专利名称：乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法。
背景技术：
进入21世纪人民对肉产品的质量有要求越来越高，其对营养品质的要求也越来 越高，提高肉质产品的质量其源头在于饲料的质量。因此提高饲料的营养质量和营养成分 对于养殖业极为重要。目前，一些禽畜饲料已经实现产品化、标准化，含有氨基酸的饲料；含 维生素饲料含抗生素饲料含中草药饲料，这些添加剂对禽畜的利用率低，含有副作用，有害 残留进入生物链直接进入人体，即会危害人类健康又会对环境造成危害。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进动物肠道消化功能，减少药物使用，降 低饲料成本，降低出栏时间，提高肉质质量。本发明技术方案为一种乳酸菌生物饲料添 加剂的制备方法1从国家微生物菌种保藏中心购买短乳杆菌(LactcAacillus brevis)、 德氏乳杆菌(ddlbrueckii subsp. Lactis)、干酷乳杆菌(paracasei)、乳酸乳球菌 (Lactobacill)、戊糖乳杆菌(Lactobaci 1 luspentosaceus)、布氏乳杆菌(Lactobacillus)、 iS^^LIf lif (Lactobacillusplantarum) >lif (Lactobacillusacetotolerans)白勺 菌种斜面备用；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g， 酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离 子水中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰 箱中待用；3) 一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，挑取 短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆 菌(paracasei)、乳酸乳球菌(Lactobacill)、戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosaceus)、 布氏乳杆菌(Lactobacillus)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、耐酸乳杆菌 (Lactobacillus acetotolerans)菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌转种到一次活 化培养的培养基中，在温度为36士 TC条件下，厌氧静止培养16 18h，待测定ph值为 3. 8-4. 5为时，表明一次活化培养状态达到要求。4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克， 去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在 121°C条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5) 二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养 培养的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5 时，表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下 高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得 到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有动感保护记的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为1 3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰 箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克 的乳酸菌饲料添加剂。本发明的优点在于利用国内外研究比较成熟的乳酸菌菌株作微生物饲料添加剂的发酵菌株，其理化 指标稳定，生物学功能稳定安全，在禽畜肠道内的作用透彻，易于在肠道内粘附并发挥起作 用，且有较强的繁殖能力和生物活性，便于工厂化培养的优质菌株。而且在生产工艺方面操 作简单，成本低量可以连续操作，且使用该饲料添加剂可以促进动物肠道消化功能，减少药 物使用，降低饲料成本，降低出栏时间，提高肉质质量。上述生物饲料添加剂的制备方法，其 特点在于三个方面，一是菌种选择的优化；二是发酵工艺的简单低成本；三是冻干工艺的 高效本发明的特点在于利用乳酸菌中的优质菌株短乳杆菌(LactcAacillus brevis)、德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)、乳酸乳球菌 (Lactobacill)戊糖乳杆菌(Lactobaci 1 luspentosaceus)布氏乳杆菌(Lactobacillus)植
(Lactobacillusplantarum) SIILff Iif (Lactobacillus acetotolerans) t^it 后经过一次扩大培养，二次扩大培养用脱脂乳甘油葡萄糖乳糖蔗糖作为保护剂经过真空冷 冻干燥而得到的活菌数IO9/克的饲料添加剂。而乳酸菌是禽畜肠道的正常有益微生物与饲料的消化吸收有着密切的关系。保持 超岛内益生菌群正常时，即可以提高食物消化率和生物效价；控制内毒素；抑制肠道内腐 败菌生长。同时益生菌代谢产生的生物菌素对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆 菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作，提高机体免疫力等。
具体实施例方式一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法1从国家微生物菌种保藏中心购买短乳杆菌(LactcAacillus brevis)、德氏乳杆 菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)、乳酸乳球菌(Lactobacill)、 戊糖乳杆菌(Lactobaci 1 luspentosaceus)、布氏乳杆菌(Lactobaci 1 lus)、植物乳杆菌 (Lactobacillusplantarum) >lif (Lactobacillusacetotolerans) StJ liffΨ 用；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g， 酵母粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离 子水中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰 箱中待用；3) 一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，挑取 短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)、乳酸乳球菌(Lactobacill)、戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosaceus)、 布氏乳杆菌(Lactobacillus)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、耐酸乳杆菌 (Lactobacillus acetotolerans)菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌转种到一次活 化培养的培养基中，在温度为36士 TC条件下，厌氧静止培养16 18h，待测定ph值为 3. 8-4. 5为时，表明一次活化培养状态达到要求。4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克， 去离子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在 121°C条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5) 二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养 培养的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5 时，表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下 高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离 心管中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得 到的干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有动感保护记的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为1 3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰 箱中预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克 的乳酸菌饲料添加剂。
权利要求
1. 一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法，其特征是1 短 IL 杆菌(Lactobacillus brevis) > 德氏 IL 杆菌(delbrueckiisubsp. Lactis)、干酪乳杆菌(paracasei)、乳酸乳球菌(LactcAacill)、戊糖乳杆 菌(Lactobacilluspentosaceus)、布氏乳杆菌(Lactobacillus)、植物乳杆菌 (Lactobaci 1 lusplantarum) >lif (Lactobacillusacetotol erans) StJ Iifft 用；2)制备一次活化培养培养基，其培养基的配方如下大豆蛋白胨50g，牛肉粉30g，酵母 粉30g，葡萄糖200g，乳糖20g，番茄汁50ml，去离子水IOOOml，将以上组份溶解于去离子水 中，将其装入21的三角瓶中，在121 °C的条件下高压蒸汽灭菌20min后，放入_4°C的冰箱中 待用；3)一次活化培养将一次活化培养的培养基20ml，分装到IOOml培养瓶中，挑取短 乳杆菌(Lactobacillus brevis)、德氏乳杆菌(delbrueckii subsp. Lactis)、干酪乳杆 菌(paracasei)、乳酸乳球菌(Lactobacill)、戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosaceus)、 布氏乳杆菌(Lactobacillus)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、耐酸乳杆菌 (Lactobacillus acetotolerans)菌种斜面上的一个单菌落，将各个单菌转种到一次活 化培养的培养基中，在温度为36 士 TC条件下，厌氧静止培养16 18h，待测定ph值为 3. 8-4. 5为时，表明一次活化培养状态达到要求。4)配制二次扩大培养大豆蛋白胨200g，棉籽糖20g，番茄汁100ml，氯化钠10克，去离 子水2000ml，将以上各组分溶解在去离子水中，加入到容量为41的小型发酵罐中，在121 °C 条件下高压蒸汽灭菌20min待用；5)二次扩大培养将各个菌株的一次活化培养的发酵液同时接种到二次扩大培养培养 的培养液中，将温度调到40°C恒温厌养静止培养12-14h，待发酵液的ph达到3. 8-4. 5时， 表明二次扩大培养状态达到要求；6)配制冻干保护剂脱脂乳720g，甘油30ml，乳糖200g，葡萄糖200g，去离子水 6000ml，将以上组份溶解到去离子水中，搅拌均勻后装到101的三角瓶中，在118°C条件下 高压蒸汽灭菌15min后放入-4°C的冰箱中待用；7)收集发酵菌泥将二次扩大培养得到的发酵液在无菌条件下装入离心机的离心管 中，在lOOOOrpm/min条件下，离心5min后，在无菌的超净工作台内，倒掉上清液，所得到的 干物质为菌泥，收集菌泥后立即加入到装有动感保护记的101的三角瓶中待用；8)将收集的菌泥与冻干保护剂混勻，其中发酵后菌泥与保护剂的比例为1 3;9)冻干将混合均勻的菌泥和冻干保护剂装入冻干瓶中，冻干瓶转入-40°C的冰箱中 预冻4h，然后将冻干瓶转入真空冷冻干燥机，冻干Mh，即可以得到活菌数达到IO11/克的乳 酸菌饲料添加剂。
全文摘要
本发明涉及一种乳酸菌生物饲料添加剂的制备方法，利用乳酸菌中的优质乳杆菌和乳球菌经培养得到高活性的乳酸菌发酵液，利用脱脂乳等作为保护剂利用真空冷冻干燥机制成活菌数高达1011/克的活菌添加剂。本生物饲料添加剂的优点在于经过真空冷冻干燥所得到的乳酸菌活菌添加剂活性高活力强，发酵产物生物学功能稳定，适于工业连续培养且成本低，便于操作等优点。此外经过此饲料添加剂发酵的饲料能促进动物生长、调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡、而且降解内毒素、抑制肠道内腐败菌生长、提高机体免疫力等，同时对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作用，因此应用于养殖业中即可以降低养殖成本，又有效的杜绝了抗生素滥用。
文档编号A23K1/14GK102077904SQ20101012214
公开日2011年6月1日 申请日期2010年3月11日 优先权日2010年3月11日
发明者曾广伟, 王淼, 陈丽秋 申请人:哈尔滨龙猪科技开发有限公司