的反应制备物中用随机化的β/γD-P33ATP温育10分钟或者30分钟。在平行制备物中，相同的磷酸化的小麦淀粉同时与R1蛋白质和OK1蛋白质(制备物3)温育。对于所有反应制备物，温育完成后，通过用闪烁计数器测量，确定各自反应制备物中结合到淀粉的磷酸的量。图中还给出了反应制备物的总体，对于所述反应制备物，仅分别导入了两种酶的一种用于磷酸化反应。
一般方法在下文描述了可以用于实施本发明的方法。这些方法构成了本发明的特定实施方案但是不将本发明限定于这些方法。本领域技术人员已知通过修饰所述方法和/或通过所述方法的备选部分替换这些方法的各自部分，可以以相同方式完成本发明。
1.从植物组织制备蛋白质提取物a)从植物组织制备蛋白质提取物叶材料收获后立即在液氮中冷冻并随后在液氮下在研钵中匀浆。将减小的叶材料与约3.5倍体积(指所用叶材料的重量)的冷(4℃)结合缓冲液混合并用Ultraturrax(最大速度)破坏2×10秒。用Ultraturrax第一次处理后，在第二次处理前将减小的叶材料在冰上冷却。然后所处理的叶材料穿过100μm尼龙网并离心20分钟(50ml离心容器，20,000×g，4℃)。
b)蛋白质提取物中所含蛋白质的沉淀将根据步骤a)离心后所得上清液移去并测定其体积。为了沉淀蛋白质，在冰上搅拌下30分钟内向上清液连续加入硫酸铵至终浓度75％(重量/体积)。上清液随后在冰上搅拌下再温育1小时。从上清液沉淀的蛋白质以20,000×g在4℃下沉降10分钟并随后用5ml结合缓冲液吸收沉淀物，即，溶解沉淀物中存在的蛋白质。
c)所沉淀蛋白质的脱盐通过装有Sephadex G25(Amersham Bioscience，Freiburg，柱产品号17-0851-01，Sephadex G25-M产品号17-0033-01)的PD10柱在4℃温度下对溶解的蛋白质脱盐，即步骤b)中用于沉淀的硫酸铵也与溶解的蛋白质分离。在加入根据步骤b)中溶解的蛋白质前将PD10柱用结合缓冲液平衡。为此，每种情况下在柱子上覆盖5ml结合缓冲液5次。随后，向每根柱子加入根据步骤b)得到的2.5ml蛋白质溶液，之后用3.5ml结合缓冲液从柱子洗脱蛋白质。
d)蛋白质浓度的测定用Bradford测定法(Biorad，Munich，产品号500-0006，Bradford，1976，Anal.Biochem.72，248-254)测定蛋白质浓度。
e)结合缓冲液的组成结合缓冲液50mM HEPES/NaOH(或者KOH)，pH 7.21mM EDTA2mM 二硫赤藓糖醇(DTE)
2mM 苯甲脒2mM ε-氨基己酸0.5mM PMSF0.02％ Triton X-1002.叶子淀粉的分离a)从植物组织分离淀粉颗粒叶材料收获后立即在液氮中冷冻。将叶材料按份在研钵中液氮下匀浆并吸收到共约2.5倍体积(重量/体积)的淀粉缓冲液中。此外，该悬浮液在韦林氏搅切器中再次以最大速度匀浆20分钟。匀浆物穿过尼龙网(100μm网孔宽)并以1,000×g离心5分钟。丢弃含有可溶蛋白质的上清液。
b)从植物组织分离的淀粉的纯化用淀粉缓冲液冲洗绿色材料除去淀粉上的绿色材料后，将含有从步骤a)所得淀粉的沉淀物吸收在淀粉缓冲液中并连续穿过具有不同网孔宽度(60μm、30μm和20μm级)的尼龙网。滤液用10ml Percoll垫层(95％(v/v)Percoll(Pharmacia，Uppsala，Sweden)、5％(v/v)0.5M HEPES-KOHpH7.2)(Correx管，15min，2,000xg)离心。该离心后所得沉淀物一次重悬浮在淀粉缓冲液中并再次离心(5min，1,000×g)。
c)除去结合淀粉的蛋白质步骤b)后，得到淀粉颗粒，其含有结合到淀粉的蛋白质。通过在所有情况下在室温搅拌下用0.5％SDS(十二烷基硫酸钠)温育10-15分钟除去结合到淀粉颗粒表面的蛋白质。每个洗涤步骤后离心(5min，5,000xg)，以便从各自洗涤缓冲液分离淀粉颗粒。
d)纯化没有蛋白质的淀粉从步骤c)得到的淀粉已经没有结合其表面的蛋白质，将该淀粉随后通过在所有情况下室温搅拌下用洗涤缓冲液温育4次，每次10-15分钟除去。每个洗涤步骤后离心(5min，1,000xg)，以便从各自的洗涤缓冲液分离淀粉颗粒。这些纯化步骤主要用于除去用于步骤c)中温育的SDS。
e)测定所分离淀粉的浓度通过光度法测定步骤d)中分离的淀粉的量。适当稀释后，在600nm的波长下对校准曲线测量淀粉悬浮液的光密度。校准曲线的线性范围位于0到0.3消光单位之间。
为了产生校准曲线，将例如从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离的淀粉在真空干燥、称重并用确定体积的水吸收。所得悬浮液在所有情况下用水在几步中以1∶1的比例稀释直到得到每毫升水约5μg淀粉的悬浮液。在光度计中以600nm波长测量各稀释步骤所得悬浮液。每种悬浮液所得吸收值对各自悬浮液中淀粉的浓度作图。所得校准曲线应该在0μg淀粉/ml水到0.3μg淀粉/ml水的范围内遵循线性数学函数。
f)所分离淀粉的贮存淀粉可以不用进一步贮存直接用于进一步测试，或者以等分试样在1.5ml Eppendorf容器中-20℃下贮存。如果需要，对于本发明中描述的关于例如体外磷酸化和/或结合测试的方法，可以使用冷冻的淀粉和未贮存的、新鲜分离的淀粉。
g)所用缓冲液的组成1×淀粉缓冲液20mM HEPES-KOH，pH 8.00.2mM EDTA0.5％ Triton X-100洗涤缓冲液 50mM HEPES/KOH，pH 7.23.所鉴定的淀粉-磷酸化蛋白质的重组表达
a)制备含有编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA的细菌表达载体例如，使用来自植物组织的mRNA或者多聚A-加-mRNA作为“模板”，通过聚合酶链式反应(PCR)，可以扩增编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA。为此，逆转录酶首先用于制备cDNA链，其与编码淀粉磷酸化蛋白质的mRNA互补，之后通过DNA聚合酶扩增有关cDNA链。可以购买得到用于进行PCR反应的所称作的含有物质、酶和使用说明的“试剂盒”(例如，SuperScriptTMOne-Step RT-PCR System，Invitrogen，产品号10928-034)。所扩增的编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA可以随后克隆在细菌表达载体，例如pDESTTM17(Invitrogen)中。pDESTTM17含有T7启动子，其用于启动T7-RNA-聚合酶的转录。此外，表达载体pDESTTM17在T7启动子的5’方向中含有SD(Shine Dalgarno)序列，接着是起始密码子(ATG)和所称作的His标签。该His标签由直接相互连接的6个密码子组成，每个密码子编码氨基酸组氨酸并且位于所述起始密码子的读框中。以在起始密码子、His标签和编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA之间发生翻译融合的方式进行pDESTTM17中编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA的克隆。结果，在T7启动子上启动转录，和随后的翻译后，得到淀粉磷酸化蛋白质，其在其N-末端上含有包含His标签的额外氨基酸。然而，适于在微生物中表达的其他载体也可以用于表达淀粉磷酸化蛋白质。表达载体和有关的表达菌株是本领域技术人员已知的并且可以以适当的组合从合适的经销商购买得到。
b)在大肠杆菌中产生表达克隆首先，将染色体编码T7-RNA聚合酶的适当的转化感受态大肠杆菌菌株用步骤a)中制备的表达质粒转化，并随后在用琼脂固化的培养基上30℃下过夜培养。合适的表达菌株为例如，BL21菌株(Invitrogen产品号C6010-03，其染色体编码处于IPTG可诱导的启动子(lacZ)控制下的T7-RNA聚合酶)。从转化得到的细菌菌落可以用本领域技术人员已知的方法研究来判断它们是否含有所需要的表达质粒，其中该表达质粒含有编码淀粉磷酸化蛋白质的cDNA。同时，得到表达克隆。
c)在大肠杆菌中表达淀粉磷酸化蛋白质首先，产生初步培养物。为此，将根据步骤b)得到的表达克隆接种在30ml Terrific Broth(TB培养基)中，该培养基含有用以选择表达质粒的存在的抗生素，并在30℃搅拌(250转/分钟)下过夜培养。
然后产生用于表达淀粉磷酸化蛋白质的主培养物。为此，在所有情况下，将每只含有预热到30℃的300ml TB培养基和用于选择表达质粒的存在的抗生素的1升锥形瓶每只接种10ml合适的预培养物并在30℃搅拌(250转/分钟)下培养直到实现约0.8的光密度(在600nm波长下测量；OD600)。
如果为了表达淀粉磷酸化蛋白质，使用表达质粒，其中淀粉磷酸化蛋白质的表达通过可诱导的系统启动(例如，BL21大肠杆菌菌株中的表达载体pDESTTM17，可以通过IPTG诱导)，然后当达到约0.8的OD600时，向主培养物加入有关的诱导物(例如，IPTG)。加入诱导物后，主培养物在30℃搅拌(250转/分钟)下培养直到实现约1.8的OD600。然后将主培养物在冰上冷却30分钟后通过离心(4,000×g和4℃下10分钟)从培养基分离主培养物的细胞。
4.淀粉磷酸化蛋白质的纯化a)表达淀粉磷酸化蛋白质的细胞的破碎在一般方法第三项步骤c)中离心后所得细胞重悬浮在裂解缓冲液中。在这种情况下，向约1g细胞加入约4ml裂解缓冲液。然后重悬浮的细胞在冰上孵育30分钟后用超声探头(Baudelin Sonoplus UW 2070，Baudelinelectronic，Berlin，设置周期6，70％，1分钟)在通过冰连续冷却下破碎。必须小心确保在超声处理中细胞悬浮液不能加热到太高温度。超声处理后所得悬浮液经离心(20,000xg 12分钟，4℃)并将离心后得到的上清液用孔径为45μm的滤器过滤。
b)淀粉磷酸化蛋白质的纯化如果大肠杆菌细胞中表达的淀粉磷酸化蛋白质是具有His标签的融合蛋白，那么可以借助于镍离子进行纯化，His标签以较大亲和力结合镍离子。在这种情况下，将25ml步骤d)中所得滤液与1ml Ni-琼脂糖浆液(Qiagen，产品号30210)混合并在冰上温育1小时。Ni-琼脂糖浆液和滤液的混合物随后在聚苯乙烯柱(Pierce，产品号29920)上覆盖。丢弃穿过层析柱的产物。接着通过加入8ml裂解缓冲液洗涤层析柱，其中再次丢弃穿过层析柱的产物。通过向层析柱分次加入1ml E1缓冲液2次，然后加入1mlE2缓冲液1次，随后加入1ml E3缓冲液5次，进行淀粉磷酸化蛋白质的洗脱。通过向层析柱加入各自部分的合适的洗涤缓冲液(E1、E2、E3缓冲液)产生的穿过柱子的产物以单独的级分收集。这些级分的等分试样随后通过变性SDS丙烯酰胺凝胶电泳，通过考马斯蓝染色来分析。含有足够量和满意的纯度的淀粉磷酸化蛋白质的级分借助于在4℃下加压过滤来纯化和浓缩。例如，可以借助于Amicon cell(Amicon Ultrafiltration Cell，Model8010，产品号5121)使用Diaflo PM30膜(Millipore，产品号13212)在4℃进行加压过滤。然而，本领域技术人员已知的其他方法也可以用于浓缩。
c)所用的缓冲液的组成裂解缓冲液50mM HEPES300mM NaCl10mM 咪唑pH 8.0(用NaOH调节)1mg/ml 溶菌酶(使用缓冲液即刻前加入)1/4片/10ml完全没有EDTA的蛋白酶抑制剂(Roche，产品号1873580)(使用缓冲液即刻前加入)洗脱缓冲液E150mMHEPES300mM NaCl
50mM咪唑pH 8.0(用NaOH调节)洗脱缓冲液E250mMHEPES300mM NaCl75mM咪唑pH 8.0(用NaOH调节)洗脱缓冲液E350mMHEPES300mM NaCl250mM 咪唑pH 8.0(用NaOH调节)5.R1蛋白质的重组表达R1蛋白质的重组表达在文献中描述(Ritte等人，2002，PNAS99，7166-7171；Mikkelsen等人，2004，Biochemical Journal 377，525-532)，但是也可以按照上文在一般方法的第3项中描述的关于淀粉磷酸化蛋白质的重组表达的方法进行。
6.R1蛋白质的纯化R1蛋白质的纯化在文献中描述(Ritte等人，2002，PNAS99，7166-7171；Mikkelsen等人，2004，Biochemical Journal 377，525-532)，但是如果含有His标签的R1融合蛋白通过在大肠杆菌细胞中表达R1产生，那么也可以按照上文在一般方法第4项中描述的淀粉磷酸化蛋白质的纯化的方法进行。
7.在体外从非磷酸化的淀粉产生磷酸化的淀粉a)非磷酸化淀粉的体外磷酸化将不含有淀粉磷酸酯(例如，借助于上文一般方法第二项中描述的方法分别从玉米或者小麦植物的胚乳分离，或者从拟南芥sex1-3突变体的叶子分离)的淀粉与R1缓冲液和纯化的R1蛋白质(约0.25μg R1蛋白质/mg淀粉)混合以便产生25mg/ml的淀粉含量。该反应制备物在室温搅拌下过夜温育(约15h)。反应完成时，通过在所有情况下用约800μl 0.5％SDS洗涤4次，除去反应制备物中存在的结合淀粉的R1。随后，每种情况下通过用1ml洗涤缓冲液洗涤5次除去体外磷酸化的淀粉中存在的SDS。在室温搅拌下进行所有洗涤步骤10到15分钟。每个洗涤步骤后进行离心(2分钟，10,000xg)，以便从各自SDS缓冲液分离淀粉颗粒。
b)所用的缓冲液的组成R1缓冲液 50mMHEPES/KOH，pH 7.51mM EDTA6mMMgCl20.5mM ATP洗涤缓冲液 50mMHEPES/KOH，pH 7，28.蛋白质与磷酸化淀粉或者非磷酸化淀粉的结合a)分离P-淀粉蛋白质复合体或者非磷酸化的淀粉蛋白质复合体在所有情况下将约50mg P-淀粉或者约50mg非磷酸化的淀粉分别以约800μl蛋白质提取物重悬浮在单独的制备物中。每种情况下蛋白质提取物的蛋白质浓度应该为约4mg到5mg/ml。P-淀粉或者非磷酸化的淀粉与蛋白质提取物的温育在室温4℃搅拌下进行15分钟。温育完成时，用Percoll垫层(cushion)(4ml)(15分钟，3500转/分钟，4℃)离心反应制备物。离心后，不结合磷酸化淀粉或者P-淀粉的蛋白质将在上清液中发现并且可以用巴氏滴管除去。丢弃上清液。离心后得到的沉降的沉淀物含有P-淀粉和非磷酸化淀粉，包括结合各自淀粉的蛋白质(分别是P-淀粉蛋白质复合体或者非磷酸化的淀粉蛋白质复合体)，将所述沉淀物通过在所有情况下在4℃搅拌下温育3分钟，在所有情况下用1ml洗涤缓冲液洗涤两次(见上文，一般方法7.b项)。每个洗涤步骤后离心(5分钟，8000转/分钟，4℃，台式离心机，Hettich EBA 12R)，以便从洗涤缓冲液分别分离P-淀粉或者非磷酸化的淀粉。
b)溶解分别结合在P-淀粉蛋白质复合体或者非磷酸化的淀粉蛋白质复合体中的蛋白质步骤a)中所得P-淀粉蛋白质复合体或者非磷酸化的淀粉蛋白质复合体重悬浮在约150μl SDS测试缓冲液中并在室温搅拌下温育15分钟。随后通过离心(1分钟，13,000转/分钟，室温，Eppendorf台式离心机)从溶解的蛋白质分别除去P-淀粉或者非磷酸化的淀粉。离心后所得上清液再次离心(1分钟，13,000转/分钟，室温，Eppendorf台式离心机)以便分别除去P-淀粉或者非磷酸化淀粉的任何残渣并除去。结果，得到结合P-淀粉或者非磷酸化淀粉的溶解的蛋白质。
c)所用的缓冲液的组成SDS测试缓冲液 187.5mM Tris/HCl pH 6.86％ SDS30％ 甘油～0.015％溴酚蓝60mM DTE(用时加入！)Percoll将Percoll对由25mM HEPES/KOH，pH 7.0组成的溶液过夜透析。
9.结合P-淀粉和/或非磷酸化淀粉的蛋白质的分离将涉及蛋白质对P-淀粉或者非磷酸化淀粉的结合的一般方法第8项中步骤c)中所得溶解的蛋白质在所有情况下在95℃温育5分钟并随后借助于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。在这种情况下，对于通过结合P-淀粉得到的溶解的蛋白质和通过结合非磷酸化得到的蛋白质，在所有情况下对丙烯酰胺凝胶应用相等体积。电泳完成时所得凝胶至少用胶态考马斯(Roth，Karlsruhe，Roti-Blue Rod.No.A152.1)过夜染色并随后在30％甲醇、5％乙酸或者25％甲醇中脱色。
10.鉴定和分离结合P-淀粉和/或非磷酸化淀粉的蛋白质a)与非磷酸化淀粉相比，对P-淀粉有增加的结合活性的蛋白质的鉴定通过丙烯酰胺凝胶电泳分离并随后通过染色显现(见上面，一般方法第9项)后，结合P-淀粉后显示出与结合非磷酸化淀粉后的对应信号相比增强的信号的蛋白质对于P-淀粉与对非磷酸化相比具有增加的结合活性。用这种方法，可能鉴定对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性的蛋白质。对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性的蛋白质从丙烯酰胺凝胶切除。
b)鉴定对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性的蛋白质的氨基酸序列将根据步骤a)鉴定的蛋白质用胰蛋白酶消化，并通过MALDI-TOF分析所得肽以测定所得肽的质量。胰蛋白酶是序列特异的蛋白酶，即，当有关蛋白质含有某些氨基酸序列时，胰蛋白酶仅在特定位置剪切该蛋白质。当从N-末端开始氨基酸精氨酸和赖氨酸相邻时，胰蛋白酶总是切割它们形成的肽键。这样，通过氨基酸序列的胰蛋白酶消化后，可以理论上确定所有肽。根据编码理论上确定的肽的氨基酸的知识，也可以确定理论上胰蛋白酶消化后所得肽的质量。含有关于理论上胰蛋白酶消化后肽质量的信息的数据库(例如，NCBlnr http://prospector.ucsf.edu/ucsfhtml4.0/msfit.htm；Swissprot http://cbrg.inf.ethz.ch/Server/MassSearch.html)因此可以与用MALDI-TOF-MS得到的未知蛋白质的肽的真实质量比较。理论和/或真实胰蛋白酶消化后具有相同肽质量的氨基酸序列将被认为是相同的。有关数据库含有蛋白质的肽质量，已经证明的所述蛋白质的功能，以及蛋白质的肽质量，其迄今仅仅通过从测序计划中得到的核酸序列推导氨基酸序列而假设地存在。因此，很少证明此类假设蛋白质的实际存在和功能，如果存在功能，那么这通常仅仅是基于预测而不是该功能的实际证明。
从丙烯酰胺凝胶切除根据步骤a)鉴定的含有蛋白质的带；所切割的丙烯酰胺小块通过在约1ml 60％50mM NH4HCO3，40％乙腈中37℃温育约半小时进行还原和脱色。随后除去脱色溶液并真空干燥(例如，Speedvac)剩下的凝胶。干燥后，加入胰蛋白酶溶液以消化有关凝胶块中含有的蛋白质。在37℃下过夜消化。消化后，加入少量乙腈(直到丙烯酰胺凝胶染成白色)并在真空下干燥(例如，Speedvac)制备物。干燥完成时，加入足够5％甲酸来覆盖干燥的成分并在37℃温育几分钟。再次重复乙腈处理后干燥。干燥的成分随后用1％TFA(三氟乙酸，5μl到10μl)吸收并以约5μl部分滴在载体上。还对载体应用等量基质(ε-氰基-4-羟基-肉桂酸)。从基质结晶出后，通过MALDI-TOF-MS-MS(例如，Burker ReflexTMII，Bruker Daltonic，Bremen)测定肽的质量。利用所得质量，对数据库检索理论胰蛋白酶消化后得到相同质量的氨基酸序列。这样，可以鉴定这样的氨基酸序列，其编码优选结合磷酸化的α-1，4-葡聚糖和/或需要P-α-1，4-葡聚糖作为底物的蛋白质。
11.证明蛋白质的淀粉-磷酸化活性的方法a)蛋白质与P-淀粉和/或非磷酸化淀粉的温育为了阐明蛋白质是否具有淀粉磷酸化活性，所研究的蛋白质可以与淀粉和放射性标记的ATP温育。在这种情况下，约5mg P-淀粉或者约5mg非磷酸化的淀粉与待研究的蛋白质(0.01μg到5.0μg/mg加入的淀粉)在500μl磷酸化缓冲液中室温搅拌下温育10分钟到30分钟。随后通过加入高达2％浓度(重量/体积)的SDS终止反应。各自反应混合物中的淀粉颗粒离心(1分钟，13,000xg)出来，并用900μl 2％SDS溶液洗涤一次，用2mM ATP溶液洗涤4次，每次900μl。每次洗涤步骤在室温搅拌下进行15分钟。每次洗涤步骤后，通过离心(1分钟，13,000xg)从各自洗涤缓冲液分离淀粉颗粒。
此外，当进行实验来阐明蛋白质的淀粉磷酸化活性时，应该将不含有蛋白质或者含有失活的蛋白质，但是以与所述反应制备物相同方式处理的其他反应制备物作为所称作的对照处理。
b)测定由于酶促活性掺入P-淀粉和/或非磷酸化淀粉的磷酸残基的量可以研究根据步骤a)所得淀粉颗粒中放射性标记的磷酸残基的存在。为此，将各自淀粉重悬浮在100μl水中并在所有情况下与3ml闪烁混合物(例如，Ready SafeTM，BECKMANN Coulter)混合并随后用闪烁计数器(例如LS 6500 Multi-Purpose Scintillation Counter，BECKMANNCOULTERTM)分析。
c)鉴定优选用P-淀粉作为底物的蛋白质如果根据a)中描述的方法，将蛋白质在分开的制备物中温育，一次与P-淀粉，一次与非磷酸化的淀粉，那么通过比较步骤b)所得淀粉磷酸酯存在的值，可以确定有关蛋白质是否在P-淀粉中比在非磷酸化的淀粉中掺入了更多磷酸。这样，可以鉴定能够将磷酸导入P-淀粉而不是非磷酸化淀粉的蛋白质。这表示可以鉴定已经需要磷酸化的淀粉作为底物进行进一步磷酸化反应的蛋白质。
d)所用的缓冲液的组成磷酸化缓冲液50mM HEPES/KOH，pH 7.51mM EDTA6mM MgCl20.01到0.5mM ATP0.2到2μCi/ml随机化的33P-ATP(备选地，也可以使用含有在γ位特异标记的磷酸残基的ATP)。
结合本发明，术语“随机化的ATP”将理解为表示在γ位以及β位都含有标记的磷酸残基的ATP(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)。随机化的ATP也在科学文献中描述为β/γATP。在下面描述了制备随机化ATP的方法。
i)随机化ATP的制备这里描述的借助酶催化的反应制备随机化ATP的方法是基于下面的反应机理第一个反应步骤
第二个反应步骤
该反应平衡取决于产物边，但是尽管如此，该反应还是产生主要由β33P-ATP和一些γ33P-ATP组成的混合物。
ii)进行第一个反应步骤将含有γ位用33P标记的磷酸残基的ATP(100μCi，3000Ci/mmol)与2μl肌激酶(AMP-磷酸转移酶，来自兔肌肉；SIGMA，产品号M3003 3.8mg/ml，1,626单位/mg)在90μl随机化缓冲液中37℃下温育1小时。随后通过在95℃温育12分钟终止反应，然后用Microcon YM 10滤器(Amicon，Millipore产品号42407)以14,000xg离心过滤至少10分钟纯化反应制备物。
iii)进行第二个反应步骤向步骤ii)中得到的滤液加入2μl丙酮酸激酶(关于合适的溶液的制备见下文)和3μl 50mM PEP(磷酸烯醇丙酮酸)。该反应混合物在30℃温育45分钟，然后通过在95℃温育12分钟终止反应。随后离心反应混合物(2分钟，Eppendorf台式离心机中12,000转/分钟)。离心后除去含有所得随机化ATP的上清液，等分试样并且可以在-20℃保存。
丙酮酸激酶溶液的制备将15μl丙酮酸激酶(来自兔肌肉，Roche，产品号12815，10mg/ml，200单位/mg，25℃)离心，丢弃上清液并用27μl丙酮酸激酶缓冲液吸收沉淀。
iv)所用的缓冲液丙酮酸激酶缓冲液50mM HEPES/KOH pH 7.51mM EDTA随机化缓冲液100mMHEPES/KOH pH 7.51mM EDTA10％ 甘油5mM MgCl25mM KCl0.1mMATP0.3mMAMP12.蛋白质的自磷酸化的阐明为了阐明蛋白质是否具有自磷酸化活性，将待研究的蛋白质与放射性标记的ATP温育。为此，将待研究的蛋白质(50μg到100μg)在220μl磷酸化缓冲液(见上面的一般方法12d项)中室温搅拌下温育30分钟到90分钟。随后通过加入EDTA到0.11M的终浓度停止反应。借助变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(7.5％丙烯酰胺凝胶)分离2μg到4μg蛋白质。聚丙烯酰胺凝胶电泳后所得凝胶进行放射自显影。显示出放射自显影信号的蛋白质携带放射性磷酸残基。
13.鉴定α-1，4-葡聚糖的葡萄糖分子中通过淀粉磷酸化蛋白质导入磷酸残基的C-原子位置α-1，4-葡聚糖的葡萄糖分子的哪些C-原子位置被蛋白质磷酸化可以以受控的方式如下阐明水解在体外通过合适的蛋白质得到的磷酸化的葡聚糖，水解后随后分离所得葡萄糖单体，然后测量葡萄糖分子的某些级分中合适的蛋白质掺入的磷酸。
a)α-1，4-葡聚糖的总水解将含有α-1，4-葡聚糖的水悬浮液离心，沉降的沉淀物随后重悬浮在0.7M HCl(Baker，用于分析)并在95℃搅拌下温育2小时。温育完成时，样品快速冷却并离心(例如，2分钟，10,000xg)。将所得上清液转移到新的反应容器中并加入2M NaOH(Baker，用于分析)中和。如果残留沉淀物，将其重悬浮在100μl水中并测定其中存在的经标记的磷酸的量作为对照。中和的上清液随后在10KDa滤器上离心。通过测量所得滤液的等分试样，借助于例如闪烁计数器测定滤液中经标记磷酸的量。
b)水解产物的分级分离和磷酸化C-原子位置的确定通过步骤a)得到的水解产物的中和的滤液可以借助例如高压阴离子交换层析(HPAE)分离(当使用约3,000cpm的放射性标记的ATP时)。中和的滤液可以用水稀释得到HPAE所需的体积。此外，在所有情况下向适宜的滤液加入葡萄糖-6-磷酸(约0.15mM)和葡萄糖-3-磷酸(约0.3mM)作为内部对照。例如，借助Dionex DX 600Bio Lc系统使用CarboPac PA 100柱(具有合适的前置柱)和脉冲的电流检测器(ED 50)，通过HPAE分离。这样，注射样品前，将柱子首先用99％洗脱剂C和1％洗脱剂D冲洗10分钟。然后注射60μl样品体积。
在下面的条件下发生样品的洗脱
流速1ml/分钟梯度从0分钟到30分钟线性增加洗脱剂C洗脱剂D0分钟99％ 1％30分钟 0％100％35分钟 0％100％运行结束从柱子洗脱的水解产物在单独的级分中收集，每个级分1ml。由于在所有情况下，已经向水解产物的注射的样品加入未标记的葡萄糖-3-磷酸(Ritte等人，2002，PNAS 99，7166-7171)和未标记的葡萄糖-6-磷酸(Sigma，产品号G7879)作为内部标准，所以可以通过脉冲的电流检测确定含有葡萄糖-3-磷酸或者葡萄糖-6-磷酸的级分。通过测量各自级分中经标记的磷酸的量，并随后与含有葡萄糖-3-磷酸或者葡萄糖-6-磷酸的级分比较，这可以用于确定其中含有标记的葡萄糖-6-磷酸或者标记的葡萄糖-3-磷酸的那些级分。测定有关级分中标记的磷酸的量。从各自水解产物中对标记的磷酸测量的葡萄糖-3-磷酸与葡萄糖-6-磷酸的量的比率，现在可以确定哪个C-原子位置优选被α-1，4-葡聚糖磷酸化酶磷酸化。
c)所用的缓冲液洗脱剂C100mM NaOH洗脱剂D100mM NaOH500mM 乙酸钠14.稻植物的转化根据Hiei等人(1994，Plant Journal 6(2)，271-282)描述的方法转化稻植物。
15.小麦植物的转化根据Becker等人(1994，Plant Journal 5，299-307)的方法转化小麦植物。
16.玉米植物的转化根据Ishida等人(1996，Nature Biotechnology 14，745-750)描述的方法转化品系A188的玉米植物的未成熟胚。
17.测定淀粉磷酸酯含量a)测定C-磷酸含量可以磷酸化淀粉中葡萄糖单位的C2、C3和C6位。为了测定淀粉的C6-P含量，将50mg淀粉在500μl 0.7M HCl中95℃下水解4小时。随后以15500g离心制备物10分钟，并除去上清液。将几微升上清液与193μl咪唑缓冲液(100mM咪唑，pH 7.4；5mM MgCl2，1mM EDTA和0.4mMNAD)混合。用光度计在340nm进行测量。建立基本吸收后，通过加入2单位葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(来自肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)，Boehringer Mannheim)开始酶反应。吸收的改变与淀粉的G-6-P含量的浓度成正比。
b)总磷酸含量的测定根据Ames(Methods in Enzymology VIII，(1996)，115-118)的方法进行总磷酸含量的测定。
将约50mg淀粉与30μl硝酸镁的乙醇溶液混合并在马弗炉中在500℃下煅烧3小时。残渣与300μl 0.5M盐酸混合并在60℃温育30分钟。随后再填充300μl 0.5M盐酸的等分试样，加入100μl 10％抗坏血酸和600μl0.42％钼酸铵在2M硫酸中的混合物并在45℃温育20分钟。
c)测定C-6磷酸和C-3磷酸的含量为了测定结合在α-1，4-葡聚糖的葡萄糖分子的C-6位和C-3位中磷酸的含量，根据在一般方法13中给出的方法总水解后可以通过HPAE分离有关葡聚糖。可以通过HPAE分离后所得各自峰面积的积分确定葡萄糖-6-磷酸和葡萄糖-3-磷酸的量。通过比较未知样品中葡萄糖-6-磷酸和葡萄糖-3-磷酸所得峰面积与通过HPAE分离后葡萄糖-6-磷酸和葡萄糖-3-磷酸的已知量，可以确定待研究的样品中葡萄糖-6-磷酸和葡萄糖-3-磷酸的量。
实施例1.从拟南芥分离蛋白质，其对P-淀粉与对非磷酸化的淀粉相比有增加的结合活性a)从拟南芥制备蛋白质提取物根据一般方法第一项中描述的方法，从约7g拟南芥(EcotypeColumbia，Col-O)叶子(鲜重)制备蛋白质提取物。
b)从拟南芥的sex1-3突变体叶子分离淀粉颗粒根据一般方法第二项中描述的方法从拟南芥的sex1-3突变体的约20g(鲜重)叶子分离淀粉颗粒。
c)用纯化的R1蛋白质对从拟南芥的sex1-3突变体分离的淀粉的体外磷酸化根据一般方法第7项中描述的方法，通过在大肠杆菌中重组表达并纯化的R1蛋白质，从拟南芥的sex1-3突变体分离约30g非磷酸化的淀粉。Ritte等人(2002，PNAS 99，7166-7171)描述的方法用于在大肠杆菌中表达R1蛋白质并随后纯化。
d)结合P-淀粉和/或非磷酸化淀粉的蛋白质的分离使用根据一般方法8a)项中描述的方法，根据步骤a)得到的拟南芥的蛋白质提取物在制备物A中用根据步骤c)制备的50mg体外磷酸化的淀粉温育并洗涤。使用根据一般方法8a)项中描述的方法，根据步骤a)得到的拟南芥的蛋白质提取物在另一种制备物B中与根据步骤b)制备的50mg非磷酸化的淀粉温育并洗涤。
随后，根据一般方法8b)项中描述的方法溶解制备物A的结合P-淀粉的蛋白质和制备物B的结合非磷酸化淀粉的蛋白质。
在第三种制备物C中，根据步骤c)制备的50mg体外磷酸化的淀粉用一般方法8a)项描述的方法温育和洗涤。然而，制备物C不含有蛋白质提取物。
e)通过丙烯酰胺凝胶电泳分离根据步骤d)得到的蛋白质使用一般方法第9项描述的方法，通过9％丙烯酰胺凝胶在变性条件(SDS)下分离步骤d)中得到的制备物A、B和C的蛋白质，并随后用考马斯蓝染色。染色的凝胶在
图1中显示。可以清楚地看到参照蛋白质标准参照物(迹线M)，在变性丙烯酰胺凝胶中具有约130kDa分子量的蛋白质与非磷酸化的淀粉(K)相比优选结合磷酸化的淀粉(迹线P)。
f)与非磷酸化的淀粉相比优选结合P-淀粉的蛋白质的鉴定从凝胶切除步骤e)中鉴定的分子量为约130kDa的蛋白质条带。随后如一般方法10b)描述的从丙烯酰胺凝胶释放蛋白质，将其用胰蛋白酶消化并通过MALD-TOF-MS测定所得肽质量。通过MALD-TOF-MS得到的所称作的“指纹”与数据库中理论上消化的氨基酸分子的指纹比较(Mascothttp://www.matrixscience.com/search_form_select.html；ProFoundhttp://129.85.19.192/profound_bin/WebProFound.exe；PepSeahttp://195.41.108.38/PepSealntro.html)。由于这种指纹对蛋白质非常特异，所以可以鉴定氨基酸分子。借助该氨基酸分子的序列，可以从拟南芥分离编码OK1蛋白质的核酸序列。用该方法鉴定的蛋白质称作A.t.-OK1。来自拟南芥的OK1蛋白质的氨基酸序列的分析表明该序列与存在于数据库的序列(NP198009，NCBI)偏离。SEQ ID No 2中所示氨基酸序列编码A.t.-OK1蛋白质。SEQ ID No 2当与数据库中的序列(Acc.NP 198009.1，NCBI)比较时含有偏离。SEQ ID No 2中所含的氨基酸519到523(WRLCE)和762到766(VRARQ)不在数据库中存在的序列(ACC.NP 198009.1)中。与数据库序列的版本2(Acc.NP 198009.2)比较，SEQ ID No 2中所示的氨基酸序列也含有额外的氨基酸519到523(WRLCE)。
2.克隆编码鉴定的OK1蛋白质的cDNA借助反转录PCR使用从拟南芥的叶子分离的mRNA分离A.t.-OK1cDNA。为此，通过逆转录酶(SuperScriptTMFirst-Strand Synthesis Systemfor RT PCR，Invitrogen产品号11904-018)合成cDNA链，其然后用DNA聚合酶(Expand High Fidelity PCR Systems，Roche产品号1732641)扩增。从该PCR反应得到的扩增产物在载体pGEM_-T(Invitrogen产品号A3600)中克隆。将所得质粒称作A.t.-OK1-pGEM，测定编码A.t.-OK1蛋白质的cDNA序列并在SEQ ID NO.1中显示。
SEQ ID NO.1中显示的序列与数据库中含有的序列不同。这已经关于编码A.t.-OK1蛋白质的氨基酸序列讨论过。
用于扩增编码A.t.-OK1蛋白质的cDNA的条件第一链合成使用产生商指定的条件和缓冲液。此外，第一链合成的反应制备物含有下面的物质3μg总RNA5μM 3’-引物(OK1 rev15′-GACTCAACCACATAACACACAAAGATC)0.83μM dNTP混合物将反应制备物在75℃温育5分钟并随后冷却到室温。
然后加入第一链缓冲液、RNA酶抑制剂和DTT并在42℃温育2分钟之后加入1μL Superscript RT DNA聚合酶并在42℃温育反应制备物50分钟。
通过PCR扩增第一链的条件
1μL第一链合成的反应制备物0.25μM 3’-引物(OK1 rev25′-TGGTAACGAGGCAAATGCAGA)0.25μM 5’-引物(OK1 fwd25′-ATCTCTTATCACACCACCTCCAATG)反应条件步骤1 95℃2分钟步骤2 94℃20秒步骤3 62℃30秒步骤4 68℃4分钟步骤5 94℃20秒步骤6 56℃30秒步骤7 68℃4分钟步骤8 68℃10分钟首先按照步骤1到4进行反应。在步骤4和步骤2之间进行10次重复(循环)，每个循环后步骤3的温度减小0.67℃。随后用步骤5到8中指定的条件反应。在步骤7和步骤5之间进行25次重复(循环)，每个循环时步骤7的时间增加5秒。反应完成时，反应物冷却到4℃。
3.制备用于OK1蛋白质的cDNA的重组表达的载体使用Gateway Technology(Invitrogen)，用质粒A.t.-OK1-pGEM作为模板通过PCR扩增后，接着在载体pDONORTM201(Invitrogen产品号11798-014)中克隆编码来自拟南芥的OK1蛋白质的序列。随后，用表达载体pDEST17TM(Invitrogen产品号11803-014)通过序列特异的重组从所得载体克隆OK1蛋白质的编码区。所得表达载体称作A.t.-OK1-pDESTTM17。克隆导致编码A.t-OK1蛋白质的cDNA与表达载体pDESTTM17中存在的核苷酸翻译融合。来自载体pDESTTM17的核苷酸编码21个氨基酸，所述核苷酸与编码A.t-OK1蛋白质的cDNA在翻译上融合。这21个氨基酸包括起始密码子(ATG)和所称作的His标签(直接相邻的6个组氨酸残基)。翻译融合的序列翻译后，这导致A.t-OK1蛋白质，其在其N-末端具有来自所述载体的核苷酸编码的额外21个氨基酸。从该载体得到的重组A.t-OK1蛋白质因此在其N-末端含有来自载体pDESTTM17的21个额外氨基酸。
4.在大肠杆菌中OK1蛋白质的异源(Heterological)表达根据实施例3得到的表达载体A.t.-OK1-pDESTTM17在大肠杆菌菌株BL21 StarTM(DE3)(Invitrogen，产品号C6010-03)中转化。上面已经给出了该表达系统的描述(见一般方法第3项)。转化得到的含有载体A.t.-OK1-pDESTTM17的细菌克隆接着用于制备初步培养物，其随后用于接种主要培养物(见一般方法第三项)。初步培养物和主要培养物每种在30℃搅拌(250转/分钟)下培养。当主要培养物已经达到约0.8的OD600时，通过加入IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃型半乳糖苷)诱导重组A.t.-OK1蛋白质的表达，直到实现1mM的终浓度。加入IPTG后，主要培养物在30℃搅拌(250转/分钟)下培养，找到实现约1.8的OD600。然后将主要培养物在冰上冷却30分钟，之后通过离心(4,000xg和4℃下离心10分钟)从培养基分离主要培养物的细胞。
5.纯化重组表达的OK1蛋白质用一般方法第4项中描述的方法从根据实施例4得到的细胞纯化和浓缩A.t.-OK1蛋白质。
6.OK1蛋白质的淀粉磷酸化活性的阐明根据一般方法第11项描述的方法阐明A.t.-OK1蛋白质的淀粉磷酸化活性。为此，根据实施例5制备的5μg纯化的A.t.-OK1蛋白质在所有情况下在制备物A中用根据实施例1b)从拟南芥的sex1-3突变体分离的5mg淀粉和在实施例B中用根据实施例1c)通过酶促磷酸化得到的5mg淀粉，每种情况下在含有0.05mM放射性(33P)标记的随机化ATP(总共1,130,00转/分钟，约0.55μCi)的500μl磷酸缓冲液中在搅拌室温下温育30分钟。制备物C用作对照，其与制备物B相同，只是不含有OK1蛋白质，但是与制备物A和B以相同方式处理。对所有制备物(A、B、C)进行相互独立的两次试验。
使用闪烁计数器，对制备物A、B和C的淀粉研究放射性标记的磷酸的存在(见一般方法11b)项)。结果在表1和图3中显示。
表1OK1蛋白质的淀粉-磷酸化活性的阐明从所得结果，可以看出当提供非磷酸化淀粉作为底物时，OK1蛋白质不从ATP转移磷酸基团到淀粉，因为通过OK1蛋白质转移到非磷酸化淀粉的磷酸基团的份额(以cpm测量)不超过制备物C(对照)中放射性标记的磷酸基团的份额。另一方面，如果提供P-淀粉作为底物，那么从ATP转移到P-淀粉的放射性磷酸基团的份额(以cpm测量)明显更高。从这，可以看出OK1蛋白质需要P-淀粉作为底物并且非-磷酸化的淀粉不被OK1蛋白质接受为底物。
如果上述试验用在γ位用33P特异标记的ATP进行，那么不可能建立淀粉中放射性标记的磷酸的掺入。从这可以看出ATP的β磷酸残基从OK1蛋白质转移到淀粉。这种试验的结果在图6中显示。
7.自磷酸化的阐明通过上述方法(见一般方法，第12项)阐明A.t.-OK1蛋白质的自磷酸化。这里，将50μg纯化的A.t.-OK1蛋白质与放射性标记的随机化的ATP在220μl磷酸化缓冲液(见上文一般方法12d)项)中室温搅拌下温育60分钟。随后，在所有情况下从温育制备物除去100μl并转移到4个新的反应容器中。在反应容器1中，通过加入40μl 0.11M EDTA停止反应。反应容器2在95℃温育5分钟。向反应容器3加入HCl直到终浓度为0.5M，向反应容器4加入NaOH直到终浓度为0.5M。反应容器3和4每个在30℃温育25分钟。随后，在所有情况下从反应容器1、2、3和4除去50μl，将其与SDS测试缓冲液混合并通过SDS丙烯酰胺凝胶电泳(7.5％丙烯酰胺凝胶)分离。为此，将反应容器的样品应用于两个相同丙烯酰胺凝胶的每一个。完成电泳时得到的凝胶之一进行放射自显影，而第二块凝胶用考马斯蓝染色。
在用考马斯蓝染色的凝胶(见图2A)中，可以清楚地看到用0.5M NaOH处理导致OK1蛋白质的降解。因此OK1蛋白质必须描述为对NaOH是不稳定的。在30℃、95℃和用0.5M HCl温育表明OK1蛋白质在所述温育条件下相对稳定。从该事实可以推断在这些温育条件下，在所有情况下，用考马斯蓝染色后可以在有关凝胶中证明OK1蛋白质的大概相同的量。在放射自显影(见图2B)中，通过与在30℃温育的磷酸化OK1蛋白质比较可以看到，在95℃温育磷酸化的OK1蛋白质导致结合OK1蛋白质的磷酸显著减少。因此，磷酸残基和OK1蛋白质的氨基酸之间的键必须描述为热不稳定的。
此外，与在30℃温育的磷酸化的OK1蛋白质相比，对用0.5M HCl和0.5M NaOH温育可以看到结合OK1蛋白质的磷酸的轻微减少。如果考虑到用0.5M NaOH处理后放射自显影中的OK1蛋白质的量显著小于用热和酸处理的样品中的OK1蛋白质的量，这是由于OK1蛋白质对NaOH的不稳定性所致，然后可以推断磷酸残基和OK1蛋白质的氨基酸之间的键将对于碱相对稳定。由于用酸处理的样品含有与30℃和95℃温育的样品大概相同量的蛋白质，并且在放射自显影中具有显著低于在30℃处理的样品的信号，必须推测酸温育条件也在一定程度上断裂磷酸残基和OK1蛋白质的氨基酸之间的键。磷酸残基和OK1蛋白质的氨基酸之间的键的不稳定性因此可以在进行的试验中建立。同时，对于酸的不稳定性明显弱于(lesslabeled)对热的不稳定性。
组氨酸和磷酸之间的键是热不稳定的、酸不稳定的但是是碱稳定的(Rosenberg，1996，Protein Analysis and Purification，Birkhauser，Boston，242-244)。上述结果因此表明通过OK1蛋白质的自磷酸化产生磷酸组氨酸。
如果如上述重组表达的OK1蛋白质与在γ位用33P特异标记的ATP温育，那么检测不到自磷酸化。图5A)显示了各自反应制备物中蛋白质的量，其可以在合适的温育步骤后通过蛋白质印迹分析阐明。图5B)显示了来自各自反应制备物的蛋白质的放射自显影。可以看到，当使用在γ特异标记的ATP时，不发生OK1蛋白质的自磷酸化，而当使用随机化的ATP时，可以证明自磷酸化。这意味着当OK1蛋白质被自磷酸化时，ATP的β位的磷酸残基共价结合到OK1蛋白质的氨基酸。
8.淀粉的葡萄糖分子的被OK1蛋白质磷酸化的C-原子位置的阐明a)制备磷酸化的淀粉根据一般方法第7项制备磷酸化淀粉。为此，从拟南芥的sex1-3突变体的叶子分离的5mg非磷酸化的淀粉与25μg纯化的A.t.-OK1蛋白质用于制备物A中，在另一制备物B中，使用最初从拟南芥的sex1-3突变体的叶子分离的5mg体外磷酸化的淀粉与5μg纯化的R1蛋白质。在所有情况下通过在室温搅拌下温育1小时在500μl磷酸化缓冲液中进行反应，该缓冲液在所有情况下含有33P标记的ATP(约2.5×106cpm)。此外，使用对照制备物，其含有从拟南芥的sex1-3突变体的叶子分离的5mg淀粉和所述磷酸化缓冲液，但是没有蛋白质。以与制备物A和B完全相同的方式处理对照制备物。在所有情况下通过加入125μl 10％SDS停止各自反应并在所有情况下用900μl洗涤，用2％SDS洗涤一次，用2mM ATP洗涤5次，并用水洗涤2次。每个洗涤步骤后进行离心(在所有情况下在Eppendorf台式离心机中以13,000转/分钟离心2分钟)。在所有情况下将所得淀粉沉淀物重悬浮在1ml H2O中并加入3ml闪烁混合物(Ready SafeTM，BECKMANN)后混合100μl每种制备物并随后借助闪烁计数器(LS 6500 Multi-PurposeScintillation Counter，BECKMANN COULTERTM)测量。
测量得到下面的结果对照63cpm/100μL 630cpm/1000μL制备物A(OK1)1351cpm/100μL 13512cpm/1000μL制备物B(R1) 3853cpm/100μL 38526cpm/1000μLb)P-淀粉的总水解根据步骤a)得到的制备物A、B和C的悬浮液再次离心(Eppendorf台式离心机中13,000转/分钟离心5分钟)，将所得沉淀物重悬浮在90μl 0.7MHCl(Baker，用于分析)中并随后在95℃温育2小时。然后再次离心制备物A、B和C(Eppendorf台式离心机中13,000转/分钟离心5分钟)，将上清液转移到新的反应容器中。在所有情况下，将制备物的沉降的残余物重悬浮在100ml H2O中，加入3ml闪烁混合物(Ready SafeTM，BECKMANN)后借助闪烁计数器(LS 6500 Multi-Purpose Scintillation Counter，BECKMANN COULTERTM)测量。不能证明在任何残渣中显著量的放射性，这意味着用放射性磷酸标记的所有水解产物都位于上清液中。
接着通过在所有情况下加入30μl 2M NaOH(提前对盲样品(blindsample)测试中和所需的NaOH的量)中和含有水解产物的各上清液。将中和的水解产物置于10kDa Microcon滤器上，其已经事先用200μl水在所有情况下冲洗，并在Eppendorf台式离心机上以12,000转/分钟离心约25分钟，加入3ml闪烁混合物(Ready SafeTM，BECKMANN)后借助闪烁计数器(LS 6500 Multi-Purpose Scintillation Counter，BECKMANNCOULTERTM)测量。各制备物中存在的活性的测定给出下面的结果制备物A(OK1) 934cpm/10μL 11.208cpm/120μL 93cpm/μL制备物B(R1) 2518cpm/10μL 30.216cpm/120μL 252cpm/μLc)水解产物的分离通过HPAE使用Dionex系统在上述条件下(见一般方法，13c)项)分离根据步骤b)得到的水解产物。用于分离根据步骤b)得到的制备物A和B的过滤上清液的样品的组成如下制备物A(OK1)43μl根据步骤b)得到的制备物A的上清液(等同于约4000cpm)，32μl H2O，2.5μl 2.5mM葡萄糖-6-磷酸和2.5μl 5mM葡萄糖-3-磷酸(体积＝80μl)。
制备物B(R1)16μl根据步骤b)得到的制备物B的上清液(等同于约4000cpm)，59μl H2O，2.5μl 2.5mM葡萄糖-6-磷酸和2.5μl 5mM葡萄糖-3-磷酸(体积＝80μl)。
在所有情况下，注射含有约3,000cpm的60μl合适的样品用于通过HPAE分离。根据一般方法13c)项指定的条件进行HPAE。穿过HPAE柱后，以级分收集洗脱缓冲液，每级分1ml。在注射样品后10分钟开始级分的收集。基于从所用PAD检测器接受的信号，将葡萄糖-6-磷酸的洗脱分配给级分15，葡萄糖-3-磷酸的洗脱分配给级分17。在所有情况下，500μl各级分与3ml闪烁混合物(Ready SafeTM，BECKMANN)混合后借助闪烁计数器(LS 6500 Multi-Purpose Scintillation Counter，BECKMANNCOULTERTM)测量。对各级分得到下面的测量每级分的总cpm制备物A(OK1)制备物B(R1)级分13 8.7 3.3级分14 13.1 32.2级分15(G6P) 207.3 1952.8级分16 399.8 112.3级分17(G3P) 1749.2801.6级分18 196.7 17.3级分19 6.7 18.9总的 2581.52938.3沉淀 3000.03000.0回收 86.0％97.9％表4通过水解OK1蛋白质或者R1蛋白质磷酸化的淀粉得到的水解产物的各级分中测量的放射性的量[cpm]。
结果也在图5中图示。
R1蛋白质催化的淀粉磷酸化后，按照所分析的级分中总的测量的放射性磷酸，约66％的放射性标记的磷酸在水解淀粉后随含有葡萄糖-6-磷酸作为标准的级分洗脱，约27％随含有葡萄糖-3-磷酸作为标准的级分洗脱。OK1蛋白质催化的淀粉磷酸化后，按照所分析的级分中总的测量的放射性磷酸，约67％的放射性标记的磷酸在水解淀粉后随含有葡萄糖-6-磷酸作为标准的级分洗脱，约8％随含有葡萄糖-3-磷酸作为标准的级分洗脱。从这可以推断葡萄糖分子优选在C-6位被R1蛋白质磷酸化，而葡萄糖分子优选在C-3位被OK1蛋白质磷酸化。
9.R1蛋白质和OK1蛋白质催化的磷酸化反应的同时分析中磷酸化速率的增加a)小麦淀粉的体外磷酸化根据一般方法第7项描述的方法体外磷酸化35mg小麦淀粉(Sigma，产品号S-5127)/ml反应制备物。为此使用浓度为0.23μg/mg淀粉的纯化的R1蛋白质和浓度为25μM的ATP。在室温下反应时间总计1小时。在含有随机化的33P-ATP代替ATP的平行反应制备物中，测定掺入淀粉的磷酸的量(0.0054nmol/mg淀粉)和所用R1蛋白质的比活性(0.41nmol/(mg蛋白质×分钟))。该测定不考虑随机化ATP的使用。从而所得值低于实际存在的值，因为随机化的ATP也含有在γ位标记的磷酸残基以及在β位标记的磷酸残基。
b)通过R1和/或OK1蛋白质对天然小麦淀粉和体外磷酸化的小麦淀粉的磷酸化将15mg小麦淀粉(Sigma，产品号S-5127，或者根据a)描述的方法体外磷酸化的小麦淀粉))与纯化的淀粉磷酸化的酶在含有一般方法第11项描述的11nmol随机化33P-ATP(约1.5×106cpm)的430μl缓冲液中，在室温搅拌下温育1小时。各反应制备物含有下面的蛋白质和底物
每种制备物在所有情况下以三次重复进行。
根据一般方法第11项描述的方法，进行1小时反应时间后各反应制备物的处理和有关底物中掺入的磷酸的量的测定。
得到下面的结果
表5各反应制备物的各重复中测量的放射性的量[cpm]。在所有情况下从实际测量值减去有关对照的测量值确定所给出的测量值。
从该表可以清楚看出天然小麦淀粉(Sigma，产品号S-5127)不形成OK1蛋白质的底物，而体外磷酸化的小麦淀粉可以从OK1蛋白质磷酸化。此外，可以看出当R1蛋白质和OK1蛋白质同时存在于反应混合物中时，活性显著高于对应的各自活性的总和。
c)通过R1和/或OK1蛋白质对体外磷酸化的小麦淀粉的磷酸化根据a)中描述的方法制备磷酸化的小麦淀粉。结合到淀粉的磷酸的量达到0.0048mg磷酸/mg淀粉。如a)中描述，该测定没有考虑随机化ATP的使用。
根据b)描述的方法将15mg体外磷酸化的小麦淀粉与淀粉磷酸化酶温育。各反应制备物含有下面的蛋白质和底物
每种制备物在所有情况下以两次重复进行。
对于每种反应制备物，0、10和30分钟温育时间后终止样品，根据一般方法第11项描述的方法测定各自反应条件下掺入的磷酸的量。
作为对照，在未放射性标记的ATP的存在下，温育天然小麦淀粉与R1蛋白质。随后，反应停止前向反应混合物加入随机化的33P-ATP和缓冲液。
得到下面的结果
表6各反应制备物的各重复中测量的放射性的量[cpm]。通过从两次独立测量的平均值减去有关对照的测量值确定给出的测量值。
10.稻中OK1蛋白质的鉴定使用一般方法1到13项描述的方法，还可以从稻(品种M202)鉴定蛋白质，其将磷酸残基从ATP转移到P-淀粉。该蛋白质称作O.s.-OK1。非磷酸化的淀粉不被O.s.-OK1蛋白质用作底物，即该O.s.-OK1蛋白质也需要P-淀粉作为底物。确定所鉴定的O.s.-OK1蛋白质的核酸序列在SEQ IDNO 3中显示并且编码O.s.-OK1蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO 4中显示。SEQ ID NO 4中显示的编码O.s.-OK1蛋白质的氨基酸序列与SEQ IDNO 2中显示的编码A.t.-OK1蛋白质的氨基酸序列有57％同一性。SEQ IDNO 3中所示编码O.s.-OK1蛋白质的核酸序列与SEQ ID NO 1中所示编码A.t.-OK1蛋白质的核酸序列有61％同一性。
制备含有编码稻的OK1蛋白质的核酸序列的质粒pMI50载体pMI50含有DNA片段，其编码来自品种M202的稻的完整OK1蛋白质。
在5个小步骤中进行稻DNA的扩增。
1.借助逆转录酶和聚合酶链式反应使用合成的寡核苷酸Os_ok1-R9(GGAACCGATAATGCCTACATGCTC)和Os_ok1-F6(AAAACTCGAGGAGGATCAATGACGTCGCTGCGGCCCCTC)作为引物对不成熟稻种子的RNA扩增SEQ DIE NO 3中指定的序列的从11位到288位的可读框的部分。将扩增的DNA片段克隆到载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒命名为pML123。
2.借助逆转录酶和聚合酶链式反应使用合成的寡核苷酸Os_ok1-F4(CCAGGTTAAGTTTGGTGAGCA)和Os_ok1-R6(CAAAGCACGATATCTGACCTGT)作为引物对不成熟稻种子的RNA扩增SEQ DIE NO 3中指定的序列的从250位到949位的可读框的部分。将扩增的DNA片段克隆到载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒命名为pML120。
3.借助逆转录酶和聚合酶链式反应使用合成的寡核苷酸Os_ok1-F7(TTGTTCGCGGGATATTGTCAGA)和Os_ok1-R7(GACAAGGGCATCAAGAGTAGTATC)作为引物对不成熟稻种子的RNA扩增SEQ DIE NO 3中指定的序列的从839位到1761位的可读框的部分。将扩增的DNA片段克隆到载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒命名为pML121。
4.借助逆转录酶和聚合酶链式反应使用合成的寡核苷酸Os_ok1-F8(ATGATGCGCCTGATAATGCT)和Os_ok1-R4(GGCAAACAGTATGAAGCACGA)作为引物对不成熟稻种子的RNA扩增SEQ DIE NO 3中指定的序列的从1571位到3241位的可读框的部分。将扩增的DNA片段克隆到载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒命名为pML119。
5.借助聚合酶链式反应使用合成的寡核苷酸Os_ok1-F3(CATTTGGATCAATGGAGGATG)和Os_ok1-R2(CTATGGCTGTGGCCTGCTTTGCA)作为引物对稻的基因组DNA扩增从2777位到3621位的可读框的部分。将扩增的DNA片段克隆到载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒命名为pML122。
如下将OK1的可读框的子部分克隆在一起。
在pML121的ApaI位点中克隆含有OK1的可读框部分的pML120的700碱基对长的ApaI片段。所得质粒称作pMI47。
通过聚合酶链式反应扩增含有来自pML120和pML123的编码OK1的载体区的960碱基对长的片段。这样，使用引物Os_ok1-F4(见上文)和Os_ok1-R9(见上文)(每种浓度为50nm)和引物Os_ok1-F6和Os_ok1-R6(每种浓度为500nm)。扩增的DNA片段在载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中克隆。所得质粒称作pMI44。
使用引物Os_ok1-F3(见上文)和Os_ok1-R2Xho(AAAACTCGAGCTATGGCTGTGGCCTGCTTTGCA)再扩增pML122的845个碱基对长的片段以在终止密码子后引入XhoI位点，并将该片段克隆在载体pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。所得质粒称作pMI45。
从pML119通过用限制酶SpeI和PstI消化得到含有OK1的可读框的部分的1671个碱基对长的片段。该片段在pBluescript II SK+(GenbankAcc.X52328)中克隆。所得质粒称作pMI46。
用限制酶SpeI和XhoI从pMI46切除含有OK1的可读框的部分的1706个碱基对长的片段并将其在已经用相同限制酶切割的载体pMI45中。所得质粒称为pMI47。
用限制酶AflII/NotI从pMI43切除含有OK1的可读框的部分的146个碱基对长的片段并将其在已经用相同限制酶切割的载体pMI44中。所得质粒称为pMI49。
用限制酶NotI和NarI从pMI49切除含有OK1的可读框的部分的1657个碱基对长的片段并将其在已经用相同限制酶切割的载体pMI47中。所得质粒称为pMI50并且含有在稻中鉴定的OK1蛋白质的完整编码区。
11.特异检测OK1蛋白质的抗体的制备作为抗原，通过SDS凝胶电泳分离约100μg纯化的A.t.-OK1蛋白质，切除含有A.t.-OK1蛋白质的蛋白质带并将其送到EUROGENTEC S.A.公司(比利时)，该公司根据合同制备抗体。接着，研究兔的免疫前血清以判断它们在用重组OK1免疫前是否将已经检测来自拟南芥总提取物的蛋白质。两只兔的免疫前血清没有检测到100-150kDa范围的蛋白质并且从而选择用于免疫。对每只兔给予100μg蛋白质的四次注射(第0、14、28和56天)。从每只兔采集4个血样(第38、66、87天和最后采血)。第一次采血后所得血清已经在蛋白质印迹中显示出与OK1抗原特异反应。然而，在所有其他测试中，使用兔的最后采血。
12.制备具有增强活性的OK1蛋白质和R1蛋白质的转基因玉米植物
a)制备用于转化过表达R1蛋白质的玉米植物的构建体质粒pMZ12用作起始质粒用于制备用于转化玉米植物的质粒。该质粒含有质粒pBR322的ColE1原点(Bolivar等人，1977，Gene2，95-113)和促进针对抗生素庆大霉素的抗性的细菌选择标记(Wohlleben等人，1989MGG 217，202-208)。此外，该质粒含有右和左T-DNA边界序列。在这些T-DNA边界序列之间，该质粒含有来自吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)的bar基因(White等人，1990，NAR 18，1062；EMBL Acc.X17220)，该基因促进对除草剂草铵膦的抗性。bar基因的表达通过稻的actin基因的启动子启动(McElroy等人，1990，Plant Cell 2，163.171)。为了稳定bar基因的表达，将稻的actin基因的第一个内含子插入actin启动子和编码bar蛋白质的序列之间(McElroy等人，1990，Plant Cell 2，163.171)。来自根瘤土壤杆菌的胭脂氨酸合酶基因的多腺苷酸化信号在编码bar蛋白质的序列之后(Depicker等人，1982 J Mol.Appl.Gent.1，561-573)。
来自玉米的泛蛋白启动子插入质粒pMZ12的左和右T-DNA边界序列之间(Christensen等人，1992，Plant Mol.Bio 18，675-689)，接着是来自玉米的泛蛋白基因的第一个内含子(Christensen等人，1992，Plant Mol.Bio 18，675-689)，接着是来自马铃薯的R1基因的编码序列(见SEQ ID NO 10)，接着是来自根瘤土壤杆菌的胭脂氨酸合酶基因的多腺苷酸化信号(Depicker等人，1982，J Mol.Appl.Gent.1，561-573)。所得质粒称作pHN3-146。
b)用质粒pHN3-146转化玉米植物授粉后10天分离玉米植物的未成熟胚并用含有作为共合体的质粒pHN3-146的根瘤土壤杆菌根据Ishida等人(1996，Nature Biotechnology14，745-750)的方法转化。从该转化得到的所称作的T0植物在温室生长。
c)鉴定增加表达马铃薯S.t.-R1蛋白质的玉米植物通过定量RT PCR分析，可以鉴定表达编码S.t.-R1蛋白质的mRNA的植物。
d)质粒pUbi-A.t.-OK1的制备首先，制备质粒pIR96。通过在用SdaI和MunI切除的载体pGSV71中克隆由两个寡核苷酸X1(TGCAGGCTGCAGAGCTCCTAGGCTCGAGTTAACACTAGTAAGCTTAATTAAGATATCATTTAC)和X2(AATTGTAAATGATATCTTAATTAAGCTTACTAGTGTTAACTCGAGCCTAGGAGCTCTGCAGCCTGCA)组成的DNA的合成片段得到质粒pIR96。所得质粒用SdaI切割，并将突出的3’-末端用T4 DNA聚合酶填平。所得质粒用SdaI切割，突出的3’-末端用T4 DNA聚合酶填平并且插入来自pBinAR(H_fgen和Willmitzer，1990，Plant Science 66，221-230)、大小为197个碱基对的平端HindIII/SphI片段，其含有来自根瘤土壤杆菌的章鱼碱合酶基因的终止信号。所得质粒称作pIR96。
pGSV71是质粒pGSV7的衍生物，质粒pGSV7来自中间载体pGSV1。pGSV1构成pGSC1700的衍生物，pGSC1700的构建已经由Cornelissen和Vanderwiele(Nucleic Acid Research 17，(1989)，19-25)描述。通过缺失羧苄青霉素抗性基因和缺失质粒pTiB6S3的TL-DNA区的T-DNA序列，从pGSC1700得到pGSV1。
pGSV7含有质粒pBR322(Bolivar等人，Gene 2，(1977)，95-113)的复制起点以及假单胞菌质粒pVS1的复制起点(Itoh等人，Plasmid 11，(1984)，206)。pGSV7还含有来自肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的转座子的选择性标记基因aadA，其给予抗对抗生素壮观霉素和链霉素的抗性(Tolmasky，Plasmid 244(3)，(1990)，218-226；Tolmasky和Crosa，Plasmid29(1)，(1993)，31-40)。
通过克隆pGSV7的边界区之间的嵌合bar基因得到质粒pGSV71。该嵌合bar基因含有用于启动转录的花椰菜花叶病毒的启动子区(Odell等人，Nature 313，(1985)，180)、来自吸水链霉菌的bar基因(Thompson等人，1987，EMBO J.6，2519-2523)和用于终止转录和多腺苷酸化的pTiT37的T-DNA的胭脂氨酸合酶基因的3’-非翻译区。bar基因提供了对除草剂草铵膦的耐受性。
在pBluescript II SK+中克隆含有来自玉米的多聚遍在蛋白基因的启动子的1986个碱基对长的片段(EMBLK Acc.94464，Christensen等人，1992，Plant Mol.Biol.18675-689)作为PstI片段。将所得质粒称作pSK-ubq。
将质粒A.t.-OK1-pGEM用限制酶Bsp120I切割，用T4-DNA-聚合酶填平并用SacI切割。编码来自拟南芥的OK1蛋白质的DNA片段在用SmaI和SacI切割的质粒pSK-ubq中克隆。所得质粒称作pSK-ubq-ok1。
从质粒pSK-ubq-ok1分离含有来自玉米的泛蛋白启动子和来自拟南芥的A.t.-OK1蛋白质的总可读框的片段。为此，将该质粒用限制酶Asp718I切割，末端用T4 DNA聚合酶重填并用SdaI切割。所得具有5799个碱基对的片段在用EcoRV和PstI切割的质粒pIR96中克隆。从该克隆得到的质粒称作pUbi-A.t.-OK1。
e)用质粒pUbi-A.t.-OK1转化玉米植物授粉后10天，分离玉米植物的未成熟胚并用含有作为共合体的质粒pUbi-A.t.-OK1的根瘤土壤杆菌根据Ishida等人(1996，NatureBiotechnology 14，745-750)的方法转化。从该转化得到的所称作的T0植物在温室中生长。
f)鉴定增加表达拟南芥的A.t.-OK1蛋白质的玉米植物通过定量RT PCR分析，可以鉴定表达编码A.t.-OK1蛋白质的mRNA的植物。
g)产生增加表达S.t.-R1蛋白质或者A.t.-OK1蛋白质的纯合植物对于表达S.t.-R1或者A.t.-OK1蛋白质的T1植物，收获各植物的种子，在所有情况下，再次用每株植物约30粒种子并在温室中培养。该T1代植物在三叶期用含有0.5％Basta_的溶液喷雾。仅仅对在所有情况中用Basta_溶液喷雾后30株培养的植物中约25％相继死亡的那些组的植物进一步跟踪，因为这些植物是在基因组的基因座中存在质粒pHN3-146或者pUbi-A.t.-OK1的相关T-DNA整合的那些植物。从Basta_溶液喷雾后幸存的约75％的植物的叶材料分离基因组DNA并在所有情况中通过Invader_技术(Pielberg等人2003，Genome Res.；13，2171-2177)研究存在的拷贝数。通过Invader_技术的分析中，如果T0植物的后代组中T1植物显示出与相同T0植物的剩余后代约2倍强的信号，那么所述T1植物对于整合相关质粒的T-DNA的基因座是纯合的。通过Invader技术，如果Basta_溶液处理幸存的T0植物的约30％的后代显示出与相同T0植物的剩余约70％的后代相比约2倍强的信号，那么这进一步表明T-DNA的整合在单个基因座上。
h)产生增加表达S.t.-R1蛋白质以及增加表达A.t.-OK1蛋白质的植物将增加表达S.t.-R1蛋白质并且根据g)的分析对于质粒pHN3-146的T-DNA的整合纯合并且其中整合存在于植物的基因组的基因座上的T1植物与增加表达A.t.-OK1蛋白质并且对于质粒pUbi-A.t.-OK1的T-DNA的整合纯合并且其中整合存在于植物基因组的基因座上的T1植物杂交。这些杂交后代增加表达S.t.-R1蛋白质以及增加表达A.t.-OK1蛋白质。
i)分析转基因玉米植物的谷粒和从它们合成的淀粉从h)所述杂交得到的有关玉米植物的谷粒分离淀粉。增加表达S.t.-R1蛋白质并且增加表达A.t.-OK1蛋白质的谷粒的淀粉比来自未转化的野生型植物的淀粉含有更多共价连接淀粉的磷酸。从增加表达S.t.-R1蛋白质并且增加表达A.t.-OK1蛋白质的谷粒分离的淀粉同样比从仅增加表达S.t.-R1蛋白质或者仅增加表达A.t.-OK1蛋白质的植物分离的淀粉有更多共价连接淀粉的磷酸。
13.增加表达OK1蛋白质和R1蛋白质的转基因小麦植物的产生a)产生过表达R1蛋白质的转基因小麦植物增加表达来自马铃薯的R1蛋白质的小麦植物的产生在WO 02 34923中描述。其中描述的植物部分用作起始材料来产生增加表达OK1蛋白质和R1蛋白质的植物。
b)制备用于转化过表达OK1蛋白质的小麦植物的质粒将pMCS5(Mobitec，www.mobitec.de)用BglII和BamHI消化并重新连接。所得质粒称作pML4。来自根瘤土壤杆菌(Depicker等人，1982，Journal of Molecular and Applied Genetics 1561-573)的nos-终止子用引物 P9(ACTTCTgCAgCggCCgCgATCgTTCAAACATTTggCAATAAAgTTTC)和 P10(TCTAAgCTTggCgCCgCTAgCAgATCTgATCTAgTAACATAgATgACACC)扩增(25个循环，30秒94℃，30秒58℃，30秒72℃)，用HindIII和PstI消化，并在用相同酶切割的质粒pML4中克隆。所得质粒称作pML4-nos。克隆1986个碱基对长的片段，其含有来自玉米的多聚遍在蛋白的启动子(Genbank Acc.94464，Christensen等人，1992，Plant Mol.Biol.18675-689)和相同基因的通过ClaI消化并重新连接缩短的第一个内含子。所得质粒称作pML8。
来自拟南芥的OK1的总可读框在质粒pML8中克隆。为此，用Bsp120/NotI从A.t.-OK10pGEM切除对应的片段并以有义方向连接到NotI位点中。
使用限制酶AvrII和SwaI，可以从所得载体pML8-A.t.-OK1切除用于转化小麦植物的片段，其含有来自玉米的多聚遍在蛋白基因的启动子、来自拟南芥的OK1的总可读框和来自根瘤土壤杆菌的nos-终止子。
c)制备用于产生过表达R1蛋白质的小麦植物的质粒制备质粒，其中编码来自马铃薯的完整R1蛋白质的DNA片段位于限制酶PacI的两个检测位点之间。为此，借助聚合酶链式反应和寡核苷酸MCS1-1(TTTTTGCGCGCGTTAATTAACGACTCACTATAGGGCGA)和 MCS1-2(TTTTTGCGCGCTTAATTAACCCTCACTAAAGGGAACAAAAG)从质粒pBluescript II SK+扩增多克隆位点(Multiple Cloning Site)，将其用限制酶BssHII切割，并克隆在用BssHII切割的去磷酸化的载体pBluescript IISK+(Invitrogen)中。所得质粒称作pSK-Pac。
在从克隆pRL2(WO 9711188)得到的载体pSK-Pac中克隆NotI片段。该NotI片段含有来自马铃薯的R1蛋白质的总可读框。所得质粒称作pIR1。
用限制酶EcoRV和SmaI从pSK-ubq(见上文)切割含有泛蛋白启动子和缩短的第一个内含子的片段，并将其在质粒的EcoRV位点中克隆。在所得质粒中，从pIR1以与启动子的有义方向克隆PacI片段，其含有编码来自马铃薯的R1蛋白质的总可读框。所得质粒称作pML82。
d)转化小麦植物以过表达OK1蛋白质将Florida品种的小麦植物通过生物射弹方法根据Becker等人(1994，Plant Journal 5，299-307)描述的方法转化，该转化使用从琼脂糖凝胶切除的片段以及质粒pGSV71，所述片段用限制酶AvrII和SwaI从质粒pML8-A.t.-OK1切割并且含有来自玉米的多聚遍在蛋白基因的启动子、来自拟南芥的OK1的总可读框和来自根瘤土壤杆菌的nos-终止子。所得植物称作TA-OK1。
e)转化小麦植物用以过表达R1蛋白质将Florida品种的小麦植物通过生物射弹方法根据Becker等人(1994，Plant Journal 5，299-307)描述的方法用质粒pML82转化。所得植物称作TA-R1。
f)小麦植物的共转化以过表达OK1蛋白质和R1蛋白质将Florida品种的小麦植物通过生物射弹方法根据Becker等人(1994，Plant Journal 5，299-307)描述的方法用DNA混合物转化，该混合物含有质粒pML82和通过HPLC纯化的片段，该片段是用限制酶AvrII和SwaI从质粒pML8-A.t.-OK1切除的并且含有来自玉米的多聚遍在蛋白基因的启动子、来自拟南芥的OK1的总可读框和来自根瘤土壤杆菌的nos-终止子。借助RT-PCR，鉴定表达A.t.-Ok1蛋白质以及表达S.t.-R1蛋白质的植物。所得植物称作TA-R1-OK1。
g)转基因小麦植物的鉴定品系TA-R1和TA-OK1的T1植物在温室中培养并在开花前用Basta_(0.5％溶液)喷雾。不表达Basta_介导的抗性基因的植物死亡。
h)通过杂交产生表达S.t.-R1蛋白质并且表达A.t.-Ok1蛋白质的小麦植物Basta_处理幸存下来的TA-OK1植物与Basta_处理幸存下来的TA-R1植物，或者与WO 02034923中描述的品系40A-11-8的纯合植物杂交。所得后代分别称作TA-Ok1xTA-R1或者TA-OK1x40A-11-8。
i)转基因小麦植物和从它们合成的淀粉的分析对分别从品系TA-Ok1和TA-R1或者TA-OK1和40A-11-8的杂交得到的谷粒分离淀粉并测定共价结合淀粉的磷酸的含量。对于某些植物，从TA-Ok1和TA-R1或者TA-OK1和40A-11-8杂交所得谷粒分离的淀粉的磷酸含量显著高于从对应的野生型植物或者品系40A-11-8的植物的谷粒分离的淀粉的磷酸含量。从多种TA-R1-OK1品系收获各植物的谷粒用于淀粉分析，并分析分离的淀粉的C-6磷酸含量和C-3磷酸含量。可以鉴定一些植物中C-6磷酸加上C-3磷酸的含量与从品系TA-R1或者40A-11-8的谷粒分离的淀粉的C-6磷酸加上C-3磷酸的含量相比明显更高。
14.OK1蛋白质和R1蛋白质的表达增加的转基因稻植物的产生a)制备质粒pGlo-A.t.-OK1通过聚合酶链式反应(30x 20sec 94℃，20see 62℃，1min 68℃，4mM Mg2SO4)，使用引物glb1-F2(AAAACAATTGGCGCCTGGAGGGAGGAGA)和glb1-R1(AAAACAATTGATGATCAATCAGACAATCACTAGAA)，用高保真Tag聚合酶(High Fidelity Taq Polymerase)(Invitrogen，目录号11304-011)从品种M202的稻的基因组DNA扩增稻的球蛋白基因的启动子得到质粒pIR94并将其克隆在pCR2.1(Invitrogen目录号K2020-20)中。
通过在用SdaI和MunI切割的载体pGSV71中克隆由两种寡核苷酸X1(TGCAGGCTGCAGAGCTCCTAGGCTCGAGTTAACACTAGTAAGCTTAATTAAGATATCATTTAC)和X2(AATTGTAAATGATATCTTAATTAAGCTTACTAGTGTTAACTCGAGCCTAGGAGCTCTGCAGCCTGCA)组成的合成的DNA片段得到质粒pIR115。
所得质粒pIR115用SdaI切割，突出的3’-末端用T4 DNA聚合酶填平并插入具有197个碱基对大小的来自pBinAR(H_fgen和Willmitzer，1990，Plant Science 66，221-230)的HindIII/SphI片段，该片段是通过T4DNA聚合酶填平的并且含有来自根瘤土壤杆菌的章鱼碱合酶基因的终止信号。所得质粒称作pIR96。
在pIR96中克隆含有稻的球蛋白基因的启动子、具有986个碱基对长度的从pIR94克隆的DNA片段，得到质粒pIR103。
pGSV71是质粒pGSV7的衍生物，质粒pGSV7来自中间载体pGSV1。pGSV1构成pGSC1700的衍生物，pGSC1700的构建已经由Cornelissen和Vanderwiele(Nucleic Acid Research 17，(1989)，19-25)描述。通过缺失羧苄青霉素抗性基因和缺失质粒pTiB6S3的TL-DNA区的T-DNA序列，从pGSC1700得到pGSV1。
pGSV7含有质粒pBR322(Bolivar等人，Gene 2，(1977)，95-113)的复制起点以及假单胞菌质粒pVS1的复制起点(Itoh等人，Plasmid 11，(1984)，206)。pGSV7还含有来自肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的转座子的选择性标记基因aadA，其给予抗对抗生素壮观霉素和链霉素的抗性(Tolmasky，Plasmid 244(3)，(1990)，218-226；Tolmasky和Crosa，Plasmid29(1)，(1993)，31-40)。
通过克隆pGSV7的边界区之间的嵌合bar基因得到质粒pGSV71。该嵌合bar基因含有用于启动转录的花椰菜花叶病毒的启动子序列(Odell等人，Nature 313，(1985)，180)、来自吸水链霉菌的bar基因(Thompson等人，1987，EMBO J.6，2519-2523)和pTiT37的T-DNA的胭脂氨酸合酶基因的3’-非翻译区，其用于终止转录和多腺苷酸化。bar基因提供了对除草剂草铵膦的耐受性。
从载体A.t.-OK1-pGEM切除DNA片段并克隆到载体pIR103中，所述DNA片段含有来自拟南芥的OK1蛋白质的总可读框的序列。为此，将质粒A.t.-OK1-pGEM用限制酶Bsp120I切割，末端用T4-DNA聚合酶填平并用SacI切割。编码来自拟南芥的OK1蛋白质的DNA片段在用Ecl136II和XhoI切割的载体pIR103中克隆。所得质粒称作pGlo-A.t.-OK1。
b)用质粒pGlo-A.t.-OK1转化稻植物使用Hiei等人(1994，Plant Journal 6(2)，271-282)描述的方法通过土壤杆菌(含有质粒pGlo-A.t.-OK1)转化稻植物(品种M202)。
c)用质粒pGlo-A.t.-OK1转化的转基因稻植物的分析通过定量RT PCR分析，可以鉴定表达编码A.t.-OK1蛋白质的mRNA的植物。如上面实施例11.g)中关于玉米植物描述的鉴定T1代的纯合植物。所得植物称作OS-OK1。
d)用质粒pML82转化稻植物用Hiei等人(1994，Plant Journal 6(2)，271-282)描述的方法通过土壤杆菌(含有质粒pML82)转化稻植物(品种M202)。
e)用质粒pGloML82转化的转基因稻植物的分析通过定量RT PCR分析，可以鉴定表达编码S.t.-R1蛋白质的mRNA的植物。如上面实施例11.g)中关于玉米植物描述的鉴定T1代的纯合植物。所得植物称作OS-R1。
f)通过杂交产生表达S.t.-R1并且表达A.t.-OK1蛋白质的稻植物将纯合的OS-OK1植物与纯合的OS-R1植物杂交。所得植物称作OS-Ok1xOS-R1.
g)转基因稻植物和它们合成的淀粉的分析对于从OS-Ok1xOS-R1杂交得到的谷粒分离淀粉并测定共价结合淀粉的磷酸的含量。对于某些品系，从品系OS-Ok1和OS-R1杂交得到的谷粒分离的淀粉的葡萄糖分子中C-6位和C-3位中磷酸含量明显高于从对应的野生型植物或者从品系OS-R1的植物的谷粒分离的淀粉的所述磷酸含量。
序列表<110>拜尔作物科学有限公司<120>多种淀粉磷酸化酶活性增加的植物<130>BCS 04-5003-PCT<150>EP 04090089.6<151>2004-03-05<150>US 60/550,021<151>2004-03-05<150>EP 04090284.3<151>2004-07-21<150>EP 04090121.7<151>2004-03-29<160>17<170>PatentIn版本3.1<210>1<211>3591<212>DNA<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)<220>
<221>CDS<222>(1)..(3591)<223>
<400>1atg gag agc att ggc agc cat tgt tgc agc tct cct ttc acc ttc atc48Met Glu Ser Ile Gly Ser His Cys Cys Ser Ser Pro Phe Thr Phe Ile1 5 10 15act aga aac tca tca tca tca ctt cct aga ctc gtt aac atc act cac96Thr Arg Asn Ser Ser Ser Ser Leu Pro Arg Leu Val Asn Ile Thr His20 25 30
aga gtt aat ctc agc cac caa tct cac cga ctc aga aac tcc aat tct144Arg Val Asn Leu Ser His Gln Ser His Arg Leu Arg Asn Ser Asn Ser35 40 45cgt ctc act tgc act gct act tct tct tcc acc att gag gaa caa cgg192Arg Leu Thr Cys Thr Ala Thr Ser Ser Ser Thr Ile Glu Glu Gln Arg50 55 60aag aag aaa gat gga tca gga acg aaa gtg agg ttg aat gtg agg tta240Lys Lys Lys Asp Gly Ser Gly Thr Lys Val Arg Leu Asn Val Arg Leu65 70 75 80gat cat caa gtt aat ttt ggt gac cat gtg gct atg ttt gga tca gct288Asp His Gln Val Asn Phe Gly Asp His Val Ala Met Phe Gly Ser Ala85 90 95aaa gag att ggt tca tgg aaa aag aaa tcg cct ttg aat tgg agt gag336Lys Glu Ile Gly Ser Trp Lys Lys Lys Ser Pro Leu Asn Trp Ser Glu100 105 110aat gga tgg gtt tgt gag ttg gaa ctt gac ggt ggt cag gtt ttg gag384Asn Gly Trp Val Cys Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gly Gln Val Leu Glu115 120 125tat aag ttt gtc att gtt aag aat gat ggt tca ctt tca tgg gaa tct432Tyr Lys Phe Val Ile Val Lys Asn Asp Gly Ser Leu Ser Trp Glu Ser130 135 140ggt gat aat cgt gtc ctt aag gtt cca aat tct ggg aat ttt tct gtt480Gly Asp Asn Arg Val Leu Lys Val Pro Asn Ser Gly Asn Phe Ser Val145 150 155 160gtt tgt cat tgg gat gct act aga gaa acc ctt gat ttg cct cag gag528Val Cys His Trp Asp Ala Thr Arg Glu Thr Leu Asp Leu Pro Gln Glu165 170 175gtt ggt aat gat gat gat gtt ggt gat ggt ggg cat gag agg gat aat576Val Gly Asn Asp Asp Asp Val Gly Asp Gly Gly His Glu Arg Asp Asn180 185 190cat gat gtt ggt gat gat aga gta gtg gga agt gaa aat ggt gcg cag624His Asp Val Gly Asp Asp Arg Val Val Gly Ser Glu Asn Gly Ala Gln195 200 205
ctt cag aag agt aca ttg ggt ggg caa tgg caa ggt aaa gat gcg tcc672Leu Gln Lys Ser Thr Leu Gly Gly Gln Trp Gln Gly Lys Asp Ala Ser210 215 220ttt atg cgt tct aat gat cat ggt aac aga gaa gtt ggt aga aat tgg720Phe Met Arg Ser Asn Asp His Gly Asn Arg Glu Val Gly Arg Asn Trp225 230 235 240gat act agt ggt ctt gaa ggc aca gct ctt aag atg gtt gag ggt gat768Asp Thr Ser Gly Leu Glu Gly Thr Ala Leu Lys Met Val Glu Gly Asp245 250 255cgc aac tct aag aac tgg tgg aga aag ctt gaa atg gta cgc gag gtt816Arg Asn Ser Lys Asn Trp Trp Arg Lys Leu Glu Met Val Arg Glu Val260 265 270ata gtt ggg agt gtt gag agg gag gaa cga ttg aag gcg ctc ata tac864Ile Val Gly Ser Val Glu Arg Glu Glu Arg Leu Lys Ala Leu Ile Tyr275 280 285tct gca att tat ttg aag tgg ata aac aca ggt cag att cct tgt ttt912Ser Ala Ile Tyr Leu Lys Trp Ile Asn Thr Gly Gln Ile Pro Cys Phe290 295 300gaa gat gga ggg cat cac cgt cca aac agg cat gcc gag att tcc aga960Glu Asp Gly Gly His His Arg Pro Asn Arg His Ala Glu Ile Ser Arg305 310 315 320ctt ata ttc cgt gag ttg gag cac att tgc agt aag aaa gat gct act1008Leu Ile Phe Arg Glu Leu Glu His Ile Cys Ser Lys Lys Asp Ala Thr325 330 335cca gag gaa gtg ctt gtt gct cgg aaa atc cat ccg tgt tta cct tct1056Pro Glu Glu Val Leu Val Ala Arg Lys Ile His Pro Cys Leu Pro Ser340 345 350ttc aaa gca gag ttt act gca gct gtc cct cta act cgg att agg gac1104Phe Lys Ala Glu Phe Thr Ala Ala Val Pro Leu Thr Arg Ile Arg Asp355 360 365ata gcc cat cgg aat gat att cct cat gat ctc aag caa gaa atc aag1152Ile Ala His Arg Asn Asp Ile Pro His Asp Leu Lys Gln Glu Ile Lys370 375 380
cat acg ata caa aat aag ctt cac cgg aat gct ggt cca gaa gat cta1200His Thr Ile Gln Asn Lys Leu His Arg Asn Ala Gly Pro Glu Asp Leu385 390 395 400att gca aca gaa gca atg ctt caa cga att acc gag acc cca gga aaa1248Ile Ala Thr Glu Ala Met Leu Gln Arg Ile Thr Glu Thr Pro Gly Lys405 410 415tat agt gga gac ttt gtg gag cag ttt aaa ata ttc cat aat gag ctt1296Tyr Ser Gly Asp Phe Val Glu Gln Phe Lys Ile Phe His Asn Glu Leu420 425 430aaa gat ttc ttt aat gct gga agt ctc act gaa cag ctt gat tct atg1344Lys Asp Phe Phe Asn Ala Gly Ser Leu Thr Glu Gln Leu Asp Ser Met435 440 445aaa att tct atg gat gat aga ggt ctt tct gcg ctc aat ttg ttt ttt1392Lys Ile Ser Met Asp Asp Arg Gly Leu Ser Ala Leu Asn Leu Phe Phe450 455 460gaa tgt aaa aag cgc ctt gac aca tca gga gaa tca agc aat gtt ttg1440Glu Cys Lys Lys Arg Leu Asp Thr Ser Gly Glu Ser Ser Asn Val Leu465 470 475 480gag ttg att aaa acc atg cat tct cta gct tct tta aga gaa aca att1488Glu Leu Ile Lys Thr Met His Ser Leu Ala Ser Leu Arg Glu Thr Ile485 490 495ata aag gaa ctt aat agc ggc ttg cga aat gat gct cct gat act gcc1536Ile Lys Glu Leu Asn Ser Gly Leu Arg Asn Asp Ala Pro Asp Thr Ala500 505 510att gca atg cgc cag aag tgg cgc ctt tgt gag atc ggc ctc gag gac1584Ile Ala Met Arg Gln Lys Trp Arg Leu Cys Glu Ile Gly Leu Glu Asp515 520 525tac ttt ttt gtt cta cta agc aga ttc ctc aat gct ctt gaa act atg1632Tyr Phe Phe Val Leu Leu Ser Arg Phe Leu Asn Ala Leu Glu Thr Met530 535 540gga gga gct gat caa ctg gca aaa gat gtg gga tca aga aac gtt gcc1680Gly Gly Ala Asp Gln Leu Ala Lys Asp Val Gly Ser Arg Asn Val Ala545 550 555 560
tca tgg aat gat cca cta gat gct ttg gtg ttg ggt gtt cac caa gta1728Ser Trp Asn Asp Pro Leu Asp Ala Leu Val Leu Gly Val His Gln Val565 570 575ggt cta tct ggt tgg aag caa gaa gaa tgt tta gcc att gga aat gaa1776Gly Leu Ser Gly Trp Lys Gln Glu Glu Cys Leu Ala Ile Gly Asn Glu580 585 590ctc ctt gct tgg cga gaa agg gac cta ctt gaa aaa gaa ggg gaa gag1824Leu Leu Ala Trp Arg Glu Arg Asp Leu Leu Glu Lys Glu Gly Glu Glu595 600 605gat gga aaa aca att tgg gcc atg agg ctg aaa gca act ctt gat cga1872Asp Gly Lys Thr Ile Trp Ala Met Arg Leu Lys Ala Thr Leu Asp Arg6l0 615 620gca cgc aga tta aca gca gaa tat tct gat ttg ctt ctt caa ata ttt1920Ala Arg Arg Leu Thr Ala Glu Tyr Ser Asp Leu Leu Leu Gln Ile Phe625 630 635 640cct cct aat gtg gag att tta gga aaa gct cta gga att cca gag aat1968Pro Pro Asn Val Glu Ile Leu Gly Lys Ala Leu Gly Ile Pro Glu Asn645 650 655agt gtc aag acc tat aca gaa gca gag att cgt gct gga att att ttc2016Ser Val Lys Thr Tyr Thr Glu Ala Glu Ile Arg Ala Gly Ile Ile Phe660 665 670cag atc tca aag ctc tgc act gtt ctt cta aaa gct gta aga aat tca2064Gln Ile Ser Lys Leu Cys Thr Val Leu Leu Lys Ala Val Arg Asn Ser675 680 685ctt ggt tct gag ggc tgg gat gtc gtt gta cct gga tcg acg tct ggg2112Leu Gly Ser Glu Gly Trp Asp Val Val Val Pro Gly Ser Thr Ser Gly690 695 700aca tta gtt cag gtt gag agc att gtt ccg gga tca ttg cca gca act2160Thr Leu Val Gln Val Glu Ser Ile Val Pro Gly Ser Leu Pro Ala Thr705 710 715 720tct ggt ggt cct att att ctc ttg gtc aat aaa gct gat ggc gat gaa2208Ser Gly Gly Pro Ile Ile Leu Leu Val Asn Lys Ala Asp Gly Asp Glu725 730 735
gag gta agt gct gct aat ggg aac ata gct gga gtc atg ctt ctg cag2256Glu Val Ser Ala Ala Asn Gly Asn Ile Ala Gly Val Met Leu Leu Gln740 745 750gag ctg cct cac ttg tct cac ctt ggc gtt aga gcg cgg cag gag aaa2304Glu Leu Pro His Leu Ser His Leu Gly Val Arg Ala Arg Gln Glu Lys755 760 765att gtc ttt gtg aca tgt gat gat gat gac aag gtt gct gat ata cga2352Ile Val Phe Val Thr Cys Asp Asp Asp Asp Lys Val Ala Asp Ile Arg770 775 780cga ctt gtg gga aaa ttt gtg agg ttg gaa gca tct cca agt cat gtg2400Arg Leu Val Gly Lys Phe Val Arg Leu Glu Ala Ser Pro Ser His Val785 790 795 800aat ctg ata ctt tca act gag ggt agg agt cgc act tcc aaa tcc agt2448Asn Leu Ile Leu Ser Thr Glu Gly Arg Ser Arg Thr Ser Lys Ser Ser805 810 815gcg acc aaa aaa acg gat aag aac agc tta tct aag aaa aaa aca gat2496Ala Thr Lys Lys Thr Asp Lys Asn Ser Leu Ser Lys Lys Lys Thr Asp820 825 830aag aag agc tta tct atc gat gat gaa gaa tca aag cct ggt tcc tca2544Lys Lys Ser Leu Ser Ile Asp Asp Glu Glu Ser Lys Pro Gly Ser Ser835 840 845tct tcc aat agc ctc ctt tac tct tcc aag gat atc cct agt gga gga2592Ser Ser Asn Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Lys Asp Ile Pro Ser Gly Gly850 855 860atc ata gca ctt gct gat gca gat gta cca act tct ggt tca aaa tct2640Ile Ile Ala Leu Ala Asp Ala Asp Val Pro Thr Ser Gly Ser Lys Ser865 870 875 880gct gca tgt ggt ctt ctt gca tct tta gca gaa gcc tct agt aaa gtg2688Ala Ala Cys Gly Leu Leu Ala Ser Leu Ala Glu Ala Ser Ser Lys Val885 890 895cac agc gaa cac gga gtt ccg gca tca ttt aag gtt cca act gga gtt2736His Ser Glu His Gly Val Pro Ala Ser Phe Lys Val Pro Thr Gly Val900 905 910
gtc ata cct ttt gga tcg atg gaa tta gct tta aag caa aat aat tcg2784Val Ile Pro Phe Gly Ser Met Glu Leu Ala Leu Lys Gln Asn Asn Ser915 920 925gaa gaa aag ttt gcg tct ttg cta gaa aaa cta gaa acc gcc aga cct2832Glu Glu Lys Phe Ala Ser Leu Leu Glu Lys Leu Glu Thr Ala Arg Pro930 935 940gag ggt ggt gag cta gac gac ata tgt gac cag atc cat gaa gtg atg2880Glu Gly Gly Glu Leu Asp Asp Ile Cys Asp Gln Ile His Glu Val Met945 950 955 960aaa acg ttg caa gtg cct aaa gaa aca atc aac agc ata agc aaa gcg2928Lys Thr Leu Gln Val Pro Lys Glu Thr Ile Asn Ser Ile Ser Lys Ala965 970 975ttt ctc aaa gat gct cgt ctc att gtt cgt tca agt gct aac gtc gag2976Phe Leu Lys Asp Ala Arg Leu Ile Val Arg Ser Ser Ala Asn Val Glu980 985 990gac tta gcc gga atg tca gct gca gga ctc tat gaa tca atc cct aac 3024Asp Leu Ala Gly Met Ser Ala Ala Gly Leu Tyr Glu Ser Ile Pro Asn995 1000 1005gtg agt ccc tcg gat cct ttg gtg ttt tca gat tcg gtt tgc caa 3069Val Ser Pro Ser Asp Pro Leu Val Phe Ser Asp Ser Val Cys Gln1010 1015 1020gtt tgg gct tct ctc tac aca aga aga gct gtt cta agc cgt aga 3114Val Trp Ala Ser Leu Tyr Thr Arg Arg Ala Val Leu Ser Arg Arg1025 1030 1035gct gct ggt gtc tct caa aga gaa gct tca atg gct gtt ctc gtt 3159Ala Ala Gly Val Ser Gln Arg Glu Ala Ser Met Ala Val Leu Val1040 1045 1050caa gaa atg ctt tcg ccg gac tta tca ttc gtt ctg cac aca gtg 3204Gln Glu Met Leu Ser Pro Asp Leu Ser Phe Val Leu His Thr Val1055 1060 1065agt cca gct gat ccg gac agt aac ctt gtg gaa gcc gag atc gct 3249Ser Pro Ala Asp Pro Asp Ser Asn Leu Val Glu Ala Glu Ile Ala1070 1075 1080
cct ggt tta ggt gag act tta gct tca gga aca aga gga aca cca 3294Pro Gly Leu Gly Glu Thr Leu Ala Ser Gly Thr Arg Gly Thr Pro1085 1090 1095tgg aga ctc gct tcg ggt aag crc gac ggg att gta caa acc tta 3339Trp Arg Leu Ala Ser Gly Lys Leu Asp Gly Ile Val Gln Thr Leu1100 1105 1110gct ttc gca aac ttc agc gaa gag ctt ctt gtg tca gga aca ggt 3384Ala Phe Ala Asn Phe Ser Glu Glu Leu Leu Val Ser Gly Thr Gly1115 1120 1125cct gct gat gga aaa tac gtt cgg ttg acc gtg gac tat agc aaa 3429Pro Ala Asp Gly Lys Tyr Val Arg Leu Thr Val Asp Tyr Ser Lys1130 1135 1140aaa cgt tta act gtt gac tcg gtg ttt aga cag cag ctc ggt cag 3474Lys Arg Leu Thr Val Asp Ser Val Phe Arg Gln Gln Leu Gly Gln1145 1150 1155aga ctc ggt tcg gtt ggt ttc ttc ttg gaa aga aac ttt ggc tgt 3519Arg Leu Gly Ser Val Gly Phe Phe Leu Glu Arg Asn Phe Gly Cys1160 1165 1170gct caa gac gtt gaa ggt tgt ttg gtt ggt gaa gat gtt tac att 3564Ala Gln Asp Val Glu Gly Cys Leu Val Gly Glu Asp Val Tyr Ile1175 1180 1185gtt cag tca agg cca caa cct ctg tag 3591Val Gln Ser Arg Pro Gln Pro Leu1190 1195<210>2<211>1196<212>PRT<213>拟南芥<400>2Met Glu Ser Ile Gly Ser His Cys Cys Ser Ser Pro Phe Thr Phe Ilel 5 l0 15
Thr Arg Asn Ser Ser Ser Ser Leu Pro Arg Leu Val Asn Ile Thr His20 25 30Arg Val Asn Leu Ser His Gln Ser His Arg Leu Arg Asn Ser Asn Ser35 40 45Arg Leu Thr Cys Thr Ala Thr Ser Ser Ser Thr Ile Glu Glu Gln Arg50 55 60Lys Lys Lys Asp Gly Ser Gly Thr Lys Val Arg Leu Asn Val Arg Leu65 70 75 80Asp His Gln Val Asn Phe Gly Asp His Val Ala Met Phe Gly Ser Ala85 90 95Lys Glu Ile Gly Ser Trp Lys Lys Lys Ser Pro Leu Asn Trp Ser Glu100 105 110Asn Gly Trp Val Cys Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gly Gln Val Leu Glu115 120 125Tyr Lys Phe Val Ile Val Lys Asn Asp Gly Ser Leu Ser Trp Glu Ser130 135 140Gly Asp Asn Arg Val Leu Lys Val Pro Asn Ser Gly Asn Phe Ser Val145 150 155 160Val Cys His Trp Asp Ala Thr Arg Glu Thr Leu Asp Leu Pro Gln Glu165 170 175Val Gly Asn Asp Asp Asp Val Gly Asp Gly Gly His Glu Arg Asp Asn180 185 190
His Asp Val Gly Asp Asp Arg Val Val Gly Ser Glu Asn Gly Ala Gln195 200 205Leu Gln Lys Ser Thr Leu Gly Gly Gln Trp Gln Gly Lys Asp Ala Ser210 215 220Phe Met Arg Ser Asn Asp His Gly Asn Arg Glu Val Gly Arg Asn Trp225 230 235 240Asp Thr Ser Gly Leu Glu Gly Thr Ala Leu Lys Met Val Glu Gly Asp245 250 255Arg Asn Ser Lys Asn Trp Trp Arg Lys Leu Glu Met Val Arg Glu Val260 265 270Ile Val Gly Ser Val Glu Arg Glu Glu Arg Leu Lys Ala Leu Ile Tyr275 280 285Ser Ala Ile Tyr Leu Lys Trp Ile Asn Thr Gly Gln Ile Pro Cys Phe290 295 300Glu Asp Gly Gly His His Arg Pro Asn Arg His Ala Glu Ile Ser Arg305 310 315 320Leu Ile Phe Arg Glu Leu Glu His Ile Cys Ser Lys Lys Asp Ala Thr325 330 335Pro Glu Glu Val Leu Val Ala Arg Lys Ile His Pro Cys Leu Pro Ser340 345 350Phe Lys Ala Glu Phe Thr Ala Ala Val Pro Leu Thr Arg Ile Arg Asp355 360 365
Ile Ala His Arg Asn Asp Ile Pro His Asp Leu Lys Gln Glu Ile Lys370 375 380His Thr Ile Gln Asn Lys Leu His Arg Asn Ala Gly Pro Glu Asp Leu385 390 395 400Ile Ala Thr Glu Ala Met Leu Gln Arg Ile Thr Glu Thr Pro Gly Lys405 4l0 415Tyr Ser Gly Asp Phe Val Glu Gln Phe Lys Ile Phe His Asn Glu Leu420 425 430Lys Asp Phe Phe Asn Ala Gly Ser Leu Thr Glu Gln Leu Asp Ser Met435 440 445Lys Ile Ser Met Asp Asp Arg Gly Leu Ser Ala Leu Asn Leu Phe Phe450 455 460Glu Cys Lys Lys Arg Leu Asp Thr Ser Gly Glu Ser Ser Asn Val Leu465 470 475 480Glu Leu Ile Lys Thr Met His Ser Leu Ala Ser Leu Arg Glu Thr Ile485 490 495Ile Lys Glu Leu Asn Ser Gly Leu Arg Asn Asp Ala Pro Asp Thr Ala500 505 5l0Ile Ala Met Arg Gln Lys Trp Arg Leu Cys Glu Ile Gly Leu Glu Asp515 520 525Tyr Phe Phe Val Leu Leu Ser Arg Phe Leu Asn Ala Leu Glu Thr Met530 535 540
Gly Gly Ala Asp Gln Leu Ala Lys Asp Val Gly Ser Arg Asn Val Ala545 550 555 560Ser Trp Asn Asp Pro Leu Asp Ala Leu Val Leu Gly Val His Gln Val565 570 575Gly Leu Ser Gly Trp Lys Gln Glu Glu Cys Leu Ala Ile Gly Asn Glu580 585 590Leu Leu Ala Trp Arg Glu Arg Asp Leu Leu Glu Lys Glu Gly Glu Glu595 600 605Asp Gly Lys Thr Ile Trp Ala Met Arg Leu Lys Ala Thr Leu Asp Arg610 615 620Ala Arg Arg Leu Thr Ala Glu Tyr Ser Asp Leu Leu Leu Gln Ile Phe625 630 635 640Pro Pro Asn Val Glu Ile Leu Gly Lys Ala Leu Gly Ile Pro Glu Asn645 650 655Ser Val Lys Thr Tyr Thr Glu Ala Glu Ile Arg Ala Gly Ile Ile Phe660 665 670Gln Ile Ser Lys Leu Cys Thr Val Leu Leu Lys Ala Val Arg Asn Ser675 680 685Leu Gly Ser Glu Gly Trp Asp Val Val Val Pro Gly Ser Thr Ser Gly690 695 700Thr Leu Val Gln Val Glu Ser Ile Val Pro Gly Ser Leu Pro Ala Thr705 710 715 720
Ser Gly Gly Pro Ile Ile Leu Leu Val Asn Lys Ala Asp Gly Asp Glu725 730 735Glu Val Ser Ala Ala Asn Gly Asn Ile Ala Gly Val Met Leu Leu Gln740 745 750Glu Leu Pro His Leu Ser His Leu Gly Val Arg Ala Arg Gln Glu Lys755 760 765Ile Val Phe Val Thr Cys Asp Asp Asp Asp Lys Val Ala Asp Ile Arg770 775 780Arg Leu Val Gly Lys Phe Val Arg Leu Glu Ala Ser Pro Ser His Val785 790 795 800Asn Leu Ile Leu Ser Thr Glu Gly Arg Ser Arg Thr Ser Lys Ser Ser805 810 815Ala Thr Lys Lys Thr Asp Lys Asn Ser Leu Ser Lys Lys Lys Thr Asp820 825 830Lys Lys Ser Leu Ser Ile Asp Asp Glu Glu Ser Lys Pro Gly Ser Ser835 840 845Ser Ser Asn Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Lys Asp Ile Pro Ser Gly Gly850 855 860Ile Ile Ala Leu Ala Asp Ala Asp Val Pro Thr Ser Gly Ser Lys Ser865 870 875 880Ala Ala Cys Gly Leu Leu Ala Ser Leu Ala Glu Ala Ser Ser Lys Val885 890 895
His Ser Glu His Gly Val Pro Ala Ser Phe Lys Val Pro Thr Gly Val900 905 910Val Ile Pro Phe Gly Ser Met Glu Leu Ala Leu Lys Gln Asn Asn Ser915 920 925Glu Glu Lys Phe Ala Ser Leu Leu Glu Lys Leu Glu Thr Ala Arg Pro930 935 940Glu Gly Gly Glu Leu Asp Asp Ile Cys Asp Gln Ile His Glu Val Met945 950 955 960Lys Thr Leu Gln Val Pro Lys Glu Thr Ile Asn Ser Ile Ser Lys Ala965 970 975Phe Leu Lys Asp Ala Arg Leu Ile Val Arg Ser Ser Ala Asn Val Glu980 985 990Asp Leu Ala Gly Met Ser Ala Ala Gly Leu Tyr Glu Ser Ile Pro Asn995 1000 1005Val Ser Pro Ser Asp Pro Leu Val Phe Ser Asp Ser Val Cys Gln1010 1015 1020Val Trp Ala Ser Leu Tyr Thr Arg Arg Ala Val Leu Ser Arg Arg1025 1030 1035Ala Ala Gly Val Ser Gln Arg Glu Ala Ser Met Ala Val Leu Val1040 1045 1050Gln Glu Met Leu Ser Pro Asp Leu Ser Phe Val Leu His Thr Val1055 1060 1065
Ser Pro Ala Asp Pro Asp Ser Asn Leu Val Glu Ala Glu Ile Ala1070 1075 1080Pro Gly Leu Gly Glu Thr Leu Ala Ser Gly Thr Arg Gly Thr Pro1085 1090 1095Trp Arg Leu Ala Ser Gly Lys Leu Asp Gly Ile Val Gln Thr Leu1100 1105 1110Ala Phe Ala Asn Phe Ser Glu Glu Leu Leu Val Ser Gly Thr Gly1115 1120 1125Pro Ala Asp Gly Lys Tyr Val Arg Leu Thr Val Asp Tyr Ser Lys1130 1135 1140Lys Arg Leu Thr Val Asp Ser Val Phe Arg Gln Gln Leu Gly Gln1145 1150 1155Arg Leu Gly Ser Val Gly Phe Phe Leu Glu Arg Asn Phe Gly Cys1160 1165 1170Ala Gln Asp Val Glu Gly Cys Leu Val Gly Glu Asp Val Tyr Ile1175 1180 1185Val Gln Ser Arg Pro Gln Pro Leu1190 1195<210>3<211>3644<212>DNA<213>稻(Oryza sativa)<220>
<221>CDS<222>(13)..(3633)
<223>
<400>3cgaggaggat ca atg acg tcg ctg cgg ccc ctc gaa acc tcg ctc tcc ata 51Met Thr Ser Leu Arg Pro Leu Glu Thr Ser Leu Ser Ile1 5 10ggc ggc agg ccg cgc cgt ggt ctc gtc ctc ccg ccg ccc gga gtc ggt99Gly Gly Arg Pro Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro Pro Pro Gly Val Gly15 20 25gcg ggt gtg ctg ctc cgc cgg gga gcg atg gcg ctc cct ggg cgg cgc147Ala Gly Val Leu Leu Arg Arg Gly Ala Met Ala Leu Pro Gly Arg Arg30 35 40 45ggc ttc gcg tgc cgc ggg aga tcc gcg gcc tcg gcg gca gag aga aca195Gly Phe Ala Cys Arg Gly Arg Ser Ala Ala Ser Ala Ala Glu Arg Thr50 55 60aag gag aaa aag aga aga gat tct tca aag cag cca ttg gtg cat ctc243Lys Glu Lys Lys Arg Arg Asp Ser Ser Lys Gln Pro Leu Val His Leu65 70 75cag gtt tgt cta gag cac cag gtt aag ttt ggt gag cat gta ggc att291Gln Val Cys Leu Glu His Gln Val Lys Phe Gly Glu His Val Gly Ile80 85 90atc ggt tcc aca aag gag ctt ggt tca tgg gag gag cag gtt gaa ctg339Ile Gly Ser Thr Lys Glu Leu Gly Ser Trp Glu Glu Gln Val Glu Leu95 100 105gaa tgg act aca aat ggt tgg gtc tgc cag ctt aag ctc cct gga gaa387Glu Trp Thr Thr Asn Gly Trp Val Cys Gln Leu Lys Leu Pro Gly Glu110 115 120 125aca ctt gtg gag ttt aaa ttt gtt ata ttt ttg gtg gga gga aaa gat435Thr Leu Val Glu Phe Lys Phe Val Ile Phe Leu Val Gly Gly Lys Asp130 135 140aaa ata tgg gaa gat ggt aat aac cgt gtt gtt gag ctg ccg aag gat483Lys Ile Trp Glu Asp Gly Asn Asn Arg Val Val Glu Leu Pro Lys Asp145 150 155ggt aag ttt gat ata gta tgc cac tgg aat aga aca gaa gag cca tta531
Gly Lys Phe Asp Ile Val Cys His Trp Asn Arg Thr Glu Glu Pro Leu160 165 170gaa ctt tta gga aca cca aag ttt gag ttg gtc gga gaa gct gaa aag579Glu Leu Leu Gly Thr Pro Lys Phe Glu Leu Val Gly Glu Ala Glu Lys175 180 185aat act ggc gag gat gct tca gca tct gta act ttt gca cct gaa aaa627Asn Thr Gly Glu Asp Ala Ser Ala Ser Val Thr Phe Ala Pro Glu Lys190 195 200 205gtt caa gat att tca gtt gtt gag aat ggt gat cca gca cca gag gcc675Val Gln Asp Ile Ser Val Val Glu Asn Gly Asp Pro Ala Pro Glu Ala210 215 220gag tca agc aaa ttt ggt ggg caa tgg caa gga agt aaa act gtt ttc723Glu Ser Ser Lys Phe Gly Gly Gln Trp Gln Gly Ser Lys Thr Val Phe225 230 235atg aga tca aat gag cat ctg aat aag gag gct gat agg atg tgg gat771Met Arg Ser Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Ala Asp Arg Met Trp Asp240 245 250aca act ggg ctt gat gga ata gca ctg aaa ctg gtg gag ggc gat aaa819Thr Thr Gly Leu Asp Gly Ile Ala Leu Lys Leu Val Glu Gly Asp Lys255 260 265gca tcc agg aac tgg tgg cgg aag tta gag gtt gtt cgc ggg ata ttg867Ala Ser Arg Asn Trp Trp Arg Lys Leu Glu Val Val Arg Gly Ile Leu270 275 280 285tca gaa tct ttt gat gac cag agt cgt ctg ggg gcc ctt gta tac tca915Ser Glu Ser Phe Asp Asp Gln Ser Arg Leu Gly Ala Leu Val Tyr Ser290 295 300gct att tat ctg aag tgg att tat aca ggt cag ata tcg tgc ttt gaa963Ala Ile Tyr Leu Lys Trp Ile Tyr Thr Gly Gln Ile Ser Cys Phe Glu305 310 315gat ggt ggc cac cat cgg cct aac aaa cat gct gag ata tcg agg caa1011Asp Gly Gly His His Arg Pro Asn Lys His Ala Glu Ile Ser Arg Gln320 325 330ata ttc cgt gaa ctt gaa atg atg tat tat ggg aaa acc aca tca gcc1059
Ile Phe Arg Glu Leu Glu Met Met Tyr Tyr Gly Lys Thr Thr Ser Ala335 340 345aag gat gtt ctc gtg att cgc aaa att cat ccc ttt tta cct tca ttt1107Lys Asp Val Leu Val Ile Arg Lys Ile His Pro Phe Leu Pro Ser Phe350 355 360 365aag tca gag ttt aca gcc tct gtc cct cta aca cga att cgt gat att1155Lys Ser Glu Phe Thr Ala Ser Val Pro Leu Thr Arg Ile Arg Asp Ile370 375 380gct cac cgg aat gac atc cca cat gat ctc aag caa gaa atc aag cat1203Ala His Arg Asn Asp Ile Pro His Asp Leu Lys Gln Glu Ile Lys His385 390 395act ata caa aac aaa ctt cat cgt aat gct gga cct gag gat ctt att1251Thr Ile Gln Asn Lys Leu His Arg Asn Ala Gly Pro Glu Asp Leu Ile400 405 410gct aca gaa gtc atg ctt gct agg att act aag acc cct gga gaa tac1299Ala Thr Glu Val Met Leu Ala Arg Ile Thr Lys Thr Pro Gly Glu Tyr415 420 425agt gaa aca ttt gtt gaa caa ttc acg ata ttt tat agc gaa cta aaa1347Ser Glu Thr Phe Val Glu Gln Phe Thr Ile Phe Tyr Ser Glu Leu Lys430 435 440 445gat ttc ttc aat gct ggc agc cta ttt gag caa ctg gag tcc atc aag1395Asp Phe Phe Asn Ala Gly Ser Leu Phe Glu Gln Leu Glu Ser Ile Lys450 455 460gaa tct ctg aac gag tca ggc tta gaa gtt ctc tca tcc ttt gtg gaa1443Glu Ser Leu Asn Glu Ser Gly Leu Glu Val Leu Ser Ser Phe Val Glu465 470 475acc aaa agg agt ttg gac caa gtg gat cat gca gaa gat ttg gat aaa1491Thr Lys Arg Ser Leu Asp Gln Val Asp His Ala Glu Asp Leu Asp Lys480 485 490aat gat acc att caa att ttg atg act acc ttg caa tca tta tct tct1539Asn Asp Thr Ile Gln Ile Leu Met Thr Thr Leu Gln Ser Leu Ser Ser495 500 505cta aga tcg gtt cta atg aag ggc ctt gaa agt ggc ctt aga aat gat1587
Leu Arg Ser Val Leu Met Lys Gly Leu Glu Ser Gly Leu Arg Asn Asp5l0 515 520 525gcg cct gat aat gct ata gca atg cga caa aag tgg cgc ctt tgt gaa1635Ala Pro Asp Asn Ala Ile Ala Met Arg Gln Lys Trp Arg Leu Cys Glu530 535 540att agt ctt gag gat tat tca ttt gtt ctg tta agc aga ttc atc aat1683Ile Ser Leu Glu Asp Tyr Ser Phe Val Leu Leu Ser Arg Phe Ile Asn545 550 555act ctt gaa gcc tta ggt gga tca gct tca ctt gca aag gat gta gct1731Thr Leu Glu Ala Leu Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Lys Asp Val Ala560 565 570aga aat act act cta tgg gat act act ctt gat gcc ctt gtc att ggc1779Arg Asn Thr Thr Leu Trp Asp Thr Thr Leu Asp Ala Leu Val Ile Gly575 580 585atc aat caa gtt agc ttt tca ggt tgg aaa aca gat gaa tgt att gcc1827Ile Asn Gln Val Ser Phe Ser Gly Trp Lys Thr Asp Glu Cys Ile Ala590 595 600 605ata ggg aat gag att ctt tcc tgg aag caa aaa ggt cta tct gaa agt1875Ile Gly Asn Glu Ile Leu Ser Trp Lys Gln Lys Gly Leu Ser Glu Ser6l0 615 620gaa ggt tgt gaa gat ggg aaa tat att tgg tca cta aga ctt aaa gct1923Glu Gly Cys Glu Asp Gly Lys Tyr Ile Trp Ser Leu Arg Leu Lys Ala625 630 635aca ctg gac aga gca cgg aga tta acg gaa gag tac tct gaa gca ctt1971Thr Leu Asp Arg Ala Arg Arg Leu Thr Glu Glu Tyr Ser Glu Ala Leu640 645 650ctt tct ata ttc cct gaa aaa gta atg gtt att ggg aaa gcc ctt gga2019Leu Ser Ile Phe Pro Glu Lys Val Met Val Ile Gly Lys Ala Leu Gly655 660 665ata cca gat aac agt gtg aga act tac aca gag gca gaa att cgt gct2067Ile Pro Asp Asn Ser Val Arg Thr Tyr Thr Glu Ala Glu Ile Arg Ala670 675 680 685ggc att gtt ttt cag gta tct aaa cta tgc aca gta ctt cag aaa gca2115
Gly Ile Val Phe Gln Val Ser Lys Leu Cys Thr Val Leu Gln Lys Ala690 695 700att cga gaa gta ctt gga tca act ggc tgg gat gtt ctt gtt cct gga2163Ile Arg Glu Val Leu Gly Ser Thr Gly Trp Asp Val Leu Val Pro Gly705 710 715gtg gcc cat gga act ctg atg cgg gtg gaa aga att ctt cct gga tca2211Val Ala His Gly Thr Leu Met Arg Val Glu Arg Ile Leu Pro Gly Ser720 725 730tta cct tca tct gtc aaa gaa cct gtg gtt cta att gta gat aag gct2259Leu Pro Ser Ser Val Lys Glu Pro Val Val Leu Ile Val Asp Lys Ala735 740 745gat gga gat gaa gag gtc aaa gct gct ggg gat aat ata gtt ggt gtt2307Asp Gly Asp Glu Glu Val Lys Ala Ala Gly Asp Asn Ile Val Gly Val750 755 760 765att ctt ctt cag gaa cta cct cac ctt tca cat ctt ggt gtt aga gct2355Ile Leu Leu Gln Glu Leu Pro His Leu Ser His Leu Gly Val Arg Ala770 775 780cgt caa gag aat gtt gta ttt gta act tgt gaa tat gat gac aca gtt2403Arg Gln Glu Asn Val Val Phe Val Thr Cys Glu Tyr Asp Asp Thr Val785 790 795aca gat gtg tat ttg ctt gag gga aaa tat atc aga tta gaa gca tca2451Thr Asp Val Tyr Leu Leu Glu Gly Lys Tyr Ile Arg Leu Glu Ala Ser800 805 810tcc atc aat gtc aat ctc tca ata gtt tca gaa aaa aat gac aat gct2499Ser Ile Asn Val Asn Leu Ser Ile Val Ser Glu Lys Asn Asp Asn Ala815 820 825gtc tct aca gaa cca aat agt aca ggg aat cca ttt caa cag aaa ctc2547Val Ser Thr Glu Pro Asn Ser Thr Gly Asn Pro Phe Gln Gln Lys Leu830 835 840 845caa aat gaa ttc tct cta cca tcg gat atc gag atg cca ctg caa atg2595Gln Asn Glu Phe Ser Leu Pro Ser Asp Ile Glu Met Pro Leu Gln Met850 855 860tct aag caa aaa agc aaa tca gga gtg aat ggt agt ttt gct gct ctt2643
Ser Lys Gln Lys Ser Lys Ser Gly Val Asn Gly Ser Phe Ala Ala Leu865 870 875gag ctt tca gaa gct tca gtg gaa tca gct ggt gca aaa gct gct gca2691Glu Leu Ser Glu Ala Ser Val Glu Ser Ala Gly Ala Lys Ala Ala Ala880 885 890tgc aga act ctt tct gtt ctt gct tca ttg tct aat aaa gtc tat agt2739Cys Arg Thr Leu Ser Val Leu Ala Ser Leu Ser Asn Lys Val Tyr Ser895 900 905gat caa gga gtt cca gca gcc ttt aga gtc cct tct ggt gct gtg ata2787Asp Gln Gly Val Pro Ala Ala Phe Arg Val Pro Ser Gly Ala Val Ile910 915 920 925cca ttt gga tca atg gag gat gcg ctc aag aaa agt gga tca ctg gaa2835Pro Phe Gly Ser Met Glu Asp Ala Leu Lys Lys Ser Gly Ser Leu Glu930 935 940tcc ttt aca agc ctt cta gaa aag att gaa aca gcc aaa gtc gaa aat2883Ser Phe Thr Ser Leu Leu Glu Lys Ile Glu Thr Ala Lys Val Glu Asn945 950 955ggt gaa gtt gat agc ctg gcg ttg gag cta caa gca ata att tca cat2931Gly Glu Val Asp Ser Leu Ala Leu Glu Leu Gln Ala Ile Ile Ser His960 965 970ctt tcc cca ccg gag gag act att ata ttt ctc aaa aga atc ttc cca2979Leu Ser Pro Pro Glu Glu Thr Ile Ile Phe Leu Lys Arg Ile Phe Pro975 980 985cag gat gtc cgg ttg att gtt aga tct agt gct aat gtg gag gat ttg 3027Gln Asp Val Arg Leu Ile Val Arg Ser Ser Ala Asn Val Glu Asp Leu990 995 1000 1005gct ggt atg tca gct gct ggt ctc tat gat tca att ccc aat gtc 3072Ala Gly Met Ser Ala Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Ile Pro Asn Val1010 1015 1020agt ctc atg gac cca tgt gcc ttt gga gct gcg gtt ggg aag gtt 3117Ser Leu Met Asp Pro Cys Ala Phe Gly Ala Ala Val Gly Lys Val1025 1030 1035tgg gct tct tta tac aca agg aga gcc atc cta agc cgt cga gcc 3162
Trp Ala Ser Leu Tyr Thr Arg Arg Ala Ile Leu Ser Arg Arg Ala1040 1045 1050gct ggt gtt tat cag aga gac gcg aca atg gct gtt ctt gtc caa 3207Ala Gly Val Tyr Gln Arg Asp Ala Thr Met Ala Val Leu Val Gln1055 1060 1065gaa ata ctg cag cca gat ctc tcc ttc gtg ctt cat act gtt tgc 3252Glu Ile Leu Gln Pro Asp Leu Ser Phe Val Leu His Thr Val Cys1070 1075 1080ccc gct gac cat gac ccc aag gtt gtc cag gct gag gtc gcc cct 3297Pro Ala Asp His Asp Pro Lys Val Val Gln Ala Glu Val Ala Pro1085 1090 1095ggg ctg ggt gaa acg ctt gct tca gga acc cgt ggc acc ccg tgg 3342Gly Leu Gly Glu Thr Leu Ala Ser Gly Thr Arg Gly Thr Pro Trp1100 1105 1110agg ctg tca tgt aac aaa ttc gat gga aaa gtt gcc act ctt gcc 3387Arg Leu Ser Cys Asn Lys Phe Asp Gly Lys Val Ala Thr Leu Ala1115 1120 1125ttt tca aat ttc agt gag gag atg gtg gtg cac aac tct ggt cct 3432Phe Ser Asn Phe Ser Glu Glu Met Val Val His Asn Ser Gly Pro1130 1135 1140gcc aat gga gaa gta att cgt ctt act gtt gat tac agc aag aag 3477Ala Asn Gly Glu Val Ile Arg Leu Thr Val Asp Tyr Ser Lys Lys1145 1150 1155cca ttg tcg gtt gat aca acc ttt agg aag cag ttt ggt cag cga 3522Pro Leu Ser Val Asp Thr Thr Phe Arg Lys Gln Phe Gly Gln Arg1160 1165 1170ctg gct gcg att ggc cag tat ctg gag cag aag ttc ggg agt gca 3567Leu Ala Ala Ile Gly Gln Tyr Leu Glu Gln Lys Phe Gly Ser Ala1175 1180 1185cag gat gtg gaa ggt tgc ctg gtt ggg aaa gat att ttt ata gtg 3612Gln Asp Val Glu Gly Cys Leu Val Gly Lys Asp Ile Phe Ile Val1190 1195 1200caa agc agg cca cag cca tag aagccgaatt c 3644
Gln Ser Arg Pro Gln Pro1205<2l0>4<2ll>1206<212>PRT<213>稻<400>4Met Thr Ser Leu Arg Pro Leu Glu Thr Ser Leu Ser Ile Gly Gly Argl 5 10 15Pro Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro Pro Pro Gly Val Gly Ala Gly Val20 25 30Leu Leu Arg Arg Gly Ala Met Ala Leu Pro Gly Arg Arg Gly Phe Ala35 40 45Cys Arg Gly Arg Ser Ala Ala Ser Ala Ala Glu Arg Thr Lys Glu Lys50 55 60Lys Arg Arg Asp Ser Ser Lys Gln Pro Leu Val His Leu Gln Val Cys65 70 75 80Leu Glu His Gln Val Lys Phe Gly Glu His Val Gly Ile Ile Gly Ser85 90 95Thr Lys Glu Leu Gly Ser Trp Glu Glu Gln Val Glu Leu Glu Trp Thr100 105 110Thr Asn Gly Trp Val Cys Gln Leu Lys Leu Pro Gly Glu Thr Leu Val115 120 125Glu Phe Lys Phe Val Ile Phe Leu Val Gly Gly Lys Asp Lys Ile Trp
130 l35 140Glu Asp Gly Asn Asn Arg Val Val Glu Leu Pro Lys Asp Gly Lys Phe145 150 155 160Asp Ile Val Cys His Trp Asn Arg Thr Glu Glu Pro Leu Glu Leu Leu165 170 175Gly Thr Pro Lys Phe Glu Leu Val Gly Glu Ala Glu Lys Asn Thr Gly180 185 190Glu Asp Ala Ser Ala Ser Val Thr Phe Ala Pro Glu Lys Val Gln Asp195 200 205Ile Ser Val Val Glu Asn Gly Asp Pro Ala Pro Glu Ala Glu Ser Ser210 215 220Lys Phe Gly Gly Gln Trp Gln Gly Ser Lys Thr Val Phe Met Arg Ser225 230 235 240Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Ala Asp Arg Met Trp Asp Thr Thr Gly245 250 255Leu Asp Gly Ile Ala Leu Lys Leu Val Glu Gly Asp Lys Ala Ser Arg260 265 270Asn Trp Trp Arg Lys Leu Glu Val Val Arg Gly Ile Leu Ser Glu Ser275 280 285Phe Asp Asp Gln Ser Arg Leu Gly Ala Leu Val Tyr Ser Ala Ile Tyr290 295 300Leu Lys Trp Ile Tyr Thr Gly Gln Ile Ser Cys Phe Glu Asp Gly Gly
305 310 315 320His His Arg Pro Asn Lys His Ala Glu Ile Ser Arg Gln Ile Phe Arg325 330 335Glu Leu Glu Met Met Tyr Tyr Gly Lys Thr Thr Ser Ala Lys Asp Val340 345 350Leu Val Ile Arg Lys Ile His Pro Phe Leu Pro Ser Phe Lys Ser Glu355 360 365Phe Thr Ala Ser Val Pro Leu Thr Arg Ile Arg Asp Ile Ala His Arg370 375 380Asn Asp Ile Pro His Asp Leu Lys Gln Glu Ile Lys His Thr Ile Gln385 390 395 400Asn Lys Leu His Arg Asn Ala Gly Pro Glu Asp Leu Ile Ala Thr Glu405 4l0 415Val Met Leu Ala Arg Ile Thr Lys Thr Pro Gly Glu Tyr Ser Glu Thr420 425 430Phe Val Glu Gln Phe Thr Ile Phe Tyr Ser Glu Leu Lys Asp Phe Phe435 440 445Asn Ala Gly Ser Leu Phe Glu Gln Leu Glu Ser Ile Lys Glu Ser Leu450 455 460Asn Glu Ser Gly Leu Glu Val Leu Ser Ser Phe Val Glu Thr Lys Arg465 470 475 480Ser Leu Asp Gln Val Asp His Ala Glu Asp Leu Asp Lys Asn Asp Thr
485 490 495Ile Gln Ile Leu Met Thr Thr Leu Gln Ser Leu Ser Ser Leu Arg Ser500 505 510Val Leu Met Lys Gly Leu Glu Ser Gly Leu Arg Asn Asp Ala Pro Asp515 520 525Asn Ala Ile Ala Met Arg Gln Lys Trp Arg Leu Cys Glu Ile Ser Leu530 535 540Glu Asp Tyr Ser Phe Val Leu Leu Ser Arg Phe Ile Asn Thr Leu Glu545 550 555 560Ala Leu Gly Gly Ser Ala Ser Leu Ala Lys Asp Val Ala Arg Asn Thr565 570 575Thr Leu Trp Asp Thr Thr Leu Asp Ala Leu Val Ile Gly Ile Asn Gln580 585 590Val Ser Phe Ser Gly Trp Lys Thr Asp Glu Cys Ile Ala Ile Gly Asn595 600 605Glu Ile Leu Ser Trp Lys Gln Lys Gly Leu Ser Glu Ser Glu Gly Cys610 615 620Glu Asp Gly Lys Tyr Ile Trp Ser Leu Arg Leu Lys Ala Thr Leu Asp625 630 635 640Arg Ala Arg Arg Leu Thr Glu Glu Tyr Ser Glu Ala Leu Leu Ser Ile645 650 655Phe Pro Glu Lys Val Met Val Ile Gly Lys Ala Leu Gly Ile Pro Asp
660 665 670Asn Ser Val Arg Thr Tyr Thr Glu Ala Glu Ile Arg Ala Gly Ile Val675 680 685Phe Gln Val Ser Lys Leu Cys Thr Val Leu Gln Lys Ala Ile Arg Glu690 695 700Val Leu Gly Ser Thr Gly Trp Asp Val Leu Val Pro Gly Val Ala His705 7l0 715 720Gly Thr Leu Met Arg Val Glu Arg Ile Leu Pro Gly Ser Leu Pro Ser725 730 735Ser Val Lys Glu Pro Val Val Leu Ile Val Asp Lys Ala Asp Gly Asp740 745 750Glu Glu Val Lys Ala Ala Gly Asp Asn Ile Val Gly Val Ile Leu Leu755 760 765Gln Glu Leu Pro His Leu Ser His Leu Gly Val Arg Ala Arg Gln Glu770 775 780Asn Val Val Phe Val Thr Cys Glu Tyr Asp Asp Thr Val Thr Asp Val785 790 795 800Tyr Leu Leu Glu Gly Lys Tyr Ile Arg Leu Glu Ala Ser Ser Ile Asn805 810 815Val Asn Leu Ser Ile Val Ser Glu Lys Asn Asp Asn Ala Val Ser Thr820 825 830Glu Pro Asn Ser Thr Gly Asn Pro Phe Gln Gln Lys Leu Gln Asn Glu
835 840 845Phe Ser Leu Pro Ser Asp Ile Glu Met Pro Leu Gln Met Ser Lys Gln850 855 860Lys Ser Lys Ser Gly Val Asn Gly Ser Phe Ala Ala Leu Glu Leu Ser865 870 875 880Glu Ala Ser Val Glu Ser Ala Gly Ala Lys Ala Ala Ala Cys Arg Thr885 890 895Leu Ser Val Leu Ala Ser Leu Ser Asn Lys Val Tyr Ser Asp Gln Gly900 905 910Val Pro Ala Ala Phe Arg Val Pro Ser Gly Ala Val Ile Pro Phe Gly915 920 925Ser Met Glu Asp Ala Leu Lys Lys Ser Gly Ser Leu Glu Ser Phe Thr930 935 940Ser Leu Leu Glu Lys Ile Glu Thr Ala Lys Val Glu Asn Gly Glu Val945 950 955 960Asp Ser Leu Ala Leu Glu Leu Gln Ala Ile Ile Ser His Leu Ser Pro965 970 975Pro Glu Glu Thr Ile Ile Phe Leu Lys Arg Ile Phe Pro Gln Asp Val980 985 990Arg Leu Ile Val Arg Ser Ser Ala Asn Val Glu Asp Leu Ala Gly Met995 1000 1005Ser Ala Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Ile Pro Asn Val Ser Leu Met
1010 1015 1020Asp Pro Cys Ala Phe Gly Ala Ala Val Gly Lys Val Trp Ala Ser1025 1030 1035Leu Tyr Thr Arg Arg Ala Ile Leu Ser Arg Arg Ala Ala Gly Val1040 1045 1050Tyr Gln Arg Asp Ala Thr Met Ala Val Leu Val Gln Glu Ile Leu1055 1060 1065Gln Pro Asp Leu Ser Phe Val Leu His Thr Val Cys Pro Ala Asp1070 1075 1080His Asp Pro Lys Val Val Gln Ala Glu Val Ala Pro Gly Leu Gly1085 1090 1095Glu Thr Leu Ala Ser Gly Thr Arg Gly Thr Pro Trp Arg Leu Ser1100 1105 1110Cys Asn Lys Phe Asp Gly Lys Val Ala Thr Leu Ala Phe Ser Asn1115 1120 1125Phe Ser Glu Glu Met Val Val His Asn Ser Gly Pro Ala Asn Gly1130 1135 1140Glu Val Ile Arg Leu Thr Val Asp Tyr Ser Lys Lys Pro Leu Ser1145 1150 1155Val Asp Thr Thr Phe Arg Lys Gln Phe Gly Gln Arg Leu Ala Ala1160 1165 1170Ile Gly Gln Tyr Leu Glu Gln Lys Phe Gly Ser Ala Gln Asp Val
1175 1180 1185Glu Gly Cys Leu Val Gly Lys Asp Ile Phe Ile Val Gln Ser Arg1190 1195 1200Pro Gln Pro1205<210>5<211>12<212>PRT<213>拟南芥，稻<400>5Leu Pro His Leu Ser His Leu Gly Val Arg Ala Arg1 5 10<210>6<211>5124<212>DNA<213>桔(Citrus reticulate)<220>
<221>CDS<222>(257)..(4684)<223>
<300>
<308>EMBL/AY094062<309>2003-05-03<400>6gcacgagctc ttattacaag gtgccacgcg tcgtccgcga ctgagataaa tcgcaagtgt 60cgctccagat tttagtactt gtttcttacg gactccgtga aaaaaaccaa aatcaaataa 120tagcgaatag ccatagtcac attctcagct tcatcaatat ctctaccaag cagtatctct 180tcgtatattc accatccact tatcgtttca tgctccaatt actctgagct aagaagtgta 240
cttattgtag aggaat atg agc aat agc ata ggc cgt aat gta ctc cac cag 292Met Ser Asn Ser Ile Gly Arg Asn Val Leu His Glnl 5 10agc ttg ctt tgt tca acg gtt ttt gag cat caa agc aac cgt cat tct340Ser Leu Leu Cys Ser Thr Val Phe Glu His Gln Ser Asn Arg His Ser15 20 25tct ggc att cct gca aac tct ttg ttt caa gct gtc tct ata aat caa388Ser GIy Ile Pro Ala Asn Ser Leu Phe Gln Ala Val Ser Ile Asn Gln30 35 40ccg gcg ggg gcg tcg gca gca cgc aag tcg cct tta tct acc aaa ttt436Pro Ala Gly Ala Ser Ala Ala Arg Lys Ser Pro Leu Ser Thr Lys Phe45 50 55 60tac ggg acg agt ttg aat gct aga cca aag atg gcc atg gga agg cat484Tyr Gly Thr Ser Leu Asn Ala Arg Pro Lys Met Ala Met Gly Arg His65 70 75cgc cct gtt ttg atc act cca cgt gct gta tta gcc gtg gat tca gct532Arg Pro Val Leu Ile Thr Pro Arg Ala Val Leu Ala Val Asp Ser Ala80 85 90tct gag ctt gca gga aaa ttc aac ctt gaa ggg aat gtt gaa ttg cag580Ser Glu Leu Ala Gly Lys Phe Asn Leu Glu Gly Asn Val Glu Leu Gln95 100 105att aca gtt ggt gct cca act cca ggg tct ttg aca caa gta aat att628Ile Thr Val Gly Ala Pro Thr Pro Gly Ser Leu Thr Gln Val Asn Ile110 115 120gag atc tca tat agt agc aat tcc ttg ctt ctg cac tgg ggt gcg ata676Glu Ile Ser Tyr Ser Ser Asn Ser Leu Leu Leu His Trp Gly Ala Ile125 130 135 140cgt gac aaa aag gaa aag tgg gta ctt cct tct cgt ccg cca gat ggg724Arg Asp Lys Lys Glu Lys Trp Val Leu Pro Ser Arg Pro Pro Asp Gly145 150 155acc aaa ata tta aag aat aga gcc ctt aga act ccc ttt gtg agc tct772Thr Lys Ile Leu Lys Asn Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Ser Ser160 165 170
ggt tcc aaa tct ctc gtt aaa tta gag ata gat gat cct gca ata gaa820Gly Ser Lys Ser Leu Val Lys Leu Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ile Glu175 180 185gca gta gag ttt ctt ata ctc gat gaa gcc cag aat aaa tgg ttc aaa868Ala Val Glu Phe Leu Ile Leu Asp Glu Ala Gln Asn Lys Trp Phe Lys190 195 200aac aat ggt gca aat ttt cat gta aag tta cca tca gag agg agt ttg916Asn Asn Gly Ala Asn Phe His Val Lys Leu Pro Ser Glu Arg Ser Leu205 210 215 220att caa aat gtt tca gtt cct gaa gat ctt gta cag act caa gca tat964Ile Gln Asn Val Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Thr Gln Ala Tyr225 230 235tta agg tgg gaa aga aag ggt aaa cag att tat act cct gaa caa gag1012Leu Arg Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Ile Tyr Thr Pro Glu Gln Glu240 245 250aag gag gag tat gaa gca gct cgc act gag ctg ctg gaa gaa att gtt1060Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Leu Glu Glu Ile Val255 260 265aga ggt act tct gtg gag gac ctg cga gca aaa cta aca aac aaa aat1108Arg Gly Thr Ser Val Glu Asp Leu Arg Ala Lys Leu Thr Asn Lys Asn270 275 280gat aga caa gaa att aag gaa tct tct tcc cat gga aca aaa aat gcg1156Asp Arg Gln Glu Ile Lys Glu Ser Ser Ser His Gly Thr Lys Asn Ala285 290 295 300ata ccg gat gat ctt gtg caa ata caa tct tat ata cgg tgg gag aga1204Ile Pro Asp Asp Leu Val Gln Ile Gln Ser Tyr Ile Arg Trp Glu Arg305 310 315gct ggg aag ccc aat tac tct gca gac caa cag ctt aga gaa ttt gag1252Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Ser Ala Asp Gln Gln Leu Arg Glu Phe Glu320 325 330gaa gca aga aaa gaa ttg caa tct gaa cta gag aag ggt atc tct ctt1300Glu Ala Arg Lys Glu Leu Gln Ser Glu Leu Glu Lys Gly Ile Ser Leu335 340 345
gat gaa ata tgg aaa aag att aca aaa ggg gag atc cag act aag gtc1348Asp Glu Ile Trp Lys Lys Ile Thr Lys Gly Glu Ile Gln Thr Lys Val350 355 360tct gat caa ctt aaa act aaa aag tat ttt aga act gaa agg att cag1396Ser Asp Gln Leu Lys Thr Lys Lys Tyr Phe Arg Thr Glu Arg Ile Gln365 370 375 380agg aag cag agg gac ttt atg cag att cta aac aaa cat gtg gct gaa1444Arg Lys Gln Arg Asp Phe Met Gln Ile Leu Asn Lys His Val Ala Glu385 390 395ccc aca gag aag aag aat att tca gtt gaa cca aaa gcc ttg aca cca1492Pro Thr Glu Lys Lys Asn Ile Ser Val Glu Pro Lys Ala Leu Thr Pro400 405 4l0gtt gaa ctt ttc gtc ggg gca act gaa gaa cag gag ggt gat tct att1540Val Glu Leu Phe Val Gly Ala Thr Glu Glu Gln Glu Gly Asp Ser Ile415 420 425ctt aac aag aag atc tac aag ctt gct ggc aaa gaa ctt ctg gta ctt1588Leu Asn Lys Lys Ile Tyr Lys Leu Ala Gly Lys Glu Leu Leu Val Leu430 435 440gtg cac aag cct ggt ggc aag acc aaa att cac cta gct act gat ggc1636Val His Lys Pro Gly Gly Lys Thr Lys Ile His Leu Ala Thr Asp Gly445 450 455 460aaa gag cca ctc att ctc cac tgg gct ttg tct aag aag gct gga gaa1684Lys Glu Pro Leu Ile Leu His Trp Ala Leu Ser Lys Lys Ala Gly Glu465 470 475tgg ttg gct ccg cct cca agt gta ctg cct gca ggt tca gtt ttg ctg1732Trp Leu Ala Pro Pro Pro Ser Val Leu Pro Ala Gly Ser Val Leu Leu480 485 490agt ggg tca gtt gaa aca aca ttc aca act agc tct ctt gcg gat ctg1780Ser Gly Ser Val Glu Thr Thr Phe Thr Thr Ser Ser Leu Ala Asp Leu495 500 505cct tat cag gtc caa tca att gaa ata gag att gaa gaa gaa ggt tat1828Pro Tyr Gln Val Gln Ser Ile Glu Ile Glu Ile Glu Glu Glu Gly Tyr510 515 520
gtt gga atg cca tct gtc ctt cag tct ggc gga aac tgg ata aag aat1876Val Gly Met Pro Ser Val Leu Gln Ser Gly Gly Asn Trp Ile Lys Asn525 530 535 540aag ggc tct gac ttc tat gtt gac ttt agc tat gaa tct aag caa gtt1924Lys Gly Ser Asp Phe Tyr Val Asp Phe Ser Tyr Glu Ser Lys Gln Val545 550 555caa cag gat ttt ggc gat ggc aaa ggt acg gcc aag gct ttg ttg gag1972Gln Gln Asp Phe Gly Asp Gly Lys Gly Thr Ala Lys Ala Leu Leu Glu560 565 570aaa ata gca gga ttg gaa att gag gca cag aag tcc ttt atg cac cgg2020Lys Ile Ala Gly Leu Glu Ile Glu Ala Gln Lys Ser Phe Met His Arg575 580 585ttt aac att gca gca gac ttg ata caa gaa gcc aaa gag gct ggt gaa2068Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Ile Gln Glu Ala Lys Glu Ala Gly Glu590 595 600ctg ggc ttt gct ggg atc ttg gtg tgg atg agg ttt atg gct aca agg2116Leu Gly Phe Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met Ala Thr Arg605 610 615 620cag cta ata tgg aat aaa aac tac aat gtt aaa cca cgt gaa atc agt2164Gln Leu Ile Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser625 630 635aaa gcc cag gat agg ctt aca gac ctg ctc cag aat gtc tac att agt2212Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asn Val Tyr Ile Ser640 645 650aat cca gag tat agg gaa att gtg cgc atg att ttg tct act gtt ggc2260Asn Pro Glu Tyr Arg Glu Ile Val Arg Met Ile Leu Ser Thr Val Gly655 660 665cgt gga ggt gaa gga gat gtg gga cag cga att cgc gat gaa atc ctg2308Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu670 675 680gtt atc cag aga aac aat aat tgc aag ggt gga atg atg gaa gaa tgg2356Val Ile Gln Arg Asn Asn Asn Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu Trp685 690 695 700
cat cag aag ttg cat aat aac act agt cct gat gat gtt ata att tgt2404His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Ile Ile Cys705 7l0 715cag gca ttg att gat tat att aaa agt gac ttc gac atc agt gcc tac 2452Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Ile Ser Ala Tyr720 725 730tgg aag act ttg aat gac aat ggc att acg aaa gaa cgt ctt cta agt2500Trp Lys Thr Leu Asn Asp Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser735 740 745tat gat cgt gcg atc cat tct gag cca aac ttc aga aga gat cag aag2548Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Arg Asp Gln Lys750 755 760gat ggt ctg ctg cgt gac cta gga aac tac atg aga acc tta aag gcg2596Asp Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Thr Leu Lys Ala765 770 775 780gtt cat tca ggt gca gat ctt gag tct gct atc acg aat tgc ttg ggc2644Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Thr Asn Cys Leu Gly785 790 795tac aga tct gag ggt caa ggg ttc atg gtc ggg gtg cag ata aat cct2692Tyr Arg Ser Glu Gly Gln Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn Pro800 805 810ata ccg aac ttg cca tct gga ttt cca gaa ttg ctt caa ttt gtc tct2740Ile Pro Asn Leu Pro Ser Gly Phe Pro Glu Leu Leu Gln Phe Val Ser815 820 825gag cat gtt gaa gat aga aat gta gaa gca ttg ctt gag ggt ttg ctg2788Glu His Val Glu Asp Arg Asn Val Glu Ala Leu Leu Glu Gly Leu Leu830 835 840gag gct cgt caa gag att cgg cca ttg ctg tgc aag cac aat gat cgt2836Glu Ala Arg Gln Glu Ile Arg Pro Leu Leu Cys Lys His Asn Asp Arg845 850 855 860ctg aag gat cta tta ttt ttg gac ata gcc ctt gag tct agt gtt agg2884Leu Lys Asp Leu Leu Phe Leu Asp Ile Ala Leu Glu Ser Ser Val Arg865 870 875
aca gct att gaa aaa gga tac gag gaa ttg aac gag gct gga ccg gag2932Thr Ala Ile Glu Lys Gly Tyr Glu Glu Leu Asn Glu Ala Gly Pro Glu880 885 890aaa atc atg tac ttt gtc tct ctg att ctt gaa aat ctc gca ctt tca2980Lys Ile Met Tyr Phe Val Ser Leu Ile Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser895 900 905tta gat gac aat gag gat ctc atc tac tgt tta aag ggt tgg agt aat3028Leu Asp Asp Asn Glu Asp Leu Ile Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Ser Asn910 915 920gct tta agc atg tcc aag agt aaa agt gat aac tgg gca tta ttt gca3076Ala Leu Ser Met Ser Lys Ser Lys Ser Asp Asn Trp Ala Leu Phe Ala925 930 935 940aaa tca gtt ctt gac aga act cgc ctt gca ctc gcc ggc aag gca gac3124Lys Ser Val Leu Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala Gly Lys Ala Asp945 950 955tgg tac cag aaa gtt ttg caa cct tcg gca gag tat ctt gga acg ctg3172Trp Tyr Gln Lys Val Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Thr Leu960 965 970ttg agt gtt gat aag tgg gct gtg gac ata ttt aca gaa gaa atg atc3220Leu Ser Val Asp Lys Trp Ala Val Asp Ile Phe Thr Glu Glu Met Ile975 980 985cgt gct gga tca gct gca gct cta tcc tta ctc ctt aat cga ctt gat 3268Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ala Leu Ser Leu Leu Leu Asn Arg Leu Asp990 995 1000cca gtt ctt cgg aag aca gct agt ctg gga agt tgg cag gtt atc 3313Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala Ser Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile1005 1010 1015agc cct gtt gaa gtt ttt gga tat gtc gca gtt gtg gat gag tta 3358Ser Pro Val Glu Val Phe Gly Tyr Val Ala Val Val Asp Glu Leu1020 1025 1030cta gct gtg cag gat aaa tct tat gat cag cct aca ata tta ctg 3403Leu Ala Val Gln Asp Lys Ser Tyr Asp Gln Pro Thr Ile Leu Leu1035 1040 1045
gca aga cgt gta aaa gga gag gaa gaa att cca cat ggc aca gtt 3448Ala Arg Arg Val Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro His Gly Thr Val1050 1055 1060gct gta ctg aca gcg gat atg cca gat gtc cta tca cat gtt tca 3493Ala Val Leu Thr Ala Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser1065 1070 1075gtt cga gct aga aat tgc aag gtt tgc ttc gct aca tgc ttt gat 3538Val Arg Ala Arg Asn Cys Lys Val Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp1080 1085 1090ccc aat atc ttg gct gac cta caa tca aat gaa ggg aaa atg ctg 3583Pro Asn Ile Leu Ala Asp Leu Gln Ser Asn Glu Gly Lys Met Leu1095 1100 1105cac cta aaa cca aca tct gct gat att gca tat agt gtg gtg gag 3628His Leu Lys Pro Thr Ser Ala Asp Ile Ala Tyr Ser Val Val Glu1110 1115 1120ggc agt gag cta caa gat tca agt tca gct aac ttg aaa gaa gaa 3673Gly Ser Glu Leu Gln Asp Ser Ser Ser Ala Asn Leu Lys Glu Glu1125 1130 1135gat ggt cct tca tct tct gtt gca tta gtc aaa aag cag ttt gct 3718Asp Gly Pro Ser Ser Ser Val Ala Leu Val Lys Lys Gln Phe Ala1140 1145 1150ggc aga tat gct ata aca tct gat gag ttc act ggt gaa ctg gtg 3763Gly Arg Tyr Ala Ile Thr Ser Asp Glu Phe Thr Gly Glu Leu Val1155 1160 1165ggt gct aaa tca cgt aat att gca tat ctg aaa gga aaa gta ccg 3808Gly Ala Lys Ser Arg Asn Ile Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro1170 1175 1180tct tgg att ggg att ccg aca tca gtt gcc cta cca ttt gga gtg 3853Ser Trp Ile Gly Ile Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val1185 1190 1195ttt gag aag gtt ctt tca gat gac ata aat cag gca gtg gca gag 3898Phe Glu Lys Val Leu Ser Asp Asp Ile Asn Gln Ala Val Ala Glu1200 1205 1210
aag ttg caa att ttg aaa caa aag tta gga gag gaa gac cat agt 3943Lys Leu Gln Ile Leu Lys Gln Lys Leu Gly Glu Glu Asp His Ser1215 1220 1225gcc ctt agg gag att cgg gaa aca gtt tta cag atg aaa gca cca 3988Ala Leu Arg Glu Ile Arg Glu Thr Val Leu Gln Met Lys Ala Pro1230 1235 1240aac cag ttg gtc caa gaa ctg aag aca gag atg aaa agt tct ggt 4033Asn Gln Leu Val Gln Glu Leu Lys Thr Glu Met Lys Ser Ser Gly1245 1250 1255atg cct tgg cct ggt gat gaa ggt gag cag cgc tgg gag caa gca 4078Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu Gly Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala1260 1265 1270tgg atg gct atc aag aag gtc tgg gct tca aaa tgg aat gag aga 4123Trp Met Ala Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg1275 1280 1285gca ttc ttc agc aca agg aga gta aaa tta gat cat gaa tat ctc 4168Ala Phe Phe Ser Thr Arg Arg Val Lys Leu Asp His Glu Tyr Leu1290 1295 1300tgc atg gct gtc ctg gtt cag gaa ata atc aat gct gac tat gca 4213Cys Met Ala Val Leu Val Gln Glu Ile Ile Asn Ala Asp Tyr Ala1305 1310 1315ttt gtt atc cat aca act aat ccc tct tca gga gat tca tca gaa 4258Phe Val Ile His Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu1320 1325 1330ata tat gct gag gtg gtg aag gga ctt gga gaa act ctc gtt gga 4303Ile Tyr Ala Glu Val Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly1335 1340 1345gct tat cca ggc cgt gct ttg agt ttt gtc tgc aag aaa aat gat 4348Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Leu Ser Phe Val Cys Lys Lys Asn Asp1350 1355 1360ttg aag tct cct cgg gtt ttg ggt tat cca agc aag ccc att ggg 4393Leu Lys Ser Pro Arg Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly1365 1370 1375
ctt ttt ata aga cga tca atc atc ttc cga tct gat tcc aat ggt 4438Leu Phe Ile Arg Arg Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly1380 1385 1390gaa gat ctg gaa ggt tat gct ggt gct ggc ctt tat gat agt gtg 4483Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val1395 1400 1405cca atg gat gaa gcc gag aaa gtt gtg ctt gat tac tct tca gac 4528Pro Met Asp Glu Ala Glu Lys Val Val Leu Asp Tyr Ser Ser Asp1410 1415 1420cat ctg atc act gac gga cac ttc cag caa tca att ctc tct tcc 4573His Leu Ile Thr Asp Gly His Phe Gln Gln Ser Ile Leu Ser Ser1425 1430 1435att gct cgt gca gga tgt gag att gag gag cta ttt gga tct gca 4618Ile Ala Arg Ala Gly Cys Glu Ile Glu Glu Leu Phe Gly Ser Ala1440 1445 1450caa gac att gaa ggt gtg gtt agg gat ggg aaa ata tat gtt gtc 4663Gln Asp Ile Glu Gly Val Val Arg Asp Gly Lys Ile Tyr Val Val1455 1460 1465cag aca aga ccc caa atg tga ggctgttctt tttctttttt attttttcct 4714Gln Thr Arg Pro Gln Met1470 1475gattgggaag ctattgataa aagcattata tcaatgaaaa aaattaaaaa gaaattatag 4774aggtcaagcc tagaaaggag gaaaggggag tgagtattta tttggaagca agtgaaataa 4834aggtacaaaa ggagagagga ataaagttgc aatttcccag aacatgtaaa ttcacttgga 4894aattgtgtac tggatgcttt gctctgtatg aagactaccg ggtcgaaatg acaacatttt 4954tgtccatagg catgtaatgt tacatttgat tctgggtaat accatacgct tcattatagg 5014ggatcagcag atactatgtt gtagttgaaa tgtaatgtta taataaaatg ttaatacaaa 5074tgttataaca tttgtattaa cctgtaacgt gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5124
<210>7<211>1475<212>PRT<213>桔<400>7Met Ser Asn Ser Ile Gly Arg Asn Val Leu His Gln Ser Leu Leu Cys1 5 10 15Ser Thr Val Phe Glu His Gln Ser Asn Arg His Ser Ser Gly Ile Pro20 25 30Ala Asn Ser Leu Phe Gln Ala Val Ser Ile Asn Gln Pro Ala Gly Ala35 40 45Ser Ala Ala Arg Lys Ser Pro Leu Ser Thr Lys Phe Tyr Gly Thr Ser50 55 60Leu Asn Ala Arg Pro Lys Met Ala Met Gly Arg His Arg Pro Val Leu65 70 75 80Ile Thr Pro Arg Ala Val Leu Ala Val Asp Ser Ala Ser Glu Leu Ala85 90 95Gly Lys Phe Asn Leu Glu Gly Asn Val Glu Leu Gln Ile Thr Val Gly100 105 110Ala Pro Thr Pro Gly Ser Leu Thr Gln Val Asn Ile Glu Ile Ser Tyr115 120 125Ser Ser Asn Ser Leu Leu Leu His Trp Gly Ala Ile Arg Asp Lys Lys130 135 140Glu Lys Trp Val Leu Pro Ser Arg Pro Pro Asp Gly Thr Lys Ile Leu
145 150 155 160Lys Asn Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Ser Ser Gly Ser Lys Ser165 170 175Leu Val Lys Leu Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ile Glu Ala Val Glu Phe180 185 190Leu Ile Leu Asp Glu Ala Gln Asn Lys Trp Phe Lys Asn Asn Gly Ala195 200 205Asn Phe His Val Lys Leu Pro Ser Glu Arg Ser Leu Ile Gln Asn Val210 215 220Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Thr Gln Ala Tyr Leu Arg Trp Glu225 230 235 240Arg Lys Gly Lys Gln Ile Tyr Thr Pro Glu Gln Glu Lys Glu Glu Tyr245 250 255Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Leu Glu Glu Ile Val Arg Gly Thr Ser260 265 270Val Glu Asp Leu Arg Ala Lys Leu Thr Asn Lys Asn Asp Arg Gln Glu275 280 285Ile Lys Glu Ser Ser Ser His Gly Thr Lys Asn Ala Ile Pro Asp Asp290 295 300Leu Val Gln Ile Gln Ser Tyr Ile Arg Trp Glu Arg Ala Gly Lys Pro305310 315 320Asn Tyr Ser Ala Asp Gln Gln Leu Arg Glu Phe Glu Glu Ala Arg Lys
325 330 335Glu Leu Gln Ser Glu Leu Glu Lys Gly Ile Ser Leu Asp Glu Ile Trp340 345 350Lys Lys Ile Thr Lys Gly Glu Ile Gln Thr Lys Val Ser Asp Gln Leu355 360 365Lys Thr Lys Lys Tyr Phe Arg Thr Glu Arg Ile Gln Arg Lys Gln Arg370 375 380Asp Phe Met Gln Ile Leu Asn Lys His Val Ala Glu Pro Thr Glu Lys385 390 395 400Lys Asn Ile Ser Val Glu Pro Lys Ala Leu Thr Pro Val Glu Leu Phe405 410 415Val Gly Ala Thr Glu Glu Gln Glu Gly Asp Ser Ile Leu Asn Lys Lys420 425 430Ile Tyr Lys Leu Ala Gly Lys Glu Leu Leu Val Leu Val His Lys Pro435 440 445Gly Gly Lys Thr Lys Ile His Leu Ala Thr Asp Gly Lys Glu Pro Leu450 455 460Ile Leu His Trp Ala Leu Ser Lys Lys Ala Gly Glu Trp Leu Ala Pro465 470 475 480Pro Pro Ser Val Leu Pro Ala Gly Ser Val Leu Leu Ser Gly Ser Val485 490 495Glu Thr Thr Phe Thr Thr Ser Ser Leu Ala Asp Leu Pro Tyr Gln Val
500 505 510Gln Ser Ile Glu Ile Glu Ile Glu Glu Glu Gly Tyr Val Gly Met Pro515 520 525Ser Val Leu Gln Ser Gly Gly Asn Trp Ile Lys Asn Lys Gly Ser Asp530 535 540Phe Tyr Val Asp Phe Ser Tyr Glu Ser Lys Gln Val Gln Gln Asp Phe545 550 555 560Gly Asp Gly Lys Gly Thr Ala Lys Ala Leu Leu Glu Lys Ile Ala Gly565 570 575Leu Glu Ile Glu Ala Gln Lys Ser Phe Met His Arg Phe Asn Ile Ala580 585 590Ala Asp Leu Ile Gln Glu Ala Lys Glu Ala Gly Glu Leu Gly Phe Ala595 600 605Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met Ala Thr Arg Gln Leu Ile Trp610 615 620Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp625 630 635 640Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asn Val Tyr Ile Ser Asn Pro Glu Tyr645 650 655Arg Glu Ile Val Arg Met Ile Leu Ser Thr Val Gly Arg Gly Gly Glu660 665 670Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg
675 680 685Asn Asn Asn Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu Trp His Gln Lys Leu690 695 700His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Ile Ile Cys Gln Ala Leu Ile705 710 715 720Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Ile Ser Ala Tyr Trp Lys Thr Leu725 730 735Asn Asp Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala740 745 750Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Arg Asp Gln Lys Asp Gly Leu Leu755 760 765Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Thr Leu Lys Ala Val His Ser Gly770 775 780Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Thr Asn Cys Leu Gly Tyr Arg Ser Glu785 790 795 800Gly Gln Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn Pro Ile Pro Asn Leu805 810 815Pro Ser Gly Phe Pro Glu Leu Leu Gln Phe Val Ser Glu His Val Glu820 825 830Asp Arg Asn Val Glu Ala Leu Leu Glu Gly Leu Leu Glu Ala Arg Gln835 840 845Glu Ile Arg Pro Leu Leu Cys Lys His Asn Asp Arg Leu Lys Asp Leu
850 855 860Leu Phe Leu Asp Ile Ala Leu Glu Ser Ser Val Arg Thr Ala Ile Glu865 870 875 880Lys Gly Tyr Glu Glu Leu Asn Glu Ala Gly Pro Glu Lys Ile Met Tyr885 890 895Phe Val Ser Leu Ile Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser Leu Asp Asp Asn900 905 910Glu Asp Leu Ile Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Ser Asn Ala Leu Ser Met915 920 925Ser Lys Ser Lys Ser Asp Asn Trp Ala Leu Phe Ala Lys Ser Val Leu930 935 940Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala Gly Lys Ala Asp Trp Tyr Gln Lys945 950 955 960Val Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Thr Leu Leu Ser Val Asp965 970 975Lys Trp Ala Val Asp Ile Phe Thr Glu Glu Met Ile Arg Ala Gly Ser980 985 990Ala Ala Ala Leu Ser Leu Leu Leu Asn Arg Leu Asp Pro Val Leu Arg995 1000 1005Lys Thr Ala Ser Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile Ser Pro Val Glu1010 1015 1020Val Phe Gly Tyr Val Ala Val Val Asp Glu Leu Leu Ala Val Gln
1025 1030 1035Asp Lys Ser Tyr Asp Gln Pro Thr Ile Leu Leu Ala Arg Arg Val1040 1045 1050Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro His Gly Thr Val Ala Val Leu Thr1055 1060 1065Ala Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg Ala Arg1070 1075 1080Asn Cys Lys Val Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp Pro Asn Ile Leu1085 1090 1095Ala Asp Leu Gln Ser Asn Glu Gly Lys Met Leu His Leu Lys Pro1100 1105 1110Thr Ser Ala Asp Ile Ala Tyr Ser Val Val Glu Gly Ser Glu Leu1115 1120 1125Gln Asp Ser Ser Ser Ala Asn Leu Lys Glu Glu Asp Gly Pro Ser1130 1135 1140Ser Ser Val Ala Leu Val Lys Lys Gln Phe Ala Gly Arg Tyr Ala1145 1150 1155Ile Thr Ser Asp Glu Phe Thr Gly Glu Leu Val Gly Ala Lys Ser1160 1165 1170Arg Asn Ile Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp Ile Gly1175 1180 1185Ile Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val Phe Glu Lys Val
1190 1195 1200Leu Ser Asp Asp Ile Asn Gln Ala Val Ala Glu Lys Leu Gln Ile1205 1210 1215Leu Lys Gln Lys Leu Gly Glu Glu Asp His Ser Ala Leu Arg Glu1220 1225 1230Ile Arg Glu Thr Val Leu Gln Met Lys Ala Pro Asn Gln Leu Val1235 1240 1245Gln Glu Leu Lys Thr Glu Met Lys Ser Ser Gly Met Pro Trp Pro1250 1255 1260Gly Asp Glu Gly Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Met Ala Ile1265 1270 1275Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Phe Phe Ser1280 1285 1290Thr Arg Arg Val Lys Leu Asp His Glu Tyr Leu Cys Met Ala Val1295 1300 1305Leu Val Gln Glu Ile Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His1310 1315 1320Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu1325 1330 1335Val Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly1340 1345 1350Arg Ala Leu Ser Phe Val Cys Lys Lys Asn Asp Leu Lys Ser Pro
1355 1360 1365Arg Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly Leu Phe Ile Arg1370 1375 1380Arg Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn 6ly Glu Asp Leu Glu1385 1390 1395Gly Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Gh1400 1405 1410Ala Glu Lys Val Val Leu Asp Tyr Ser Ser Asp His Leu lle Thr1415 1420 1425Asp Gly His Phe Gln Gln Ser Ile Leu Ser Ser Ile Ala Arg Ala1430 1435 1440Gly Cys Glu lle Glu Glu Leu Phe Gly Ser Ala Gln Asp IIe Glu1445 1450 1455Gly Val Val Arg Asp Gly Lys lle Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro1460 1465 1470Gln Met1475<210>8<211>4200<212>DNA<213>拟南芥<220>
<221>CDS<222>(1)..(4200)<223>
<300>
<308>EMBL/AF312027<309>2001-01-08<400>8atg agt aac tct gta gtg cat aac tta ctt aac cgg ggt ttg att cgt48Met Ser Asn Ser Val Val His Asn Leu Leu Asn Arg Gly Leu Ile Arg1 5 10 15cct ctt aac ttt gaa cat caa aac aag ctc aac tcc tct gtg tac caa96Pro Leu Asn Phe Glu His Gln Asn Lys Leu Asn Ser Ser Val Tyr Gln20 25 30act tca aca gca aat ccg gct ctt ggc aag att ggc aga tca aaa ctt144Thr Ser Thr Ala Asn Pro Ala Leu Gly Lys Ile Gly Arg Ser Lys Leu35 40 45tac ggg aaa ggt ctt aag cag gca gga cgc agt ctg gtc act gaa aca192Tyr Gly Lys Gly Leu Lys Gln Ala Gly Arg Ser Leu Val Thr Glu Thr50 55 60gga gga aga cct ctc tca ttt gtt cca cga gct gtc ctt gcc atg gat240Gly Gly Arg Pro Leu Ser Phe Val Pro Arg Ala Val Leu Ala Met Asp65 70 75 80cct cag gca gcc gag aaa ttt agt ctt gac gga aat atc gat tta ctg288Pro Gln Ala Ala Glu Lys Phe Ser Leu Asp Gly Asn Ile Asp Leu Leu85 90 95gtt gaa gtc act tct aca act gta aga gaa gta aat atc cag ata gct336Val Glu Val Thr Ser Thr Thr Val Arg Glu Val Asn Ile Gln Ile Ala100 105 110tat aca agt gac aca ttg ttc cta cac tgg ggt gca att ctt gac aac384Tyr Thr Ser Asp Thr Leu Phe Leu His Trp Gly Ala Ile Leu Asp Asn115 120 125aaa gaa aat tgg gtt cta cct tct cgc tct ccg gat aga act caa aac432Lys Glu Asn Trp Val Leu Pro Ser Arg Ser Pro Asp Arg Thr Gln Asn130 135 140ttc aag aac agt gcg ctt aga act cca ttt gtg aaa tcc ggt ggc aat480Phe Lys Asn Ser Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser Gly Gly Asn145 150 155 160
tct cac ctt aaa cta gag ata gat gat cct gcc ata cac gct att gag528Ser His Leu Lys Leu Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ile His Ala Ile Glu165 170 175ttc ctt ata ttt gac gaa agt cgg aac aaa tgg tat aaa aat aat ggt576Phe Leu Ile Phe Asp Glu Ser Arg Asn Lys Trp Tyr Lys Asn Asn Gly180 185 190cag aat ttt cat ata aac tta cca acg gaa agg aat gtg aaa caa aat624Gln Asn Phe His Ile Asn Leu Pro Thr Glu Arg Asn Val Lys Gln Asn195 200 205gtt tct gtt cct gaa gat ctt gta cag atc caa gca tat ctt aga tgg672Val Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ala Tyr Leu Arg Trp210 215 220gaa cgt aag ggt aaa caa atg tac aac cct gag aaa gag aag gag gag720Glu Arg Lys Gly Lys Gln Met Tyr Asn Pro Glu Lys Glu Lys Glu Glu225 230 235 240tat gaa gcc gcc cgg acg gag cta cgg gag gaa atg atg cga ggt gct768Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Arg Glu Glu Met Met Arg Gly Ala245 250 255tca gtg gaa gat ctc aga gca aag ctg ttg aag aaa gat aac agt aat816Ser Val Glu Asp Leu Arg Ala Lys Leu Leu Lys Lys Asp Asn Ser Asn260 265 270gaa tcc cca aaa tct aat ggg aca tca tcc agt gga cgg gag gaa aag 864Glu Ser Pro Lys Ser Asn Gly Thr Ser Ser Ser Gly Arg Glu Glu Lys275 280 285aaa aaa gtt tcc aag caa cca gag cgt aaa aaa aat tat aac act gac912Lys Lys Val Ser Lys Gln Pro Glu Arg Lys Lys Asn Tyr Asn Thr Asp290 295 300aag atc cag cgc aag gga agg gac ctg act aag ctt atc tat aag cat960Lys Ile Gln Arg Lys Gly Arg Asp Leu Thr Lys Leu Ile Tyr Lys His305 310 315 320gtt gct gat ttt gtt gaa cca gaa tcc aaa tcc tca tct gaa cca cgg1008Val Ala Asp Phe Val Glu Pro Glu Ser Lys Ser Ser Ser Glu Pro Arg325 330 335
tcc tta aca act ctg gag ata tac gcc aaa gca aag gag gaa caa gaa1056Ser Leu Thr Thr Leu Glu Ile Tyr Ala Lys Ala Lys Glu Glu Gln Glu340 345 350acc act cca gtc ttt agc aag aaa aca ttc aag ctt gaa ggc agt gcg1104Thr Thr Pro Val Phe Ser Lys Lys Thr Phe Lys Leu Glu Gly Ser Ala355 360 365att ttg gtg ttt gtt act aaa ctt tcc gga aag acg aaa att cat gtg1152Ile Leu Val Phe Val Thr Lys Leu Ser Gly Lys Thr Lys Ile His Val370 375 380gca act gat ttt aaa gag ccg gtt acc ctt cac tgg gct ttg tct caa1200Ala Thr Asp Phe Lys Glu Pro Val Thr Leu His Trp Ala Leu Ser Gln385 390 395 400aag ggt gga gaa tgg ttg gac cca cct tca gat ata ctg cca cca aac1248Lys Gly Gly Glu Trp Leu Asp Pro Pro Ser Asp Ile Leu Pro Pro Asn405 410 415tct ttg cca gta cgt ggt gct gtt gat aca aaa ctg acc atc act tca1296Ser Leu Pro Val Arg Gly Ala Val Asp Thr Lys Leu Thr Ile Thr Ser420 425 430aca gat ctt cct agt ccg gtt caa act ttt gag ctg gaa ata gaa ggt1344Thr Asp Leu Pro Ser Pro Val Gln Thr Phe Glu Leu Glu Ile Glu Gly435 440 445gac agc tac aag ggc atg ccg ttt gta ctc aat gct ggt gaa agg tgg1392Asp Ser Tyr Lys Gly Met Pro Phe Val Leu Asn Ala Gly Glu Arg Trp450 455 460att aaa aat aat gac agt gac ttt tat gtg gac ttt gct aaa gaa gaa1440Ile Lys Asn Asn Asp Ser Asp Phe Tyr Val Asp Phe Ala Lys Glu Glu465 470 475 480aaa cat gtt cag aag gat tat ggc gat gga aag ggt aca gcc aag cat1488Lys His Val Gln Lys Asp Tyr Gly Asp Gly Lys Gly Thr Ala Lys His485 490 495tta ctg gac aaa atc gca gat ttg gag agt gag gcc cag aag tct ttc1536Leu Leu Asp Lys Ile Ala Asp Leu Glu Ser Glu Ala Gln Lys Ser Phe500 505 510
atg cat cga ttc aac att gca gca gat ctt gtg gac gag gca aaa agt1584Met His Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Val Asp Glu Ala Lys Ser515 520 525gct ggt caa ctg ggc ttt gca ggg atc cta gtc tgg atg agg ttt atg1632Ala Gly Gln Leu Gly Phe Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met530 535 540gct aca aga cag ctt gtg tgg aac aaa aac tat aat gtt aag cca agg1680Ala Thr Arg Gln Leu Val Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg545 550 555 560gag ata agc aaa gcg cag gat aga ctg act gac ctt ctc cag gac gtt1728Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asp Val565 570 575tat gca agt tat cca gag tac aga gaa ctt ttg cgg atg ata atg tct1776Tyr Ala Ser Tyr Pro Glu Tyr Arg Glu Leu Leu Arg Met Ile Met Ser580 585 590act gta ggt cga gga ggt gaa gga gat gtc ggg caa cga atc cgt gac1824Thr Val Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp595 600 605gaa att cta gtc atc cag cgg aaa aat gac tgc aag ggt gga att atg1872Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg Lys Asn Asp Cys Lys Gly Gly Ile Met610 615 620gag gaa tgg cat cag aag ttg cat aac aac act agt cca gat gat gtt1920Glu Glu Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val625 630 635 640gtc atc tgt cag gca ttg atg gat tat atc aaa agt gac ttt gac tta1968Val Ile Cys Gln Ala Leu Met Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Leu645 650 655agt gtt tac tgg aag acc ttg aac gat aat ggc ata acc aaa gag cga2016Ser Val Tyr Trp Lys Thr Leu Asn Asp Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg660 665 670ctc tta agt tat gat cgt gct ata cat tct gaa cca aat ttt aga gga2064Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Gly675 680 685
gaa caa aaa gac ggt ctt ttg cgt gat ctt gga cac tac atg agg act2112Glu Gln Lys Asp Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly His Tyr Met Arg Thr690 695 700tta aag gct gtt cat tca ggg gca gac ctt gag tcg gct ata caa aat2160Leu Lys Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Gln Asn705 710 715 720tgc atg ggc tac caa gat gac ggt gaa ggt ttc atg gtt ggg gtg cag2208Cys Met Gly Tyr Gln Asp Asp Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln725 730 735ata aat cct gta tca gga ttg cct tct gga tat cca gac ttg ctt cgt2256Ile Asn Pro Val Ser Gly Leu Pro Ser Gly Tyr Pro Asp Leu Leu Arg740 745 750ttc gtc cta gaa cat gtt gaa gaa aag aat gta gag cca ctt ctt gag2304Phe Val Leu Glu His Val Glu Glu Lys Asn Val Glu Pro Leu Leu Glu755 760 765ggt ttg ctt gaa gct cgt caa gag cta agg cca ctt ctg ctg aag tcc2352Gly Leu Leu Glu Ala Arg Gln Glu Leu Arg Pro Leu Leu Leu Lys Ser770 775 780cat gac cgc ctc aag gat ctg tta ttc ttg gac ctc gct ctt gat tct2400His Asp Arg Leu Lys Asp Leu Leu Phe Leu Asp Leu Ala Leu Asp Ser785 790 795 800act gtc aga aca gcg att gaa aga gga tat gag caa ttg aat gat gct2448Thr Val Arg Thr Ala Ile Glu Arg Gly Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ala805 810 815gga cct gag aaa atc atg tac ttc atc agc cta gtt ctt gaa aat ctt2496Gly Pro Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu820 825 830gcc ctc tct tca gat gac aat gaa gac ctt ata tac tgc ttg aag gga2544Ala Leu Ser Ser Asp Asp Asn Glu Asp Leu Ile Tyr Cys Leu Lys Gly835 840 845tgg caa ttt gcc ctc gac atg tgc aag agc aaa aaa gat cac tgg gct2592Trp Gln Phe Ala Leu Asp Met Cys Lys Ser Lys Lys Asp His Trp Ala850 855 860
ctg tat gca aaa tct gtt ctt gac aga agc cga cta gca ctg gca agc2640Leu Tyr Ala Lys Ser Val Leu Asp Arg Ser Arg Leu Ala Leu Ala Ser865 870 875 880aaa gct gag agg tac ctt gaa att ctg caa cca tcg gct gaa tat ctt2688Lys Ala Glu Arg Tyr Leu Glu Ile Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu885 890 895gga tct tgt ctt gga gtc gat cag tcg gct gtt agt ata ttt act gaa2736Gly Ser Cys Leu Gly Val Asp Gln Ser Ala Val Ser Ile Phe Thr Glu900 905 910gag atc att cga gct gga tct gca gca gca ttg tcg tca ctt gtt aac2784Glu Ile Ile Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ala Leu Ser Ser Leu Val Asn915 920 925cga ctt gac cca gtt ctt agg aag act gct aac ttg gga agt tgg cag2832Arg Leu Asp Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala Asn Leu Gly Ser Trp Gln930 935 940gtt att agt cct gta gag gtc gtc gga tat gtc att gtt gtg gac gaa2880Val Ile Ser Pro Val Glu Val Val Gly Tyr Val Ile Val Val Asp Glu945 950 955 960ttg ctc act gta cag aat aaa acc tac gat aga cct aca att ata gtt2928Leu Leu Thr Val Gln Asn Lys Thr Tyr Asp Arg Pro Thr Ile Ile Val965 970 975gca aac aga gtg aga gga gag gag gaa atc cct gat ggt gca gtt gcg2976Ala Asn Arg Val Arg Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Ala Val Ala980 985 990gta ctg aca cct gac atg ccg gat gta cta tct cat gtt tct gtt cga 3024Val Leu Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg995 1000 1005gca aga aat gga aag atc tgc ttt gcc aca tgt ttt gat tct ggt 3069Ala Arg Asn Gly Lys Ile Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp Ser Gly1010 1015 1020atc tta tct gac ctc caa gga aaa gat gga aaa ctg ttg agc cta 3114Ile Leu Ser Asp Leu Gln Gly Lys Asp Gly Lys Leu Leu Ser Leu1025 1030 1035
caa cca acc tct gca gat gta gtc tat aaa gag gta aac gat agt 3159Gln Pro Thr Ser Ala Asp Val Val Tyr Lys Glu Val Asn Asp Ser1040 1045 1050gag ctt tcg agt cca agt tca gac aac ctg gaa gat gcc cct cca 3204Glu Leu Ser Ser Pro Ser Ser Asp Asn Leu Glu Asp Ala Pro Pro1055 1060 1065agt att tct ttg gtc aag aaa cag ttt gcg ggt aga tat gct ata 3249Ser Ile Ser Leu Val Lys Lys Gln Phe Ala Gly Arg Tyr Ala Ile1070 1075 1080tca tct gag gag ttc aca agt gac ttg gtt ggt gct aaa tca aga 3294Ser Ser Glu Glu Phe Thr Ser Asp Leu Val Gly Ala Lys Ser Arg1085 1090 1095aat atc ggg tat ctg aaa gga aaa gtt cct tct tgg gtt ggt atc 3339Asn Ile Gly Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp Val Gly Ile1100 1105 1110cca act tca gtt gcg ttg cca ttt ggt gtt ttt gag aag gtt atc 3384Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val Phe Glu Lys Val Ile1115 1120 1125tcc gaa aag gcg aat cag gcg gtg aac gat aaa ttg cta gta ttg 3429Ser Glu Lys Ala Asn Gln Ala Val Asn Asp Lys Leu Leu Val Leu1130 1135 1140aag aaa act ctt gat gag gga gac caa ggt gct ctg aag gaa atc 3474Lys Lys Thr Leu Asp Glu Gly Asp Gln Gly Ala Leu Lys Glu Ile1145 1150 1155cgg cag aca ctg ttg ggg cta gtt gca ccc cca gaa ctg gtt gaa 3519Arg Gln Thr Leu Leu Gly Leu Val Ala Pro Pro Glu Leu Val Glu1160 1165 1170gaa ctg aaa agt act atg aaa agt tct gac atg cca tgg ccg ggt 3564Glu Leu Lys Ser Thr Met Lys Ser Ser Asp Met Pro Trp Pro Gly1175 1180 1185gat gaa ggt gaa cag aga tgg gag caa gct tgg gca gcc att aaa 3609Asp Glu Gly Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Ala Ala Ile Lys1190 1195 1200
aag gtc tgg gct tcg aaa tgg aac gag aga gca tac ttc agc acg 3654Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr1205 1210 1215agg aaa gta aaa ctg gat cat gac tat ctc tgc atg gct gtt ttg 3699Arg Lys Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu Cys Met Ala Val Leu1220 1225 1230gtc caa gaa gtc atc aat gcg gat tac gca ttc gtc att cac aca 3744Val Gln Glu Val Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr1235 1240 1245act aat cca tct tct gga gat tca tca gag att tat gcc gag gtg 3789Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val1250 1255 1260gtc aaa ggc ctt ggg gaa act ctt gta gga gca tat ccc ggt cgg 3834Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly Arg1265 1270 1275tct ctg agt ttc atc tgc aag aaa aac aac ctt gat tcg cct ctg 3879Ser Leu Ser Phe Ile Cys Lys Lys Asn Asn Leu Asp Ser Pro Leu1280 1285 1290gtg ttg ggc tac cca agc aaa ccg att ggg ctg ttc ata aga cgt 3924Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly Leu Phe Ile Arg Arg1295 1300 1305tca atc atc ttc aga tct gat tcc aat gga gaa gat ctt gaa ggt 3969Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly1310 1315 1320tat gca ggt gca ggc ctc tac gac agt gta cca atg gac gag gaa 4014Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Glu1325 1330 1335gac caa gtc gtg ctc gat tac aca aca gat cct ctg atc act gac 4059Asp Gln Val Val Leu Asp Tyr Thr Thr Asp Pro Leu Ile Thr Asp1340 1345 1350ttg agc ttc cag aaa aag gtt ctc tca gac att gca cgc gct gga 4104Leu Ser Phe Gln Lys Lys Val Leu Ser Asp Ile Ala Arg Ala Gly1355 1360 1365
gat gcc att gag aaa ctc tat gga act gca cag gac att gaa ggt 4149Asp Ala Ile Glu Lys Leu Tyr Gly Thr Ala Gln Asp Ile Glu Gly1370 1375 1380gtg atc aga gac ggg aag crc tat gtc gtc cag aca cga cca caa 4194Val Ile Arg Asp Gly Lys Leu Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln1385 1390 1395gtg tga4200Val<210>9<211>1399<212>PRT<213>拟南芥<400>9Met Set Asn Ser Val Val His Asn Leu Leu Asn Arg Gly Leu Ile Arg1 5 10 15Pro Leu Asn Phe Glu His Gln Asn Lys Leu Asn Ser Ser Val Tyr Gln20 25 30Thr Ser Thr Ala Asn Pro Ala Leu Gly Lys Ile Gly Arg Ser Lys Leu35 40 45Tyr Gly Lys Gly Leu Lys Gln Ala Gly Arg Ser Leu Val Thr Glu Thr50 55 60Gly Gly Arg Pro Leu Ser Phe Val Pro Arg Ala Val Leu Ala Met Asp65 70 75 80Pro Gln Ala Ala Glu Lys Phe Ser Leu Asp Gly Asn Ile Asp Leu Leu85 90 95
Val Glu Val Thr Ser Thr Thr Val Arg Glu Val Asn Ile Gln Ile Ala100 105 110Tyr Thr Ser Asp Thr Leu Phe Leu His Trp Gly Ala Ile Leu Asp Asn115 120 125Lys Glu Asn Trp Val Leu Pro Ser Arg Ser Pro Asp Arg Thr Gln Asn130 135 140Phe Lys Asn Ser Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser Gly Gly Asn145 150 155 160Ser His Leu Lys Leu Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ile His Ala Ile Glu165 170 175Phe Leu Ile Phe Asp Glu Ser Arg Asn Lys Trp Tyr Lys Asn Asn Gly180 185 190Gln Asn Phe His Ile Asn Leu Pro Thr Glu Arg Asn Val Lys Gln Asn195 200 205Val Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ala Tyr Leu Arg Trp210 215 220Glu Arg Lys Gly Lys Gln Met Tyr Asn Pro Glu Lys Glu Lys Glu Glu225 230 235 240Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Arg Glu Glu Met Met Arg Gly Ala245 250 255Ser Val Glu Asp Leu Arg Ala Lys Leu Leu Lys Lys Asp Asn Ser Asn260 265 270
Glu Ser Pro Lys Ser Asn Gly Thr Ser Ser Ser Gly Arg Glu Glu Lys275 280 285Lys Lys Val Ser Lys Gln Pro Glu Arg Lys Lys Asn Tyr Asn Thr Asp290 295 300Lys Ile Gln Arg Lys Gly Arg Asp Leu Thr Lys Leu Ile Tyr Lys His305 310 315 320Val Ala Asp Phe Val Glu Pro Glu Ser Lys Ser Ser Ser Glu Pro Arg325 330 335Ser Leu Thr Thr Leu Glu Ile Tyr Ala Lys Ala Lys Glu Glu Gln Glu340 345 350Thr Thr Pro Val Phe Ser Lys Lys Thr Phe Lys Leu Glu Gly Ser Ala355 360 365Ile Leu Val Phe Val Thr Lys Leu Ser Gly Lys Thr Lys Ile His Val370 375 380Ala Thr Asp Phe Lys Glu Pro Val Thr Leu His Trp Ala Leu Ser Gln385 390 395 400Lys Gly Gly Glu Trp Leu Asp Pro Pro Ser Asp Ile Leu Pro Pro Asn405 410 415Ser Leu Pro Val Arg Gly Ala Val Asp Thr Lys Leu Thr Ile Thr Ser420 425 430Thr Asp Leu Pro Ser Pro Val Gln Thr Phe Glu Leu Glu Ile Glu Gly435 440 445
Asp Ser Tyr Lys Gly Met Pro Phe Val Leu Asn Ala Gly Glu Arg Trp450 455 460Ile Lys Asn Asn Asp Ser Asp Phe Tyr Val Asp Phe Ala Lys Glu Glu465 470 475 480Lys His Val Gln Lys Asp Tyr Gly Asp Gly Lys Gly Thr Ala Lys His485 490 495Leu Leu Asp Lys Ile Ala Asp Leu Glu Ser Glu Ala Gln Lys Ser Phe500 505 510Met His Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Val Asp Glu Ala Lys Ser515 520 525Ala Gly Gln Leu Gly Phe Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met530 535 540Ala Thr Arg Gln Leu Val Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg545 550 555 560Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asp Val565 570 575Tyr Ala Ser Tyr Pro Glu Tyr Arg Glu Leu Leu Arg Met Ile Met Ser580 585 590Thr Val Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp595 600 605Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg Lys Asn Asp Cys Lys Gly Gly Ile Met610 615 620
Glu Glu Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val625 630 635 640Val Ile Cys Gln Ala Leu Met Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Leu645 650 655Ser Val Tyr Trp Lys Thr Leu Asn Asp Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg660 665 670Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Gly675 680 685Glu Gln Lys Asp Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly His Tyr Met Arg Thr690 695 700Leu Lys Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Gln Asn705 710 715 720Cys Met Gly Tyr Gln Asp Asp Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln725 730 735Ile Asn Pro Val Ser Gly Leu Pro Ser Gly Tyr Pro Asp Leu Leu Arg740 745 750Phe Val Leu Glu His Val Glu Glu Lys Asn Val Glu Pro Leu Leu Glu755 760 765Gly Leu Leu Glu Ala Arg Gln Glu Leu Arg Pro Leu Leu Leu Lys Ser770 775 780His Asp Arg Leu Lys Asp Leu Leu Phe Leu Asp Ieu Ala Leu Asp Ser785 790 795 800
Thr Val Arg Thr Ala Ile Glu Arg Gly Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ala805 810 815Gly Pro Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu820 825 830Ala Leu Ser Ser Asp Asp Asn Glu Asp Leu Ile Tyr Cys Leu Lys Gly835 840 845Trp Gln Phe Ala Leu Asp Met Cys Lys Ser Lys Lys Asp His Trp Ala850 855 860Leu Tyr Ala Lys Ser Val Leu Asp Arg Ser Arg Leu Ala Leu Ala Ser865 870 875 880Lys Ala Glu Arg Tyr Leu Glu Ile Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu885 890 895Gly Ser Cys Leu Gly Val Asp Gln Ser Ala Val Ser Ile Phe Thr Glu900 905 910Glu Ile Ile Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ala Leu Ser Ser Leu Val Asn915 920 925Arg Leu Asp Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala Asn Leu Gly Ser Trp Gln930 935 940Val Ile Ser Pro Val Glu Val Val Gly Tyr Val Ile Val Val Asp Glu945 950 955 960Leu Leu Thr Val Gln Asn Lys Thr Tyr Asp Arg Pro Thr Ile Ile Val965 970 975
Ala Asn Arg Val Arg Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Ala Val Ala980 985 990Val Leu Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg995 1000 1005Ala Arg Asn Gly Lys Ile Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp Ser Gly1010 1015 1020Ile Leu Ser Asp Leu Gln Gly Lys Asp Gly Lys Leu Leu Ser Leu1025 1030 1035Gln Pro Thr Ser Ala Asp Val Val Tyr Lys Glu ValAsn Asp Ser1040 1045 1050Glu Leu Ser Ser Pro Ser Ser Asp Asn Leu Glu Asp Ala Pro Pro1055 1060 1065Ser Ile Ser Leu Val Lys Lys Gln Phe Ala Gly Arg Tyr Ala Ile1070 1075 1080Ser Ser Glu Glu Phe Thr Ser Asp Leu Val Gly Ala Lys Ser Arg1085 1090 1095Asn Ile Gly Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp Val Gly Ile1100 1105 1110Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val Phe Glu Lys Val Ile1115 1120 1125Ser Glu Lys Ala Asn Gln Ala Val Asn Asp Lys Leu Leu Val Leu1130 1135 1140
Lys Lys Thr Leu Asp Glu Gly Asp Gln Gly Ala Leu Lys Glu Ile1145 1150 1155Arg Gln Thr Leu Leu Gly Leu Val Ala Pro Pro Glu Leu Val Glu1160 1165 1170Glu Leu Lys Ser Thr Met Lys Ser Ser Asp Met Pro Trp Pro Gly1175 1180 1185Asp Glu Gly Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Ala Ala Ile Lys1190 1195 1200Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr1205 1210 1215Arg Lys Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu Cys Met Ala Val Leu1220 1225 1230Val Gln Glu Val Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr1235 1240 1245Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val1250 1255 1260Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr ProGly Arg1265 1270 1275Ser Leu Ser Phe Ile Cys Lys Lys Asn Asn Leu Asp Ser Pro Leu1280 1285 1290Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly Leu Phe Ile Arg Arg1295 1300 1305
Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly1310 1315 1320Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Glu1325 1330 1335Asp Gln Val Val Leu Asp Tyr Thr Thr Asp Pro Leu Ile Thr Asp1340 1345 1350Leu Set Phe Gln Lys Lys Val Leu Ser Asp Ile Ala Arg Ala Gly1355 1360 1365Asp Ala Ile Glu Lys Leu Tyr Gly Thr Ala Gln Asp Ile Glu Gly1370 1375 1380Val Ile Arg Asp Gly Lys Leu Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln1385 1390 1395Val<210>10<211>4851<212>DNA<213>马铃薯(Solanum tuberosum)<220>
<221>CDS<222>(105)..(4499)<223>
<300>
<308>EMBL/Y09533<309>1998-07-30<400>10
catcttcatc gaatttctcg aagcttcttc gctaatttcc tggtttcttc actcaaaatc 60gacgtttcta gctgaacttg agtgaattaa gccagtggga ggat atg agt aat tcc 116Met Ser Asn Ser1tta ggg aat aac ttg ctg tac cag gga ttc cta acc tca aca gtg ttg164Leu Gly Asn Asn Leu Leu Tyr Gln Gly Phe Leu Thr Ser Thr Val Leu5 10 15 20gaa cat aaa agt aga atc agt cct cct tgt gtt gga ggc aat tct ttg212Glu His Lys Ser Arg Ile Ser Pro Pro Cys Val Gly Gly Asn Ser Leu25 30 35ttt caa caa caa gtg atc tcg aaa tca cct tta tca act gag ttt cga260Phe Gln Gln Gln Val Ile Ser Lys Ser Pro Leu Ser Thr Glu Phe Arg40 45 50ggt aac agg tta aag gtg cag aaa aag aaa ata cct atg gaa aag aag308Gly Asn Arg Leu Lys Val Gln Lys Lys Lys Ile Pro Met Glu Lys Lys55 60 65cgt gct ttt tct agt tct cct cat gct gta ctt acc act gat acc tct356Arg Ala Phe Ser Ser Ser Pro His Ala Val Leu Thr Thr Asp Thr Ser70 75 80tct gag cta gca gaa aag ttc agt cta ggg ggg aat att gag cta cag404Ser Glu Leu Ala Glu Lys Phe Ser Leu Gly Gly Asn Ile Glu Leu Gln85 90 95 100gtt gat gtt agg cct ccc act tca ggt gat gtg tcc ttt gtg gat ttt452Val Asp Val Arg Pro Pro Thr Ser Gly Asp Val Ser Phe Val Asp Phe105 110 115caa gta aca aat ggt agt gat aaa ctg ttt ttg cac tgg ggg gca gta500Gln Val Thr Asn Gly Ser Asp Lys Leu Phe Leu His Trp Gly Ala Val120 125 130aaa ttc ggg aaa gaa aca tgg tct ctt ccg aat gat cgt cca gat ggg548Lys Phe Gly Lys Glu Thr Trp Ser Leu Pro Asn Asp Arg Pro Asp Gly135 140 145acc aaa gtg tac aag aac aaa gca ctt aga act cca ttt gtt aaa tct596Thr Lys Val Tyr Lys Asn Lys Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser
150 155 160ggc tct aac tcc atc ctg aga ctg gag ata cga gac act gct atc gaa644Gly Ser Asn Ser Ile Leu Arg Leu Glu Ile Arg Asp Thr Ala Ile Glu165 170 175 180gct att gag ttt ctc ata tac gat gaa gcc cac gat aaa tgg ata aag692Ala Ile Glu Phe Leu Ile Tyr Asp Glu Ala His Asp Lys Trp Ile Lys185 190 195aat aat ggt ggt aat ttt cgt gtc aaa ttg tca aga aaa gag ata cga740Asn Asn Gly Gly Asn Phe Arg Val Lys Leu Ser Arg Lys Glu Ile Arg200 205 210ggc cca gat gtt tct gtt cct gag gag ctt gta cag atc caa tca tat788Gly Pro Asp Val Ser Val Pro Glu Glu Leu Val Gln Ile Gln Ser Tyr215 220 225ttg agg tgg gag agg aag gga aaa cag aat tac ccc cct gag aaa gag836Leu Arg Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Asn Tyr Pro Pro Glu Lys Glu230 235 240aag gag gaa tat gag gct gct cga act gtg cta cag gag gaa ata gct884Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Val Leu Gln Glu Glu Ile Ala245 250 255 260cgt ggt gct tcc ata cag gac att cga gca agg cta aca aaa act aat932Arg Gly Ala Ser Ile Gln Asp Ile Arg Ala Arg Leu Thr Lys Thr Asn265 270 275gat aaa agt caa agc aaa gaa gag cct ctt cat gta aca aag agt gat980Asp Lys Ser Gln Ser Lys Glu Glu Pro Leu His Val Thr Lys Ser Asp280 285 290ata cct gat gac ctt gcc caa gca caa gct tac att agg tgg gag aaa1028Ile Pro Asp Asp Leu Ala Gln Ala Gln Ala Tyr Ile Arg Trp Glu Lys295 300 305gca gga aag ccg aac tat cct cca gaa aag caa att gaa gaa ctc gaa1076Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Pro Pro Glu Lys Gln Ile Glu Glu Leu Glu310 315 320gaa gca aga aga gaa ttg caa ctt gag ctt gag aaa ggc att acc ctt1124Glu Ala Arg Arg Glu Leu Gln Leu Glu Leu Glu Lys Gly Ile Thr Leu
325 330 335 340gat gag ttg cgg aaa acg att aca aaa ggg gag ata aaa act aag gtg1172Asp Glu Leu Arg Lys Thr Ile Thr Lys Gly Glu Ile Lys Thr Lys Val345 350 355gaa aag cac ctg aaa aga agt tct ttt gcc gtt gaa aga atc caa aga1220Glu Lys His Leu Lys Arg Ser Ser Phe Ala Val Glu Arg Ile Gln Arg360 365 370aag aag aga gac ttt ggg cat ctt att aat aag tat act tcc agt cct1268Lys Lys Arg Asp Phe Gly His Leu Ile Asn Lys Tyr Thr Ser Ser Pro375 380 385gca gta caa gta caa aag gtc ttg gaa gaa cca cca gcc tta tct aaa1316Ala Val Gln Val Gln Lys Val Leu Glu Glu Pro Pro Ala Leu Ser Lys390 395 400att aag ctg tat gcc aag gag aag gag gag cag att gat gat ccg atc1364Ile Lys Leu Tyr Ala Lys Glu Lys Glu Glu Gln Ile Asp Asp Pro Ile405 410 415 420cta aat aaa aag atc ttt aag gtc gat gat ggg gag cta ctg gta ctg1412Leu Asn Lys Lys Ile Phe Lys Val Asp Asp Gly Glu Leu Leu Val Leu425 430 435gta gca aag tcc tct ggg aag aca aaa gta cat cta gct aca gat ctg1460Val Ala Lys Ser Ser Gly Lys Thr Lys Val His Leu Ala Thr Asp Leu440 445 450aat cag cca att act ctt cac tgg gca tta tcc aaa agt cct gga gag1508Asn Gln Pro Ile Thr Leu His Trp Ala Leu Ser Lys Ser Pro Gly Glu455 460 465tgg atg gta cca cct tca agc ata ttg cct cct ggg tca att att tta1556Trp Met Val Pro Pro Ser Ser Ile Leu Pro Pro Gly Ser Ile Ile Leu470 475 480gac aag gct gcc gaa aca cct ttt tca gcc agt tct tct gat ggt cta1604Asp Lys Ala Ala Glu Thr Pro Phe Ser Ala Ser Ser Ser Asp Gly Leu485 490 495 500act tct aag gta caa tct ttg gat ata gta att gaa gat ggc aat ttt1652Thr Ser Lys Val Gln Ser Leu Asp Ile Val Ile Glu Asp Gly Asn Phe
505 510 515gtg ggg atg cca ttt gtt ctt ttg tct ggt gaa aaa tgg att aag aac1700Val Gly Met Pro Phe Val Leu Leu Ser Gly Glu Lys Trp Ile Lys Asn520 525 530caa ggg tcg gat ttc tat gtt ggc ttc agt gct gca tcc aaa tta gca1748Gln Gly Ser Asp Phe Tyr Val Gly Phe Ser Ala Ala Ser Lys Leu Ala535 540 545ctc aag gct gct ggg gat ggc agt gga act gca aag tct tta ctg gat1796Leu Lys Ala Ala Gly Asp Gly Ser Gly Thr Ala Lys Ser Leu Leu Asp550 555 560aaa ata gca gat atg gaa agt gag gct cag aag tca ttt atg cac cgg1844Lys Ile Ala Asp Met Glu Ser Glu Ala Gln Lys Ser Phe Met His Arg565 570 575 580ttt aat att gca gct gac ttg ata gaa gat gcc act agt gct ggt gaa1892Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Ile Glu Asp Ala Thr Ser Ala Gly Glu585 590 595ctt ggt ttt gct gga att ctt gta tgg atg agg ttc atg gct aca agg1940Leu Gly Phe Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met Ala Thr Arg600 605 610caa ctg ata tgg aac aaa aac tat aac gta aaa cca cgt gaa ata agc1988Gln Leu Ile Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser615 620 625aag gct cag gac aga ctt aca gac ttg ttg cag aat gct ttc acc agt2036Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asn Ala Phe Thr Ser630 635 640cac cct cag tac cgt gaa att ttg cgg atg att atg tca act gtt gga2084His Pro Gln Tyr Arg Glu ILe Leu Arg Met Ile Met Ser Thr Val Gly645 650 655 660cgt gga ggt gaa ggg gat gta gga cag cga att agg gat gaa att ttg2132Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu665 670 675gtc atc cag agg aac aat gac tgc aag ggt ggt atg atg caa gaa tgg2180Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met Met Gln Glu Trp
680 685 690cat cag aaa ttg cat aat aat act agt cct gat gat gtt gtg atc tgt2228His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile Cys695 700 705cag gca tta att gac tac atc aag agt gat ttt gat ctt ggt gtt tat2276Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Leu Gly Val Tyr710 715 720tgg aaa acc ctg aat gag aac gga ata aca aaa gag cgt ctt ttg agt2324Trp Lys Thr Leu Asn Glu Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser725 730 735 740tat gac cgt gct atc cat tct gaa cca aat ttt aga gga gat caa aag2372Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Gly Asp Gln Lys745 750 755ggt ggt ctt ttg cgt gat tta ggt cac tat atg aga aca ttg aag gca2420Gly Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly His Tyr Met Arg Thr Leu Lys Ala760 765 770gtt cat tca ggt gca gat ctt gag tct gct att gca aac tgc atg ggc2468Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ala Asn Cys Met Gly775 780 785tac aaa act gag gga gaa ggc ttt atg gtt gga gtc cag ata aat cct2516Tyr Lys Thr Glu Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn Pro790 795 800gta tca ggc ttg cca tct ggc ttt cag gac ctc ctc cat ttt gtc tta2564Val Ser Gly Leu Pro Ser Gly Phe Gln Asp Leu Leu His Phe Val Leu805 810 815 820gac cat gtg gaa gat aaa aat gtg gaa act ctt ctt gag aga ttg cta2612Asp His Val Glu Asp Lys Asn Val Glu Thr Leu Leu Glu Arg Leu Leu825 830 835gag gct cgt gag gag ctt agg ccc ttg ctt ctc aaa cca aac aac cgt2660Glu Ala Arg Glu Glu Leu Arg Pro Leu Leu Leu Lys Pro Asn Asn Arg840 845 850cta aag gat ctg ctg ttt ttg gac ata gca ctt gat tct aca gtt aga2708Leu Lys Asp Leu Leu Phe Leu Asp Ile Ala Leu Asp Ser Thr Val Arg
855 860 865aca gca gta gaa agg gga tat gaa gaa ttg aac aac gct aat cct gag2756Thr Ala Val Glu Arg Gly Tyr Glu Glu Leu Asn Asn Ala Asn Pro Glu870 875 880aaa atc atg tac ttc atc tcc ctc gtt ctt gaa aat ctc gca ctc tct2804Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser885 890 895 900gtg gac gat aat gaa gat ctt gtt tat tgc ttg aag gga tgg aat caa2852Val Asp Asp Asn Glu Asp Leu Val Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asn Gln905 910 915gct ctt tca atg tcc aat ggt ggg gac aac cat tgg gct tta ttt gca2900Ala Leu Ser Met Ser Asn Gly Gly Asp Asn His Trp Ala Leu Phe Ala920 925 930aaa gct gtg ctt gac aga acc cgt ctt gca ctt gca agc aag gca gag2948Lys Ala Val Leu Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala Ser Lys Ala Glu935 940 945tgg tac cat cac tta ttg cag cca tct gcc gaa tat cta gga tca ata2996Trp Tyr His His Leu Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser Ile950 955 960ctt ggg gtg gac caa tgg gct ttg aac ata ttt act gaa gaa att ata3044Leu Gly Val Asp Gln Trp Ala Leu Asn Ile Phe Thr Glu Glu Ile Ile965 970 975 980cgt gct gga tca gca gct tca tta tcc tct ctt ctt aat aga ctc gat3092Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ser Leu Ser Ser Leu Leu Asn Arg Leu Asp985 990 995ccc gtg ctt cgg aaa act gca aat cta gga agt tgg cag att atc 3137Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala Asn Leu Gly Ser Trp Gln Ile Ile1000 1005 1010agt cca gtt gaa gcc gtt gga tat gtt gtc gtt gtg gat gag ttg 3182Ser Pro Val Glu Ala Val Gly Tyr Val Val Val Val Asp Glu Leu1015 1020 1025ctt tca gtt cag aat gaa atc tac gag aag ccc acg atc tta gta 3227Leu Ser Val Gln Asn Glu Ile Tyr Glu Lys Pro Thr Ile Leu Val
1030 1035 1040gca aaa tct gtt aaa gga gag gag gaa att cct gat ggt gct gtt 3272Ala Lys Ser Val Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Ala Val1045 1050 1055gcc ctg ata aca cca gac atg cca gat gtt ctt tca cat gtt tct 3317Ala Leu Ile Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser1060 1065 1070gtt cga gct aga aat ggg aag gtt tgc ttt gct aca tgc ttt gat 3362Val Arg Ala Arg Asn Gly Lys Val Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp1075 1080 1085ccc aat ata ttg gct gac ctc caa gca aag gaa gga agg att ttg 3407Pro Asn Ile Leu Ala Asp Leu Gln Ala Lys Glu Gly Arg Ile Leu1090 1095 1100ctc tta aag cct aca cct tca gac ata atc tat agt gag gtg aat 3452Leu Leu Lys Pro Thr Pro Ser Asp Ile Ile Tyr Ser Glu Val Asn1105 1110 1115gag att gag ctc eaa agt tca agt aac ttg gta gaa gct gaa act 3497Glu Ile Glu Leu Gln Ser Ser Ser Asn Leu Val Glu Ala Glu Thr1120 1125 1130tca gca aca ctt aga ttg gtg aaa aag caa ttt ggt ggt tgt tac 3542Ser Ala Thr Leu Arg Leu Val Lys Lys Gln Phe Gly Gly Cys Tyr1135 1140 1145gca ata tca gca gat gaa ttc aca agt gaa atg gtt gga gct aaa 3587Ala Ile Ser Ala Asp Glu Phe Thr Ser Glu Met Val Gly Ala Lys1150 1155 1160tca cgt aat att gca tat ctg aaa gga aaa gtg cct tcc tcg gtg 3632Ser Arg Asn Ile Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Ser Val1165 1170 1175gga att cct acg tca gta gct ctt cca ttt gga gtc ttt gag aaa 3677Gly Ile Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val Phe Glu Lys1180 1185 1190gta ctt tca gac gac ata aat cag gga gtg gca aaa gag ttg caa 3722Val Leu Ser Asp Asp Ile Asn Gln Gly Val Ala Lys Glu Leu Gln
1195 1200 1205att ctg atg aaa aaa cta tct gaa gga gac ttc agc gct ctt ggt 3767Ile Leu Met Lys Lys Leu Ser Glu Gly Asp Phe Ser Ala Leu Gly1210 1215 1220gaa att cgc aca acg gtt tta gat ctt tca gca cca gct caa ttg 3812Glu Ile Arg Thr Thr Val Leu Asp Leu Ser Ala Pro Ala Gln Leu1225 1230 1235gtc aaa gag ctg aag gag aag atg cag ggt tct ggc atg cct tgg 3857Val Lys Glu Leu Lys Glu Lys Met Gln Gly Ser Gly Met Pro Trp1240 1245 1250cct ggt gat gaa ggt cca aag cgg tgg gaa caa gca tgg atg gcc 3902Pro Gly Asp Glu Gly Pro Lys Arg Trp Glu Gln Ala Trp Met Ala1255 1260 1265ata aaa aag gtg tgg gct tca aaa tgg aat gag aga gca tac ttc 3947Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe1270 1275 1280agc aca agg aag gtg aaa ctg gat cat gac tat ctg tgc atg gct 3992Ser Thr Arg Lys Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu Cys Met Ala1285 1290 1295gtc ctt gtt caa gaa ata ata aat gct gat tat gca ttt gtc att 4037Val Leu Val Gln Glu Ile Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile1300 1305 1310cac aca acc aac cca tct tcc gga gac gac tca gaa ata tat gcc 4082His Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Asp Ser Glu Ile Tyr Ala1315 1320 1325gag gtg gtc agg ggc ctt ggg gaa aca ctt gtt gga gct tat cca 4127Glu Val Val Arg Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro1330 1335 1340gga cgt gct ttg agt ttt atc tgc aag aaa aag gat ctc aac tct 4172Gly Arg Ala Leu Ser Phe Ile Cys Lys Lys Lys Asp Leu Asn Ser1345 1350 1355cct caa gtg tta ggt tac cca agc aaa ccg atc ggc ctt ttc ata 4217Pro Gln Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly Leu Phe Ile
1360 1365 1170aaa aga tct atc atc ttc cga tct gat tcc aat ggg gaa gat ttg 4262Lys Arg Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu1375 1380 1385gaa ggt tat gcc ggt gct ggc ctc tac gac agt gta cca atg gat 4307Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp1390 1395 1400gag gag gaa aaa gtt gta att gat tac tct tcc gac cca ttg ata 4352Glu Glu Glu Lys Val Val Ile Asp Tyr Ser Ser Asp Pro Leu Ile1405 1410 1415act gat ggt aac ttc cgc cag aca atc ctg tce aac att gct cgt 4397Thr Asp Gly Asn Phe Arg Gln Thr Ile Leu Ser Asn Ile Ala Arg1420 1425 1430gct gga cat gct atc gag gag cta tat ggc tct cct caa gac att 4442Ala Gly His Ala Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Ser Pro Gln Asp Ile1435 1440 1445gag ggt gta gtg agg gat gga aag att tat gtc gtt cag aca aga 4487Glu Gly Val Val Arg Asp Gly Lys Ile Tyr Val Val Gln Thr Arg1450 1455 1460cca cag atg tga ttatattctc gttgtatgtt gttcagagaa gaccacagat4539Pro Gln Metgtgatcatat tctcattgta tcagatctgt gaccacttac ctgatacctc ccatgaagtt 4599acctgtatga ttatacgtga tccaaagcca tcacatcatg ttcaccttca gctattggag 4659gagaagtgag aagtaggaat tgcaatatga ggaataataa gaaaaacttt gtaaaagcta 4719aattagctgg gtatgatata gggagaaatg tgtaaacatt gtactatata tagtatatac 4779acacgcatta tgtattgcat tatgcactga ataatatcgc agcatcaaag aagaaatcct 4839ttgggtggtt tc 4851<210>11
<211>1464<212>PRT<213>马铃薯<400>11Met Ser Asn Ser Leu Gly Asn Asn Leu Leu Tyr Gln Gly Phe Leu Thr1 5 10 15Ser Thr Val Leu Glu His Lys Ser Arg Ile Ser Pro Pro Cys Val Gly20 25 30Gly Asn Ser Leu Phe Gln Gln Gln Val Ile Ser Lys Ser Pro Leu Ser35 40 45Thr Glu Phe Arg Gly Asn Arg Leu Lys Val Gln Lys Lys Lys Ile Pro50 55 60Met Glu Lys Lys Arg Ala Phe Set Ser Ser Pro His Ala Val Leu Thr65 70 75 80Thr Asp Thr Ser Ser Glu Leu Ala Glu Lys Phe Ser Leu Gly Gly Asn85 90 95Ile Glu Leu Gln Val Asp Val Arg Pro Pro Thr Ser Gly Asp Val Ser100 105 110Phe Val Asp Phe Gln Val Thr Asn Gly Ser Asp Lys Leu Phe Leu His115 120 125Trp Gly Ala Val Lys Phe Gly Lys Glu Thr Trp Ser Leu Pro Asn Asp130 135 140Arg Pro Asp Gly Thr Lys Val Tyr Lys Asn Lys Ala Leu Arg Thr Pro145 150 155 160
Phe Val Lys Ser Gly Ser Asn Ser Ile Leu Arg Leu Glu Ile Arg Asp165 170 175Thr Ala Ile Glu Ala Ile Glu Phe Leu Ile Tyr Asp Glu Ala His Asp180 185 190Lys Trp Ile Lys Asn Asn Gly Gly Asn Phe Arg Val Lys Leu Ser Arg195 200 205Lys Glu Ile Arg Gly Pro Asp Val Ser Val Pro Glu Glu Leu Val Gln210 215 220Ile Gln Ser Tyr Leu Arg Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Asn Tyr Pro225 230 235 240Pro Glu Lys Glu Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Val Leu Gln245 250 255Glu Glu Ile Ala Arg Gly Ala Ser Ile Gln Asp Ile Arg Ala Arg Leu260 265 270Thr Lys Thr Asn Asp Lys Ser Gln Ser Lys Glu Glu Pro Leu His Val275 280 285Thr Lys Ser Asp Ile Pro Asp Asp Leu Ala Gln Ala Gln Ala Tyr Ile290 295 300Arg Trp Glu Lys Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Pro Pro Glu Lys Gln Ile305 310 315 320Glu Glu Leu Glu Glu Ala Arg Arg Glu Leu Gln Leu Glu Leu Glu Lys325 330 335
Gly Ile Thr Leu Asp Glu Leu Arg Lys Thr Ile Thr Lys Gly Glu Ile340 345 350Lys Thr Lys Val Glu Lys His Leu Lys Arg Ser Ser Phe Ala Val Glu355 360 365Arg Ile Gln Arg Lys Lys Arg Asp Phe Gly His Leu Ile Asn Lys Tyr370 375 380Thr Ser Ser Pro Ala Val Gln Val Gln Lys Val Leu Glu Glu Pro Pro385 390 395 400Ala Leu Ser Lys Ile Lys Leu Tyr Ala Lys Glu Lys Glu Glu Gln Ile405 410 415Asp Asp Pro Ile Leu Asn Lys Lys Ile Phe Lys Val Asp Asp Gly Glu420 425 430Leu Leu Val Leu Val Ala Lys Ser Ser Gly Lys Thr Lys Val His Leu435 440 445Ala Thr Asp Leu Asn Gln Pro Ile Thr Leu His Trp Ala Leu Ser Lys450 455 460Ser Pro Gly Glu Trp Met Val Pro Pro Ser Ser Ile Leu Pro Pro Gly465 470 475 480Ser Ile Ile Leu Asp Lys Ala Ala Glu Thr Pro Phe Ser Ala Ser Ser485 490 495Ser Asp Gly Leu Thr Ser Lys Val Gln Ser Leu Asp Ile Val Ile Glu500 505 510
Asp Gly Asn Phe Val Gly Met Pro Phe Val Leu Leu Ser Gly Glu Lys515 520 525Trp Ile Lys Asn Gln Gly Ser Asp Phe Tyr Val Gly Phe Ser Ala Ala530 535 540Ser Lys Leu Ala Leu Lys Ala Ala Gly Asp Gly Ser Gly Thr Ala Lys545 550 555 560Ser Leu Leu Asp Lys Ile Ala Asp Met Glu Ser Glu Ala Gln Lys Ser565 570 575Phe Met His Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Ile Glu Asp Ala Thr580 585 590Ser Ala Gly Glu Leu Gly Phe Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe595 600 605Met Ala Thr Arg Gln Leu Ile Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro610 615 620Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asn625 630 635 640Ala Phe Thr Ser His Pro Gln Tyr Arg Glu Ile Leu Arg Met Ile Met645 650 655Ser Thr Val Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg660 665 670Asp Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met675 680 685
Met Gln Glu Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp690 695 700Val Val Ile Cys Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp705 710 715 720Leu Gly Val Tyr Trp Lys Thr Leu Asn Glu Asn Gly Ile Thr Lys Glu725 730 735Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg740 745 750Gly Asp Gln Lys Gly Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly His Tyr Met Arg755 760 765Thr Leu Lys Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ala770 775 780Asn Cys Met Gly Tyr Lys Thr Glu Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val785 790 795 800Gln Ile Asn Pro Val Ser Gly Leu Pro Ser Gly Phe Gln Asp Leu Leu805 810 815His Phe Val Leu Asp His Val Glu Asp Lys Asn Val Glu Thr Leu Leu820 825 830Glu Arg Leu Leu Glu Ala Arg Glu Glu Leu Arg Pro Leu Leu Leu Lys835 840 845Pro Asn Asn Arg Leu Lys Asp Leu Leu Phe Leu Asp Ile Ala Leu AspR50 855 860
Ser Thr Val Arg Thr Ala Val Glu Arg Gly Tyr Glu Glu Leu Asn Asn865 870 875 880Ala Asn Pro Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn885 890 895Leu Ala Leu Ser Val Asp Asp Asn Glu Asp Leu Val Tyr Cys Leu Lys900 905 910Gly Trp Asn Gln Ala Leu Ser Met Ser Asn Gly Gly Asp Asn His Trp915 920 925Ala Leu Phe Ala Lys Ala Val Leu Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala930 935 940Ser Lys Ala Glu Trp Tyr His His Leu Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr945 950 955 960Leu Gly Ser Ile Leu Gly Val Asp Gln Trp Ala Leu Asn Ile Phe Thr965 970 975Glu Glu Ile Ile Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ser Leu Ser Ser Leu Leu980 985 990Asn Arg Leu Asp Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala Asn Leu Gly Ser Trp995 1000 1005Gln Ile Ile Ser Pro Val Glu Ala Val Gly Tyr Val Val Val Val1010 1015 1020Asp Glu Leu Leu Ser Val Gln Asn Glu Ile Tyr Glu Lys Pro Thr1025 1030 1035
Ile Leu Val Ala Lys Ser Val Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp1040 1045 1050Gly Ala Val Ala Leu Ile Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser1055 1060 1065His Val Ser Val Arg Ala Arg Asn Gly Lys Val Cys Phe Ala Thr1070 1075 1080Cys Phe Asp Pro Asn Ile Leu Ala Asp Leu Gln Ala Lys Glu Gly1085 1090 1095Arg Ile Leu Leu Leu Lys Pro Thr Pro Ser Asp Ile Ile Tyr Ser1100 1105 1110Glu Val Asn Glu Ile Glu Leu Gln Ser Ser Ser Asn Leu Val Glu1115 1120 1125Ala Glu Thr Ser Ala Thr Leu Arg Leu Val Lys Lys Gln Phe Gly1130 1135 1140Gly Cys Tyr Ala Ile Ser Ala Asp Glu Phe Thr Ser Glu Met Val1145 1150 1155Gly Ala Lys Ser Arg Asn Ile Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro1160 1165 1170Ser Ser Val Gly Ile Pro Thr Ser Val Ala Leu Pro Phe Gly Val1175 1180 1185Phe Glu Lys Val Leu Ser Asp Asp Ile Asn Gln Gly Val Ala Lys1190 1195 1200
Glu Leu Gln Ile Leu Met Lys Lys Leu Ser Glu Gly Asp Phe Ser1205 1210 1215Ala Leu Gly Glu Ile Arg Thr Thr Val Leu Asp Leu Ser Ala Pro1220 1225 1230Ala Gln Leu Val Lys Glu Leu Lys Glu Lys Met Gln Gly Ser Gly1235 1240 1245Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu Gly Pro Lys Arg Trp Glu Gln Ala1250 1255 1260Trp Met Ala Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg1265 1270 1275Ala Tyr Phe Ser Thr Arg Lys Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu1280 1285 1290Cys Met Ala Val Leu Val Gln Glu Ile Ile Asn Ala Asp Tyr Ala1295 1300 1305Phe Val Ile His Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Asp Ser Glu1310 1315 1320Ile Tyr Ala Glu Val Val Arg Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly1325 1330 1335Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Leu Ser Phe Ile Cys Lys Lys Lys Asp1340 1345 1350Leu Asn Ser Pro Gln Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly1355 1360 1365
Leu Phe Ile Lys Arg Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly1370 1375 1380Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val1385 1390 1395Pro Met Asp Glu Glu Glu Lys Val Val Ile Asp Tyr Ser Ser Asp1400 1405 1410Pro Leu Ile Thr Asp Gly Asn Phe Arg Gln Thr Ile Leu Ser Asn1415 1420 1425Ile Ala Arg Ala Gly His Ala Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Ser Pro1430 1435 1440Gln Asp Ile Glu Gly Val Val Arg Asp Gly Lys Ile Tyr Val Val1445 1450 1455Gln Thr Arg Pro Gln Met1460<210>12<211>4576<212>DNA<213>稻<220>
<22l>CDS<222>(20)..(4393)<223>
<300>
<308>NCBI/AR400814<309>2003-12-18
<400>12cttacagata ttcgtgcag atg agc gga ttc tcc gcg gca gct gct gcg gcc 52Met Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala1 5 10gag cgg tgc gcg ctc ggc ctc ggc gtc cac gcg cgc ccc gcc tcg ccc100Glu Arg Cys Ala Leu Gly Leu Gly Val His Ala Arg Pro Ala Ser Pro15 20 25tcg ccg gcg ctg ctc ccg ccg gcg gct ctc cgc cgc ggc cgc cgt ctc148Ser Pro Ala Leu Leu Pro Pro Ala Ala Leu Arg Arg Gly Arg Arg Leu30 35 40ccc gcg gcc acc acc acc ctc gcc gtc tcc cgt cgg agc ctc ctc gcc196Pro Ala Ala Thr Thr Thr Leu Ala Val Ser Arg Arg Ser Leu Leu Ala45 50 55cct cgc gcc atc gcc gct tcc acc ggc cgc gcc tcc ccg ggc ctt gtc244Pro Arg Ala Ile Ala Ala Ser Thr Gly Arg Ala Ser Pro Gly Leu Val60 65 70 75gga agg ttc acc ctg gat gcc aac tcc gag ctt aag gtg aca ttg aac292Gly Arg Phe Thr Leu Asp Ala Asn Ser Glu Leu Lys Val Thr Leu Asn80 85 90cca gca ccg cag ggt tcg gtg gtg gag atc aat cta gag gca act aac340Pro Ala Pro Gln Gly Ser Val Val Glu Ile Asn Leu Glu Ala Thr Asn95 100 105acc agc ggc tcc ctg ata ctg cat tgg ggc gcc ctt cgc ccg gat aga388Thr Ser Gly Ser Leu Ile Leu His Trp Gly Ala Leu Arg Pro Asp Arg110 115 120gga gaa tgg ctc cta cca tcc cgg aaa cca gat ggc acg aca gtg tac436Gly Glu Trp Leu Leu Pro Ser Arg Lys Pro Asp Gly Thr Thr Val Tyr125 130 135aag aac agg gct ctt agg acg cct ttt ata aag tca ggt gat aac tcc484Lys Asn Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Ile Lys Ser Gly Asp Asn Ser140 145 150 155acg ctg aaa att gag ata gat gat cct gca gtg caa gcc att gag ttc532Thr Leu Lys Ile Glu Ile Asp Asp Pro Ala Val Gln Ala Ile Glu Phe160 165 170
ctc ata ttt gat gag gca cgg aat aat tgg tac aaa aac aat ggc cag580Leu Ile Phe Asp Glu Ala Arg Asn Asn Trp Tyr Lys Asn Asn Gly Gln175 180 185aat ttc caa att cag cta caa gcg agc caa tat caa ggg cag ggt aca628Asn Phe Gln Ile Gln Leu Gln Ala Ser Gln Tyr Gln Gly Gln Gly Thr190 195 200tct act gct act tct tct act gtg gtt cca gag gat ctt gtg cag ata676Ser Thr Ala Thr Ser Ser Thr Val Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile205 210 215caa tca tat ctt cgg tgg gaa aga aag gga aag cag tca tat aca cct724Gln Ser Tyr Leu Arg Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Ser Tyr Thr Pro220 225 230 235gag caa gag aag gag gag tat gaa gca gca cga act gag ttg ata gag772Glu Gln Glu Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Ile Glu240 245 250gaa tta aac aag ggt gtt tct ttg gag aag cta cga gcg aaa ctg aca820Glu Leu Asn Lys Gly Val Ser Leu Glu Lys Leu Arg Ala Lys Leu Thr255 260 265aag aca cct gag gca act gat agt aat gct cct gca tct gaa agc act868Lys Thr Pro Glu Ala Thr Asp Ser Asn Ala Pro Ala Ser Glu Ser Thr270 275 280gtg act act aaa gtc cca gag gaa ctt gta caa gtc cag gct tac ata916Val Thr Thr Lys Val Pro Glu Glu Leu Val Gln Val Gln Ala Tyr Ile285 290 295agg tgg gag aaa gca ggc aag cca aat tat gcc cca gag aag caa ttg964Arg Trp Glu Lys Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Ala Pro Glu Lys Gln Leu300 305 310 315gtc gag ttt gag gaa gca agg aag gaa ctg cag tct gag ttg gat aag1012Val Glu Phe Glu Glu Ala Arg Lys Glu Leu Gln Ser Glu Leu Asp Lys320 325 330ggg acc tca gtt gag cag ttg agg aac aaa att ttg aaa ggg aac att1060Gly Thr Ser Val Glu Gln Leu Arg Asn Lys Ile Leu Lys Gly Asn Ile335 340 345
gag aca aaa gtt tcc aag cag ctg aag gac aaa aaa tac ttt tct gtg1108Glu Thr Lys Val Ser Lys Gln Leu Lys Asp Lys Lys Tyr Phe Ser Val350 355 360gaa aga att cag cgg aaa aaa cga gat att gtg caa cta ctt aaa aaa1156Glu Arg Ile Gln Arg Lys Lys Arg Asp Ile Val Gln Leu Leu Lys Lys365 370 375cac aag cct act gtt atg gaa gcg caa gta gag act cct aaa caa ccc1204His Lys Pro Thr Val Met Glu Ala Gln Val Glu Thr Pro Lys Gln Pro380 385 390 395act gtt ctg gat ctc ttc aca aag tca tta cag gag cag gat aac tgt1252Thr Val Leu Asp Leu Phe Thr Lys Ser Leu Gln Glu Gln Asp Asn Cys400 405 410gag gtt cta agc aga aag ctt ttc aag ttc ggt gac aag gag ata ctg1300Glu Val Leu Ser Arg Lys Leu Phe Lys Phe Gly Asp Lys Glu Ile Leu415 420 425gga att acc acc gtt gct cta gga aaa acc aaa gtt cac ttg gca aca1348Gly Ile Thr Thr Val Ala Leu Gly Lys Thr Lys Val His Leu Ala Thr430 435 440aac tat atg gag cca ctt ata ctt cac tgg gcg ttg tca aaa gag aat1396Asn Tyr Met Glu Pro Leu Ile Leu His Trp Ala Leu Ser Lys Glu Asn445 450 455gga gag tgg cag gca cct ccc tca agc ata ttg cca tct ggt tca tca1444Gly Glu Trp Gln Ala Pro Pro Ser Ser Ile Leu Pro Ser Gly Ser Ser460 465 470 475ttg cta gac aag gca tgt gaa act tca ttc agt gaa tat gaa ttg aat1492Leu Leu Asp Lys Ala Cys Glu Thr Ser Phe Ser Glu Tyr Glu Leu Asn480 485 490ggt ctg cat tgt cag gtt gtt gag atc gag ctt gac gat ggt gga tac1540Gly Leu His Cys Gln Val Val Glu Ile Glu Leu Asp Asp Gly Gly Tyr495 500 505aag cgg atg ccc ttt gtt ctc cgg tct ggt gaa aca tgg atg aaa aat1588Lys Arg Met Pro Phe Val Leu Arg Ser Gly Glu Thr Trp Met Lys Asn510 515 520
aat ggc tct gac ttt tac ttg gat ttc agc acc aaa gtt gca aaa aat1636Asn Gly Ser Asp Phe Tyr Leu Asp Phe Ser Thr Lys Val Ala Lys Asn525 530 535aca aag gat act ggt gat gct ggt aaa ggc act gct gag gcc ttg ctt1684Thr Lys Asp Thr Gly Asp Ala Gly Lys Gly Thr Ala Glu Ala Leu Leu540 545 550 555gaa aga ata gca gat cta gag gaa gat gcc caa cga tct ctt atg cac1732Glu Arg Ile Ala Asp Leu Glu Glu Asp Ala Gln Arg Ser Leu Met His560 565 570aga ttc aat att gca gca gat cta gtt gac caa gcg aga gat aat gga1780Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Val Asp Gln Ala Arg Asp Asn Gly575 580 585tta ttg ggt att att gga att ttt gtt tgg att ggg ttc atg gct aca1828Leu Leu Gly Ile Ile Gly Ile Phe Val Trp Ile Gly Phe Met Ala Thr590 595 600agg caa cta ata tgg aac aag aac tac aat gtg aag cca cgt gag ata1876Arg Gln Leu Ile Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile605 610 615agc aaa gcc caa gat agg ttt aca gat gat ctt gag aat atg tac aga1924Ser Lys Ala Gln Asp Arg Phe Thr Asp Asp Leu Glu Asn Met Tyr Arg620 625 630 635act tac cca caa tat cag gag atc tta aga atg ata atg tct gct gtt1972Thr Tyr Pro Gln Tyr Gln Glu Ile Leu Arg Met Ile Met Ser Ala Val640 645 650ggt cgg gga ggt gaa ggt gat gtt ggt caa cgc att cgt gat gag ata2020Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile655 660 665tta gta atc cag aga aat aat gac tgc aaa ggt gga atg atg gag gag2068Leu Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu670 675 680tgg cac cag aaa ctg cac aac aat aca agc cca gat gat gta gtg atc2116Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile685 690 695
tgc cag gcc cta ctt gat tat atc aag agt gat ttt gat act ggt gtt2164Cys Gln Ala Leu Leu Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Thr Gly Val700 705 710 715tac tgg gac acc ttg aaa aaa ggt ggt ata aca aaa gag cgt cta ttg2212Tyr Trp Asp Thr Leu Lys Lys Gly Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu720 725 730agc tat gat cga ccg att cat tca gag cca aat ttc agg agt gaa cag2260Ser Tyr Asp Arg Pro Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Ser Glu Gln735 740 745aaa gat agc tta ctc cgt gac ttg ggc aat tat atg aga agc ctc aag2308Lys Asp Ser Leu Leu Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Ser Leu Lys750 755 760gca gtg cat tct ggt gct gat ctt gaa tct gct ata gca act tgc atg2356Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ala Thr Cys Met765 770 775gga tac aaa tca gag ggt gaa ggt ttc atg gtt ggt gtt cag att aat2404Gly Tyr Lys Ser Glu Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn780 785 790 795cca gtg aag ggt ttg cca tct gga ttt cct aaa ttg ctt gaa ttt ata2452Pro Val Lys Gly Leu Pro Ser Gly Phe Pro Lys Leu Leu Glu Phe Ile800 805 810ctt gac cat gtt gag gat aaa tca gca aga cca ctt ctt gga ggg tta2500Leu Asp His Val Glu Asp Lys Ser Ala Arg Pro Leu Leu Gly Gly Leu815 820 825ttg gag gct cga gct gaa cta cac cct ttg ctc ctt ggc tct cct gaa2548Leu Glu Ala Arg Ala Glu Leu His Pro Leu Leu Leu Gly Ser Pro Glu830 835 840cgc atg aag gat ctt atc ttt tta gac att gct ctt gat tct act ttc2596Arg Met Lys Asp Leu Ile Phe Leu Asp Ile Ala Leu Asp Ser Thr Phe845 850 855agg aca gca gtc gaa aga tca tat gag gag ctc aat aat gta gaa cca2644Arg Thr Ala Val Glu Arg Ser Tyr Glu Glu Leu Asn Asn Val Glu Pro860 865 870 875
gag aaa att atg tac ttc atc agt ctt gtc ctt gaa aat ctt gct tta2692Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu880 885 890tcc acc gac gac aat gaa gat atc cta tat tgc tta aag gga tgg aat2740Ser Thr Asp Asp Asn Glu Asp Ile Leu Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asn895 900 905caa gcc gtg gaa atg gct aaa cag aaa aac aac caa tgg gct ctc tat2788Gln Ala Val Glu Met Ala Lys Gln Lys Asn Asn Gln Trp Ala Leu Tyr910 915 920gct aaa gca ttt ctg gac aga acc aga ctt gcc ctt gca agc aag gga2836Ala Lys Ala Phe Leu Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala Ser Lys Gly925 930 935gaa caa tac tat aat ttg atg cag ccc tca gct gaa tat ctt ggc tcg 2884Glu Gln Tyr Tyr Asn Leu Met Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser940 945 950 955tta ctt aac att gac caa tgg gca gtt aat atc ttt aca gaa gaa att2932Leu Leu Asn Ile Asp Gln Trp Ala Val Asn Ile Phe Thr Glu Glu Ile960 965 970att cgt ggt gga tca gct gct acc ctg tct gct ctt ctg aat cgg att2980Ile Arg Gly Gly Ser Ala Ala Thr Leu Ser Ala Leu Leu Asn Arg Ile975 980 985gat cct gtt ctt agg aat gtt gca cag ctt gga agt tgg cag gtt ata 3028Asp Pro Val Leu Arg Asn Val Ala Gln Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile990 995 1000age cca gtt gaa gta tca ggt tac att gta gtg gtt gat gaa ttg 3073Ser Pro Val Glu Val Ser Gly Tyr Ile Val Val Val Asp Glu Leu1005 1010 1015ctt gct gtt caa aac aaa tcc tat gat aaa cca act atc ctt gtg 3118Leu Ala Val Gln Asn Lys Ser Tyr Asp Lys Pro Thr Ile Leu Val1020 1025 1030gca aag agt gtc aag gga gag gaa gaa ata cca gat gga gtt gtt 3163Ala Lys Ser Val Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Val Val1035 1040 1045
ggt gtt att aca cct gat atg cca gat gtt ctc tcc cat gta tca 3208Gly Val Ile Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser1050 1055 1060gtc cga gca agg aat tgc aag gtt tta ttt gca aca tgc ttt gat 3253Val Arg Ala Arg Asn Cys Lys Val Leu Phe Ala Thr Cys Phe Asp1065 1070 1075cct aac acc ttg tct gaa ctc caa gga cat gat ggg aaa gtg ttt 3298Pro Asn Thr Leu Ser Glu Leu Gln Gly His Asp Gly Lys Val Phe1080 1085 1090tcc ttc aaa cct act tct gca gat atc acc tat agg gag att cca 3343Ser Phe Lys Pro Thr Ser Ala Asp Ile Thr Tyr Arg Glu Ile Pro1095 1100 1105gag agt gaa ctg caa tca ggt tct cta aat gca gaa gct ggc cag 3388Glu Ser Glu Leu Gln Ser Gly Ser Leu Asn Ala Glu Ala Gly Gln1110 1115 1120gca gtg cca tct gtg tca tta gtc aag aag aag ttt ctt gga aaa 3433Ala Val Pro Ser Val Ser Leu Val Lys Lys Lys Phe Leu Gly Lys1125 1130 1135tat gca ata tca gca gaa gaa ttc tct gag gaa atg gtt ggg gcc 3478Tyr Ala Ile Ser Ala Glu Glu Phe Ser Glu Glu Met Val Gly Ala1140 1145 1150aag tct cgc aac gta gca tac ctc aaa gga aaa gta ccc tca tgg 3523Lys Ser Arg Asn Val Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp1155 1160 1165gtt ggt gtc cct aca tca gtt gcg att cca ttt ggg acc ttt gag 3568Val Gly Val Pro Thr Ser Val Ala Ile Pro Phe Gly Thr Phe Glu1170 1175 1180aag gtt ttg tct gat gaa atc aat aag gaa gtc gcg caa acc ata 3613Lys Val Leu Ser Asp Glu Ile Asn Lys Glu Val Ala Gln Thr Ile1185 1190 1195caa atg ctg aag gga aaa ctt gct caa gat gat ttt agt gct cta 3658Gln Met Leu Lys Gly Lys Leu Ala Gln Asp Asp Phe Ser Ala Leu1200 1205 1210
ggc gaa ata cgg aaa act gtt ctc aat tta act gct cct act caa 3703Gly Glu Ile Arg Lys Thr Val Leu Asn Leu Thr Ala Pro Thr Gln1215 1220 1225ctg atc aag gaa ctg aag gag aag atg cta ggc tct gga atg ccc 3748Leu Ile Lys Glu Leu Lys Glu Lys Met Leu Gly Ser Gly Met Pro1230 1235 1240tgg cct gga gat gaa ggt gac caa cgt tgg gag caa gca tgg atg 3793Trp Pro Gly Asp Glu Gly Asp Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Met1245 1250 1255gca att aaa aag gtt tgg gcg tca aaa tgg aat gaa aga gca tat 3838Ala Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr1260 1265 1270ttt agc act cgt aag gtg aag ctt gat cat gac tac ctt tcc atg 3883Phe Ser Thr Arg Lys Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu Ser Met1275 1280 1285gct gta ctt gta caa gaa att gtc aat gca gac tat gcc ttt gtc 3928Ala Val Leu Val Gln Glu Ile Val Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val1290 1295 1300att cat act act aac cca tca tcg gga gat tcg tct gag ata tat 3973Ile His Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr1305 1310 1315gct gaa gtg gtg aaa ggg ctt gga gaa aca ctt gta gga gcc tat 4018Ala Glu Val Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr1320 1325 1330cct ggt cgc gcc atg agc ttt gta tgt aag aaa aac gac ctt gac 4063Pro Gly Arg Ala Met Ser Phe Val Cys Lys Lys Asn Asp Leu Asp1335 1340 1345tct ccc aag gta ctg ggt ttc cca agc aag cca att ggt gtc ttc 4108Ser Pro Lys Val Leu Gly Phe Pro Ser Lys Pro Ile Gly Val Phe1350 1355 1360ata aag aga tca atc atc ttt cgt tcg gat tcc aac ggt gag gat 4153Ile Lys Arg Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp1365 1370 1375
tta gaa ggg tat gct gga gca aga ctg tat gat agt gtc cct atg 4198Leu Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Arg Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met1380 1385 1390gat gag gaa gat gaa gtc ata gtc gac tac aac aac gga ccc ctc 4243Asp Glu Glu Asp Glu Val Ile Val Asp Tyr Asn Asn Gly Pro Leu1395 1400 1405att aca gat cag gga ttc caa aaa tcc aac ctc ccg agc att gca 4288Ile Thr Asp Gln Gly Phe Gln Lys Ser Asn Leu Pro Ser Ile Ala1410 1415 1420ccg gct ggt cat gcc att gag gag ctt tat ggg tcc cca cag gat 4333Pro Ala Gly His Ala Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Ser Pro Gln Asp1425 1430 1435gtt gag ggt gca gtg aag gaa ggg aag cta tac gta gta cag aca 4378Val Glu Gly Ala Val Lys Glu Gly Lys Leu Tyr Val Val Gln Thr1440 1445 1450aga cca cag atg taa tctatatgta tattttatag ccaagtcaat caggcaatgt 4433Arg Pro Gln Met1455tgtagagtaa gatatacggg ccgtgggaca tgtataacac gttacgccct tttttttatt 4493atttgctttc atactcacaa tacactaatt tatagggctt attttatcgc caaaaaaaaa 4553aaaaaaaaga aaaaaaaaaa aaa 4576<210>13<211>1457<212>PRT<213>稻<400>13Met Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Glu Arg Cys Ala Leu1 5 10 15Gly Leu Gly Val His Ala Arg Pro Ala Ser Pro Ser Pro Ala Leu Leu
20 25 30Pro Pro Ala Ala Leu Arg Arg Gly Arg Arg Leu Pro Ala Ala Thr Thr35 40 45Thr Leu Ala Val Ser Arg Arg Ser Leu Leu Ala Pro Arg Ala Ile Ala50 55 60Ala Ser Thr Gly Arg Ala Ser Pro Gly Leu Val Gly Arg Phe Thr Leu65 70 75 80Asp Ala Asn Ser Glu Leu Lys Val Thr Leu Asn Pro Ala Pro Gln Gly85 90 95Ser Val Val Glu Ile Asn Leu Glu Ala Thr Asn Thr Ser Gly Ser Leu100 105 110Ile Leu His Trp Gly Ala Leu Arg Pro Asp Arg Gly Glu Trp Leu Leu115 120 125Pro Ser Arg Lys Pro Asp Gly Thr Thr Val Tyr Lys Asn Arg Ala Leu130 135 140Arg Thr Pro Phe Ile Lys Ser Gly Asp Asn Ser Thr Leu Lys Ile Glu145 150 155 160Ile Asp Asp Pro Ala Val Gln Ala Ile Glu Phe Leu Ile Phe Asp Glu165 170 175Ala Arg Asn Asn Trp Tyr Lys Asn Asn Gly Gln Asn Phe Gln Ile Gln180 185 190Leu Gln Ala Ser Gln Tyr Gln Gly Gln Gly Thr Ser Thr Ala Thr Ser
195 200 205Ser Thr Val Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ser Tyr Leu Arg210 215 220Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Ser Tyr Thr Pro Glu Gln Glu Lys Glu225 230 235 240Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Thr Glu Leu Ile Glu Glu Leu Asn Lys Gly245 250 255Val Ser Leu Glu Lys Leu Arg Ala Lys Leu Thr Lys Thr Pro Glu Ala260 265 270Thr Asp Ser Asn Ala Pro Ala Ser Glu Ser Thr Val Thr Thr Lys Val275 280 285Pro Glu Glu Leu Val Gln Val Gln Ala Tyr Ile Arg Trp Glu Lys Ala290 295 300Gly Lys Pro Asn Tyr Ala Pro Glu Lys Gln Leu Val Glu Phe Glu Glu305 310 315 320Ala Arg Lys Glu Leu Gln Ser Glu Leu Asp Lys Gly Thr Ser Val Glu325 330 335Gln Leu Arg Asn Lys Ile Leu Lys Gly Asn Ile Glu Thr Lys Val Ser340 345 350Lys Gln Leu Lys Asp Lys Lys Tyr Phe Ser Val Glu Arg Ile Gln Arg355 360 365Lys Lys Arg Asp Ile Val Gln Leu Leu Lys Lys His Lys Pro Thr Val
370 375 380Met Glu Ala Gln Val Glu Thr Pro Lys Gln Pro Thr Val Leu Asp Leu385 390 395 400Phe Thr Lys Ser Leu Gln Glu Gln Asp Asn Cys Glu Val Leu Ser Arg405 410 415Lys Leu Phe Lys Phe Gly Asp Lys Glu Ile Leu Gly Ile Thr Thr Val420 425 430Ala Leu Gly Lys Thr Lys Val His Leu Ala Thr Asn Tyr Met Glu Pro435 440 445Leu Ile Leu His Trp Ala Leu Ser Lys Glu Asn Gly Glu Trp Gln Ala450 455 460Pro Pro Ser Ser Ile Leu Pro Ser Gly Ser Ser Leu Leu Asp Lys Ala465 470 475 480Cys Glu Thr Ser Phe Ser Glu Tyr Glu Leu Asn Gly Leu His Cys Gln485 490 495Val Val Glu Ile Glu Leu Asp Asp Gly Gly Tyr Lys Arg Met Pro Phe500 505 510Val Leu Arg Ser Gly Glu Thr Trp Met Lys Asn Asn Gly Ser Asp Phe515 520 525Tyr Leu Asp Phe Ser Thr Lys Val Ala Lys Asn Thr Lys Asp Thr Gly530 535 540Asp Ala Gly Lys Gly Thr Ala Glu Ala Leu Leu Glu Arg Ile Ala Asp
545 550 555 560Leu Glu Glu Asp Ala Gln Arg Ser Leu Met His Arg Phe Asn Ile Ala565 570 575Ala Asp Leu Val Asp Gln Ala Arg Asp Asn Gly Leu Leu Gly Ile Ile580 585 590Gly Ile Phe Val Trp Ile Gly Phe Met Ala Thr Arg Gln Leu Ile Trp595 600 605Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp610 615 620Arg Phe Thr Asp Asp Leu Glu Asn Met Tyr Arg Thr Tyr Pro Gln Tyr625 630 635 640Gln Glu Ile Leu Arg Met Ile Met Ser Ala Val Gly Arg Gly Gly Glu645 650 655Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg660 665 670Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu Trp His Gln Lys Leu675 680 685His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile Cys Gln Ala Leu Leu690 695 700Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Thr Gly Val Tyr Trp Asp Thr Leu705 710 715 720Lys Lys Gly Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Pro
725 730 735Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Ser Glu Gln Lys Asp Ser Leu Leu740 745 750Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Ser Leu Lys Ala Val His Ser Gly755 760 765Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ala Thr Cys Met Gly Tyr Lys Ser Glu770 775 780Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn Pro Val Lys Gly Leu785 790 795 800Pro Ser Gly Phe Pro Lys Leu Leu Glu Phe Ile Leu Asp His Val Glu805 810 815Asp Lys Ser Ala Arg Pro Leu Leu Gly Gly Leu Leu Glu Ala Arg Ala820 825 830Glu Leu His Pro Leu Leu Leu Gly Ser Pro Glu Arg Met Lys Asp Leu835 840 845Ile Phe Leu Asp Ile Ala Leu Asp Ser Thr Phe Arg Thr Ala Val Glu850 855 860Arg Ser Tyr Glu Glu Leu Asn Asn Val Glu Pro Glu Lys Ile Met Tyr865 870 875 880Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser Thr Asp Asp Asn885 890 895Glu Asp Ile Leu Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asn Gln Ala Val Glu Met
900 905 910Ala Lys Gln Lys Asn Asn Gln Trp Ala Leu Tyr Ala Lys Ala Phe Leu915 920 925Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ala Ser Lys Gly Glu Gln Tyr Tyr Asn930 935 940Leu Met Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser Leu Leu Asn Ile Asp945 950 955 960Gln Trp Ala Val Asn Ile Phe Thr Glu Glu Ile Ile Arg Gly Gly Ser965 970 975Ala Ala Thr Leu Ser Ala Leu Leu Asn Arg Ile Asp Pro Val Leu Arg980 985 990Asn Val Ala Gln Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile Ser Pro Val Glu Val995 1000 l005Ser Gly Tyr Ile Val Val Val Asp Glu Leu Leu Ala Val Gln Asn1010 1015 1020Lys Ser Tyr Asp Lys Pro Thr Ile Leu Val Ala Lys Ser Val Lys1025 1030 1035Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Val Val Gly Val Ile Thr Pro1040 1045 1050Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg Ala Arg Asn1055 1060 1065Cys Lys Val Leu Phe Ala Thr Cys Phe Asp Pro Asn Thr Leu Ser
1070 1075 l080Glu Leu Gln Gly His Asp Gly Lys Val Phe Ser Phe Lys Pro Thr1085 1090 1095Ser Ala Asp Ile Thr Tyr Arg Glu Ile Pro Glu Ser Glu Leu Gln1100 1105 1110Ser Gly Ser Leu Asn Ala Glu Ala Gly Gln Ala Val Pro Ser Val1115 1120 1125Ser Leu Val Lys Lys Lys Phe Leu Gly Lys Tyr Ala Ile Ser Ala1130 1135 1140Glu Glu Phe Ser Glu Glu Met Val Gly Ala Lys Ser Arg Asn Val1145 1150 1155Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp ValGly Val Pro Thr1160 1165 1170Ser Val Ala Ile Pro Phe Gly Thr Phe Glu Lys Val Leu Ser Asp1175 1180 1185Glu Ile Asn Lys Glu Val Ala Gln Thr Ile Gln Met Leu Lys Gly1190 1195 1200Lys Leu Ala Gln Asp Asp Phe Ser Ala Leu Gly Glu Ile Arg Lys1205 1210 1215Thr Val Leu Asn Leu Thr Ala Pro Thr Gln Leu Ile Lys Glu Leu1220 1225 1230Lys Glu Lys Met Leu Gly Ser Gly Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu
1235 1240 1245Gly Asp Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Met Ala Ile Lys Lys Val1250 1255 1260Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr Arg Lys1265 1270 1275Val Lys Leu Asp His Asp Tyr Leu Ser Met Ala Val Leu Val Gln1280 1285 1290Glu Ile Val Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr Thr Asn1295 1300 1305Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val Val Lys1310 1315 1320Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Met1325 1330 1335Ser Phe Val Cys Lys Lys Asn Asp Leu Asp Ser Pro Lys Val Leu1340 1345 1350Gly Phe Pro Ser Lys Pro Ile Gly Val Phe Ile Lys Arg Ser Ile1355 1360 1365Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala1370 1375 1380Gly Ala Arg Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Glu Asp Glu1385 1390 1395Val Ile Val Asp Tyr Asn Asn Gly Pro Leu Ile Thr Asp Gln Gly
1400 1405 1410Phe Gln Lys Ser Asn Leu Pro Ser Ile Ala Pro Ala Gly His Ala1415 1420 1425Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Ser Pro Gln Asp Val Glu Gly Ala Val1430 1435 1440Lys Glu Gly Lys Leu Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln Met1445 1450 1455<210>14<211>4745<212>DNA<213>大豆(Glycine max)<220>
<221>CDS<222>(103)..(4482)<223>
<300>
<308>NCBI/AR400815<309>2003-12-18<400>14gcaccagcct ctccccattt tcacgtgatt cccaatctca cactcttctc acaccttcaa 60ccgattcaac gcaacaaagt gataaagtgt ggatccggga ag atg agc cag agt 114Met Ser Gln Ser1atc ttc cac cag acg gtg crt tgt caa acg caa acg gtt gcg gag cat162Ile Phe His Gln Thr Val Leu Cys Gln Thr Gln Thr Val Ala Glu His5 10 15 20caa agt aag gtt agt tcc ttg gag gtg agt gcg aac aaa gga aag aag210Gln Ser Lys Val Ser Ser Leu Glu Val Ser Ala Asn Lys Gly Lys Lys25 30 35
aac ctc ttt ttg gct cct aca aat ttt cgc ggg agc agg ctg tgt gtg258Asn Leu Phe Leu Ala Pro Thr Asn Phe Arg Gly Ser Arg Leu Cys Val40 45 50agg aaa cgc aaa tta acc atg gga agg cac cac cac cgc cac gtt gac306Arg Lys Arg Lys Leu Thr Met Gly Arg His His His Arg His Val Asp55 60 65gct gtt cca cgc gct gtt tta acc acc aat ctg gct tct gag ctt tct354Ala Val Pro Arg Ala Val Leu Thr Thr Asn Leu Ala Ser Glu Leu Ser70 75 80ggg aag ttc aac ctt gac gga aat att gag ttg cag att gct gtt agt402Gly Lys Phe Asn Leu Asp Gly Asn Ile Glu Leu Gln Ile Ala Val Ser85 90 95 100tct tca gaa cca gga gct gca aga caa gta gat ttt aag gtt tca tat450Ser Ser Glu Pro Gly Ala Ala Arg Gln Val Asp Phe Lys Val Ser Tyr105 110 115aat agt gag tct ctg ctt tta cat tgg gga gtt gtg cgt gat cag cca498Asn Ser Glu Ser Leu Leu Leu His Trp Gly Val Val Arg Asp Gln Pro120 125 130ggg aag tgg gtt ctt cct tct cgt cac cca gat gga act aaa aat tat546Gly Lys Trp Val Leu Pro Ser Arg His Pro Asp Gly Thr Lys Asn Tyr135 140 145aag agc aga gct ctt aga act cct ttt gtg aaa tcc gac tca gga tct594Lys Ser Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser Asp Ser Gly Ser150 155 160ttc ctt aaa ata gaa att gac gat cct gct gca caa gcc att gag ttc642Phe Leu Lys Ile Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ala Gln Ala Ile Glu Phe165 170 175 180ctc ata ctt gat gag gct aag aat aag tgg ttt aag aat aat ggt gag690Leu Ile Leu Asp Glu Ala Lys Asn Lys Trp Phe Lys Asn Asn Gly Glu185 190 195aac ttt cac atc aag tta cca gta aaa agc aag cta tct caa gaa gtt738Asn Phe His Ile Lys Leu Pro Val Lys Ser Lys Leu Ser Gln Glu Val200 205 210
tca gtt cct gaa gac ctt gta cag att caa gca tat ctt agg tgg gaa786Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ala Tyr Leu Arg Trp Glu215 220 225cga aag ggt aag cag atg tac act cca gag caa gag aag gag gaa tat834Arg Lys Gly Lys Gln Met Tyr Thr Pro Glu Gln Glu Lys Glu Glu Tyr230 235 240gaa gca gct cgg aat gaa cta ttg gag gaa gta gcc agg ggt act tct882Glu Ala Ala Arg Asn Glu Leu Leu Glu Glu Val Ala Arg Gly Thr Ser245 250 255 260gtg cga gat ctc cat gca agg tta act aag aaa act aaa gct gcc gaa930Val Arg Asp Leu His Ala Arg Leu Thr Lys Lys Thr Lys Ala Ala Glu265 270 275gta aag gag cct tct gtt tct gaa aca aag acc atc cct gat gaa ctt978Val Lys Glu Pro Ser Val Ser Glu Thr Lys Thr Ile Pro Asp Glu Leu280 285 290gta cag att caa gct ttt ata cga tgg gaa aaa gct ggg aag cct aac1026Val Gln Ile Gln Ala Phe Ile Arg Trp Glu Lys Ala Gly Lys Pro Asn295 300 305tac tct cgg gaa caa caa ctt atg gaa ttt gag gaa gca aga aaa gaa1074Tyr Ser Arg Glu Gln Gln Leu Met Glu Phe Glu Glu Ala Arg Lys Glu310 315 320ttg tta gaa gag ctt gag aag ggg gct tct ctg gat gcg ata cgg aag1122Leu Leu Glu Glu Leu Glu Lys Gly Ala Ser Leu Asp Ala Ile Arg Lys325 330 335 340aag att gtc aaa gga gag ata caa act aaa gtt gcc aag caa ttg aaa1170Lys Ile Val Lys Gly Glu Ile Gln Thr Lys Val Ala Lys Gln Leu Lys345 350 355acc aaa aaa tac ttt cgt gct gaa aga ata cag agg aaa aag aga gat1218Thr Lys Lys Tyr Phe Arg Ala Glu Arg Ile Gln Arg Lys Lys Arg Asp360 365 370ttg atg cag ctt atc aac cga aat gtt gca caa aat ata gtt gaa caa1266Leu Met Gln Leu Ile Asn Arg Asn Val Ala Gln Asn Ile Val Glu Gln375 380 385
gtt ata gat gct cca aaa gcc ttg aca gta att gaa cat tat gcc aat1314Val Ile Asp Ala Pro Lys Ala Leu Thr Val Ile Glu His Tyr Ala Asn390 395 400gca agg gaa gaa tat gaa agt ggt cct gtt ttg aat aag aca ata tac1362Ala Arg Glu Glu Tyr Glu Ser Gly Pro Val Leu Asn Lys Thr Ile Tyr405 410 415 420aag ctt ggt gat aat tat ctt ctg gtc ctt gtt acc aag gat gct ggc1410Lys Leu Gly Asp Asn Tyr Leu Leu Val Leu Val Thr Lys Asp Ala Gly425 430 435aag att aag gtt cac cta gct aca gac tcg aaa aaa cct ttt aca ctt1458Lys Ile Lys Val His Leu Ala Thr Asp Ser Lys Lys Pro Phe Thr Leu440 445 450cac tgg gcc tta tct aga aca tct gaa gag tgg ttg gta cca cct gaa1506His Trp Ala Leu Ser Arg Thr Ser Glu Glu Trp Leu Val Pro Pro Glu455 460 465act gct ctg ccc cct gga tct gtt act atg aat gag gcc gct gaa aca1554Thr Ala Leu Pro Pro Gly Ser Val Thr Met Asn Glu Ala Ala Glu Thr470 475 480cct ttc aaa gct ggt tct tcg tct cat cct tct tat gag gtc cag tcc1602Pro Phe Lys Ala Gly Ser Ser Ser His Pro Ser Tyr Glu Val Gln Ser485 490 495 500ttg gat ata gag gtt gat gat gat act ttt aaa gga ata cct ttt gtc1650Leu Asp Ile Glu Val Asp Asp Asp Thr Phe Lys Gly Ile Pro Phe Val505 510 515att ctg tcg gat gga gaa tgg ata aag aac aat gga tca aat ttt tat1698Ile Leu Ser Asp Gly Glu Trp Ile Lys Asn Asn Gly Ser Asn Phe Tyr520 525 530att gaa ttt ggt ggg aag aag cag aaa cag aag gat ttt ggc aat ggc1746Ile Glu Phe Gly Gly Lys Lys Gln Lys Gln Lys Asp Phe Gly Asn Gly535 540 545aaa ggt aca gcc aag ttc ttg ttg aat aaa ata gca gaa atg gaa agt1794Lys Gly Thr Ala Lys Phe Leu Leu Asn Lys Ile Ala Glu Met Glu Ser550 555 560
gag gca caa aag tcc ttc atg cat cga ttt aac att gca tca gat ttg1842Glu Ala Gln Lys Ser Phe Met His Arg Phe Asn Ile Ala Ser Asp Leu565 570 575 580ata gat gaa gcc aaa aat gct ggt caa ctg ggt ctt gcg ggg att ttg1890Ile Asp Glu Ala Lys Asn Ala Gly Gln Leu Gly Leu Ala Gly Ile Leu585 590 595gtg tgg atg aga ttc atg gct aca agg cag ctc ata tgg aac aaa aat1938Val Trp Met Arg Phe Met Ala Thr Arg Gln Leu Ile Trp Asn Lys Asn600 605 610tac aat gtg aag cca cgt gag ata agt aaa gca cag gat agg ctt aca1986Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp Arg Leu Thr615 620 625gac ttg ctc caa gat gtt tat gca aat tat cca cag tat agg gaa att2034Asp Leu Leu Gln Asp Val Tyr Ala Asn Tyr Pro Gln Tyr Arg Glu Ile630 635 640gtg agg atg atc ttg tcc act gtt ggt cgt gga ggt gaa gga gat gtc2082Val Arg Met Ile Leu Ser Thr Val Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val645 650 655 660gga cag agg att cgg gat gaa atc ctt gtt atc cag aga aat aat gat2130Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp665 670 675tgc aaa ggt gga atg atg gag gaa tgg cac cag aaa tta cac aat aat2178Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn680 685 690act agt cct gat gat gtt gta atc tgt cag gca cta att gat tat ata2226Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile Cys Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile695 700 705aat agt gac ttt gat att ggt gtt tac tgg aaa gca ttg aat gac aat 2274Asn Ser Asp Phe Asp Ile Gly Val Tyr Trp Lys Ala Leu Asn Asp Asn7l0 715 720aga ata aca aaa gag cgg ctt ctg agc tat gac cgt gcc atc cat tct2322Arg Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser725 730 735 740
gaa cca aat ttt agg aga gat cag aag gaa ggt ctt ctg cga gat ctg2370Glu Pro Asn Phe Arg Arg Asp Gln Lys Glu Gly Leu Leu Arg Asp Leu745 750 755gga aac tac atg agg act tta aag gca gtt cat tcc ggt gca gat ctt2418Gly Asn Tyr Met Arg Thr Leu Lys Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu760 765 770gaa tct gct att tca aat tgt atg ggc tac aaa tct gag ggt cag ggc2466Glu Ser Ala Ile Ser Asn Cys Met Gly Tyr Lys Ser Glu Gly Gln Gly775 780 785ttc atg gta ggg gtg aag ata aat cca gtg ccg ggt ttg cct act ggt2514Phe Met Val Gly Val Lys Ile Asn Pro Val Pro Gly Leu Pro Thr Gly790 795 800ttt cca gaa tta ctt gag ttt gtc atg gaa cac gtt gaa gag aag aat2562Phe Pro Glu Leu Leu Glu Phe Val Met Glu His Val Glu Glu Lys Asn805 810 815 820gtt gaa cca ctt ctt gag ggg ttg ctt gag gct cgt cag gaa ctc caa2610Val Glu Pro Leu Leu Glu Gly Leu Leu Glu Ala Arg Gln Glu Leu Gln825 830 835cca tca ctc agt aaa tcc caa agt cgt ctg aaa gat ctt ata ttt ttg2658Pro Ser Leu Ser Lys Ser Gln Ser Arg Leu Lys Asp Leu Ile Phe Leu840 845 850gat gtt gcc ctt gat tct aca gtt aga aca gca gtg gaa agg agt tat2706Asp Val Ala Leu Asp Ser Thr Val Arg Thr Ala Val Glu Arg Ser Tyr855 860 865gag gaa tta aac aat gct gga cct gag aaa ata atg tac ttc att agc2754Glu Glu Leu Asn Asn Ala Gly Pro Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser870 875 880ttg gtt ctt gaa aat ctc gca ctt tca tcg gat gac aat gaa gat ctt2802Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser Ser Asp Asp Asn Glu Asp Leu885 890 895 900atc tac tgt ttg aag gga tgg gat gtt gcc tta agc atg tgc aag att2850Ile Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asp Val Ala Leu Ser Met Cys Lys Ile905 910 915
aaa gat act cat tgg gca ttg tac gca aaa tca gtc ctt gac aga acc2898Lys Asp Thr His Trp Ala Leu Tyr Ala Lys Ser Val Leu Asp Arg Thr920 925 930cgt ctt gca cta aca aac aag gct cat tta tac cag gaa att ctg caa2946Arg Leu Ala Leu Thr Asn Lys Ala His Leu Tyr Gln Glu Ile Leu Gln935 940 945cca tcg gca gaa tat ctt gga tca ctg ctt ggc gtg gac aaa tgg gcc2994Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser Leu Leu Gly Val Asp Lys Trp Ala950 955 960gtg gaa ata ttt act gaa gaa att atc cgt gct gga tct gct gct tct3042Val Glu Ile Phe Thr Glu Glu Ile Ile Arg Ala Gly Ser Ala Ala Ser965 970 975 980ttg tct act ctt cta aat cga ctg gat cct gtg ctc cga aag aca gct3090Leu Ser Thr Leu Leu Asn Arg Leu Asp Pro Val Leu Arg Lys Thr Ala985 990 995cat ctt gga agc tgg cag gtt att agt cca gtt gaa act gtt gga 3135His Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile Ser Pro Val Glu Thr Val Gly1000 1005 1010tat gtt gag gtt gta gat gag ttg ctt act gtt caa aac aaa tca 3180Tyr Val Glu Val Val Asp Glu Leu Leu Thr Val Gln Asn Lys Ser1015 1020 1025tat gag cga cct aca att ttg ata gcc aat agt gtg aaa gga gag 3225Tyr Glu Arg Pro Thr Ile Leu Ile Ala Asn Ser Val Lys Gly Glu1030 1035 1040gaa gaa att cca gat ggt aca gtt gct gtc ctg aca cct gat atg 3270Glu Glu Ile Pro Asp Gly Thr Val Ala Val Leu Thr Pro Asp Met1045 1050 1055cct gat gtc cta tcc cat gtt tct gta cga gca aga aat agc aag 3315Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg Ala Arg Asn Ser Lys1060 1065 1070gtg tgt ttt gct aca tgc ttt gat ccc aat atc ctg gct aac ctc 3360Val Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp Pro Asn Ile Leu Ala Asn Leu1075 1080 1085
caa gaa tat aaa gga aag ctt tta cgc tta aag cct aca tct gct 3405Gln Glu Tyr Lys Gly Lys Leu Leu Arg Leu Lys Pro Thr Ser Ala1090 1095 1100gat gta gtt tat agt gag gtg aag gag ggt gag ttt att gat gac 3450Asp Val Val Tyr Ser Glu Val Lys Glu Gly Glu Phe Ile Asp Asp1105 1110 1115aaa tca act caa ctg aaa gat gtt ggt tct gtg tca ccc ata tct 3495Lys Ser Thr Gln Leu Lys Asp Val Gly Ser Val Ser Pro Ile Ser1120 1125 1130ctg gcc aga aag aag ttt agt ggt aga tat gct gtc tca tct gaa 3540Leu Ala Arg Lys Lys Phe Ser Gly Arg Tyr Ala Val Ser Ser Glu1135 1140 1145gaa ttc act ggt gaa atg gtt gga gct aaa tct cgt aat atc tct 3585Glu Phe Thr Gly Glu Met Val Gly Ala Lys Ser Arg Asn Ile Ser1150 1155 1160tat tta aaa ggg aaa gta gct tct tgg att gga att cct acc tca 3630Tyr Leu Lys Gly Lys Val Ala Ser Trp Ile Gly Ile Pro Thr Ser1165 1170 1175gtt gcc ata cca ttt gga gtt ttt gaa cat gtt ctt tct gat aaa 3675Val Ala Ile Pro Phe Gly Val Phe Glu His Val Leu Ser Asp Lys1180 1185 1190cca aac cag gca gtg gct gag agg gtc aat aat ttg aaa aag aag 3720Pro Asn Gln Ala Val Ala Glu Arg Val Asn Asn Leu Lys Lys Lys1195 1200 1205tta act gag gga gac ttc agt gtt ctc aag gag att cgt gaa aca 3765Leu Thr Glu Gly Asp Phe Ser Val Leu Lys Glu Ile Arg Glu Thr1210 1215 1220gtt cta cag ttg aat gca cca tcc cag ttg gta gag gag ttg aaa 3810Val Leu Gln Leu Asn Ala Pro Ser Gln Leu Val Glu Glu Leu Lys1225 1230 1235act aaa atg aag agt tct gga atg ccg tgg ccg ggt gat gaa ggt 3855Thr Lys Met Lys Ser Ser Gly Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu Gly1240 1245 1250
gaa caa cga tgg gaa caa gct tgg ata gct ata aaa aag gtg tgg 3900Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Ile Ala Ile Lys Lys Val Trp1255 1260 1265ggc tca aag tgg aat gaa aga gca tac ttc agc aca aga aaa gtg 3945Gly Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr Arg Lys Val1270 1275 1280aaa ctc gac cac gaa tat ctt tcc atg gca gtc ctg gtt cag gaa 3990Lys Leu Asp His Glu Tyr Leu Ser Met Ala Val Leu Val Gln Glu1285 1290 1295gtg ata aat gct gac tat gct ttt gtc atc cac aca act aac cct 4035Val Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr Thr Asn Pro1300 1305 1310gcc tct gga gat tca tcg gaa ata tat gct gag gtg gta aag gga 4080Ala Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val Val Lys Gly1315 1320 1325ctt gga gaa aca ctg gtt gga gct tat cct ggt cgt gct ttg agt 4125Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Leu Ser1330 1335 1340ttt atc tgc aag aaa cgt gat ttg aac tct cct cag gtc ttg ggt 4170Phe Ile Cys Lys Lys Arg Asp Leu Asn Ser Pro Gln Val Leu Gly1345 1350 1355tat cct agc aaa cct gtc ggc cta ttt ata aga cag tca att att 4215Tyr Pro Ser Lys Pro Val Gly Leu Phe Ile Arg Gln Ser Ile Ile1360 1365 1370ttc cga tct gat tcc aat ggt gaa gat cta gaa ggt tat gct ggt 4260Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala Gly1375 1380 1385gca ggt ctt tat gac agt gtg cca atg gat gaa gcc gag aag gtg 4305Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Ala Glu Lys Val1390 1395 1400gtg ctt gat tat tca tca gac aaa ctg atc ctt gat ggt agt ttt 4350Val Leu Asp Tyr Ser Ser Asp Lys Leu Ile Leu Asp Gly Ser Phe1405 1410 1415
cgc cag tca atc ttg tcc agc att gcc cgt gca gga aat gaa att 4395Arg Gln Ser Ile Leu Ser Ser Ile Ala Arg Ala Gly Asn Glu Ile1420 1425 1430gaa gag ttg tat ggc act cct cag gac att gaa ggt gtc atc aag 4440Glu Glu Leu Tyr Gly Thr Pro Gln Asp Ile Glu Gly Val Ile Lys1435 1440 1445gat ggc aaa gtc tat gtt gtc cag acc aga cca caa atg taa 4482Asp Gly Lys Val Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln Met1450 1455acttgcatac ccatgtcttc taagccacct acctcaacta tgttcatccc cgagcaacac 4542gtcgtttcaa acgtggccgt ggcagcttct gtgagttcaa gagtaacccc cggattacca 4602aacatggcct tatagattta ttacatgata tattgaaaat taaggaataa gtgtataaaa 4662acggaatatt gtaaattaag aaaaatttag acggtcttat atattctttt tccctactat 4722aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 4745<210>15<211>1459<212>PRT<213>大豆<400>15Met Ser Gln Ser Ile Phe His Gln Thr Val Leu Cys Gln Thr Gln Thr1 5 10 15Val Ala Glu His Gln Ser Lys Val Ser Ser Leu Glu Val Ser Ala Asn20 25 30Lys Gly Lys Lys Asn Leu Phe Leu Ala Pro Thr Asn Phe Arg Gly Ser35 40 45Arg Leu Cys Val Arg Lys Arg Lys Leu Thr Met Gly Arg His His His50 55 60
Arg His Val Asp Ala Val Pro Arg Ala Val Leu Thr Thr Asn Leu Ala65 70 75 80Ser Glu Leu Ser Gly Lys Phe Asn Leu Asp Gly Asn Ile Glu Leu Gln85 90 95Ile Ala Val Ser Ser Ser Glu Pro Gly Ala Ala Arg Gln Val Asp Phe100 105 110Lys Val Ser Tyr Asn Ser Glu Ser Leu Leu Leu His Trp Gly Val Val115 120 125Arg Asp Gln Pro Gly Lys Trp Val Leu Pro Ser Arg His Pro Asp Gly130 135 140Thr Lys Asn Tyr Lys Ser Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser145 150 155 160Asp Ser Gly Ser Phe Leu Lys Ile Glu Ile Asp Asp Pro Ala Ala Gln165 170 175Ala Ile Glu Phe Leu Ile Leu Asp Glu Ala Lys Asn Lys Trp Phe Lys180 185 190Asn Asn Gly Glu Asn Phe His Ile Lys Leu Pro Val Lys Ser Lys Leu195 200 205Ser Gln Glu Val Ser Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ala Tyr210 215 220Leu Arg Trp Glu Arg Lys Gly Lys Gln Met Tyr Thr Pro Glu Gln Glu225 230 235 240
Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Asn Glu Leu Leu Glu Glu Val Ala245 250 255Arg Gly Thr Ser Val Arg Asp Leu His Ala Arg Leu Thr Lys Lys Thr260 265 270Lys Ala Ala Glu Val Lys Glu Pro Ser Val Ser Glu Thr Lys Thr Ile275 280 285Pro Asp Glu Leu Val Gln Ile Gln Ala Phe Ile Arg Trp Glu Lys Ala290 295 300Gly Lys Pro Asn Tyr Ser Arg Glu Gln Gln Leu Met Glu Phe Glu Glu305 310 315 320Ala Arg Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Glu Lys Gly Ala Ser Leu Asp325 330 335Ala Ile Arg Lys Lys Ile Val Lys Gly Glu Ile Gln Thr Lys Val Ala340 345 350Lys Gln Leu Lys Thr Lys Lys Tyr Phe Arg Ala Glu Arg Ile Gln Arg355 360 365Lys Lys Arg Asp Leu Met Gln Leu Ile Asn Arg Asn Val Ala Gln Asn370 375 380Ile Val Glu Gln Val Ile Asp Ala Pro Lys Ala Leu Thr Val Ile Glu385 390 395 400His Tyr Ala Asn Ala Arg Glu Glu Tyr Glu Ser Gly Pro Val Leu Asn405 410 415
Lys Thr Ile Tyr Lys Leu Gly Asp Asn Tyr Leu Leu Val Leu Val Thr420 425 430Lys Asp Ala Gly Lys Ile Lys Val His Leu Ala Thr Asp Ser Lys Lys435 440 445Pro Phe Thr Leu His Trp Ala Leu Ser Arg Thr Ser Glu Glu Trp Leu450 455 460Val Pro Pro Glu Thr Ala Leu Pro Pro Gly Ser Val Thr Met Asn Glu465 470 475 480Ala Ala Glu Thr Pro Phe Lys Ala Gly Ser Ser Ser His Pro Ser Tyr485 490 495Glu Val Gln Ser Leu Asp Ile Glu Val Asp Asp Asp Thr Phe Lys Gly500 505 510Ile Pro Phe Val Ile Leu Ser Asp Gly Glu Trp Ile Lys Asn Asn Gly515 520 525Ser Asn Phe Tyr Ile Glu Phe Gly Gly Lys Lys Gln Lys Gln Lys Asp530 535 540Phe Gly Asn Gly Lys Gly Thr Ala Lys Phe Leu Leu Asn Lys Ile Ala545 550 555 560Glu Met Glu Ser Glu Ala Gln Lys Ser Phe Met His Arg Phe Asn Ile565 570 575Ala Ser Asp Leu Ile Asp Glu Ala Lys Asn Ala Gly Gln Leu Gly Leu580 585 590
Ala Gly Ile Leu Val Trp Met Arg Phe Met Ala Thr Arg Gln Leu Ile595 600 605Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln610 615 620Asp Arg Leu Thr Asp Leu Leu Gln Asp Val Tyr Ala Asn Tyr Pro Gln625 630 635 640Tyr Arg Glu Ile Val Arg Met Ile Leu Ser Thr Val Gly Arg Gly Gly645 650 655Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile Leu Val Ile Gln660 665 670Arg Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu Trp His Gln Lys675 680 685Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile Cys Gln Ala Leu690 695 700Ile Asp Tyr Ile Asn Ser Asp Phe Asp Ile Gly Val Tyr Trp Lys Ala705 710 715 720Leu Asn Asp Asn Arg Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg725 730 735Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Arg Asp Gln Lys Glu Gly Leu740 745 750Leu Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Thr Leu Lys Ala Val His Ser755 760 765
Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ser Asn Cys Met Gly Tyr Lys Ser770 775 780Glu Gly Gln Gly Phe Met Val Gly Val Lys Ile Asn Pro Val Pro Gly785 790 795 800Leu Pro Thr Gly Phe Pro Glu Leu Leu Glu Phe Val Met Glu His Val805 810 815Glu Glu Lys Asn Val Glu Pro Leu Leu Glu Gly Leu Leu Glu Ala Arg820 825 830Gln Glu Leu Gln Pro Ser Leu Ser Lys Ser Gln Ser Arg Leu Lys Asp835 840 845Leu Ile Phe Leu Asp Val Ala Leu Asp Ser Thr Val Arg Thr Ala Val850 855 860Glu Arg Ser Tyr Glu Glu Leu Asn Asn Ala Gly Pro Glu Lys Ile Met865 870 875 880Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser Ser Asp Asp885 890 895Asn Glu Asp Leu Ile Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asp Val Ala Leu Ser900 905 910Met Cys Lys Ile Lys Asp Thr His Trp Ala Leu Tyr Ala Lys Ser Val915 920 925Leu Asp Arg Thr Arg Leu Ala Leu Thr Asn Lys Ala His Leu Tyr Gln930 935 940
Glu Ile Leu Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser Leu Leu Gly Val945 950 955 960Asp Lys Trp Ala Val Glu Ile Phe Thr Glu Glu Ile Ile Arg Ala Gly965 970 975Ser Ala Ala Ser Leu Ser Thr Leu Leu Asn Arg Leu Asp Pro Val Leu980 985 990Arg Lys Thr Ala His Leu Gly Ser Trp Gln Val Ile Ser Pro Val Glu995 1000 1005Thr Val Gly Tyr Val Glu Val Val Asp Glu Leu Leu Thr Val Gln1010 1015 1020Asn Lys Ser Tyr Glu Arg Pro Thr Ile Leu Ile Ala Asn Ser Val1025 1030 1035Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Thr Val Ala Val Leu Thr1040 1045 1050Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val Ser Val Arg Ala Arg1055 1060 1065Asn Ser Lys Val Cys Phe Ala Thr Cys Phe Asp Pro Asn Ile Leu1070 1075 1080Ala Asn Leu Gln Glu Tyr Lys Gly Lys Leu Leu Arg Leu Lys Pro1085 1090 1095Thr Ser Ala Asp Val Val Tyr Ser Glu Val Lys Glu Gly Glu Phe1100 1105 1110
Ile Asp Asp Lys Ser Thr Gln Leu Lys Asp Val Gly Ser Val Ser1115 1120 1125Pro Ile Ser Leu Ala Arg Lys Lys Phe Ser Gly Arg Tyr Ala Val1130 1135 1140Ser Ser Glu Glu Phe Thr Gly Glu Met Val Gly Ala Lys Ser Arg1145 1150 1155Asn Ile Ser Tyr Leu Lys Gly Lys Val Ala Ser Trp Ile Gly Ile1160 1165 1170Pro Thr Ser Val Ala Ile Pro Phe Gly Val Phe Glu His Val Leu1175 1180 1185Ser Asp Lys Pro Asn Gln Ala Val Ala Glu Arg Val Asn Asn Leu1190 1195 1200Lys Lys Lys Leu Thr Glu Gly Asp Phe Ser Val Leu Lys Glu Ile1205 1210 1215Arg Glu Thr Val Leu Gln Leu Asn Ala Pro Ser Gln Leu Val Glu1220 1225 1230Glu Leu Lys Thr Lys Met Lys Ser Ser Gly Met Pro Trp Pro Gly1235 1240 1245Asp Glu Gly Glu Gln Arg Trp Glu Gln Ala Trp Ile Ala Ile Lys1250 1255 1260Lys Val Trp Gly Ser Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr1265 1270 1275
Arg Lys Val Lys Leu Asp His Glu Tyr Leu Ser Met Ala Val Leu1280 1285 1290Val Gln Glu Val Ile Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr1295 1300 1305Thr Asn Pro Ala Ser Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val1310 1315 1320Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly Arg1325 1330 1335Ala Leu Ser Phe Ile Cys Lys Lys Arg Asp Leu Asn Ser Pro Gln1340 1345 1350Val Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Val Gly Leu Phe Ile Arg Gln1355 1360 1365Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly1370 1375 1380Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Ala1385 1390 1395Glu Lys Val Val Leu Asp Tyr Ser Ser Asp Lys Leu Ile Leu Asp1400 1405 1410Gly Ser Phe Arg Gln Ser Ile Leu Ser Ser Ile Ala Arg Ala Gly1415 1420 1425Asn Glu Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Thr Pro Gln Asp Ile Glu Gly1430 1435 1440
Val Ile Lys Asp Gly Lys Val Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln1445 1450 1455Met<210>16<211>4846<212>DNA<213>玉米(Zea mays)<220>
<221>CDS<222>(158)..(4567)<223>
<300>
<308>NCBI /AR400813<309>2003-12-18<400>16ccacgcgtcc ggcttcatct tgctgatcgt gtccgtggct tcttgatact ccgtgactgt 60ctccgtccga agcgagtgag caagccgacc aacagcggct gagattcgct gcaacgtcgg 120tatcaaaagg tgtccgagcg gttgagattc gcgtgcc atg tcc gga ttc agt gcc 175Met Ser Gly Phe Ser Ala1 5gcg gcc aac gca gcg gcg gct gag cgg tgc gcg ctc gcg ttc cgc gca223Ala Ala Asn Ala Ala Ala Ala Glu Arg Cys Ala Leu Ala Phe Arg Ala10 15 20cgg ccc gcg gcc tcc tcg cca gcg aag cgg cag cag cag ccg cag cca271Arg Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ala Lys Arg Gln Gln Gln Pro Gln Pro25 30 35gcg tcc ctc cga cgc agc ggg ggc cag cgc cgc ccc acg acg ctc tcc319Ala Ser Leu Arg Arg Ser Gly Gly Gln Arg Arg Pro Thr Thr Leu Ser40 45 50
gcc tct agc cgc ggc ccc gtc gtg ccg cgc gcc gtc gcc acg tcc gcg367Ala Ser Ser Arg Gly Pro yal Val Pro Arg Ala Val Ala Thr Ser Ala55 60 65 70gac cgc gcg tcc ccc gac ctt atc gga aag ttc acg ctg gat tcc aac415Asp Arg Ala Ser Pro Asp Leu Ile Gly Lys Phe Thr Leu Asp Ser Asn75 80 85tcc gag ctc cag gtc gca gtg aac cca gcg ccg cag ggt ttg gtg tca463Ser Glu Leu Gln Val Ala Val Asn Pro Ala Pro Gln Gly Leu Val Ser90 95 100gag att agc ctg gag gtg acc aac aca agc ggt tcc ctg att ttg cat511Glu Ile Ser Leu Glu Val Thr Asn Thr Ser Gly Ser Leu Ile Leu His105 110 115tgg gga gcc ctt cgc ccg gac aag aga gat tgg atc ctc ccg tcc aga559Trp Gly Ala Leu Arg Pro Asp Lys Arg Asp Trp Ile Leu Pro Ser Arg120 125 130aaa cct gat gga acg aca gtg tac aag aac agg gct ctc agg aca cct607Lys Pro Asp Gly Thr Thr Val Tyr Lys Asn Arg Ala Leu Arg Thr Pro135 140 145 150ttt gta aag tca ggt gat aac tcc act cta agg att gag ata gat gat655Phe Val Lys Ser Gly Asp Asn Ser Thr Leu Arg Ile Glu Ile Asp Asp155 160 165cct ggg gtg cac gcc att gag ttc ctc atc ttt gac gag aca cag aac703Pro Gly Val His Ala Ile Glu Phe Leu Ile Phe Asp Glu Thr Gln Asn170 175 180aaa tgg ttt aaa aac aat ggc cag aat ttt cag gtt cag ttc cag tcg 751Lys Trp Phe Lys Asn Asn Gly Gln Asn Phe Gln Val Gln Phe Gln Ser185 190 195agc cgc cat cag ggt act ggt gca tct ggt gcc tcc tct tct gct act799Ser Arg His Gln Gly Thr Gly Ala Ser Gly Ala Ser Ser Ser Ala Thr200 205 210tct acc ttg gtg cca gag gat ctt gtg cag atc caa gct tac ctt cgg847Ser Thr Leu Val Pro Glu Asp Leu Val Gln Ile Gln Ala Tyr Leu Arg215 220 225 230
tgg gaa aga agg gga aag cag tca tac aca cca gag caa gaa aag gag895Trp Glu Arg Arg Gly Lys Gln Ser Tyr Thr Pro Glu Gln Glu Lys Glu235 240 245gag tat gaa gct gca cga gct gag tta ata gag gaa gta aac aga ggt943Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Ala Glu Leu Ile Glu Glu Val Asn Arg Gly250 255 260gtt tct tta gag aag ctt cga gct aaa ttg aca aaa gca cct gaa gca991Val Ser Leu Glu Lys Leu Arg Ala Lys Leu Thr Lys Ala Pro Glu Ala265 270 275cct gag tcg gat gaa agt aaa tct tct gca tct cga atg ccc atc ggt1039Pro Glu Ser Asp Glu Ser Lys Ser Ser Ala Ser Arg Met Pro Ile Gly280 285 290aaa ctt cca gag gat ctt gta cag gtg cag gct tat ata agg tgg gag1087Lys Leu Pro Glu Asp Leu Val Gln Val Gln Ala Tyr Ile Arg Trp Glu295 300 305 310caa gcg ggc aag cca aac tat cct cct gag aag caa ctg gta gaa ttt1135Gln Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Pro Pro Glu Lys Gln Leu Val Glu Phe315 320 325gag gaa gca agg aag gaa ctg cag gct gag gtg gac aag gga atc tct1183Glu Glu Ala Arg Lys Glu Leu Gln Ala Glu Val Asp Lys Gly Ile Ser330 335 340att gat cag ttg agg cag aaa att ttg aaa gga aac att gag agt aaa1231Ile Asp Gln Leu Arg Gln Lys Ile Leu Lys Gly Asn Ile Glu Ser Lys345 350 355gtt tcc aag cag ctg aag aac aag aag tac ttc tct gta gaa agg att1279Val Ser Lys Gln Leu Lys Asn Lys Lys Tyr Phe Ser Val Glu Arg Ile360 365 370cag cgc aaa aag aga gat atc aca caa ctt ctc agt aaa cat aag cat1327Gln Arg Lys Lys Arg Asp Ile Thr Gln Leu Leu Ser Lys His Lys His375 380 385 390aca ctt gtg gaa gat aaa gta gag gtt gta cca aaa caa cca act gtt1375Thr Leu Val Glu Asp Lys Val Glu Val Val Pro Lys Gln Pro Thr Val395 400 405
ctt gat ctc ttc acc aag tct tta cat gag aag gat ggc tgt gaa gtt1423Leu Asp Leu Phe Thr Lys Ser Leu His Glu Lys Asp Gly Cys Glu Val410 415 420cta agc aga aag ctc ttc aag ttc ggc gat aaa gag ata ctg gca att1471Leu Ser Arg Lys Leu Phe Lys Phe Gly Asp Lys Glu Ile Leu Ala Ile425 430 435tct acc aag gtt caa aat aaa aca gaa gtt cac ttg gca aca aac cat1519Ser Thr Lys Val Gln Asn Lys Thr Glu Val His Leu Ala Thr Asn His440 445 450acc gac cca ctt att ctt cac tgg tct ttg gca aaa aat gct gga gaa1567Thr Asp Pro Leu Ile Leu His Trp Ser Leu Ala Lys Asn Ala Gly Glu455 460 465 470tgg aag gca cct tct cca aat ata ttg cca tct ggt tcc aca ttg ctg1615Trp Lys Ala Pro Ser Pro Asn Ile Leu Pro Ser Gly Ser Thr Leu Leu475 480 485gac aag gcg tgt gaa act gaa ttt act aaa tct gaa ttg gat ggt ttg1663Asp Lys Ala Cys Glu Thr Glu Phe Thr Lys Ser Glu Leu Asp Gly Leu490 495 500cat tac cag gtt gtt gag ata gag ctt gat gat gga gga tac aaa gga1711His Tyr Gln Val Val Glu Ile Glu Leu Asp Asp Gly Gly Tyr Lys Gly505 510 515atg cca ttt gtt ctt cgg tct ggt gaa aca tgg aaa aaa aat aat ggt1759Met Pro Phe Val Leu Arg Ser Gly Glu Thr Trp Lys Lys Asn Asn Gly520 525 530tct gat ttt ttc cta gat ttc agc acc cat gat gtc aga aat att aag1807Ser Asp Phe Phe Leu Asp Phe Ser Thr His Asp Val Arg Asn Ile Lys535 540 545 550tta aag ggc aat ggt gat gct ggt aaa ggt act gct aag gca ttg ctg1855Leu Lys Gly Asn Gly Asp Ala Gly Lys Gly Thr Ala Lys Ala Leu Leu555 560 565gag aga ata gca gat ctg gag gaa gat gcc cag cga tct ctt atg cac1903Glu Arg Ile Ala Asp Leu Glu Glu Asp Ala Gln Arg Ser Leu Met His570 575 580
aga ttc aat att gca gca gat cta gct gac caa gcc aga gat gct gga1951Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Ala Asp Gln Ala Arg Asp Ala Gly585 590 595ctt ttg ggt att gtt ggg ctt ttt gtt tgg att aga ttc atg gct acc1999Leu Leu Gly Ile Val Gly Leu Phe Val Trp Ile Arg Phe Met Ala Thr600 605 610agg caa cta aca tgg aat aag aac tat aat gtg aag cca cgt gag ata2047Arg Gln Leu Thr Trp Asn Lys Asn Tyr Asn Val Lys Pro Arg Glu Ile615 620 625 630agc aaa gca cag gat agg ttt aca gat gat ctt gag aat atg tac aaa2095Ser Lys Ala Gln Asp Arg Phe Thr Asp Asp Leu Glu Asn Met Tyr Lys635 640 645gct tat cca cag tac aga gag ata tta aga atg ata atg gct gct gtt2143Ala Tyr Pro Gln Tyr Arg Glu Ile Leu Arg Met Ile Met Ala Ala Val650 655 660ggt cgc gga ggt gaa ggt gat gtt ggt caa cgc att cgt gat gag ata219lGly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln Arg Ile Arg Asp Glu Ile665 670 675tta gta ata cag aga aat aat gac tgc aaa ggt gga atg atg gaa gaa2239Leu Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp Cys Lys Gly Gly Met Met Glu Glu680 685 690tgg cac cag aaa ttg cac aac aat aca agc cca gat gat gta gtg ata2287Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser Pro Asp Asp Val Val Ile695 700 705 710tgc cag gcc tta att gat tat atc aag agt gac ttt gat ata agc gtt2335Cys Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile Lys Ser Asp Phe Asp Ile Ser Val715 720 725tac tgg gac acc ttg aac aaa aat ggc ata acc aaa gag cgt ctc ttg2383Tyr Trp Asp Thr Leu Asn Lys Asn Gly Ile Thr Lys Glu Arg Leu Leu730 735 740agc tat gat cgt gct att cat tca gaa cca aat ttc aga agt gaa cag2431Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro Asn Phe Arg Ser Glu Gln745 750 755
aag gcg ggt tta ctc cgt gac ctg gga aat tac atg aga agc cta aag2479Lys Ala Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly Asn Tyr Met Arg Ser Leu Lys760 765 770gct gtg cat tct ggt gct gat ctt gaa tct gct ata gca agt tgt atg2527Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser Ala Ile Ala Ser Cys Met775 780 785 790gga tac aaa tca gag ggt gaa ggt ttc atg gtt ggt gtt cag atc aat2575Gly Tyr Lys Ser Glu Gly Glu Gly Phe Met Val Gly Val Gln Ile Asn795 800 805cca gtg aag ggt tta cca tct gga ttt ccg gag ttg ctt gaa ttt gtg2623Pro Val Lys Gly Leu Pro Ser Gly Phe Pro Glu Leu Leu Glu Phe Val810 815 820ctt gaa cat gtt gag gat aaa tca gcg gaa cca ctt ctt gag ggg cta2671Leu Glu His Val Glu Asp Lys Ser Ala Glu Pro Leu Leu Glu Gly Leu825 830 835ttg gaa gct cga gtt gaa ctg cgc cct ttg ctt ctt gat tcg cgt gaa2719Leu Glu Ala Arg Val Glu Leu Arg Pro Leu Leu Leu Asp Ser Arg Glu840 845 850cgc atg aaa gat ctt ata ttt ttg gac att gct ctt gat tct acc ttc2767Arg Met Lys Asp Leu Ile Phe Leu Asp Ile Ala Leu Asp Ser Thr Phe855 860 865 870agg aca gca att gaa agg tca tat gag gag ctg aat gat gca gcc cca2815Arg Thr Ala Ile Glu Arg Ser Tyr Glu Glu Leu Asn Asp Ala Ala Pro875 880 885gag aaa ata atg tac ttc atc agt ctt gtc ctt gaa aat ctt gcg ctt2863Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val Leu Glu Asn Leu Ala Leu890 895 900tca att gac gac aat gaa gac atc ctg tat tgt tta aag gga tgg aac2911Ser Ile Asp Asp Asn Glu Asp Ile Leu Tyr Cys Leu Lys Gly Trp Asn905 910 915caa gcc ttg gaa atg gct aag caa aaa gac gac caa tgg gcg ctc tat2959Gln Ala Leu Glu Met Ala Lys Gln Lys Asp Asp Gln Trp Ala Leu Tyr920 925 930
gct aaa gca ttt ctt gac aga aac aga ctt gcc ctt gcg agc aag gga3007Ala Lys Ala Phe Leu Asp Arg Asn Arg Leu Ala Leu Ala Ser Lys Gly935 940 945 950gaa caa tac cat aat atg atg cag ccc tct gct gag tat ctt ggc tcg3055Glu Gln Tyr His Asn Met Met Gln Pro Ser Ala Glu Tyr Leu Gly Ser955 960 965tta ctc agc ata gac caa tgg gca gtc aat atc ttc aca gaa gaa att3103Leu Leu Ser Ile Asp Gln Trp Ala Val Asn Ile Phe Thr Glu Glu Ile970 975 980ata cgc ggt gga tca gct gct act ctg tct gct ctt ctg aac cga ttt3151Ile Arg Gly Gly Ser Ala Ala Thr Leu Ser Ala Leu Leu Asn Arg Phe985 990 995gat cct gtt tta agg aat gtt gct cac ctc gga agt tgg cag gtt 3196Asp Pro Val Leu Arg Asn Val Ala His Leu Gly Ser Trp Gln Val1000 1005 1010ata agc ccg gtt gaa gta tca ggt tat gtg gtt gtg gtt gat gag 3241Ile Ser Pro Val Glu Val Ser Gly Tyr Val Val Val Val Asp Glu1015 1020 1025tta ctt gct gtc cag aac aaa tct tat gat aaa cea acc atc ctt 3286Leu Leu Ala Val Gln Asn Lys Ser Tyr Asp Lys Pro Thr Ile Leu1030 1035 1040gtg gca aag agt gtc aag gga gag gaa gaa ata cca gat gga gta 3331Val Ala Lys Ser Val Lys Gly Glu Glu Glu Ile Pro Asp Gly Val1045 1050 1055gtt ggt gta att aca cct gat atg cca gat gtt ctg tct cat gtg 3376Val Gly Val Ile Thr Pro Asp Met Pro Asp Val Leu Ser His Val1060 1065 1070tca gtc cga gca agg aat agc aag gta ctg ttt gcg acc tgt ttt 3421Ser Val Arg Ala Arg Asn Ser Lys Val Leu Phe Ala Thr Cys Phe1075 1080 1085gac cac acc act cta tct gaa ctt gaa gga tat gat cag aaa ctg 3466Asp His Thr Thr Leu Ser Glu Leu Glu Gly Tyr Asp Gln Lys Leu1090 1095 1100
ttt tcc ttc aag cct act tct gca gat ata acc tat agg gag atc 3511Phe Ser Phe Lys Pro Thr Ser Ala Asp Ile Thr Tyr Arg Glu Ile1105 1110 1115aca gag agt gaa ctt cag caa tca agt tct cca aat gca gaa gtt 3556Thr Glu Ser Glu Leu Gln Gln Ser Ser Ser Pro Asn Ala Glu Val1120 1125 1130ggc cat gca gta cca tct att tca ttg gcc aag aag aaa ttt ctt 3601Gly His Ala Val Pro Ser Ile Ser Leu Ala Lys Lys Lys Phe Leu1135 1140 1145gga aaa tat gca ata tca gcc gaa gaa ttc tct gag gaa atg gtt 3646Gly Lys Tyr Ala Ile Ser Ala Glu Glu Phe Ser Glu Glu Met Val1150 1155 1160ggg gcc aag tct cgg aat ata gca tac ctc aaa gga aaa gta cct 3691Gly Ala Lys Ser Arg Asn Ile Ala Tyr Leu Lys Gly Lys Val Pro1165 1170 1175tca tgg gtc ggt gtc cca acg tca gtt gcg ata cca ttt ggc act 3736Ser Trp Val Gly Val Pro Thr Ser Val Ala Ile Pro Phe Gly Thr1180 1185 1190ttt gag aag gtt ttg tca gat ggg ctt aat aag gaa gta gca cag 3781Phe Glu Lys Val Leu Ser Asp Gly Leu Asn Lys Glu Val Ala Gln1195 1200 1205agc ata gag aag ctt aag atc aga ctt gcc caa gaa gat ttt agt 3826Ser Ile Glu Lys Leu Lys Ile Arg Leu Ala Gln Glu Asp Phe Ser1210 1215 1220gct cta ggt gaa ata aga aaa gtc gtc ctt aat ctt act gct cct 3871Ala Leu Gly Glu Ile Arg Lys Val Val Leu Asn Leu Thr Ala Pro1225 1230 1235atg caa ttg gtt aat gag ctg aag gag agg atg cta ggc tct gga 3916Met Gln Leu Val Asn Glu Leu Lys Glu Arg Met Leu Gly Ser Gly1240 1245 1250atg ccc tgg cct ggt gat gaa gga gac aag cgt tgg gag caa gca 3961Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu Gly Asp Lys Arg Trp Glu Gln Ala1255 1260 1265
tgg atg gct att aaa aag gtt tgg gca tca aaa tgg aac gaa aga 4006Trp Met Ala Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser Lys Trp Asn Glu Arg1270 1275 1280gca tat ttt agc aca cgc aag gtg aaa ctt gat cat gag tac ctt 4051Ala Tyr Phe Ser Thr Arg Lys Val Lys Leu Asp His Glu Tyr Leu1285 1290 1295tcg atg gct gtt ctc gtg caa gaa gtt gtg aat gca gat tat gct 4096Ser Met Ala Val Leu Val Gln Glu Val Val Asn Ala Asp Tyr Ala1300 1305 1310ttt gtc att cat acc aca aac cca tcg tct gga gat tct tct gag 4141Phe Val Ile His Thr Thr Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser Ser Glu1315 1320 1325ata tat gct gaa gtg gtg aaa ggg ctt ggc gag acc ctc gtg gga 4186Ile Tyr Ala Glu Val Val Lys Gly Leu Gly Glu Thr Leu Val Gly1330 1335 1340gcc tat cct ggt cgt gct atg agc ttt gtt tgc aaa aaa gat gac 4231Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Met Ser Phe Val Cys Lys Lys Asp Asp1345 1350 1355ctt gac tct ccc aag tta ctt ggt tac cca agc aag cca att ggt 4276Leu Asp Ser Pro Lys Leu Leu Gly Tyr Pro Ser Lys Pro Ile Gly1360 1365 1370ctc ttc ata agg caa tca atc atc ttc cgt tcc gac tcc aac ggt 4321Leu Phe Ile Arg Gln Ser Ile Ile Phe Arg Ser Asp Ser Asn Gly1375 1380 1385gag gac ctg gaa ggt tat gct gga gca gga tta tat gat agt gta 4366Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Gly Leu Tyr Asp Ser Val1390 1395 1400ccg atg gat gag gag gat gag gtt gta ctt gat tat aca act gac 4411Pro Met Asp Glu Glu Asp Glu Val Val Leu Asp Tyr Thr Thr Asp1405 1410 1415cct ctt ata gta gac cgt gga ttc cga agc tca atc ctc tca agc 4456Pro Leu Ile Val Asp Arg Gly Phe Arg Ser Ser Ile Leu Ser Ser1420 1425 1430
ata gca cgg gct ggc cat gcc atc gag gag cta tat ggt tct cct 4501Ile Ala Arg Ala Gly His Ala Ile Glu Glu Leu Tyr Gly Ser Pro1435 1440 1445cag gac gtc gag gga gta gtg aag gat gga aaa atc tat gta gtc 4546Gln Asp Val Glu Gly Val Val Lys Asp Gly Lys Ile Tyr Val Val1450 1455 1460cag aca aga cca cag atg tag tatgtatgca tctattagac agctcaataa 4597Gln Thr Arg Pro Gln Met1465gcactgttgt acgcttgtat ggttgggaca tatgggcgtt atggcatgta tagttgtatg 4657cctagatgta caacacgtgt actcgtatat atatatataa atgctgaaac aagcattggt 4717cctgtactgt agtttctaca tttcattgtc accaataatt aagtgtactc ctatggctgg 4777gagtctatga aaatggacgt gttgacttat tgggtaataa ataatttata taaaaaaaaa 4837aaaaaaaag 4846<210>17<211>1469<212>PRT<213>玉米<400>17Met Ser Gly Phe Ser Ala Ala Ala Asn Ala Ala Ala Ala Glu Arg Cys1 5 10 15Ala Leu Ala Phe Arg Ala Arg Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ala Lys Arg20 25 30Gln Gln Gln Pro Gln Pro Ala Ser Leu Arg Arg Ser Gly Gly Gln Arg35 40 45Arg Pro Thr Thr Leu Ser Ala Ser Ser Arg Gly Pro Val Val Pro Arg50 55 60
Ala Val Ala Thr Ser Ala Asp Arg Ala Ser Pro Asp Leu Ile Gly Lys65 70 75 80Phe Thr Leu Asp Ser Asn Ser Glu Leu Gln Val Ala Val Asn Pro Ala85 90 95Pro Gln Gly Leu Val Ser Glu Ile Ser Leu Glu Val Thr Asn Thr Ser100 105 110Gly Ser Leu Ile Leu His Trp Gly Ala Leu Arg Pro Asp Lys Arg Asp115 120 125Trp Ile Leu Pro Ser Arg Lys Pro Asp Gly Thr Thr Val Tyr Lys Asn130 135 140Arg Ala Leu Arg Thr Pro Phe Val Lys Ser Gly Asp Asn Ser Thr Leu145 150 155 160Arg Ile Glu Ile Asp Asp Pra Gly Val His Ala Ile Glu Phe Leu Ile165 170 175Phe Asp Glu Thr Gln Asn Lys Trp Phe Lys Asn Asn Gly Gln Asn Phe180 185 190Gln Val Gln Phe Gln Ser Ser Arg His Gln Gly Thr Gly Ala Ser Gly195 200 205Ala Ser Ser Ser Ala Thr Ser Thr Leu Val Pro Glu Asp Leu Val Gln210 215 220Ile Gln Ala Tyr Leu Arg Trp Glu Arg Arg Gly Lys Gln Ser Tyr Thr225 230 235 240
Pro Glu Gln Glu Lys Glu Glu Tyr Glu Ala Ala Arg Ala Glu Leu Ile245 250 255Glu Glu Val Asn Arg Gly Val Ser Leu Glu Lys Leu Arg Ala Lys Leu260 265 270Thr Lys Ala Pro Glu Ala Pro Glu Ser Asp Glu Ser Lys Ser Ser Ala275 280 285Ser Arg Met Pro Ile Gly Lys Leu Pro Glu Asp Leu Val Gln Val Gln290 295 300Ala Tyr Ile Arg Trp Glu Gln Ala Gly Lys Pro Asn Tyr Pro Pro Glu305 310 315 320Lys Gln Leu Val Glu Phe Glu Glu Ala Arg Lys Glu Leu Gln Ala Glu325 330 335Val Asp Lys Gly Ile Ser Ile Asp Gln Leu Arg Gln Lys Ile Leu Lys340 345 350Gly Asn Ile Glu Ser Lys Val Ser Lys Gln Leu Lys Asn Lys Lys Tyr355 360 365Phe Ser Val Glu Arg Ile Gln Arg Lys Lys Arg Asp Ile Thr Gln Leu370 375 380Leu Ser Lys His Lys His Thr Leu Val Glu Asp Lys Val Glu Val Val385 390 395 400Pro Lys Gln Pro Thr Val Leu Asp Leu Phe Thr Lys Ser Leu His Glu405 410 415
Lys Asp Gly Cys Glu Val Leu Ser Arg Lys Leu Phe Lys Phe GLy Asp420 425 430Lys Glu Ile Leu Ala Ile Ser Thr Lys Val Gln Asn Lys Thr Glu Val435 440 445His Leu Ala Thr Asn His Thr Asp Pro Leu Ile Leu His Trp Ser Leu450 455 460Ala Lys Asn Ala Gly Glu Trp Lys Ala Pro Ser Pro Asn Ile Leu Pro465 470 475 480Ser Gly Ser Thr Leu Leu Asp Lys Ala Cys Glu Thr Glu Phe Thr Lys485 490 495Ser Glu Leu Asp Gly Leu His Tyr Gln Val Val Glu Ile Glu Leu Asp500 505 510Asp Gly Gly Tyr Lys Gly Met Pro Phe Val Leu Arg Ser Gly Glu Thr515 520 525Trp Lys Lys Asn Asn Gly Ser Asp Phe Phe Leu Asp Phe Ser Thr His530 535 540Asp Val Arg Asn Ile Lys Leu Lys Gly Asn Gly Asp Ala Gly Lys Gly545 550 555 560Thr Ala Lys Ala Leu Leu Glu Arg Ile Ala Asp Leu Glu Glu Asp Ala565 570 575Gln Arg Ser Leu Met His Arg Phe Asn Ile Ala Ala Asp Leu Ala Asp580 585 590
Gln Ala Arg Asp Ala Gly Leu Leu Gly Ile Val Gly Leu Phe Val Trp595 600 605Ile Arg Phe Met Ala Thr Arg Gln Leu Thr Trp Asn Lys Asn Tyr Asn610 615 620Val Lys Pro Arg Glu Ile Ser Lys Ala Gln Asp Arg Phe Thr Asp Asp625 630 635 640Leu Glu Asn Met Tyr Lys Ala Tyr Pro Gln Tyr Arg Glu Ile Leu Arg645 650 655Met Ile Met Ala Ala Val Gly Arg Gly Gly Glu Gly Asp Val Gly Gln660 665 670Arg Ile Arg Asp GluIle Leu Val Ile Gln Arg Asn Asn Asp Cys Lys675 680 685Gly Gly Met Met Glu Glu Trp His Gln Lys Leu His Asn Asn Thr Ser690 695 700Pro Asp Asp Val Val Ile Cys Gln Ala Leu Ile Asp Tyr Ile Lys Ser705 710 715 720Asp Phe Asp Ile Ser Val Tyr Trp Asp Thr Leu Asn Lys Asn Gly Ile725 730 735Thr Lys Glu Arg Leu Leu Ser Tyr Asp Arg Ala Ile His Ser Glu Pro740 745 750Asn Phe Arg Ser Glu Gln Lys Ala Gly Leu Leu Arg Asp Leu Gly Asn755 760 765
Tyr Met Arg Ser Leu Lys Ala Val His Ser Gly Ala Asp Leu Glu Ser770 775 780Ala Ile Ala Ser Cys Met Gly Tyr Lys Ser Glu Gly Glu Gly Phe Met785 790 795 800Val Gly Val Gln Ile Asn Pro Val Lys Gly Leu Pro Ser Gly Phe Pro805 810 815Glu Leu Leu Glu Phe Val Leu Glu His Val Glu Asp Lys Ser Ala Glu820 825 830Pro Leu Leu Glu Gly Leu Leu Glu Ala Arg Val Glu Leu Arg Pro Leu835 840 845Leu Leu Asp Ser Arg Glu Arg Met Lys Asp Leu Ile Phe Leu Asp Ile850 855 860Ala Leu Asp Ser Thr Phe Arg Thr Ala Ile Glu Arg Ser Tyr Glu Glu865 870 875 880Leu Asn Asp Ala Ala Pro Glu Lys Ile Met Tyr Phe Ile Ser Leu Val885 890 895Leu Glu Asn Leu Ala Leu Ser Ile Asp Asp Asn Glu Asp Ile Leu Tyr900 905 910Cys Leu Lys Gly Trp Asn Gln Ala Leu Glu Met Ala Lys Gln Lys Asp915 920 925Asp Gln Trp Ala Leu Tyr Ala Lys Ala Phe Leu Asp Arg Asn Arg Leu930 935 940
Ala Leu Ala Ser Lys Gly Glu Gln Tyr His Asn Met Met Gln Pro Ser945 950 955 960Ala Glu Tyr Leu Gly Ser Leu Leu Ser Ile Asp Gln Trp Ala Val Asn965 970 975Ile Phe Thr Glu Glu Ile Ile Arg Gly Gly Ser Ala Ala Thr Leu Ser980 985 990Ala Leu Leu Asn Arg Phe Asp Pro Val Leu Arg Asn Val Ala His Leu995 1000 1005Gly Ser Trp Gln Val Ile Ser Pro Val Glu Val Ser Gly Tyr Val1010 1015 1020Val Val Val Asp Glu Leu Leu Ala Val Gln Asn Lys Ser Tyr Asp1025 1030 1035Lys Pro Thr Ile Leu Val Ala Lys Ser Val Lys Gly Glu Glu Glu1040 1045 1050Ile Pro Asp Gly Val Val Gly Val Ile Thr Pro Asp Met Pro Asp1055 1060 1065Val Leu Ser His Val Ser Val Arg Ala Arg Asn Ser Lys Val Leu1070 1075 1080Phe Ala Thr Cys Phe Asp His Thr Thr Leu Ser Glu Leu Glu Gly1085 1090 1095Tyr Asp Gln Lys Leu Phe Ser Phe Lys Pro Thr Ser Ala Asp Ile1100 1105 1110
Thr Tyr Arg Glu Ile Thr Glu Ser Glu Leu Gln Gln Ser Ser Ser1115 1120 1125Pro Asn Ala Glu Val Gly His Ala Val Pro Ser Ile Ser Leu Ala1130 1135 1140Lys Lys Lys Phe Leu Gly Lys Tyr Ala Ile Ser Ala Glu Glu Phe1145 1150 1155Ser Glu Glu Met Val Gly Ala Lys Ser Arg Asn Ile AlaTyr Leu1160 1165 1170Lys Gly Lys Val Pro Ser Trp Val Gly Val Pro Thr Ser Val Ala1175 1180 1185Ile Pro Phe Gly Thr Phe Glu Lys Val Leu Ser Asp Gly Leu Asn1190 1195 1200Lys Glu Val Ala Gln Ser Ile Glu Lys Leu Lys Ile Arg Leu Ala1205 1210 1215Gln Glu Asp Phe Ser Ala Leu Gly Glu Ile Arg Lys Val Val Leu1220 1225 1230Asn Leu Thr Ala Pro Met Gln Leu Val Asn Glu Leu Lys Glu Arg1235 1240 1245Met Leu Gly Ser Gly Met Pro Trp Pro Gly Asp Glu Gly Asp Lys1250 1255 1260Arg Trp Glu Gln Ala Trp Met Ala Ile Lys Lys Val Trp Ala Ser1265 1270 1275
Lys Trp Asn Glu Arg Ala Tyr Phe Ser Thr Arg Lys Val Lys Leu1280 1285 1290Asp His Glu Tyr Leu Ser Met Ala Val Leu Val Gln Glu Val Val1295 1300 1305Asn Ala Asp Tyr Ala Phe Val Ile His Thr Thr Asn Pro Ser Ser1310 1315 1320Gly Asp Ser Ser Glu Ile Tyr Ala Glu Val Val Lys Gly Leu Gly1325 1330 1335Glu Thr Leu Val Gly Ala Tyr Pro Gly Arg Ala Met Ser Phe Val1340 1345 1350Cys Lys Lys Asp Asp Leu Asp Ser Pro Lys Leu Leu Gly Tyr Pro1355 1360 1365Ser Lys Pro Ile Gly Leu Phe Ile Arg Gln Ser Ile Ile Phe Arg1370 1375 1380Ser Asp Ser Asn Gly Glu Asp Leu Glu Gly Tyr Ala Gly Ala Gly1385 1390 1395Leu Tyr Asp Ser Val Pro Met Asp Glu Glu Asp Glu Val Val Leu1400 1405 1410Asp Tyr Thr Thr Asp Pro Leu Ile Val Asp Arg Gly Phe Arg Ser1415 1420 1425Ser Ile Leu Ser Ser Ile Ala Arg Ala Gly His Ala Ile Glu Glu1430 1435 1440
Leu Tyr Gly Ser Pro Gln Asp Val Glu Gly Val Val Lys Asp Gly1445 1450 1455Lys Ile Tyr Val Val Gln Thr Arg Pro Gln Met1460 146权利要求
1.基因修饰的植物细胞，其特征是它与还没有基因修饰的对应的野生型植物细胞比较具有增加活性的至少一种OK1蛋白质和至少一种R1蛋白质。
2.根据权利要求1的基因修饰的植物细胞，其中所述基因修饰在于向植物的基因组导入至少一种外源核酸分子。
3.根据权利要求2的基因修饰的植物细胞，其中至少一种外源核酸分子编码OK1蛋白质。
4.根据权利要求2的基因修饰的植物细胞，其中至少一种外源核酸分子编码R1蛋白质。
5.根据权利要求2的基因修饰的植物细胞，其中第一种外源核酸分子编码R1蛋白质并且第二种外源核酸分子编码OK1蛋白质。
6.根据权利要求4或5的基因修饰的植物细胞，其中编码R1蛋白质的所述外源核酸分子编码马铃薯、小麦、玉米、稻、大豆、柑桔或者拟南芥的R1蛋白质。
7.根据权利要求1到6之一的基因修饰的植物细胞，其与还没有基因修饰的对应的野生型植物细胞相比合成经修饰的淀粉。
8.根据权利要求7的基因修饰的植物细胞，其中所述经修饰的淀粉的特征是它与从还没有基因修饰的对应的野生型植物细胞分离的淀粉比较具有增加浓度的淀粉磷酸酯和/或改变的磷酸分布。
9.根据权利要求8的基因修饰的植物细胞，其中所述经修饰的淀粉的特征是它具有改变的C-3磷酸与C-6磷酸的比率。
10.植物，其含有根据权利要求1-9之一的基因修饰的植物细胞。
11.根据权利要求10的植物，其是淀粉贮藏植物。
12.根据权利要求11的植物，其是玉米植物或者小麦植物。
13.根据权利要求1的植物的繁殖材料，根据权利要求1到9之一的基因修饰的植物细胞。
14.根据权利要求10、11或者12之一的植物的可收获的植物部分，其含有根据权利要求1到9之一的基因修饰的植物细胞。
15.产生根据权利要求10、11或者12之一的基因修饰的植物的方法，其中a)将植物细胞基因修饰，其中该基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞比较OK1蛋白质和R1蛋白质的活性增加；b)从步骤a)的植物细胞再生植物；和c)如果必要，借助根据步骤b)的植物产生其他植物。
16.根据权利要求15的方法，其中基因修饰在于向植物细胞的基因组导入外源核酸分子。
17.根据权利要求16的方法，其中至少一种所述外源核酸分子编码R1蛋白质。
18.根据权利要求16的方法，其中至少一种所述外源核酸分子编码OK1蛋白质。
19.根据权利要求15到18之一的方法，其中与没有基因修饰的对应的野生型植物比较，基因修饰的植物合成经修饰的淀粉。
20.根据权利要求19的方法，其中所述经修饰的淀粉的特征是它具有增加浓度的共价结合淀粉的磷酸。
21.根据权利要求19或者20的方法，其中所述经修饰的淀粉的特征是它具有C-磷酸与C-6磷酸的改变的比率。
22.经修饰的淀粉，其可以从根据权利要求10、11或者12之一的基因修饰的植物、从根据权利要求13的繁殖材料或者从根据权利要求14的可收获植物部分得到。
23.产生经修饰的淀粉的方法，其包括来自根据权利要求1到9之一的基因修饰的植物的淀粉。
24.产生经修饰的淀粉的方法，其包括从根据权利要求10、11或者12之一的植物提取淀粉的步骤。
25.根据权利要求10、11或者12之一的植物用于产生经修饰的淀粉的用途。
26.经修饰的淀粉，其通过根据权利要求23或24之一的方法可以得到。
27.产生衍生淀粉的方法，其中衍生根据权利要求22或者26的经修饰的淀粉。
28.衍生淀粉，其通过根据权利要求27的方法可以得到。
29.通过根据权利要求22或26之一的经修饰的淀粉用于产生衍生淀粉的用途。
30.面粉，其含有根据权利要求22或26的经修饰的淀粉。
31.面粉，其可以从根据权利要求1到9之一的植物细胞、根据权利要求10、11或者12之一的植物的部分、或者根据权利要求13的繁殖材料或者根据权利要求14的可收获的植物部分得到。
32.生产面粉的方法，其包括碾磨根据权利要求10、11或者12之一的植物的植物部分、根据权利要求13的繁殖材料或者根据权利要求14的可收获材料的步骤。
33.根据权利要求1到9之一的基因修饰的植物细胞或者根据权利要求10、11或者12之一的植物用于生产面粉的用途。
34.重组核酸分子，其含有编码OK1蛋白质的核酸分子和编码R1蛋白质的核酸分子。
35.载体，其含有根据权利要求34的重组核酸分子。
36.根据权利要求35的载体，其中该重组核酸分子与启动原核或者真核细胞中转录的调节序列连接。
37.宿主细胞，其用根据权利要求34的重组或者用根据权利要求35或36的载体进行了基因修饰。
38.组合物，其含有根据权利要求34的重组核酸分子或者根据权利要求35或36的载体。
39.组合物，其含有编码OK1蛋白质的核酸序列和编码R1蛋白质的核酸序列。
40.根据权利要求38或者39的组合物用于转化植物细胞的用途。
全文摘要
本发明涉及基因修饰的植物细胞和植物，其中基因修饰导致与没有基因修饰的对应的野生型植物细胞或者野生型植物相比，淀粉磷酸化OK1蛋白质和淀粉磷酸化R1蛋白质的活性增加。此外，本发明涉及产生此类植物细胞和植物的工具和方法。该类型的植物细胞和植物合成经修饰的淀粉。本发明因此还涉及通过根据本发明的植物细胞和植物合成的淀粉、生产该淀粉的方法、该修饰的淀粉的淀粉衍生物的生产以及含有根据本发明淀粉的面粉。此外，本发明涉及含有编码OK1蛋白质和R1蛋白质的序列的核酸分子和载体，以及含有这些核酸分子的宿主细胞。
文档编号A01H5/04GK1930295SQ200580007077
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月4日 优先权日2004年3月5日
发明者C·弗罗贝格, O·克廷, G·里特, M·施托伊普 申请人:拜尔作物科学有限公司