专利名称：一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法
技术领域：
本发明涉及一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法。
背景技术：
枣树(Ziziphus jujuba Mill.)是原产我国的特色优势果树，无论栽培面积还是 年产量都已成为我国第一大干果树种。我国枣树品种有900多个，但基本上都是传统的地 方品种或从其自然变异中优选出的品种。生产上迫切需要创新程度高、具有更新换代价值 的新品种。然而，由于枣花很小、人工去雄非常困难，加之多数枣树优良品种的胚败育现象 严重，导致常规杂交育种因难于获得杂交后代而进展十分缓慢。 果树多倍体在果实大小、抗逆性等方面通常会表现出一定的优势，多倍体育种在 果树上受到越来越多的重视。在枣树的种质资源中，已经发现自然三倍体品种赞皇大枣，表 现出果个大、丰产、适应性强等优点；枣树的近缘种毛叶枣(Ziziphus mauritiana Lam.)的 栽培品种多为四倍体，也都表现为果个大、适应性强。因此，对枣树进行多倍体诱导前景广 阔。在枣树倍性育种方面，田间茎尖诱变和组培条件下的茎尖、愈伤组织诱变已取得明显进 展，但是茎尖诱变后，多获得嵌合体，分离纯化所需周期长；组培条件下通过愈伤组织和胚 状体途径诱导多倍体，虽然可以快速获得同质多倍体，但存在玻璃化现象严重、诱变成功后 到田间开花结果周期较长等问题。而在田间通过愈伤组织途径不仅可以快速诱导同质多倍 体，而且获得的同质多倍体枝条当年即可开花结果，并且用于嫁接扩繁，从而可以大大縮短 多倍体育种周期。
发明内容
采用枣树枝条短截的方法，诱导截口处产生愈伤组织，采用秋水仙素对愈伤组织
进行诱变处理，快速获得枣树同质多倍体，大大加速了枣树多倍体育种进程。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是首先对枣树枝条进行短截，采用激
素诱导截口产生愈伤组织，然后利用秋水仙素对愈伤组织进行诱变处理，快速获得同质多
倍体(纯多倍体)。 本发明的具体内容，即在田间快速获得枣树同质多倍体的方法如下 (1)截干于生长季，将枣树上粗壮的枝条进行短截，尽量保持截面光滑、无毛边。
(2)愈伤组织的诱导枝条短截后，迅速用脱脂棉覆盖截面的形成层，将含有
TDZ(5. Omg/L) 、 AgN03(2. Omg/L)的药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为佳，覆上塑料袋，
然后将湿泥覆盖在塑料袋上，以避免温度剧烈变化，促进愈伤组织形成，最外面用塑料袋全
部套住并绑紧袋口。 (3)愈伤组织的诱变当截面泛红褐色、形成层开裂、有透明微弱愈伤出现时，去除 塑料袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织，将0. 05%的秋水仙素 (含有O. 1%二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外 面用塑料袋全部套住并绑紧袋口 。 24h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料
3袋套住，绑紧袋口。当愈伤组织上有新芽长出后，去除所有覆盖物，对新芽进行染色体倍性 检测。 本发明专利的有益效果是，通过田间愈伤组织途径，诱导出的多倍体为同质多倍 体，不需要进一步分离纯化，同时可以直接开花结果或用于嫁接扩繁。该技术应用于枣树多 倍体育种实践，方法简单便捷，诱变效率高，可大大縮短育种周期。
图1秋水仙素处理时的愈伤组织状态
图2愈伤组织上出芽的状态
图3获得的四倍体枝条
具体实施例方式
在田间，以二倍体'月光'枣的初果期树为试材，5月份将其上粗壮的枝条进行短 截，迅速用脱脂棉覆盖截面上的形成层，将6-10滴含有TDZ (5. 0mg/L) 、 AgN03 (2. Omg/L)的 药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为度，覆上塑料袋，然后将湿泥覆盖在塑料袋上，最外 面用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口 ；5d后，当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微 弱愈伤出现时，去除塑料袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织， 把6 IO滴O. 05%的秋水仙素(含有O. 1%二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料 袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口 ；24h后，去除脱 脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，用塑料绳收紧袋口 ；当截面愈伤组织上 长出新芽后，去除所有覆盖物；采用流式细胞仪检测新芽的染色体倍数，四倍体变异株率达 19. 7%。
权利要求
一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法。其特征在于对枣树枝条进行重度短截，在截面的形成层诱导愈伤组织，进而利用秋水仙素处理愈伤组织，通过愈伤组织再生快速获得同质多倍体。
2. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下几个步骤(1) 截干在枣树生长季，对其粗壮的枝条短截，尽量保持截面光滑、无毛边。(2) 愈伤组织的诱导截干后，迅速用脱脂棉覆盖截面的形成层，将含有TDZ(5. 0mg/L)、 AgN03(2. Omg/L)的药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为度，覆上塑料袋，然后将湿泥覆盖 在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，绑紧袋口 。(3) 愈伤组织的诱变当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微弱愈伤出现时，去除塑料 袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织，把0. 05%的秋水仙素(含 有O. 1%二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面 用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口 ；24h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再 用塑料袋套住，绑紧袋口 ；当愈伤组织上有新芽长出后，去除所有覆盖物，对新芽进行染色 体倍性检测。
3. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于在田间诱导枣树枝条产生愈伤组织，利用 秋水仙素对初形成的愈伤组织进行诱变，快速获得同质多倍体。
全文摘要
一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法，即对枣树枝条进行重度短截，在截面的形成层进行愈伤组织诱导，进而利用秋水仙素处理愈伤组织，通过愈伤组织再生快速获得同质多倍体。选择健壮枝条进行短截，在截面形成层上覆盖脱脂棉并迅速滴加含有TDZ(5.0mg/L)、AgNO3(2.0mg/L)的药液，采用塑料袋+湿泥+塑料袋三层覆盖；当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微弱愈伤出现时，用0.05％的秋水仙素(含有0.1％二甲基亚砜)处理愈伤组织24h；当截面愈伤组织上长出新芽后，及时去除覆盖物和检测新生芽的染色体倍性。该技术应用于枣树多倍体育种实践，方法简单便捷，可快速获得同质多倍体并应用于生产。
文档编号A01H1/08GK101773068SQ201010033318
公开日2010年7月14日 申请日期2010年1月7日 优先权日2010年1月7日
发明者刘孟军, 刘平, 刘晓光, 宁强, 徐娟, 王玖瑞 申请人:河北农业大学;国家北方山区农业工程技术研究中心