专利名称：：一种有广谱高效杀菌作用的酶组合杀菌制剂及其制备方法
技术领域：
：一种有广谱高效杀菌作用的酶组合杀菌制剂及其制备方法，本发明涉及食品安全和酶制剂
技术领域：
。还涉及替代词料中抗生素，动植物产品的保藏领域，具体说是一种具有广谱高效杀菌作用酶的组合。
背景技术：
：抗生素是一类应用最广泛的抗菌药物，不仅用于临床，也用于畜禽词养和农业方面。在过去的50多年中，由于抗生素长期使用导致大量耐药菌株的产生，且病原菌抗药性逐年增强，致使疗效下降，剂量提高。因此，世界卫生组织于1994年就细菌耐药性的监测结果给全世界提出了警示细菌对抗生素产生的耐药性正在以惊人的速度增加，而现有的抗生素药物正在失去原来的疗效。因此寻求广谱、高效的新一代抗菌药物己成为迫在眉睫的摆在人类面前的课题。酶广泛存在于生物体内，参与新陈代谢等多种生理功能，其中对微生物细胞壁具有水解功能的酶类能够溶解微生物细胞壁而使微生物死亡。由于水解酶的特异性很强，微生物的细胞壁结构和化学组成又存在差异，因此一种酶只能对某一类微生物有水解作用。即使对于某一特定微生物，由于细胞壁化学组成的复杂性，也需要不同类型水解酶的组合，才能有更好的作用效果。水解酶的杀菌作用与传统的抗生素药物相比，具有对某一病原菌所有血清型都有效的优点，当几种酶复合后，对不同类型的病原菌均有效，克服了一种抗生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足，更不存在药物残留和耐药性的问题。溶菌酶在医药和食品中已开始使用，作为畜禽饲料添加剂则刚刚起步，仅前苏联、法国、德国和美国做了一些初步研究，目前，国内也开始进行相关研究。而复合杀菌酶药物的研究国内外均刚刚起步。
发明内容本发明的目的是提供一种有广谱高效杀菌作用的酶组合杀菌制剂及其制备方法，是一种光谱高效、无残留，无污染、适用范围广的杀菌制剂。本发明的技术方案一种酶组合杀菌制剂，以制剂中酶活含量计，按溶菌酶4001000U/g、卩-l，3-葡聚糖酶2000080000U/g、卩-甘露聚糖酶5000~10000U/g和中性蛋白酶80000~140000U/g的配比配制为组合酶，采用海藻糖30%~50%、黄原胶20%~40%、羧甲基纤维素钠15%~30%和茁霉多糖5°/。~10%的配比配制为包被剂，将组合酶进行包被得酶组合杀菌制剂。所述酶组合杀菌制剂的制备方法1)组合酶的配制根据所用酶的酶活含量换算成质量，按组合酶的配比称取相应质量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然后混合均匀为组合酶；2)酶的包被保护按包被剂配比称取海藻糖、黄原胶、羧甲基纤维素钠和茁霉多糖，混合均匀为包被剂，用包被剂重量8-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小时，加入工序l)所得组合酶，用胶体磨研磨两遍，采用白炭黑吸附制备成粉末颗粒，或采用喷雾干燥制备成微胶囊。酶组合杀菌制剂的应用，用于饲料中组合酶以粉末形式添加到饲料中直接使用，添加量酶组合杀菌制剂/全价饲料为40-50g/吨；或用于食品保藏将组合酶用适量水溶解后，再用快速滤纸过滤，取滤液使用，酶组合杀菌制剂溶液浓度为0.03%-0.05%。本发明的有益效果1、杀菌谱广能够杀灭革兰氏阳性菌和阴性菌，特别是致病菌，如对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有很好的杀菌效果，且对真菌也有杀菌作用。2、杀菌能力强几种酶的组合杀菌制剂，不但具有杀菌谱广的特点，而且具有杀菌能力强的优势，不同酶组合可以增强杀菌效果，比单一使用溶菌酶杀菌能力增加IO倍以上。3、无耐药性和残留酶的杀菌机理是裂解细菌的细胞壁，细菌不会产生耐药性，不会残留在组织器官中，同时酶是蛋白质，在食品烹调过程中变性失活，有利于保障食品安全，改善人类健康。4、抗逆性强包被成微胶囊的酶组合杀菌剂能够有效耐受加工过程中的高温、强氧化剂和低酸，保持高的杀菌活力，可以满足不同条件下使用的需要。5、实用范围广可以替代饲料中的抗生素，作为兽药用于动物疾病的治疗；也可用于食品工业，用于动植物产品的保藏，延长货架寿命，改善食品品质；在医疗上可以作为消毒剂使用。具体实施例方式下面结合实施例详述本发明。实施例1酶组合杀菌制剂的配制以制剂中酶活含量计，将溶菌酶400~1000U/g、p-l，3-葡聚糖酶20000~80000U/g、卩-甘露聚糖酶500010000U/g和中性蛋白酶80000-140000U/g组合。采用海藻糖30%50%、黄原胶20%40%、羧甲基纤维素钠15%~30%和茁霉多糖5%10%的包被剂，将组合酶制备成微胶囊或粉末酶组合杀菌制剂。其制备方法为1)组合酶的配制根据酶的酶活含量，将酶活换算成所需的质量，称取相应质量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，混合均匀。2)酶活力保护采用海藻糖30%~50%、黄原胶20%~40%、羧甲基纤维素钠15%~30°/。和茁霉多糖5%10%的包被剂配方，用适量温水(8-10倍量、30-50°C)溶解浸泡包被剂3-5小时，将组合酶和包被剂按配比混合，用胶体磨研磨两遍，采用白炭黑吸附制备成粉末颗粒，或采用喷雾干燥制备成微胶囊。如用于饲料中可直接使用，如用于食品保藏需要将该制剂溶于适量水中，用快速滤纸过滤，取滤液使用，酶组合杀菌制剂溶液浓度为0.03%-0.05%。实施例2沙门氏菌培养5h后，在1号试管加最佳浓度的溶菌酶液0.5mL，2号试管加酶组合杀菌剂液0.5mL(巳将固体杀菌剂配成溶液，其中各酶的酶活在权利要求l所述的范围内，下同)，3号试管加入磷酸缓冲液0.5mL，每号管做三个重复。再置于水浴中恒温振荡培养10分钟后取出。I号试管稀释IOOO倍，2号试管稀释100倍，3号试管稀释100000倍，各取lmL于无菌培养皿中，倒入营养琼脂培养基约15mL，冷却后翻转置于37'C恒温培养箱中培养48小时后取出计数。结果见表l。表l沙门氏菌平板计数结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表1结果可知，酶组合杀菌剂杀菌效果最强，沙门氏菌数目比对照组减少了10000倍，即使与正对照的最佳的溶菌酶组相比，也减少了10倍，这充分证实了酶组合杀菌剂具有更强的杀菌效果。实施例3金黄色葡萄球菌培养5h后，在1号试管加最佳浓度的溶菌酶液0.5mL，2号试管加酶组合杀菌剂液0.5mL，3号试管加入磷酸缓冲液0.5mL，每号管做三个重复。再置于水浴中恒温振荡培养10分钟后取出。I号试管稀释IOOO倍，2号试管稀释100倍，3号试管稀释100000倍，各取lmL于无菌培养皿中，倒入营养琼脂培养基约15mL，冷却后翻转置于37'C恒温培养箱中培养36小时后取出计数。结果见表2。表2金黄色葡萄球菌平板计数结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表2结果可知，酶组合杀菌剂杀菌效果最强，金黄色葡萄球菌数目比对照组减少了约100000倍，即使与正对照的最佳的溶菌酶组相比，减少了约IOO倍，这充分证实了酶组合杀菌剂具有更强的杀菌效果。实施例4大肠杆菌(JM109)培养5h后，在1号试管加最佳浓度的溶菌酶液0.5mL，2号试管加酶组合杀菌剂液0.5mL，3号试管加入磷酸缓冲液0.5mL，每号管做三个重复。再置于水浴中恒温振荡培养10分钟后取出。I号试管稀释IOOO倍，2号试管稀释100倍，3号试管稀释100000倍，各取lmL于无菌培养皿中，倒入营养琼脂培养基约15mL，冷却后翻转置于37'C恒温培养箱中培养36小时后取出计数。结果见表3。表3大肠杆菌平板计数结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表3结果可知，酶组合杀菌剂杀菌效果最强，大肠杆菌数目比对照组减少了约100000倍，即使与正对照的最佳的溶菌酶组相比，减少了约100倍，这充分证实了酶组合杀菌剂具有更强的杀菌效果。实施例5试验在江苏省某家禽试验场进行，试验从l日龄开始至49日龄结束，日期为2006年6月25日至2006年8月14日，地面平养、锯末垫料。对照组添加药物(包括球虫药和抗生素)；试验组除添加杀菌酶组合外，不添加任何其它药物。表4肉鸡试验安排及结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例6试验在福建武坪县某猪场进行，大断奶仔猪、试验从断奶开始用至断奶后第三周结束，日期为2006年7月15日至2006年8月5日。表5断奶仔猪试验安排及结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注在同一猪场共进行两次类似的试验，第一次是去掉词料中的药物，保留氧化锌；第二次是去掉药物和氧化锌，均没有发生拉稀和其它疾病。权利要求1、一种酶组合杀菌制剂，其特征在于以制剂中酶活含量计，按溶菌酶400～1000U/g、β-1，3-葡聚糖酶20000～80000U/g、β-甘露聚糖酶5000～10000U/g和中性蛋白酶80000～140000U/g的配比配制为组合酶，采用海藻糖30％～50％、黄原胶20％～40％、羧甲基纤维素钠15％～30％和茁霉多糖5％～10％的配比配制为包被剂，将组合酶进行包被得酶组合杀菌制剂。2、一种权利要求1所述酶组合杀菌制剂的制备方法，其特征在于1)组合酶的配制根据所用酶的酶活含量换算成质量，按组合酶的配比称取相应质量的溶菌酶、P-l，3-葡聚糖酶、P-甘露聚糖酶和中性蛋白酶，然后混合均匀为组合酶；2)酶的包被保护按包被剂配比称取海藻糖、黄原胶、羧甲基纤维素钠和茁霉多糖，混合均匀为包被剂，用包被剂重量8-10倍量的30-5(TC的水浸泡3-5小时，加入工序l)所得组合酶，用胶体磨研磨两遍，采用白炭黑吸附制备成粉末颗粒，或采用喷雾干燥制备成微胶囊。3、权利要求l的酶组合杀菌制剂的应用，其特征是用于饲料中组合酶以粉末形式添加到饲料中直接使用，添加量酶组合杀菌制剂/全价饲料为40-50g/吨；或用于食品保藏将组合酶用水溶解后，再用快速滤纸过滤，取滤液使用，酶组合杀菌制剂溶液浓度为0.03%-0.05%。全文摘要一种有广谱高效杀菌作用的酶组合杀菌制剂及其制备方法，涉及食品安全和酶制剂
技术领域：
。本发明提供了一种酶组合杀菌制剂，其由溶菌酶、β-1，3-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和中性蛋白酶组合，采用海藻糖、黄原胶、羧甲基纤维素钠和茁霉多糖的包被剂配方，将组合酶进行包被。本发明通过采用多酶组合和包被技术，将上述酶优化组合，同时采用包被技术对酶进行保护，能够有效杀灭革兰氏阳性和阴性菌，杀菌谱广，效力强，可以有效杀灭沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等病原菌，能够完全替代猪、禽饲料中抗生素，用于动植物产品的保藏。包被保护提高了酶对温度、氧化剂和酸的耐受性，提高了酶在不利因素下的杀菌效果，拓展了酶杀菌剂的使用领域。文档编号A23K1/17GK101199319SQ20071013541公开日2008年6月18日申请日期2007年11月8日优先权日2007年11月8日发明者乐国伟,卉代,锋史,李永富申请人:江南大学